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DOI: 10.3791/50259-v
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Zebrafish sono un sistema emergente per modellare disturbi umani del muscolo scheletrico. Descriviamo un metodo veloce ed efficace per isolare miofibre muscolari scheletriche da zebrafish embrionale e larvale. Questo metodo fornisce una preparazione ad alta densità miofibre adatto per lo studio della morfologia singola fibra muscolare scheletrica, proteina localizzazione subcellulare, e fisiologia muscolare.
L'obiettivo generale di questa procedura è isolare in modo efficiente le fibre muscolari scheletriche da pesci zebra embrionali e larvali. Ciò si ottiene preparando prima i vetrini coprioggetti rivestiti di poli L lisina da uno a quattro giorni dopo la fecondazione, gli embrioni di zebrafish vengono dissociati. Quindi le miofibre isolate dagli embrioni dissociati vengono placcate sui vetrini di copertura in polilisina.
Infine, le miofibre vengono fissate, colorate e visualizzate per l'analisi delle proteine muscolari. In definitiva, si possono ottenere risultati che mostrano la localizzazione subcellulare delle proteine muscolari attraverso la microscopia a immunofluorescenza. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come l'analisi dell'intero embrione, è che consente lo studio della morfologia e della fisiologia delle singole fibre muscolari in modo più dettagliato.
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