1.5: Introduzione al micropipettor

Il micropipettatore è uno strumento importante utilizzato per misurare con precisione piccoli volumi di liquido. Questo strumento di ricerca, che può essere trovato in numerosi laboratori di ricerca in tutto il mondo, è disponibile in diverse forme e dimensioni. Tuttavia, nonostante la variazione tra i micropipettatori, tutti funzionano in modo simile per misurare con precisione quantità di microlitri di liquido. I micropipettatori vengono utilizzati con punte monouso che, come i micropipettatori, sono disponibili in una gamma di dimensioni.

Tutti i micropipettatori condividono gli stessi componenti di base per l'aspirazione e l'erogazione dei liquidi. Lo stantuffo si trova nella parte superiore del pipettatore e viene utilizzato per aspirare o espellere il liquido a seconda della posizione in cui viene premuto o rilasciato.

La manopola di regolazione del volume viene utilizzata per modificare il volume del liquido da trasferire.

Il display di lettura del volume viene letto dall'alto verso il basso. A seconda del micropipettatore utilizzato, i numeri riflettono diversi ordini di grandezza nella misurazione del volume. Qui puoi vedere una misura per 370 microlitri.

I puntali monouso vengono caricati sul fondo del micropipettatore.

Il pulsante di espulsione del puntale e lo stelo di espulsione del puntale lavorano insieme per espellere i puntali delle pipette quando devono essere smaltiti.

La famiglia dei micropipettatori comprende diversi membri di varie dimensioni che trasferiscono una gamma precisa di volumi.

Qui puoi vedere la famiglia allineata in base agli intervalli di volume che ciascuno di essi può trasferire. Ad esempio, Papa P-1000 eroga tra 200-1000 ?l, mentre il bambino del gruppo, il P-2, trasferisce tra 0,2-2 ?l.

Ciascuno dei membri della famiglia è riconoscibile da un numero nella parte superiore dello stantuffo e dal colore, che chiarisce chi sono e quanto volume possono trasferire comodamente.

Occasionalmente, altri parenti dei micropipettor si presentano per un esperimento, come lo zio P5000, la zia P100 e il cugino P10. Insieme, questa famiglia estesa può aiutare a spostare il liquido da 0,2 a 5000 ?l di volume.

Per garantire un trasferimento accurato e preciso del liquido, i puntali per pipette di diverse dimensioni, spesso, ma non sempre, sono codificati a colori per facilitarne il riconoscimento e vengono utilizzati per pipettatori di diverse dimensioni. Per quanto riguarda il volume trasferito, i puntali per micropipettor bianchi trasferiscono tipicamente tra 0,5 e 2,5 μl, i puntali gialli da 1 a 200 μl e i puntali blu da 200 a 1000 μl.

Quando si utilizza un micropipettatore, scegliere prima lo strumento con l'intervallo appropriato per il volume che si desidera trasferire. La scelta corretta del pipettatore potrebbe fare la differenza tra un esperimento riuscito o fallito.

Per iniziare, regolare la manopola sul volume desiderato. Per aumentare il volume di aspirazione, ruotare la manopola in senso antiorario, passando il volume desiderato di un terzo di giro, quindi diminuendo lentamente fino al segno finale. Per diminuire il volume, ruotare la manopola in senso orario.

Tieni presente che queste cifre nella lettura del volume hanno ordini di grandezza diversi a seconda del micropipettatore. Ad esempio, a sinistra, vediamo il P1000, che legge 370 ?l. C'è uno zero al posto delle migliaia, un 3 al posto delle centinaia e un 7 al posto delle decine. Sulla destra c'è il P200, che mostra 159 ?l con un 1 al posto delle centinaia, un 5 al posto delle decine e un 9 al posto delle unità.

Una volta impostato il volume, selezionare una punta.

Ora, tieni il micropipettatore in posizione verticale con la parte stretta del corpo nel palmo della mano e la sporgenza sopra il dito indice,

esercitando una leggera pressione per premere lo stantuffo circa a metà del primo arresto o quando inizi a sentire più resistenza.

Questa azione sposta l'aria dal puntale della pipetta.

Tenendo premuto lo stantuffo, immergere la punta tra 1 e 3 mm nel campione. Rilasciare delicatamente lo stantuffo in posizione di riposo, attendere un secondo affinché il liquido si sposti nella punta, quindi rimuovere la pipetta dal campione.

Quando lo stantuffo viene rilasciato di nuovo in posizione di riposo, il liquido viene aspirato nel vuoto creato dall'aria spostata.

Ispezionare la punta per verificare che sia stata aspirata la quantità di liquido desiderata e che la punta non contenga bolle d'aria.

Quando si trasferisce il campione nel recipiente desiderato, tenere il micropipettatore a un angolo di 10-45 contro la parete interna del recipiente ricevente. In questo modo si eviterà la formazione di bolle sulla punta. Per espellere il liquido, premere leggermente lo stantuffo fino al 1° arresto senza intoppi, per iniziare a erogare il liquido, quindi, applicando una resistenza più forte, premere lo stantuffo fino al secondo arresto per ?soffiare? l'ultimo pezzetto di liquido dalla punta.

Rimuovere completamente la punta dal recipiente, quindi rilasciare lo stantuffo in posizione di riposo.

A questo punto, utilizzare il pulsante di espulsione per gettare con cura il puntale della pipetta nell'apposito recipiente. Presta attenzione a ciò che stai facendo, perché le punte espulse possono agire come proiettili e possono potenzialmente ferire i tuoi compagni di laboratorio.

Per mantenere il buon funzionamento dei micropipettatori e preservare il meccanismo di regolazione del volume interno, non ruotare mai la manopola del volume al di sopra o al di sotto dell'intervallo specifico del micropipettatore. Potresti rompere lo strumento.

Per evitare la contaminazione incrociata tra i campioni, sostituire la punta dopo ogni trasferimento di volume.

La coerenza dell'operatore è importante quando si lavora con i micropipettatori. Una pressione regolare dello stantuffo produrrà risultati sperimentali ottimali. Infine, ricorda, per mantenere i tuoi micropipettatori in condizioni ottimali, riponi sempre gli strumenti in posizione verticale quando non sono in uso.

Ora che abbiamo trattato il funzionamento di base e i principi dell'uso dei micropipettatori, discutiamo alcune applicazioni di laboratorio comuni per i trasferimenti di microvolumi e le varianti di questo strumento.

I micropipettatori sono spesso utilizzati per trasferire sospensioni cellulari su piastre di coltura per una varietà di esperimenti.

In combinazione con punte specializzate, i micropipettatori possono essere utilizzati per caricare con cura i campioni per le tecniche analitiche, come l'elettroforesi su gel di DNA.

I micropipettatori possono essere utilizzati anche per rompere meccanicamente i tessuti, al fine di ottenere sospensioni a singola cellula.

In laboratorio si possono trovare anche varianti del micropipettatore, che funzionano in base allo spostamento dell'aria.

Le pipette a ripetizione consentono il pipettaggio in serie di volumi più piccoli dopo un'aspirazione iniziale di un volume maggiore di soluzione. Le pipette sono davvero utili per trasferire lo stesso volume di campione in un gran numero di recipienti.

Le pipette multicanale sono solitamente utilizzate per trasferire volumi nell'intervallo di volume 20-200 ?l e sono utili per caricare intere file di piastre da 96 pozzetti.

Hai appena visto l'introduzione di JoVE ai micropipettatori.

In questo video abbiamo esaminato: cos'è e come funziona un micropipettatore, come aspirare ed erogare un campione di volume liquido, alcune precauzioni di sicurezza e diverse applicazioni dei micropipettatori. Grazie per aver guardato e ricordate di scegliere la pipetta giusta per i vostri esperimenti.