Name: Analisi immunoistochimica nel Sistema Nervoso Centrale e Periferico Rat linfa nodo del tessuto Sezioni (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Scopri l'immunoistochimica doppia nel sistema nervoso centrale e nei linfonodi periferici del ratto. Questo protocollo ottimizzato consente di visualizzare la localizzazione proteica con microscopia a luce.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ringraziamo Hans Lassmann e Jan Bauer per la loro guida e supporto. Ringraziamo anche Katalin Benedek per l'eccellente assistenza tecnica e Caroline Westerlund per la valutazione critica e linguistica.
Questo studio è stato supportato da sovvenzioni di Biogen Idec, della Fondazione Wenner-Gren, del Consiglio svedese delle ricerche, dell'Associazione svedese delle persone con disabilità neurologiche, della Fondazione svedese per il cervello, del 6° quadro europeo EURATools (LSHG-CT-2005-019015) e di Neuropromise (LSHM-CT-2005-018637). I finanziatori non hanno avuto alcun ruolo nella progettazione dello studio, nella raccolta e nell'analisi dei dati, nella decisione di pubblicare o nella preparazione del manoscritto.

Dichiarazione etica presente studio è effettuata in conformità con le linee guida del Consiglio nazionale svedese per gli animali da laboratorio e la direttiva della Comunità europea (86/609 / CEE) sotto i permessi etici N338 / 09, N15 / 10 e N65 / 10, che sono stati approvati dal Comitato del Nord Stoccolma Animal Ethics. 1. Preparazione del tessuto <ol><li> Perfusion &amp; fissazione <ol><li> Anestetizzare l&#39;animale con isoflurano per eseguire perfusione transcardial via ventricolo sinistro. Avviare il risciacquo della vascolarizzazione con tampone fosfato (PBS) per rimuovere i componenti del sangue, seguito da 4% paraformaldeide in PBS 0,1 M (PFA). </li><li> Fissare cervello sezionato, il midollo spinale e dei tessuti periferici LN immergendolo in PFA. Dopo 24 ore a 4 ° C, trasferire il tessuto da PFA in PBS e conservare a 4 ° C fino ad ulteriore lavorazione. In alternativa alla PBS commerciale, dissolvere 9 g di NaCl in 250 ml S &amp;# 246; Rensen tampone e aggiungere 750 ml di acqua deionizzata (DH 2 O); preparare 0,2 M Sörensen tampone (pH 7,4) sciogliere 13,8 g di NaH 2 PO 4 x 1H 2 O e 71,2 g di Na 2 HPO 4 x 2H 2 O in 2,5 L dH 2 O. </li></ol></li><li> Disidratazione e embedding <ol><li> Tagliare il tessuto in porzioni spesse circa 5 mm usando una lama di rasoio. </li><li> Avviare il processo di indurimento tissutale (disidratazione) utilizzando il VIP Vacuum infiltrazione Processor Tissue-Tek (procedura standard basato su sommersione in concentrazioni crescenti di etanolo, seguito da xilene ed infine di paraffina (Tabella 1). </li><li> Posizionare il tessuto in uno stampo e versare il paraffina liquida attorno al campione per formare un &quot;blocco di paraffina&quot;. lo stoccaggio a lungo termine richiede temperatura ambiente (RT). Tuttavia, prima di sezionamento, è consigliabile raffreddare i blocchi, ad esempio, durante la notte (o / n) a 4 ° C.</li></ol></li></ol> 2. Sezioni <ol><li> Posizionare il blocco di paraffina in un supporto fisso del microtomo slitta, che può muoversi avanti e indietro attraverso il coltello. Regolare l&#39;angolo ottimale fra la massa e il coltello microtomo (che dipende dalla geometria del coltello, ma anche dalla velocità di taglio e la tecnica). </li><li> Cut 3 - 5 micron di spessore sezioni dal blocco di paraffina. </li><li> Trasferire sezione appena tagliato in un contenitore d&#39;acqua e montate successivamente dall&#39;acqua sul vetrino. </li><li> Premere la sezione montata con cura nei confronti di un tovagliolo di carta per rimuovere l&#39;acqua residua e potenziali bolle d&#39;aria. vetrini adesivi in ​​commercio pre-rivestiti sono raccomandabili. </li><li> Secco diapositive montate per un paio d&#39;ore in una stufa a 50 - 60 ° C. </li></ol> 3. Sparaffinatura (reidratazione e blocco del endogena perossidasi) <ol><li> Immergere i vetrini 2x in xilene (sostituto in alternativa xileneXEM-200), ogni volta 15 - 20 &#39;. </li><li> Risciacquare in 99% di etanolo. </li><li> Per bloccare l&#39;attività perossidasica endogena, incubare le sezioni per 30 &#39;in soluzione metanolica contenente perossido di idrogeno 0,25%. </li><li> Continuare reidratazione utilizzando etanolo con l&#39;aumento del contenuto di acqua (99%, 70%, finendo in acqua distillata. </li><li> Da questo punto fino fissaggio del coperchio scivola sezioni devono essere mantenuto umido. </li></ol> 4. Antigen Retrieval <ol><li> Utilizzare una vaporiera per bollire i vetrini in una soluzione di antigene recupero (in questo caso EDTA pH 8,5 tampone) per 60 &#39;(EDTA scorta soluzione contiene 1,21 g di Tris e 0,37 g di EDTA sciolti in 50 ml dH 2 O, per preparare il lavoro soluzione diluita 2,5 ml di EDTA soluzione madre in 47,5 ml di dH 2 O). </li><li> Raffreddare i vetrini su RT per ca. 1 ora e poi risciacquare 3 - 5x con Tris Buffered Saline (TBS, utilizzare in alternativa PBS), composto di 0,05 M Tris e 0,15 M NaCl; pH 7,5 regolato with HCl. In alternativa usare TBS commerciale. </li></ol> 5. blocco dei siti legame aspecifico <ol><li> Per evitare reazioni aspecifiche sfondo, incubare sezioni di RT per 30 &#39;nella soluzione bloccante contenente 10% di siero fetale bovino (FCS) e 90% di buffer DAKO. </li></ol> 6. Fare doppio immunomarcatura: Incubazione simultanea con gli Abs primari <ol><li> Diluire quantità di anticorpi primari nella soluzione di saturazione e incubare o / n a 4 ° C. Per la doppia immunocolorazione combinare α-eotassina (CCL11; 1: 300) con α-CD68 (Ed1; 1: 1.000) o α-Iba1 (Aif1, 1: 1000) o α-Cd8α (Ox-8; 1: 200) . </li><li> Sciacquare i vetrini 3-5x con tampone TBS (utilizzare in alternativa 10x diluito tampone DAKO). </li><li> Diluire quantità di anticorpi secondari (biotinilato anti-capra e AP-coniugato anti-topo, sia 1: 200) in soluzione di saturazione e incubare 1 ora a RT. </li><li> Sciacquare i vetrini 3 - 5x con tampone TBS (usE In alternativa 10x diluito tampone DAKO). </li><li> Incubare i vetrini con complesso avidina-perossidasi di rafano (HRP) diluita nella soluzione di blocco per 1 ora su RT. </li><li> Sciacquare i vetrini 3 - 5 volte con TBS tampone (utilizzare in alternativa 10x diluito tampone DAKO). </li></ol> 7. Visualizzazione <ol><li> Visualizzazione del anticorpo secondario legato AP-marcato <ol><li> Preparare 0,1 M Tris-HCl sciogliendo 12,1 g Tris in 1 L dH 2 O e regolare il pH a utilizzando HCl. Utilizzare lo stesso tampone Tris-HCl per preparare soluzione 1 M levamisolo. Preparare freschi 4% soluzione NaNO 2 in DH 2 O. </li><li> Per ottenere 50 ml del substrato Fast Blue (FB) (volume richiesto per una cuvetta di vetro standard) sciogliere 6,25 mg naftolo-AS-MX-fosfato in 312,5 ml DMF nel tubo di vetro e mescolate in 50 ml di pre-riscaldato (37 ° C) tampone Tris-HCl. Per sciogliere 12,5 mg FB RR sale a 312,5 ml 2 N HCl aggiungere 312,5 ml di precedenza Preparosso 4% soluzione di NaNO 2 e agitare la miscela negli stessi 50 ml di pre-riscaldato tampone Tris-HCl. Agitare delicatamente fino a quando il liquido giallo chiaro e, infine, aggiungere 77 ml di soluzione precedentemente preparata 1 M Levamisolo. Filtrato ottenuto miscela e versare su vetrini posti nella provetta di vetro. </li><li> Avviare l&#39;incubazione a 37 ° C e il controllo dei processi di sviluppo sotto il microscopio luce circa. frequenza di 15 - 30 min. Se girando fuzzy, sostituire la soluzione FB con la miscela fresca. </li><li> Sciacquare i vetrini 3 - 5x con tampone TBS e il trasferimento in seguito in tampone PBS. </li></ol></li><li> Visualizzazione del anticorpo secondario biotinilato legato <ol><li> Preparare DAB / H 2 O 2 soluzione di sviluppo diluendo 1 ml di soluzione madre DAB (25 mg DAB per 1 ml di PBS) in 49 ml di PBS. Aggiungere 16,5 ml H 2 O 2 e filtrato prima versando sul sezioni. </li><li> La conversione del cromogeno DAB in fronte precipitaren pigmento può essere immediata. Controllare il processo di sviluppo sotto il microscopio ottico (anche paio di secondi di incubazione più lungo può sollevare uno sfondo alto e mascherare il segnale specifico). </li><li> L&#39;intensità del precipitato pigmento marrone può essere alternativamente migliorata mediante incubazione in soluzione costituita da 2% di solfato di rame e 0,9% NaCl per 5 &#39;. </li><li> Sciacquare i vetrini 3 - 5 volte con PBS e infine con dH 2 O, in alternativa, utilizzare l&#39;acqua del rubinetto. </li><li> Montare le diapositive con copertura scivola direttamente dall&#39;acqua utilizzando acquosa mezzo di montaggio GelTol. Evitare la formazione di bolle d&#39;aria. </li><li> Consentire completa asciugatura del mezzo di montaggio, ad esempio, o / n a 4 ° C. Conservare asciugato diapositive su RT. </li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 1. </td><td> % di etanolo </td><td> 20 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 2. </td><td> % di etanolo </td><td> 60 &amp;# 39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 3. </td><td> % di etanolo </td><td> 90 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 4. </td><td> % di etanolo </td><td> 60 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 5. </td><td> % di etanolo </td><td> 90 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 6. </td><td> % di etanolo </td><td> 60 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 7. </td><td> % di etanolo </td><td> 90 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 8. </td><td> % di etanolo </td><td> 120 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 9. </td><td> xylol </td><td> 30 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 10. </td><td> xylol </td><td> 60 &#39; </td><td> 40 ° C </td></tr><tr><td> 11. </td><td> Paraffina </td><td> 60 &#39; </td><td> 60 ° C </td></tr><tr><td> 12. </td><td> Paraffina </td><td> 60 &#39; </td><td> 60 ° C </td></tr><tr><td> 13. </td><td> Paraffina </td><td> 60 &#39; </td><td> 60 ° C </td></tr><tr><td> 14. </td><td> Paraffina </td><td> 120 &#39; </td><td> 60 ° C </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Il trattamento dei tessuti da tessuto-Tek VIP vuoto infiltrazione del processore.

<ol><li>Coons, A., Creech, H. J., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+properties+of+an+antibody+containing+a+fluorescent+group%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Soc+Exp+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Immunological properties of an antibody containing a fluorescent group.</a> Proc Soc Exp Biol Med. 47, 200-202 (1941).</li>
<li>Nakane, P. K., Pierce, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme-labeled+antibodies%3A+preparation+and+application+for+the+localization+of+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Enzyme-labeled antibodies: preparation and application for the localization of antigens.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 14, 929-931 (1966).</li>
<li>Avrameas, S., Uriel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+of+antigen+and+antibody+labelling+with+enzymes+and+its+immunodiffusion+application%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+Hebd+Seances+Acad+Sci+D%22%5BJournal%5D)">Method of antigen and antibody labelling with enzymes and its immunodiffusion application.</a> C R Acad Sci Hebd Seances Acad Sci D. 262, 2543-2545 (1966).</li>
<li>Mason, D. Y., Sammons, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+preparation+of+peroxidase%3A+anti-peroxidase+complexes+for+immunocytochemical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological%22%5BJournal%5D)">Rapid preparation of peroxidase: anti-peroxidase complexes for immunocytochemical use.</a> Journal of immunological. 20, 317-324 (1978).</li>
<li>Faulk, W. P., Taylor, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunocolloid+method+for+the+electron+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Immunochemistry%22%5BJournal%5D)">An immunocolloid method for the electron microscope.</a> Immunochemistry. 8, 1081-1083 (1971).</li>
<li>Coons, A. H., Kaplan, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+antigen+in+tissue+cells%3B+improvements+in+a+method+for+the+detection+of+antigen+by+means+of+fluorescent+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">Localization of antigen in tissue cells; improvements in a method for the detection of antigen by means of fluorescent antibody.</a> The Journal of experimental medicine. 91, 1-13 (1950).</li>
<li>Polak, J. M., Van Noorden, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPolak%2C+JM+%22Introduction+to+immunocytochemistry%22">Introduction to immunocytochemistry</a>. , Bios Scientific Publishers Ltd. Oxford, UK. (2003).</li>
<li>Elias, J. M., Margiotta, M., Gaborc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+and+detection+efficiency+of+the+peroxidase+antiperoxidase+%28PAP%29%2C+avidin-biotin+peroxidase+complex+%28ABC%29%2C+and+peroxidase-labeled+avidin-biotin+%28LAB%29+methods%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+clinical+pathology%22%5BJournal%5D)">Sensitivity and detection efficiency of the peroxidase antiperoxidase (PAP), avidin-biotin peroxidase complex (ABC), and peroxidase-labeled avidin-biotin (LAB) methods.</a> American journal of clinical pathology. 92, 62-67 (1989).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+aspects+of+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Technical aspects of immunohistochemistry.</a> Vet Pathol. 42, 405-426 (2005).</li>
<li>Adzemovic, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Ccl11+associates+with+immune+response+modulation+and+protection+against+neuroinflammation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Expression of Ccl11 associates with immune response modulation and protection against neuroinflammation in rats.</a> PloS one. 7, 39794(2012).</li>
<li>Bauer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+in+PLP-overexpressing+transgenic+rats%3A+gray+matter+oligodendrocytes+are+more+vulnerable+than+white+matter+oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuropathology+and+experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress in PLP-overexpressing transgenic rats: gray matter oligodendrocytes are more vulnerable than white matter oligodendrocytes.</a> Journal of neuropathology and experimental neurology. 61, 12-22 (2002).</li>
<li>Bradl, M., Bauer, J., Flugel, A., Wekerle, H., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+contribution+of+CD4+and+CD8+T+lymphocytes+to+T-cell+infiltration+of+the+intact+and+the+degenerative+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">Complementary contribution of CD4 and CD8 T lymphocytes to T-cell infiltration of the intact and the degenerative spinal cord.</a> The American journal of pathology. 166, 1441-1450 (2005).</li>
<li>Zhang, C., Lam, T. T., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+populations+of+microglia%2Fmacrophages+in+the+retina+and+their+activation+after+retinal+ischemia+and+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous populations of microglia/macrophages in the retina and their activation after retinal ischemia and reperfusion injury.</a> Experimental eye research. 81, 700-709 (2005).</li>
<li>Hirasawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+microglia+in+living+tissues+using+Iba1-EGFP+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+research%22%5BJournal%5D)">Visualization of microglia in living tissues using Iba1-EGFP transgenic mice.</a> Journal of neuroscience research. 81, 357-362 (2005).</li>
<li>Norment, A. M., Salter, R. D., Parham, P., Engelhard, V. H., Littman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-cell+adhesion+mediated+by+CD8+and+MHC+class+I+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cell-cell adhesion mediated by CD8 and MHC class I molecules.</a> Nature. 336, 79-81 (1988).</li>
<li>Hoetelmans, R. W., van Slooten, H. J., Keijzer, R., Jvan de Velde, C. J., van Dierendonck, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+formaldehyde+fixation+irreversibly+reduces+immunoreactivity+of+Bcl-2+in+the+nuclear+compartment+of+breast+cancer+cells%2C+but+not+in+the+cytoplasm%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+immunohistochemistry+%26+molecular+morphology+%3A+AIMM+%2F+official+publication+of+the+Society+for+Applied+Immunohistochemistry%22%5BJournal%5D)">Routine formaldehyde fixation irreversibly reduces immunoreactivity of Bcl-2 in the nuclear compartment of breast cancer cells, but not in the cytoplasm.</a> Applied immunohistochemistry & molecular morphology : AIMM / official publication of the Society for Applied Immunohistochemistry. 9, 74-80 (2001).</li>
<li>Hayat, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHayat%2C+M+%22Microscopy%2C+Immunohistochemistry+and+antigen+retrieval+methods+for+light+and+electron+microscopy%22">Microscopy, Immunohistochemistry and antigen retrieval methods for light and electron microscopy</a>. , Kluwer Academic. New York. (2002).</li>
<li>Boenisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formalin-fixed+and+heat-retrieved+tissue+antigens%3A+a+comparison+of+their+immunoreactivity+in+experimental+antibody+diluents%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+immunohistochemistry+%26+molecular+morphology+%3A+AIMM+%2F+official+publication+of+the+Society+for+Applied+Immunohistochemistry%22%5BJournal%5D)">Formalin-fixed and heat-retrieved tissue antigens: a comparison of their immunoreactivity in experimental antibody diluents.</a> Applied immunohistochemistry & molecular morphology : AIMM / official publication of the Society for Applied Immunohistochemistry. 9, 176-179 (2001).</li>
<li>Shi, S. R., Key, M. E., Kalra, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+retrieval+in+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues%3A+an+enhancement+method+for+immunohistochemical+staining+based+on+microwave+oven+heating+of+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Antigen retrieval in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues: an enhancement method for immunohistochemical staining based on microwave oven heating of tissue sections.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 39, 741-748 (1991).</li>
<li>Huang, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+demonstration+of+hepatitis+B+core+and+surface+antigens+in+paraffin+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+investigation%3B+a+journal+of+technical+methods+and+pathology%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical demonstration of hepatitis B core and surface antigens in paraffin sections.</a> Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 33, 88-95 (1975).</li>
<li>Shi, S. R., Cote, R. J., Taylor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+retrieval+immunohistochemistry%3A+past%2C+present%2C+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Antigen retrieval immunohistochemistry: past, present, and future.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 45, 327-343 (1997).</li>
<li>Taylor, C. R., Shi, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+retrieval%3A+call+for+a+return+to+first+principles%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+immunohistochemistry+%26+molecular+morphology+%3A+AIMM+%2F+official+publication+of+the+Society+for+Applied+Immunohistochemistry%22%5BJournal%5D)">Antigen retrieval: call for a return to first principles.</a> Applied immunohistochemistry & molecular morphology : AIMM / official publication of the Society for Applied Immunohistochemistry. 8, 173-174 (2000).</li>
<li>Kitamoto, T., Ogomori, K., Tateishi, J., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formic+acid+pretreatment+enhances+immunostaining+of+cerebral+and+systemic+amyloids%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+investigation%3B+a+journal+of+technical+methods+and+pathology%22%5BJournal%5D)">Formic acid pretreatment enhances immunostaining of cerebral and systemic amyloids.</a> Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 57, 230-236 (1987).</li>
<li>Nelson, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pathology+%3A+MP%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies.</a> Molecular pathology : MP. 53, 111-117 (2000).</li>
<li>Van der Loos, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVan+der+Loos%2C+C+%22Immunoenzyme+multiple+staining+methods%22">Immunoenzyme multiple staining methods</a>. , Bios Scientifc publishers Ltd. New York. (1999).</li>
<li>Elias, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aElias%2C+J+%22Immunohistopathology.+A+practical+approach+to+diagnosis%22">Immunohistopathology. A practical approach to diagnosis</a>. , ASCP Press. Chicago. (2003).</li>
<li>Straus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Letter%3A+Cleavage+of+heme+from+horseradish+peroxidase+by+methanol+with+inhibition+of+enzymic+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Letter: Cleavage of heme from horseradish peroxidase by methanol with inhibition of enzymic activity.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 22, 908-911 (1974).</li>
<li>Streefkerk, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+erythrocyte+pseudoperoxidase+activity+by+treatment+with+hydrogen+peroxide+following+methanol%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Inhibition of erythrocyte pseudoperoxidase activity by treatment with hydrogen peroxide following methanol.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 20, 829-831 (1972).</li>
<li>Ponder, B. A., Wilkinson, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+endogenous+tissue+alkaline+phosphatase+with+the+use+of+alkaline+phosphatase+conjugates+in+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Inhibition of endogenous tissue alkaline phosphatase with the use of alkaline phosphatase conjugates in immunohistochemistry.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 29, 981-984 (1981).</li>
<li>Petrelli, F., Coderoni, S., Moretti, P., Paparelli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+biotin+on+phosphorylation%2C+acetylation%2C+methylation+of+rat+liver+histones%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+reports%22%5BJournal%5D)">Effect of biotin on phosphorylation, acetylation, methylation of rat liver histones.</a> Molecular biology reports. 4, 87-92 (1978).</li>
<li>Yagi, T., Terada, N., Baba, T., Ohno, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+endogenous+biotin-containing+proteins+in+mouse+Bergmann+glial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Histochemical+journal%22%5BJournal%5D)">Localization of endogenous biotin-containing proteins in mouse Bergmann glial cells.</a> The Histochemical journal. 34, 567-572 (2002).</li>
<li>Van Hecke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+Immunohistochemical+Staining+Today%3A+Choices+to+Make%2C+Challenges+to+Take%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histotechnology%22%5BJournal%5D)">Routine Immunohistochemical Staining Today: Choices to Make, Challenges to Take.</a> Journal of Histotechnology. 1, 45-54 (2002).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

procedure IHC standard spesso richiedono adattamenti specifici per ottenere un risultato ottimale, che implica comunemente una grande esperienza, ma anche l&#39;approccio &quot;trial and error&quot;. Dalla preparazione del tessuto fino visualizzazione di destinazione, quasi ogni fase del protocollo può essere soggetto a modifiche progettate in modo da migliorare il risultato finale. protocollo di doppia colorazione qui presentata esemplifica proteina IHC targeting basato particolarmente adeguato per valutare le interrel...

Nonostante l&#39;utilizzo di tecnologie avanzate high-throughput analisi effettuate sul methylome, trascrittoma o addirittura a livello del proteoma, immunostaining rimane il golden standard per la rilevazione delle proteine ​​direttamente nel campione di tessuto, coltura cellulare o uno striscio di cellule. Rivelando il modello di localizzazione / distribuzione, immunoistochimica (IHC) può valutare i rapporti relativi e interrelazioni topografiche delle proteine ​​bersaglio, e anche indicare le loro attività biologiche. Pertanto, IHC è ampiamente utilizzata per scopi clinici e di ricerca, per esempio, per la diagnosi, valutazioni di trattamento, lo studio dei meccanismi della malattia, alterazioni funzionali e fenotipiche in modelli animali, ecc In sostanza comprende l&#39;istologia, patologia, biochimica e immunologia, IHC è notevolmente avanzato dal 1941, quando gli anticorpi fluorescente sono stati utilizzati per la prima volta ad identificare gli antigeni pneumococco nel tessuto infetto 1. Visualization di prodotti cellulari e componenti per IHC si basa sul legame degli anticorpi (ABS) per la loro specifica antigene (Ag). Oltre a utilizzare fluorofori contrassegnati anticorpi, le reazioni immunitarie possono anche essere visualizzati utilizzando enzimi come la perossidasi 2,3 o fosfatasi alcalina 4. Inoltre, anticorpi oro-tag colloidali 5 sono utilizzati per rilevare specifica interazione antigene-anticorpo sia microscopia ottica ed elettronica, mentre le etichette radioattivi vengono visualizzati mediante autoradiografia. La reazione immunologica Ag-Ab può essere rilevato tramite metodi diretti e indiretti. Il metodo diretto è sostanzialmente più veloce e più semplice, in quanto utilizza direttamente etichettato Abs primaria 6. Tuttavia, a causa della notevole mancanza di sensibilità, metodi indiretti sono preferiti a quelli diretti. Procedure di rilevamento indiretto due fasi richiedono non marcato Abs primaria, come il primo, ed etichettati Abs secondari diretti contro il Abs primario, come secondo strato 7.amplificazione del segnale può essere ottenuto coinvolgendo ulteriormente, terziaria Ab enzima accoppiato (tre fasi metodo indiretto) che si lega al Ab secondario. metodi di rilevamento indiretto comunemente usati sono avidina-biotina e perossidasi antiperossidasi (PAP). In alternativa, fosfatasi alcalina-antialcalina fosfatasi (APAAP) complesso può essere usato al posto del metodo PAP. In particolare, fosfatasi alcalina (AP) i metodi sembrano essere ancora più sensibile rispetto ai metodi di immunoperossidasi 4. metodo avidina-biotina complesso (ABC) utilizza biotinilato Ab secondario in combinazione con l&#39;etichetta avidina-biotina complesso (LAB), o etichettato streptavidina-biotina complesso (LASTRA). Sensibilità di rilevazione può essere ulteriormente aumentata coinvolgendo avidina marcata con perossidasi o fosfatasi alcalina 8. Altri metodi di rilevamento in uso sono etichettatura polimerico, amplificazione tiramina e immuno-rolling cerchio 9. In particolare, diversi metodi di rilevamento possono essere combinati per la rilevazione multipla Ag nella stessa tessuticampione, che è stato segnalato per la prima volta nel 1978 4. simultanea doppia immunostaining qui presentata è stata eseguita in fissati in formalina, inclusi in paraffina ratto del sistema nervoso centrale e LN sezioni di tessuto con perossidasi-bound e AP-coniugati anticorpi secondari, rispettivamente. I segnali sono stati visualizzati con 3,3&#39;-diaminobencidine (DAB) cromogeno e il Fast Blue (FB) APAAP complesso, rispettivamente.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>Isoflurane (Isofluran): 1-Chlor-2,2,2-trifluorethyl (difluormethyl ether) 2-Chlor-2-(difluormethoxy)-1,1,1-trifluorethan (C3H2ClF5O)</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td>Irradiazione oculare. Probabilmente influenza la fertilità e danneggia il bambino nell'utero. Somministrare solo in ambiente anestetizzante adeguatamente attrezzato.</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (NaCl)</td><td>Merck</td><td>1.0604</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tampone fosfato (PBS), compressa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide [OH(CH2O)nH (n = 8 - 100)), 4% in 1x PBS</td><td>Apl pharma</td><td>34 24 28</td><td>Pericolo per la salute. Corrosivo. Infiammabile. Tossicità acuta.</td></tr><tr><td>Etanolo &#8805; 99,5%, assoluto (CH3CH2OH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459844-1L</td><td>Fiammabile.</td></tr><tr><td>Xilene (xileni, grado istologico; C6H4(CH3)2 </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056</td><td>Flamable. Tossicità acuta.</td></tr><tr><td>Histo-Comp Paraffin</td><td>Wax Tissue-Tek</td><td>V0-5-1001</td><td></td></tr><tr><td>Diapositive adesive per microscopio</td><td>Starfrost</td><td>MIC-1040-W</td><td></td></tr><tr><td>Sostituto dello xilolo XEM-200 </td><td>Vogel GmbH</td><td>ND-HS-200</td><td>Sensibilizzazione respiratoria. Cancerogenicità.</td></tr><tr><td>&alfa;-CD8 (Ox-8) topo anti-ratto, anticorpo primario</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA48G</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-Iba1 (AIF1) topo anti-ratto, anticorpo primario</td><td>Millipore</td><td>MABN92</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-CD68 (ED1) topo anti-ratto, anticorpo primario</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA341R</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-eotaxin C-19 (CCL11) capra anti-ratto, anticorpo primario</td><td>Santa Cruz BT</td><td>SC-6181</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario coniugato con fosfatasi alcalina (AP)</td><td>Dakopatts, Danimarca</td><td>D0314</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario biotinilato</td><td>Amersham Biotech</td><td>RPN1025</td><td></td></tr><tr><td>Complesso avidina-perossidasi di rafano (HRP) </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3151</td><td></td></tr><tr><td>Naftolo AS-MX fosfato (C19H18NO5P)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4875-1G</td><td>Tossicità acuta.</td></tr><tr><td>Sale RR blu veloce, diazo azoico n. 24 (C15H14ClN3O3 x 1/2 ZnCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FBS25</td><td></td></tr><tr><td>Levamisol cloridrato (C11H13ClN2S)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31742</td><td>Tossicità acuta.</td></tr><tr><td>3,3'-Diaminobenzidina tetracloridrato (Cromogeno DAB)</td><td>DAKO</td><td>S3000</td><td>Facilmente infiammabile. Tossico.</td></tr><tr><td>Solfato di rame (CuSO4)</td><td>Merck</td><td>1.02791</td><td>Tossicità acuta. Pericolo ambientale.</td></tr><tr><td>GelTol Mezzo di montaggio acquoso</td><td>Thermo Electron Corporation</td><td>230100</td><td></td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno, 30% (H2O2)</td><td>Merck</td><td>107210</td><td>Tossicità acuta.</td></tr><tr><td>Metanolo (CH3OH)</td><td>Fluka</td><td>65543</td><td>Tossicità acuta. Sensibilizzazione respiratoria. Cancerogenicità. Infiammabile.</td></tr><tr><td>Tris (idrossimetil) amminometano, base TRIS (C4H11NO3 )</td><td>AppliChem</td><td>A1379</td><td>Irritazione della pelle e degli occhi.</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata Tris (TBS), compressa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5030</td><td></td></tr><tr><td>Di- Sodio idrogeno fosfato diidrato (Na2HPO4 x 2H2O)</td><td>Merck</td><td>1.0658</td><td></td></tr><tr><td>Sodio diidrogeno fosfato monoidrato (NaH2PO4 x 1H2O) </td><td>Merck</td><td>1.06346</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale di vitello (FCS) </td><td>Cambrex BioScience</td><td>DE-14-802F</td><td></td></tr><tr><td>Tampone di lavaggio per citomazione DAKO 10x </td><td>DAKO</td><td>S3006</td><td>Deve essere conservato a 2-8 gradi; C per inibire la crescita batterica. Evitare la formazione di schiuma.</td></tr><tr><td>N,N-dimetilformammide; DMF (C3H7NO)</td><td>Fluka</td><td>40250</td><td>Infiammabile. Tossicità acuta.</td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti 24 x 36 mm </td><td>Menzel-Gl&#228; ser</td><td>BB024036A1</td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico, conc. (HCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30721</td><td>Corrosivo, irritante, permeatore. Sensibilizzante polmonare (come nebbia acida). Tossico.</td></tr><tr><td>Soluzione di acido cloridrico volumetrica, 2 M HCl (2 N)</td><td>Fluka</td><td>71826</td><td>Corrosivo, irritante, permeatore. Sensibilizzante polmonare (come nebbia acida). Tossico.</td></tr><tr><td>Nitrito di sodio, ReagentPlus, &#8805; 99,0% (NaNO2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2252</td><td>ossidante. Tossico. Pericoloso per l'ambiente.</td></tr><tr><td>Sale disodico dibasico dell'acido etilendinitrilotetraacetico (EDTA; C10H14N2Na2O8 x 2H2O)</td><td>Merck</td><td>1.08454</td><td>Le esposizioni orali possono causare effetti sulla riproduzione e sullo sviluppo.</td></tr><tr><td colspan="4"> Equipment</td></tr><tr><td>Tissue-TekV.I.P Vacuum Infiltration Processor</td><td>Sakura</td><td>5902 VIP Jr. 115 V, 60 Hz</td><td></td></tr><tr><td>Hacker-Bright 8000 Series Base Sledge Microtome </td><td>Hacker instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vaporiera per alimenti domestici </td><td>Braun</td><td>MultiGourmet FS 20</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio ottico </td><td>Leica Polyvar 2</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

analisi immunoistochimica nel sistema nervoso centrale e periferico rat linfa nodo del tessuto sezioni

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

Immunoistochimica (IHC) prevede la visualizzazione di proteine ​​altamente specifiche, affidabile e attraente. corretta esecuzione e interpretazione di un etichette multicolori IHC-based è impegnativo, soprattutto se utilizzata per valutare interrelazioni tra proteine ​​bersaglio nel tessuto con un alto contenuto di grassi come il sistema nervoso centrale (CNS). Il nostro protocollo rappresenta un perfezionamento della tecnica immunomarcatura serie particolarmente adeguato per il rilevamento di entrambe le proteine ​​strutturali e solubili nel ratto SNC e linfonodi periferici (LN) affetti da neuroinflammation. Tuttavia, con o senza ulteriori modifiche, il nostro protocollo potrebbe probabilmente essere utilizzato per il rilevamento di altri bersagli proteici correlati, anche in altri organi e specie che qui presentato.

immunostainings doppie (co-colorazioni) sono stati eseguiti in fissati in formalina, inclusi in paraffina ratto sezioni del sistema nervoso centrale e LN. 3-5 micron di spessore fette di tessuto sono stati tagliati con un microtomo slitta, montato successivamente su vetrini adesivo pre-verniciato e trattato come descritto in precedenza 10,11,12. Brevemente, dopo deparaffinizing, reidratazione tessuti e endogena inattivazione perossidasi, sezioni sono stati sottoposti al proces...

Presentiamo qui un protocollo ottimizzato e dettagliato per la doppia immunocolorazione in sezioni di tessuto del sistema nervoso centrale (SNC) e dei linfonodi periferici (LN) di ratto fissate in formalina e incluse in paraffina.

Analisi immunoistochimica nel Sistema Nervoso Centrale e Periferico Rat linfa nodo del tessuto Sezioni

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di individuare una proteina specifica nel tessuto di ratto. Questo risultato si ottiene isolando, fissando e inclusando il tessuto in paraffina, seguito dalla sezione del tessuto e dal suo montaggio su vetrini. Il secondo passaggio consiste nel deparaffinizzare e reidratare le sezioni di tessuto inclusate in paraffina, quindi bloccare la perossidasi endogena.Successivamente, gli epitopi vengono esposti mediante recupero dell'antigene. In seguito, si esegue un blocco per ridurre il legame aspecifico prima dell'aggiunta degli anticorpi. L'ultimo passaggio consiste nel rilevare l'epitopo specifico mediante immunomarcatura con anticorpi primari e secondari, e nello sviluppare il segnale proveniente dall'anticorpo secondario marcato.Infine, il segnale viene visualizzato mediante microscopia ottica per mostrare il pattern di localizzazione della proteina nelle sezioni di tessuto. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sui pattern di localizzazione ed espressione proteica nel sistema nervoso centrale del ratto e nei linfonodi periferici, può essere applicato anche ad altri organi e specie. Per dimostrare la procedura verrà utiliz

immunohistochemical-analysis-rat-central-nervous-system-peripheral

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Questo video dimostra la colorazione immunoistochimica delle fibre colinergiche nel nucleo basale della regione di Meynert delle sezioni cerebrali di topo. Le sezioni vengono bloccate e trattate con anticorpi primari contro la colina acetiltransferasi, seguiti da anticorpi secondari biotinilati. Vengono aggiunti complessi avidina-biotina-perossidasi, che si legano agli anticorpi secondari, seguiti dal substrato cromogenico. Le sezioni vengono quindi disidratate e montate prima di essere...

Colorazione immunoistochimica delle fibre nervose nel nucleo basale di Meyner del cervello di topo

Fonte: Evilsizor, M. N., et. al., Primer per l'immunoistochimica su tessuto cerebrale di ratto criosezionato: esempio di colorazione per microglia e neuroni. J. Vis. Exp. (2015)Questo video mostra una procedura di colorazione immunoistochimica passo-passo su tessuto cerebrale di ratto criosezionato per visualizzare la disposizione spaziale di microglia e neuroni.

Colorazione immunoistochimica delle criosezioni del tessuto coronale di ratto per microglia e neuroni

Questo protocollo di livello introduttivo descrive i reagenti, le attrezzature e le tecniche necessarie per completare la colorazione immunoistochimica del cervello dei roditori, utilizzando come esempio marcatori per microglia ed elementi neuronali.

Primer per immunoistochimica su Cryosectioned Rat tessuto cerebrale: Esempio colorazione per Microglia e neuroni

Qui, descriviamo un metodo semplice ed economico che permette la quantificazione delle cellule tumorali adesive alle criosezioni dei linfonodi (LN). Le cellule tumorali aderenti a LN sono facilmente identificabili dalla microscopia leggera e confermate da un metodo basato sulla fluorescenza, dando un indice di adesione che rivela l'affinità di legame delle cellule tumorali al parenchyma LN.

Quantificazione dell'adesione delle cellule tumorali nelle Criosezioni del linfonodo

I principali gangli pelvici contengono neuroni parasimpatici e simpatici che innervare gli organi pelvici. Qui descriviamo un metodo di dissezione e forniamo schemi per l'identificazione di questi gangli e dei loro nervi associati. Questi metodi possono essere applicati alla manipolazione sperimentale di questi gangli in vivo o alla rimozione post-mortem per ulteriori studi.

Dissezione dei Gangli autonomi pelvici e dei nervi associati nei ratti maschi e Femmine

Questo manoscritto presenta un protocollo per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale attiva (EAE) nei topi. Viene inoltre presentato un metodo per l'isolamento e la caratterizzazione dei linfociti infiltrati nel sistema nervoso centrale (CNS) per mostrare come i linfociti siano coinvolti nello sviluppo della malattia autoimmune del SNC.

Analisi citometrica del flusso dell'infiltrazione di linfociti nel sistema nervoso centrale durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Questo documento presenta due protocolli ottimizzati per l'esame delle cellule immunitarie residenti e di derivazione periferica all'interno del sistema nervoso centrale, tra cui il cervello, il midollo spinale e le meningi. Ognuno di questi protocolli aiuta ad accertare la funzione e la composizione delle cellule che occupano questi compartimenti in condizioni stazionarie e infiammatorie.

Isolamento dei tessuti del sistema nervoso centrale e delle meningi associate per l'analisi a valle delle cellule immunitarie

Qui descriviamo un metodo preciso per raccogliere linfociti del dotto toracico e osservare la migrazione dei linfociti intestinali-tropici nelle chiazze del ratto Peyer per 3 ore usando la fotografia time-lapse. Questa tecnica può chiarire come la dinamica dei linfociti sia influenzata in condizioni infiammatorie.

Osservazione microscopica della dinamica dei linfociti nelle patch di Rat Peyer

La tecnica free-floating consente ai ricercatori di eseguire colorazioni istologiche, compresa l'immunoistochimica su sezioni di tessuto fisse per visualizzare le strutture biologiche, il tipo di cellula e l'espressione e la localizzazione delle proteine. Questa è una tecnica istochimica efficiente e affidabile che può essere utile per studiare una moltitudine di tessuti, come cervello, cuore e fegato.

Colorazioni istologiche con sezioni di tessuto fluttuanti

Viene presentato un comodo metodo di perfusione alimentato a gravità per l'analisi istologica del sistema nervoso centrale del topo. Il rilevamento immunofluorescente della α-sinucleina fosforilata è dimostrato in un modello murino di malattia di Parkinson. Questo lavoro descrive anche in modo completo le fasi di perfusione transcardica, dissezione, congelamento / incorporamento dei tessuti e sezionamento congelato.

Un metodo di perfusione transcardica alimentato per gravità per l'analisi istologica del sistema nervoso centrale del topo

Questo protocollo descrive una tecnica di immunofluorescenza multicolore per la valutazione del modello di rinite allergica nel ratto.

Marcatura immunofluorescente in sezioni di tessuto della mucosa nasale di ratti con rinite allergica tramite test immunologico multicolore

Scopri l'immunoistochimica doppia nel sistema nervoso centrale e nei linfonodi periferici del ratto. Questo protocollo ottimizzato consente di visualizzare la localizzazione proteica con microscopia a luce.

Analisi immunoistochimica nel Sistema Nervoso Centrale e Periferico Rat linfa nodo del tessuto Sezioni

Esplora altri video