Name: A Caenorhabditis elegans Système modèle pour létude de Amylopathy (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: Découvrez comment évaluer la toxicité de l'amyloïde bêta sur la fonction neuronale en utilisant des vers transgéniques Caenorhabditis elegans et des tests de chimiotaxie. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes moléculaires de la neurodégénérescence.

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<p class="jove_content"&gt; Nous remercions le Dr Shuang Liu pour la lecture critique du manuscrit. Le PCL12 construction était un cadeau sous forme Dr. Christopher D. Link. Ce travail a été soutenu par deux Science Foundation subventions nationales (0842708 et 1026958) et une subvention AHA (09GRNT2250529) pour FS.</p

1. Construction des vers transgéniques <ol><li> Transformation. <ol><li> Préparer plaquettes d&#39;injection. Déposer une goutte d&#39;eau chaude, 2% d&#39;agarose dissous dans l&#39;eau, sur une lamelle de verre. Placer rapidement d&#39;une seconde lamelle sur la goutte et tapoter sur elle. Après l&#39;agarose est solidifié, des lamelles de diapositives à part, et cuire la lamelle-pad dans un four sous vide à 80 ° CO / N. </li><li> Tirez pipettes. Nous utilisons une Sutter P-97 Extracteur de tirer 1/0.5 mm OD / ID borosilicate capillaires avec filament. Les pipettes sont forgés à pointe fermée qui est cassé ouvert à un stade ultérieur. </li><li> Préparer le mélange d&#39;injection. Faire le mélange d&#39;injection contenant l&#39;ADN d&#39;intérêt (20 ng / l par construction) plus vide ADN plasmidique à une concentration finale de 150 ng / ul. Centrifuger le mélange d&#39;injection pour éliminer tout contaminant. Cette étape est cruciale car les contaminants réduisent l&#39;efficacité de la transformation. Transférer le top 5 pl (débris et autres contaminants s&#39;accumulent dans le fond) dans un nouveau tube à be utilisé dans l&#39;injection. </li><li> Chargez mélange d&#39;injection par capillarité. La partie inférieure de la pipette est immergée dans le mélange d&#39;injection. Typiquement 0,5 pi sont suffisantes pour injecter 100 vers. </li><li> Chargez pipette d&#39;injection. Insérez la pipette sur le support du micromanipulateur et casser ouvert en frottant sa pointe contre le bord d&#39;une lamelle montée sur une lame de verre ou encore contre les débris sur le pavé agarose. Il s&#39;agit d&#39;une étape cruciale que des conseils trop grand dommage que le ver et trop petits conseils sont facilement bouché. La qualité de la pointe cassée peut être jugée par la forme et surtout par le débit. Le débit peut être évaluée par la taille des bulles qui coule de l&#39;extrémité ouverte immergé dans une goutte d&#39;huile de 700 des halocarbures en réponse à une pression d&#39;injection. </li><li> Transfert vers de tampon d&#39;injection. Déposer une goutte de 700 huile hydrocarbure, un tampon d&#39;injection et de transférer plusieurs (1 ou 2 pour les débutants) vers à l&#39;huile. Utilisez un ver choisir de pousser les vers le bas sur la touche jusqu&#39;à ce que leY adhérer à l&#39;agarose. Worms doivent être orientés en rangées avec des côtés ventrales dans la même direction. Évitez de toucher la tête de vis. Si après plusieurs tentatives les vers parviennent pas à adhérer à la garniture, le remplacer par un tampon frais ou augmenter agarose épaisseur et / ou la concentration. </li><li> Insérer la pipette dans le ver. En déplaçant la scène, positionnez le ver sous la pipette. Positionner la pipette dans le noyau central de la gonade, car son cytoplasme est partagé par de nombreux noyaux des cellules germinales. Cela augmente la probabilité de livrer ADN injecté à de nombreux descendants. La pipette doit se trouver pratiquement parallèle à la vis sans fin (~ 15 ° -25 ° d&#39;angle). Pousser verticalement la pointe de la pipette vers le bas du corps de la vis sans fin jusqu&#39;à ce que la peau est enfoncée. Puis appuyez doucement sur le manipulateur pour induire l&#39;insertion de pointe. Pour de meilleurs résultats injecter deux gonades. </li><li> Injecter la solution d&#39;ADN. Appliquer une pression à la pipette jusqu&#39;à ce que la houle gonades. Arrêter l&#39;écoulement et tirer le ver au large de la pipette. Testez l&#39;aiguille pour le flux, puis déplacezà l&#39;autre vis sans fin et les étapes d&#39;injection de répétition. </li><li> Récupérer les vers: Ajouter une goutte (~ 10 pi) de tampon de récupération sur les vers et incuber jusqu&#39;à ce que les vers commencent la natation. Ajouter un volume égal de M9, attendre jusque vers reprendre la natation et répéter plusieurs fois jusqu&#39;à ce que la solution est surtout M9. Transférer individuellement vers de plaques ensemencées. </li></ol></li><li> Intégration. <ol><li> Placez 40 en bonne santé, bien nourris, L4 vers dans une assiette fraîche </li><li> Irradier avec γ-ray avec 4000 rads pour 40 min. Transfert vers irradiés (P0), en OP50 plaques ensemencées frais (4 worms / plaque). Les vers peuvent également être irradiés avec une dose de 300 J / m 2 UVs. </li><li> Transfert 10-20 transformants F1 à partir de chaque plaque d&#39;assiettes individuelles, étiqueter les plaques avec le P0 origine correspondant. </li><li> Simple à 2-4 transformants F2 pour chaque F1 à plaques séparées. Vérifier la descendance F3 de transmission de 100% du marqueur de la transformation. Typiquement, 1-3% de la descendance d&#39;une wil ver irradiéJe dois un événement d&#39;intégration. </li><li> Faire stocks de trois ou plusieurs lignes de transformants indépendants. </li></ol></li></ol> 2. Tests comportementaux <ol><li> Age-synchronisation. <ol><li> Croître vers de la norme 10 cm plaques NGM + OP50 E. coli jusqu&#39;à une grande population d&#39;adultes gravides est atteint (3-5 jours). </li><li> Recueillir les vers dans des tubes de 50 ml Falcon en les suspendant dans un tampon M9 1 ml. </li><li> Ajouter 5 ml tampon M9 et centrifuger à 450 g pendant 3 min. Rejeter le surnageant. Répétez 3-4x. </li><li> A la fin de la dernière centrifugation, éliminer le surnageant et ajouter 10 volumes de solution d&#39;hypochlorite de base (0,5 M NaOH, 1% d&#39;hypochlorite fraîchement mélangé) pour les vers granulés. Incuber à température ambiante pendant ~ 10 min. La réaction de lyse peut être contrôlée en plaçant une goutte de la réaction de lyse sur une lamelle couvre-objet et en examinant les vers au microscope. Lorsque environ 80% des vers sont cassé la réaction doit être arrêté. </li><li> Arrêter la réaction de lyse par Adding le même volume de tampon d&#39;oeufs stériles. </li><li> Ramassez les oeufs (et des carcasses) par centrifugation à 450 g pendant 5 min. </li><li> Lavez les œufs avec le tampon d&#39;œuf stérile 2-3x. </li><li> L&#39;incubation O / N dans un tampon M9 et les graines sur des plaques NGM standard. </li></ol></li><li> Essai de chimiotaxie. <ol><li> Préparer plusieurs morceaux de gélose environ 0.5x0.5x0.5 cm. Nous déposons l&#39;agar-agar dans une plaque de 10 cm et on coupe les morceaux de gélose à partir de là. </li><li> Faire tremper le morceau de gélose dans une solution contenant l&#39;attractif souhaité (à saturation, les concentrations quasi-saturation) pendant 2 heures. Attractifs typiques sont lysine (0,5 M), biotine (0,2 M). </li><li> Déposez un morceau de gélose dans une plaque d&#39;essai de 10 cm dans lequel l&#39;emplacement d&#39;un point de test et une tache de contrôle ont été marquées (figure 1A). Permettre l&#39;équilibrage et la formation d&#39;un gradient O / N (figure 1B). Préparer 5 plaques pour une expérience unique. </li><li> Avant l&#39;expérience, ajouter 10 ul de 20 mM NaN3 (anesthetic) à chaque endroit. </li><li> Placez 20 vers l&#39;âge synchronisées dans le centre de la plaque. Placer la plaque dans l&#39;incubateur à 20 ° C. </li><li> Après 1 heure, compter les animaux sur les points de test / contrôle et de calculer l&#39;indice de chimiotactisme (CI) comme suit: <img alt="Équation 1" fo:content-width=".863in" fo:src="/files/ftp_upload/50435/50435eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50435/50435eq1.jpg" /> où N, N essai et N Cnt., indiquent le nombre total d&#39;animaux, le nombre d&#39;animaux dans les lieux d&#39;essai et le nombre d&#39;animaux à l&#39;endroit de contrôle. </li></ol></li></ol> 3. Primaire embryonnaire Culture cellulaire <ol><li> Lyse vers tel que décrit dans l&#39;âge de la synchronisation. </li><li> Arrêter la réaction de lyse en ajoutant le même volume de tampon d&#39;œufs stériles et centrifuger à 450 g pendant 5 min. Jetez doucement surnageant en prenant soin de ne pas perdre oeufs granulés. Répétez 2 à 3 fois ou jusqu&#39;à ce que le surnageant soit clair. </li><li> Reprendre oeufs granulés (et des carcasses) Dans un tampon d&#39;oeuf stérile 2 ml et ajouter 2 ml de solution stérile de 60% de saccharose dans un tampon d&#39;oeuf. Mélanger cette solution jusqu&#39;à ce que les œufs sont complètement remises en suspension (comme ils ont tendance à former des amas sous centrifugation) à la main ou au vortex. </li><li> Centrifuger à 450 g pendant 15 min. </li><li> Soigneusement transférer surnageant (contenant les oeufs) dans un tube stérile. Jeter culot qui contient les carcasses et autres sous-produits de lyse. </li><li> Retirez le saccharose résiduel en remettant en suspension les oeufs dans un tampon d&#39;oeuf et la centrifugation à 450 g pendant 5 min. Recueillir délicatement et jeter le surnageant. Répétez 3x. </li><li> Sous une hotte laminaire remettre en suspension les œufs culot dans un tampon d&#39;œuf stérile contenant 1 U / ml chitinase à température ambiante pour digérer les œufs. Après 30 min de commencer à surveiller la réaction (sous un microscope de culture cellulaire inversée). Chaque lot de chitinase a une activité un peu différente. Typiquement, la digestion est terminée en 1 heure. </li><li> Quand environ 70-80% des œufs sont digérés par chitinase ajouter CM-15 (L-15 de culture cellulaire medium contenant 10% de sérum de veau foetal, 50 U / ml de pénicilline et 50 pg / ml de streptomycine). Dissocier les cellules à l&#39;aide d&#39;une seringue avec une jauge 27. Filtrer la suspension cellulaire avec un 5,0 um filtre pour éliminer les embryons intacts, des amas de cellules et de larves. </li><li> Pellet de la suspension cellulaire dissociée par centrifugation à 450 g pendant 15 min. Retirer le surnageant et remettre le culot dans un milieu de culture cellulaire CM-15. </li><li> cellules dissociées de plaque sur des lamelles de verre préalablement enduit avec de la lectine d&#39;arachide (0,1 mg / ml) dissous dans l&#39;eau. Remarque: les cellules doivent adhérer au substrat afin de se différencier. </li><li> Les cellules peuvent être conservés à température ambiante (16-20 ° C) dans l&#39;air pendant plus de 2 semaines. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs déclarent qu&#39;ils n&#39;ont aucun intérêt financier concurrents.

Nous décrivons ici une approche combinée, pour étudier les aspects cellulaires et moléculaires de l&#39;aide amylopathies C. elegans. Les avantages de cette approche sont les suivants: 1.) Faible coût C. elegans est maintenu dans un plat normale Petri ensemencées avec des bactéries, à la température ambiante. 2) génétique puissants. Les animaux transgéniques peuvent être obtenus en quelques mois et un large éventail de séquences promotrices est disponible pour conduire l&#39;expression du gène désiré d...

bêta-amyloïde (Aß) est un peptide de 36 à 43 acides aminés qui est formé après clivage séquentiel de la protéine précurseur de l&#39;amyloïde (APP) par β et γ d&#39;une secrétases. La γ-sécrétase traite l&#39;extrémité C-terminale du peptide Aß et est responsable de ses longueurs variables 5. Les formes les plus courantes de Aß sont Aß 40 et Aß 42, ce dernier étant le plus souvent associée à des états pathologiques tels que AD 5. A des concentrations élevées Aß forme β-feuilles qui s&#39;agrègent pour former des fibrilles amyloïdes 6. Fibrilles dépôts sont la principale composante des plaques séniles autour des neurones. Les deux plaques et diffusables, les oligomères de Aß non-plaque, sont pensés pour constituer le sous-jacent pathogènes de Aß. Etude en laboratoire des amylopathies neuronales est compliquée par le fait que ces conditions progrès avec le temps. Par conséquent, il est important de développer animaux génétiquement traitable modèles-complémentaire à des souris-avec durée de vie courte. Ces modèles peuvent être utilisés pour élucider les aspects spécifiques de amylopathies-général cellulaire et moléculaire et en raison de leur simplicité, de les aider à capturer l&#39;essence du problème. Le ver Caenorhabditis elegans chutes est cette catégorie. Il a une durée de vie courte, ~ 20 jours et dans les processus cellulaires de base supplémentaires, y compris la régulation de l&#39;expression génique, le trafic des protéines, de la connectivité neuronale, synaptogenèse, la signalisation cellulaire et la mort sont similaires à des mammifères 7. Les caractéristiques uniques du ver comprennent la génétique puissants et l&#39;absence d&#39;un système de navire, qui permet d&#39;étudier les lésions neuronales indépendamment des dommages vasculaires. D&#39;autre part, l&#39;absence d&#39;un cerveau limite l&#39;utilisation de C. elegans pour étudier de nombreux aspects de la neurodégénérescence. En outre, la reproduction et l&#39;identification des distributions anatomiques des lésions ne peuvent être exécutées dans cet organisme. Autre limitetions comprennent la difficulté d&#39;évaluer les différences dans les profils d&#39;expression des gènes et des troubles du comportement complexe et fonction de mémoire. Nous décrivons ici les méthodes pour générer C. elegans modèles de amylopathies.

<table><tbody><tr><td colspan="4">1. NGM</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5886</td><td>3 g</td></tr><tr><td>Gélose bactériologique</td><td>AMRESCO</td><td>J637</td><td>17 g</td></tr><tr><td>Bacto-peptone</td><td>AMRESCO</td><td>J636</td><td>2,5 g</td></tr><tr><td>Eau</td><td></td><td></td> distillée <td>Porter à 975 ml</td></tr><tr><td colspan="4">Stérilisé par autoclavage, puis ajouter les éléments suivants et bien mélanger</td></tr><tr><td>Sulfate</td> <td>de magnésiumSigma-Aldrich</td><td>M2643</td><td>1 ml de 1 M de stock</td></tr><tr><td>Chlorure</td><td>de calcium Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td>1 ml de 1 M de stock</td></tr><tr><td>Cholestérol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3045</td><td>1 ml de 5 mg/ml de stock (dans de l’éthanol)</td></tr><tr><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>de phosphate de potassium 25 ml de 1M de stock</td></tr> <tr><td colspan="4">2. Tampon phosphate de potassium</fort></td></tr><tr><td>Phosphate de potassium monobasique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td>108,3 g</td></tr><tr><td>Phosphate de potassium dibasique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3786</td><td>35,6 g</td></tr><tr><td>Eau</td><td></td><td></td> distillée <td>Porter à 1 L</td></tr><tr><td colspan="4">Stérilisé par autoclavage</td></tr><tr><td colspan="4"><fort>3. Tampon M9</fort></td></tr><tr><td>Phosphate de potassium monobasique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td>3 g</td></tr><tr><td>Phosphate de sodium dibasique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5136</td><td>6 g</td></tr><tr><td>Chlorure</td><td>de sodium Sigma-Aldrich</td><td>S5886 5</td><td>g</td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2643</td><td>1 ml de 1 M de stock</td></tr><tr><td>Eau</td><td></td><td></td> distillée <td>Porter à 1 L</td></tr><tr><td colspan="4">Stérilisé par autoclavage</td></tr><tr><td colspan="4"><fort>4. Tampon pour œufs (pH 7,3, 340 mOsm)</td></tr><tr><td>Chlorure</td><td>de sodium Sigma-Aldrich S5886</td><td></td><td>118 mM</td></tr><tr><td>Chlorure</td><td>de potassium Sigma-Aldrich</td><td>P5405</td><td>48 mM</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>Chlorure</td><td>de magnésium Sigma-Aldrich</td><td>M4880</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP310</td><td>25 mM</td></tr><tr><td>Eau</td><td></td><td></td> distillée <td>Porter à 1 L</td></tr><tr><td colspan="4">Stérilisé par autoclavage</td></tr><tr><td colspan="4"><fort>5. Milieu de culture CM-15</td></tr><tr><td>L-15</td><td>Gibco</td><td>11415</td><td>450 ml</td></tr><tr><td>Sérum fœtal de veau</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td>50 ml</td></tr><tr><td>Pénicilline</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td>50 unités/ml</td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td>50 g/ml</td></tr><tr><td colspan="4">Ajuster à 340 mOsm avec saccharose puis filtrer stérilement dans des flacons autoclavés et stocker à 4 &deg ; C</td></tr><tr><td colspan="4"><fort>6. Autres réactifs</forte></td></tr><tr><td>huile d’halocarbure 700</td><td>Produits d’halocarbure</td><td>9002-83-9</td><td></td></tr><tr><td>5 &mu ; m Filtre à seringue Acrodisc</td><td>PALL Co.</td><td>4199</td><td></td></tr><tr><td>Chitinase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6137-5UN</td><td></td></tr><tr><td>Lectine (arachide)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L0881-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium</td><td>Fisher Scientific</td><td>S320</td><td></td></tr><tr><td>Lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5501</td><td></td></tr><tr><td>Biotine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4639</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’hypochlorite</td> <td>de sodiumSigma-Aldrich</td><td>425044</td><td></td></tr><tr><td>Azoture de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71289</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr></tbody></table>

a<em&gt; caenorhabditis elegans</em&gt; système modèle pour l&#39;étude de amylopathy

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

Amylopathy est un terme qui décrit la synthèse anormale et l&#39;accumulation de bêta-amyloïde (Aß) dans les tissus avec le temps. Aß est une caractéristique de la maladie d&#39;Alzheimer (MA) et se trouve dans la démence à corps de Lewy, la myosite à inclusions et l&#39;angiopathie amyloïde cérébrale 1-4. Amylopathies développer progressivement avec le temps. Pour cette raison, les organismes simples avec une durée de vie courte peuvent aider à élucider les aspects moléculaires de ces conditions. Ici, nous décrivons les protocoles expérimentaux pour étudier la neurodégénérescence Aß induite par l&#39;utilisation des Caenorhabditis elegans du ver. Ainsi, nous construisons vers transgéniques par injection d&#39;ADN codant pour Aß humain 42 dans les gonades syncytial des hermaphrodites adultes. Des lignées transformantes sont stabilisés par une intégration mutagenèse induite. nématodes âge synchronisée par la collecte et l&#39;ensemencement de leurs oeufs. La fonction de neurones exprimant Aß 42 est testé dans des essais comportementaux opportuns (essai de chimiotaxies). Cultures primaires de neurones obtenus à partir d&#39;embryons sont utilisés pour compléter les données comportementales et de tester les effets neuroprotecteurs de composés anti-apoptotiques.

Avec nos protocoles, nous étudions les effets de l&#39;homme Aß 42 oligomères sur la fonction neuronale 8. Un fragment codant Aß humain 42 et le signal de séquence codant pour un peptide artificiel de vecteur d&#39;incendie pPD50.52 été amplifié à partir d&#39;assemblage PCL12 9 en utilisant des amorces qui introduisent un site d&#39;une endonucléase de restriction Sma aux extrémités. Le fragment a été ensuite inséré dans une construction contenant une séquence promotrice 2.48...

Nous décrivons des méthodes pour étudier les aspects de amylopathies dans le ver<em&gt; C. elegans</em&gt;. Nous montrons comment construire vers exprimant Aß humain<sub&gt; 42</sub&gt; Dans les neurones et comment tester leur fonction dans des tests comportementaux. Nous montrons en outre comment obtenir cultures primaires de neurones qui peuvent être utilisés pour les tests pharmacologiques.

A<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Système modèle pour l&#39;étude de Amylopathy

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

L'objectif général de cette procédure est d'évaluer les effets de la toxicité du peptide amyloïde bêta sur la fonction et la survie neuronales. Cette évaluation est réalisée en premier lieu en construisant des vers transgéniques *C. elegans* exprimant un peptide amyloïde bêta associé à un marqueur GFP dans les neurones sensoriels de type SE. Ensuite, les conséquences comportementales de l'expression du peptide amyloïde bêta dans les neurones SE sont évaluées à l'aide d'un test de chimiotaxie.La troisième étape consiste à obtenir des cultures primaires de neurones SE, puis à traiter les neurones en culture avec des agents pharmacologiques tels que le Q-V-D-O-P-H afin de supprimer l'effet toxique du bêta-amyloïde. En fin de compte, les résultats peuvent montrer les effets de la toxicité du bêta-amyloïde sur la fonction et la survie des neurones SE à l'aide de tests comportementaux et pharmacologiques. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés sur la neurodégénérescence, notamment en élucidant les mécanismes cellulaires et moléculaires spécifiques.Effets neurotoxiques sous-jacents des oligomères de bêta-amyloïde. Le Dr. Zing Dwan, postdoctorant de mon laboratoire, démon

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Dosage β-amyloïde toxicité utilisant un transgéniques C. elegans</emModèle>

Pour étudier la relation entre l’homéostasie des protéines, le stress et le vieillissement, nous avons surveillé les changements dans le repliement des protéines en suivant le dysfonctionnement des protéines, la localisation des protéines dans la cellule et la stabilité des protéines aux niveaux de l’organisme, des cellules et des protéines, en utilisant le métazoaire génétiquement traitable Caenorhabditis elegans comme système modèle.

Utilisation de Caenorhabditis elegans comme système modèle pour étudier l’homéostasie des protéines dans un organisme multicellulaire

Nous présentons ici le nématode Caenorhabditis elegans comme un modèle d’hôte polyvalent pour étudier l’interaction microbienne.

Le nématode Caenorhabditis Elegans - un modèle polyvalent In Vivo pour étudier les Interactions hôtes-microorganismes

Ce protocole décrit une méthode pour la culture à grande échelle de Caenorhabditis elegans , sur des milieux solides. Comme alternative à la culture liquide, ce protocole permet d’obtenir les paramètres de différentes échelles en culture axée sur la plaque. Cela augmente la comparabilité des résultats en omettant les différences morphologiques et métaboliques entre culture des médias liquides et solides.

Axée sur la plaque de culture à grande échelle de Caenorhabditis elegans: préparation des échantillons pour l’étude des modifications métaboliques dans le diabète

Les produits translationnels non dépendants à l’ATG associés à répétition sont des caractéristiques pathogènes émergentes de plusieurs maladies à base d’expansion répétée. Le but du protocole décrit est d’évaluer la toxicité causée par ces peptides à l’aide d’essais comportementaux et cellulaires dans le système modèle C. elegans.

Mesurer RAN Peptide Toxicity à C. elegans

Ici, nous introduisons et décrivons des méthodologies largement accessibles utilisant certains modèles de nématodes polyvalents, y compris la nécrose induite par le canal ione hyperactivé et la neurotoxicité induite par l’agrégat de protéines, pour surveiller et disséquer les fondements cellulaires et moléculaires des maladies neurodégénératives associées à l’âge.

Modélisation des maladies neurodégénératives associées à l’âge à Caenorhabditis elegans

Ce protocole décrit deux tests sensibles pour discriminer les déficiences motrices légères, modérées et sévères dans les modèles C. elegans de sclérose latérale amyotrophique, avec une utilité générale pour les souches de C. elegans , avec une motilité altérée.

Évaluation de l’insuffisance motrice dans les modèles C. elegans de la sclérose latérale amyotrophique

Dans cet article, nous monimons comment utiliser un système de notation à sept points pour quantifier de manière cohérente les changements dans la morphologie de la dendrite des neurones dopaminergiques chez C. elegans. Ce système est destiné à l’analyse des tests de neurodégénérescence dopaminergique utilisant des modèles génétiques, chimiques et basés sur l’âge des troubles neurodégénératifs.

Quantification des niveaux d’altération morphologique et de dégénérescence des neurones dopaminergiques chez Caenorhabditis elegans

Ici, nous présentons un protocole pour évaluer les activités neuroprotectrices des composés de test chez Caenorhabditis elegans, y compris l’agrégation de polyglutamines, la mort neuronale et le comportement de chimioavoidance, ainsi qu’une intégration exemplaire de plusieurs phénotypes.

Caenorhabditis elegans comme système modèle pour la découverte de composés bioactifs contre la neurotoxicité médiée par les polyglutamines

Approches pour tester les effets des médicaments antipsychotiques (APDS) dans Caenorhabditis elegans sont démontrés. Les dosages sont décrits pour tester les effets des médicaments sur le développement et sur la viabilité et le taux de pompage du pharynx. Ces méthodes sont également applicables pour les expériences pharmacogénétiques avec d'autres classes de médicaments que les PDA.

Méthodes pour étudier les mécanismes d&#39;action des antipsychotiques dans<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Découvrez comment évaluer la toxicité de l'amyloïde bêta sur la fonction neuronale en utilisant des vers transgéniques Caenorhabditis elegans et des tests de chimiotaxie. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes moléculaires de la neurodégénérescence.

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