Name: Un modello di topo indotta da laser di cronica ipertensione oculare per caratterizzare difetti visivi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Scopri come indurre ipertensione oculare cronica nel topo mediante fotocoagulazione laser del trabecolato. Questo modello permette di monitorare la pressione intraoculare e valutare i difetti visivi nel tempo.

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Il lavoro contenuto in questo documento è stata sostenuta dal Dr. Douglas H. Johnson Award per il Glaucoma Research dalla American Health Assistance Foundation (XL), la William &amp; Mary Greve Scholar Award speciale della ricerca per prevenire la cecità (XL), il Illinois Società per la Prevenzione della Cecità (HC) e NIH concedere R01EY019034 (XL).

Procedure C57BL/6J topi (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) sono allevati presso la Northwestern University Animal Care strumento. Tutti gli animali sono utilizzati secondo protocolli approvati dalla Northwestern University Institutional Animal Care e del Comitato uso e conforme alle linee guida sull&#39;uso degli animali in Neuroscience Research dal NIH. 1. Fotocoagulazione laser La procedura di fotocoagulazione laser viene modificata dai protocolli precedentemente pubblicati 5-7. <ol><li> Anestetizzare un 40-60 giorni vecchio mouse con un&#39;iniezione intraperitoneale di ketamina (100 mg / kg, Butler Schein la salute degli animali, OH) e xilazina (10 mg / kg, Lloyd Inc. di Iowa, Shenandoah, IA). </li><li> Dilatare la pupilla dell&#39;occhio destro dell&#39;animale sperimentale per il trattamento topico con una o due gocce di soluzione di solfato di atropina 1% (Alcon Labs, Inc., Fort Worth, TX). </li><li> Dopo midriasi, appiattire l&#39;unacamera di nterior per migliorare l&#39;induzione laser 6. Inserire una micropipetta di vetro con punta acuminata (World Precision Instruments Inc, Sarasota, FL) nello spazio anteriore sotto la lampada a fessura (SL-3E, Topcon, Oakland, NJ) per drenare il liquido nella camera anteriore. </li><li> Frena il mouse in un supporto cono di plastica (Braintree Sci Inc., MA) e legato su una piattaforma fatta in casa (vedere Figura 1A). Tenere il mouse con dispositivo di immobilizzazione ed espone l&#39;occhio destro del mouse per la fonte di luce dietro la lampada a fessura. Allineare l&#39;occhio destro del mouse anestetizzato sotto la lampada a fessura. </li><li> Tenendo premuto il dispositivo di immobilizzazione del mouse con entrambe le mani, applicare l&#39;illuminazione laser per il limbus corneale utilizzando un laser ad Argon (Ultima 2000SE, Coherent, Santa Clara, CA). Trasporti circa 80-100 punti laser (514 nm, 100 mW, 50 msec impulsi e 200 pronti micron) perpendicolarmente intorno alla circonferenza del trabecolato. I topi C57BL / 6 hanno iride pigmentata che funge da barriera per ogni pPotenziali energia randagio 7. </li><li> Instillare topico 0,5% moxifloxacina (Alcon Labs, Inc., Fort Worth, TX) sulla superficie oculare per disinfettare la zona trattata con laser e 0,5% Proparacaine (Bausch &amp; Lomb, Rochester, NY) per alleviare il dolore. </li><li> Tenere l&#39;animale su una piastra elettrica (Sunbeam Products Inc, Boca Raton, FL) per il recupero per circa un&#39;ora fino a quando non è completamente sveglio. </li><li> L&#39;occhio sinistro è trattata per servire come controllo. </li></ol> 2. IOP Misure <ol><li> Posizionare il mouse svegli in un tubo di caricare nel porta cono di plastica e poi frenare sulla piattaforma (vedi Figura 2A). </li><li> Consentire 9:55 minuti per lasciare il mouse ottenere adattato alla posizione di titolare. Avvicinatevi al tonometro rimbalzo (TonoLab, coloniale Medical Supply, Franconia, NH) per l&#39;occhio del mouse fino a quando la punta della sonda è di 2-3 mm di distanza dalla superficie della cornea 14. </li><li> Premere il tasto di misurazione per lasciare la punta della sonda ha colpito la superficie del centrodella cornea con delicatezza. Tre set consecutivi di sei misure di IOP dello stesso occhio sono acquisite e mediate come la IOP dell&#39;occhio. L&#39;occhio controllo non trattato è sempre misurato prima di ottenere una lettura di base per l&#39;occhio laser-trattato che viene misurato dopo. </li></ol> 3. Prova Optomotor Acuità visiva e la sensibilità al contrasto sono testati 14,15. Due occhi del singoli topi sono esaminati separatamente invertendo il senso reticolo deriva, cioè un reticolo deriva in senso orario viene utilizzato per identificare la funzione visiva dell&#39;occhio sinistro e una grata alla deriva in senso antiorario per l&#39;occhio destro 16. Ogni test richiede circa 15 minuti e si ripete da due osservatori in modo indipendente. <ol><li> Posizionare il mouse e lasciare il mouse per muoversi liberamente su una piattaforma elevata, circondato da quattro monitor per computer (Figura 3A-B). </li><li> Impostare i monitor in modo da visualizzare alla deriva orizzontalmente sinusoidalegrate come stimoli visivi con luminanza media di 39 cd / m 2. La direzione di spostamento del reticolo deve alternare consecutivamente tra senso orario e antiorario. </li><li> Analizzare i movimenti dell&#39;animale. Movimenti degli animali in-concerto con le grate alla deriva sono considerati &quot;positivi&quot; entro 15 secondi dopo lo stimolo visivo è accesa e poi gradualmente aumentata. La risposta di elicitare massima stimolo visivo è definita come acuità visiva dell&#39;animale 17. </li><li> Esaminare la sensibilità al contrasto a tre pre-selezionati frequenze spaziali: 0.075, 0.16, e 0,3 cicli per grado (CPD). La soglia di contrasto per ciascun occhio è definita come la più bassa contrasto che suscita risposte visive alla frequenza prefissata. La sensibilità al contrasto è il reciproco della soglia 17. </li></ol>

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<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direction-specific+disruption+of+subcortical+visual+behavior+and+receptive+fields+in+mice+lacking+the+beta2+subunit+of+nicotinic+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Direction-specific disruption of subcortical visual behavior and receptive fields in mice lacking the beta2 subunit of nicotinic acetylcholine receptor.</a> J. Neurosci. 29, 12909-12918 (2009).</li>
<li>Douglas, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+visual+threshold+measurements+in+the+two+eyes+of+freely+moving+rats+and+mice+using+a+virtual-reality+optokinetic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Independent visual threshold measurements in the two eyes of freely moving rats and mice using a virtual-reality optokinetic system.</a> Visual Neuroscience. 22, 677-684 (2005).</li>
<li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45, 4611-4616 (2004).</li>
<li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64, 85-96 (1997).</li>
<li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+anesthesia%2C+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 99, 27-35 (2012).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-derived+neurotrophic+factor+and+TrkB+modulate+visual+experience-dependent+refinement+of+neuronal+pathways+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Brain-derived neurotrophic factor and TrkB modulate visual experience-dependent refinement of neuronal pathways in retina.</a> J. Neurosci. 27, 7256-7267 (2007).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+neonatal+development+of+retinal+ganglion+cell+dendrites+by+neurotrophin-3+overexpression%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Regulation of neonatal development of retinal ganglion cell dendrites by neurotrophin-3 overexpression.</a> The Journal of Comparative Neurology. 514, 449-458 (2009).</li>
<li>Sun, W., Li, N., He, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+morphological+survey+of+mouse+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells.</a> The Journal of Comparative Neurology. 451, 115-126 (2002).</li>
<li>Feng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+Ocular+Hypertension+Induces+Dendritic+Degeneration+of+Mouse+Retinal+Ganglion+Cells+that+Depends+on+Cell-type+and+Location%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Sustained Ocular Hypertension Induces Dendritic Degeneration of Mouse Retinal Ganglion Cells that Depends on Cell-type and Location.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. , (2013).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione. Gli autori sono dipendenti a tempo pieno della Northwestern University. Gli autori hanno ricevuto alcun finanziamento che è stato fornito da aziende che producono reagenti e strumenti utilizzati in questo articolo.

Segnaliamo soprattutto che l&#39;ipertensione oculare sostenuta può essere indotta da illuminazione laser negli occhi del mouse. Rispetto al modello iniezione salina 18 e il modello cauterizzazione vena 11 entrambi richiedono estese competenze microchirurgia, l&#39;illuminazione laser è relativamente semplice e facile da eseguire. Di solito siamo in grado di eseguire l&#39;illuminazione laser per 4-6 topi in 2-3 ore. I passi fondamentali per raggiungere sostenuta IOP elevazione sono la camera anter...

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>moxifloxacin</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 0065-4013-03</td><td>0,5 %, Rx solo</td></tr><tr><td>Proparacaina cloridrato</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06</td><td>0,5 %, Rx solo</td></tr><tr><td>soluzione oftalmica USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06,5</td> <td>%, Rx solo</td></tr><tr><td>ketamina</td><td>Butler Schein Animal Health</td><td>NDC 11695-0550-1</td><td>100 mg / kg </td></tr><tr><td>xilazina</td><td>LLOYD Inc. di Iowa</td><td>NADA 139-236</td><td>10 mg / kg </td></tr><tr><td>soluzione di atropina solfato</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 61314-303-02</td><td>1 %, solo</td></tr><tr> Rx<td colspan="4">Equipment </td></tr><tr><td>Slit Lamp, TOPCON </td><td>Visual Systems Inc</td><td>SL-3E</td><td>powered by PS-30A</td></tr><tr><td>OptoMotry 1.8.0 virtual</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sistema per test optocinetici</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tonometro, TonoLab, per topi</td><td>Colonial Medical Supply</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pad riscaldante</td><td>Sunbeam Products Inc</td><td>722-810</td><td></td></tr><tr><td>Laser ad argon </td><td>Coherent Inc</td><td>Ultima 2000SE</td><td></td></tr><tr><td>DECAPICONE Porta cono in plastica </td><td>Braintree Sci Inc.</td><td>MDC-200</td><td>per mouse</td></tr></tbody></table>

un modello di topo indotta da laser di cronica ipertensione oculare per caratterizzare difetti visivi

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Glaucoma, frequentemente associata a elevata pressione intraoculare (IOP), è una delle principali cause di cecità. Abbiamo cercato di stabilire un modello murino di ipertensione oculare per imitare ad alta tensione umana glaucoma. Qui illuminazione laser è applicato al limbus corneale per fotocoagulare il deflusso acquosa, inducendo chiusura dell&#39;angolo. Le variazioni di IOP sono controllati mediante un tonometro rimbalzo prima e dopo il trattamento laser. Un test comportamentale optomotor viene utilizzato per misurare corrispondenti variazioni della capacità visiva. Il risultato rappresentante di un topo che si è sviluppato subito dopo IOP elevazione illuminazione laser è indicato. Un acuità visiva diminuita e la sensibilità al contrasto sono osservati in questo oculare ipertensiva mouse. Insieme, il nostro studio introduce un sistema modello prezioso per studiare la degenerazione neuronale e dei meccanismi molecolari sottostanti nei topi glaucomatosi.

Come descritto nelle Procedure, illuminazione laser è finalizzata alla trabecolato nella regione limbare fotocoagulare per il deflusso acquosa, inducendo chiusura di angolo (Figura 1). Occhi più esposte al laser senza significativi danni fisici, distacco pigmento o infezione, in linea con i risultati precedenti 6. Quando un piccolo gruppo di topi (meno del 5% di tutti gli animali al laser) espone i segni fisici di gravi danni, come palle sgonfie occhio, grave cataratta, distacco significativo...

Ipertensione oculare cronica è indotta mediante fotocoagulazione laser del trabecolato negli occhi del mouse. La pressione intraoculare (IOP) è elevato per diversi mesi dopo il trattamento laser. La diminuzione di acuità visiva e la sensibilità al contrasto di animali da esperimento sono monitorati utilizzando il test optomotor.

Un modello di topo indotta da laser di cronica ipertensione oculare per caratterizzare difetti visivi

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre un'ipertensione oculare cronica mediante fotocoagulazione laser della meshwork trabecolare in topi. Dopo aver anestetizzato il topo, la pupilla degli occhi bersaglio viene dilatata e quindi la camera anteriore viene appiattita. Il secondo passaggio consiste nell'indurre l'ipertensione oculare applicando un raggio laser lungo la circonferenza della meshwork trabecolare perpendicolarmente alla superficie.Successivamente, la pressione intraoculare viene monitorata nel tempo nel topo mediante un tonometro. L'ultimo passaggio consiste nell'eseguire test automatizzati per evidenziare i cambiamenti nell'acuità visiva. In definitiva, i difetti visivi causati dall'ipertensione possono essere monitorati nel tempo.Dopo aver ottenuto un protocollo I-A-C-U-C approvato, anestetizzare un topo C57 black six di età compresa tra 40 e 60 giorni mediante iniezione intraperitoneale di chetamina e xilazina. Successivamente, applicare con attenzione un unguento oftalmico sull'occhio sinistro di controllo, quindi dilatare la pupilla dell'occhio destro mediante trattamento topico con una o due gocce di soluzione di solfato di atropina al 1%. Una volta che

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Il glaucoma è una delle principali cause di cecità nel mondo. Pressione intraoculare elevata è un importante fattore di rischio. Fotocoagulazione laser ipertensione oculare indotta è uno dei modelli animali ben stabilita. Questo video mostra come indurre ipertensione oculare fotocoagulazione con Argon laser nel ratto.

Laser-Induced cronica ipertensione oculare su Ratti modello SD

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori. J. Vis. Exp. (2022)Questo video dimostra l'induzione e il monitoraggio di un'elevata pressione intraoculare (IOP) in un modello di ratto. Il processo prevede la cauterizzazione dei vasi sanguigni limbari, con conseguente occlusione dei vasi e IOP elevata. Il ratto viene quindi lasciato riprendersi e la IOP viene regolarmente monitorata sia...

 Induzione di un'elevata pressione intraoculare in un modello di ratto

Qui, presentiamo il protocollo di neovascolarizzazione coroideale indotta da laser (CNV) di topo, un modello sperimentale che ricrea i segni distintivi vascolari della degenerazione maculare neovascolare legata all'età (AMD). Una volta padroneggiato, può indurre in modo affidabile ed efficace la CNV come sistema modello per testare varie misure sperimentali.

Un modello di topo per Laser-indotta della coroide neovascolarizzazione

Qui, presentiamo un protocollo per indurre ipertensione oculare nell'occhio murino che provoca la perdita di cellule gangliari retiniche come osservato nel glaucoma. microsfere magnetiche vengono iniettati nella camera anteriore e attratti l'angolo iridocorneale utilizzando un magnete per bloccare il deflusso dell'umore acqueo.

Un magnetica microperla occlusione modello per indurre ipertensione oculare-Dependent Glaucoma nei topi

Qui, presentiamo l'utilità di longitudinale in vivo imaging nel follow-up dei cambiamenti morfologici del neovascularization coroidico laser-indotta in topi.

In Vivo Imaging multimodale e l'analisi di Mouse indotta da Laser modello di Neovascularization coroidico

Ipertensione oculare cronica è indotta applicando una sutura circumlimbal in ratti e topi, che conduce al deterioramento strutturale e funzionale delle cellule ganglionari retiniche coerente con il glaucoma.

Un modello del Glaucoma indotto da sutura Circumlimbal nei ratti e nei topi

Qui, descriviamo l'uso della tomografia a coerenza ottica di dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare strutture retiniche e oculari in vivo in modelli di degenerazione retinica, glaucoma, retinopatia diabetica e miopia.

Valutazioni strutturali in vivo della malattia oculare in modelli di roditori mediante tomografia a coerenza ottica

Qui, descriviamo un protocollo ottimizzato per l'occlusione venosa retinica utilizzando il bengala rosa e un sistema di microscopio di imaging retinico guidato dal laser con raccomandazioni per massimizzare la sua riproducibilità in ceppi geneticamente modificati.

Ottimizzazione del modello murino di occlusione venosa retinica per limitare la variabilità

Qui, descriviamo una tecnica di imaging in vivo che utilizza la tomografia a coerenza ottica per facilitare la diagnosi e la misurazione quantitativa della retinopatia nei topi.

Applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia

L'obiettivo di questo protocollo è quello di caratterizzare un nuovo modello di neurodegenerazione glaucomatosa basato sulla cauterizzazione termica a 360° del plesso vascolare limbare, inducendo ipertensione oculare subacuta.

Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per il glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori

Scopri come indurre ipertensione oculare cronica nel topo mediante fotocoagulazione laser del trabecolato. Questo modello permette di monitorare la pressione intraoculare e valutare i difetti visivi nel tempo.

Un modello di topo indotta da laser di cronica ipertensione oculare per caratterizzare difetti visivi

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