Name: Titolazione biochimica di glicogeno In vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-24T19:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Impara la titolazione biochimica del glicogeno in vitro mediante idrolisi con alfa-amilasi e misurazione della fluorescenza. Questo metodo offre un'analisi accurata e riproducibile dei livelli di glicogeno cellulare.

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Siamo grati al Dr. Thierry Pourcher per averci permesso di utilizzare lo spettrometro a fluorescenza e per il suo aiuto. Il laboratorio è finanziato dalla Ligue Nationale Contre le Cancer (équipe labellisée), l&#39;Associazione pour la Recherche contre le Cancer, l&#39;Institut National du Cancer (INCA), l&#39;Agence Nationale pour la Recherche, METOXIA (programma dell&#39;UE 7 ° PQ), il Centro A. Lacassagne, il Centre National de la Recherche Scientifique, l&#39;Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale e l&#39;Università di Nizza ( <a href="http://www.unice.fr/isdbc/" target="_blank">http://www.unice.fr/isdbc/</a> ). Ringraziamo il Dott. M Christiane Brahimi-Horn per la lettura critica e la correzione editoriale.

Titolazione biochimica di glicogeno 1. Lisi cellulare <ol><li> Alveoli ad una concentrazione di 0,5-2 x 10 6 per ogni 100 mm di diametro piatto. </li><li> Trattamento: incubare cellule 24, 48, o 72 ore a bassa concentrazione di ossigeno (ipossia) in una stazione di lavoro anaerobico Bug-Box (Ruskinn Tecnologia Biotrace International Plc, Bridgend, Regno Unito) fissato al 1% o 0,1% O 2, 94% o 94,9% N 2, e 5% di CO 2. Parallelamente, incubare le cellule in normossia (21% O 2, 5% CO 2). Cambiare mezzo (25 mM mezzo contenente glucosio) ogni 24 ore per minimizzare variazioni della concentrazione di glucosio durante il periodo dell&#39;esperimento. </li><li> Dopo il trattamento, le cellule lavaggio 2x con PBS per rimuovere tracce di glucosio dal mezzo di coltura. Raschiare le cellule in PBS freddo. </li><li> Centrifugare a 1.000 rpm per 5 min, scartare il surnatante e lavare il pellet una volta con PBS. Il pellet può essere congelato a -20 ° C prima di procedere ulteriormente.</li><li> Risospendere il pellet in 100 ml di acqua distillata. Aggiungere 100 ml di idrolisi Buffer glicogeno forniti con il glicogeno Assay Kit (Abcam). Bollire il lisato a 95 ° C per 5 minuti per inattivare gli enzimi. </li><li> Vortex e centrifugare il lisato a 13.000 rpm per 10 minuti per rimuovere i prodotti insolubili. Conservare il surnatante. </li><li> Per normalizzare i livelli di glicogeno al contenuto proteico tra i campioni, quantificazione delle proteine ​​può essere fatto con 25-35 ml del supernatante utilizzando il test Acid bicinconinico (BCA-Interchim). </li></ol> Alcuni di lisato può essere utilizzato per misurare la concentrazione di glucosio libero all&#39;interno delle cellule. 2. L&#39;idrolisi del glicogeno <ol><li> Mescolare 50 ml di surnatante (passo 1) con 1 ml di miscela di idrolisi enzimatica. Questa miscela contiene glucoamilasi. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Preparare la curva di taratura diluendo il glicogeno standard (2 mg / ml) supplied con il kit per una soluzione di 10 mg / ml nel tampone di idrolisi. Quindi, preparare sei provette separate con 0, 4, 8, 12, 16, e 20 ml di 10 mg / ml di serie e regolare ogni tubo ad un volume finale di 50 ml con tampone di idrolisi per ottenere una concentrazione di glicogeno di 0, 0,04 , 0,08, 0,12, 0,16 e 0,2 mg / ml. Aggiungere 1 ml di idrolisi enzimatica Mix nelle norme e incubare per 30 minuti a temperatura ambiente. </li></ol> La concentrazione di glucosio sfondo della linea cellulare, data dal valore della concentrazione di glucosio libero, deve essere sottratta dal valore della concentrazione di glucosio totale (glucosio dal glicogeno idrolisi + senza glucosio) per determinare il livello di glicogeno nella cellula. 3. Sviluppo e lettura di fluorescenza <ol><li> Per ogni condizione, preparare un tubo (tubo 1) per misurare la concentrazione di glucosio libero e due tubi (tubi 2 e 3) per misurare la concentrazione di glucosio totale (ogni wit tuboha diverso volume di glicogeno idrolizzato). </li><li> Aggiungere 15 ml di surnatante estratti alla fine del passaggio 1 nella provetta 1. Aggiungere 35 ml di tampone di idrolisi per completare ad un volume finale di 50 microlitri. Fluorescenza Ottenuto darà la concentrazione di glucosio libero. </li><li> Aggiungi X ml di glicogeno idrolizzato (ottenuta nella fase 2) in tubo 2. Regolare il volume finale di 50 microlitri. Volume del campione (X microlitri) deve essere regolata in funzione della densità cellulare e / o tipo cellulare al fine di ottenere valori di fluorescenza che non vadano oltre concentrazioni della curva di calibrazione. </li><li> Aggiungere 2 X ml di glicogeno idrolizzato nel tubo 3. Regolare il volume finale di 50 microlitri. </li><li> Preparare una soluzione di sviluppo per i campioni e gli standard miscelando per ogni tubo 48,7 ml di tampone Sviluppo, 1 ml di Sviluppo Enzyme Mix e 0,3 ml di OxiRed Probe (fornita nel glicogeno Assay Kit). Ad esempio, per 2 condizioni, preparare una miscela per 12 tubos (6 per gli standard, 2 per il glucosio libero e 4 per la fluorescenza totale di glucosio). </li><li> Aggiungere 50 ml di questa miscela a ciascuna provetta e incubare per 30 minuti a temperatura ambiente al buio. </li><li> Misurare la fluorescenza ad una lunghezza d&#39;onda di eccitazione di 535 nm, lunghezza d&#39;onda di emissione di 587 nm come raccomandato, e una fessura di 3 nm di eccitazione e di emissione. </li></ol>

<ol><li>Pelletier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+Synthesis+is+Induced+in+Hypoxia+by+the+Hypoxia-Inducible+Factor+and+Promotes+Cancer+Cell+Survival%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Glycogen Synthesis is Induced in Hypoxia by the Hypoxia-Inducible Factor and Promotes Cancer Cell Survival.</a> Front Oncol. 2, (2012).</li>
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</ol>

Gli autori dichiarano assenza di conflitto di interessi.

Titolazione biochimica di glicogeno in vitro permette una quantificazione precisa delle cellule contenuto di glicogeno. Rispetto ad altre tecniche (PAS, immunofluorescenza con un anticorpo glicogeno, ecc.), Questa titolazione è molto specifico, sensibile e riproducibile. Inoltre, il metodo è conveniente in quanto richiede nessuna radioattività ma uno spettrometro a fluorescenza. Tuttavia, questa tecnica è puramente quantitativa e non fornisce informazioni sulla distribuzione glicogeno nella cella. ...

Il glicogeno è un polimero con molti rami di residui di glucosio, che è presente nel citoplasma di molti tipi di cellule. È una delle principali forme di immagazzinamento dell&#39;energia nelle cellule e svolge un ruolo importante nel metabolismo del glucosio. La maggior parte delle cellule di mammiferi sono capaci di produrre e immagazzinare glicogeno, che può essere rapidamente degradato in glucosio per promuovere la glicolisi e produzione di ATP durante lo stress metabolico. Gli epatociti producono enormi quantità di glicogeno per regolare il livello di zucchero nel sangue fornendo così un approvvigionamento continuo di glucosio nel corpo. Al contrario, la concentrazione di glicogeno in altre cellule (muscoli, globuli rossi, ecc) è relativamente bassa. Tuttavia, localmente, queste quantità sono sufficienti a fornire energia a breve termine, quando le cellule sono improvvisamente esposti a un ambiente privo di sostanze nutritive. Sintesi di glicogeno e la ripartizione del glicogeno segue gli stessi passi in tutti i tessuti (Figura 1). In primo luogo, il glucosioentra cellule trasportatori del glucosio (glutei), e viene rapidamente convertito dal glucosio-6-fosfato (G6P) in glucosio-1-fosfato (G1P) da fosfoglucomutasi. G1P viene quindi modificato in UDP-glucosio e il carbonio C1 di UDP-glucosio è attaccato ad un residuo di tirosina glycogenin, la proteina di ancoraggio di glicogeno. Questa molecola, considerato un primer glicogeno, viene esteso mediante attacco del UDP-glucosio al glucosio terminale da un α (1 → 4) bond tramite il glicogeno sintasi. Infine, quando si forma una catena lineare di oltre 11 residui di glucosio, l&#39;enzima di ramificazione trasferisce un oligosaccaride terminale costituito da un minimo di 6 residui di glucosio all&#39;altro glucosio della catena vicina attraverso un α (1 → 6) linkage. La ripetizione di questo processo dà una struttura frattale massiccia contenente rami che formano un&#39;elica con 6,5 glucosio ogni turno. Il glicogeno può essere inversamente idrolizzato al glucosio con l&#39;azione concertatadebranching di enzimi che idrolizzano il α (1 → 6) vincolato e glicogeno fosforilasi che idrolizza il α (1 → 4) glicosidico limite tra l&#39;ultimo residuo di glucosio di un ramo e la molecola di glicogeno. Questa reazione chiamato glicogenolisi viene attivato aumentando i livelli di AMP (riflettente consumo di ATP), e inibito dal glucosio e ATP 2,3. Mediante microscopia elettronica, le molecole di glicogeno sono stati descritti in molti tipi cellulari particelle β libere (o monoparticelle glicogeno) di 15-30 nm di diametro. In specifici tipi cellulari quali epatociti, particelle β possono essere assemblate in un complesso per formare rosette, noto anche come particelle α che variano in diametro da 80 nm a un massimo di 200 nm 4 </sup&gt;. Il modo in cui queste particelle β sono legati per formare grandi aggregati di particelle α non è ancora completamente chiarito. Alcune prove tende a dimostrare che le particelle β possono essere legati da legami covalenti 5, legame a idrogeno, o anche attraverso le interazioni proteina-proteina 6. La quantità di glicogeno immagazzinato nelle cellule dipende da molti parametri: (I) la quantità di glycogenin nella cella che inizia la sintesi del glicogeno, (ii) l&#39;attività di glicogeno sintasi e fosforilasi regolato dalla proteina fosforilazione / defosforilazione; (III) la concentrazione di glucosio nelle cellule, che dipende da diversi parametri, quali la fornitura di glucosio dal sistema vascolare e l&#39;assorbimento del glucosio da parte delle cellule. Le riserve di glicogeno sono strettamente regolati da regolazione allosterica di ormoni biosintetici attraverso metaboliti intermedi, da ormoni che regolano il metabolismo energetico, e attraverso vie di segnalazione di rilevamento nutrienti 7. È importante esseregrado di quantificare glicogeno in campioni biologici per meglio comprendere l&#39;importanza del metabolismo del glicogeno in tutto il corpo e livello cellulare. Descriviamo qui un preciso, riproducibile e conveniente biochimico prova in vitro per glicogeno. Questa tecnica si basa sulla fluorescenza quantificazione glucosio prima e dopo specifico idrolisi di glicogeno. Altri metodi esistono per stimare il livello di glicogeno nelle cellule, ma la maggior parte di essi non sono quantitative. Una delle prime tecniche descritte per la quantificazione di glicogeno nelle cellule era basato sulla misurazione di costituzione [14 C]-glucosio in glicogeno 8,9. L&#39;uso di radioattività rende questo processo più difficile da gestire, ma ha il vantaggio di fornire la velocità di incorporazione del glucosio in glicogeno e nel distinguere tra la distribuzione di residui di glucosio sui rami esterni e nel nucleo della molecola (richiede anche un ulteriori β-amylolysis ed una fase cromatografica). Un&#39;altra tecnica è stata sviluppata più recentemente e si basa sull&#39;incorporazione di 2-NBDG (2 - {N-[7-nitrobenz-2-oxa-1 ,3-diazol-4-il] ammino}-2-deossiglucosio), un derivato fluorescente 2-deossiglucosio, in glicogeno 10. L&#39;intensità di fluorescenza misurata riflette la quantità di glicogeno prodotta e può essere misurata con un lettore di fluorescenza. Distribuzione di fluorescenza nella cella può essere valutata mediante microscopia confocale. Tra le altre tecniche nonquantitative, Periodic Acid Schiff colorazione (PAS) è forse il più comune. Può essere usato per la rilevazione di glicogeno in cellule fissate, sezioni di tessuto in paraffina o congelati. Questo istologici colori tecnica non specificamente polisaccaridi, glicolipidi, glicoproteine, cellulosa e mucine neutre in viola. La specificità di questo test può essere aumentata mediante trattamento di cellule fissate o sezioni di tessuto con diastasi, che digerisce specificamente glicogeno. Successivamente,il livello di glicogeno può essere qualitativamente stimata confrontando campioni non idrolizzati (tutti macromolecole carboidrati modificati) per campioni idrolizzati (carboidrati modificato macromolecole tranne glicogeno). Colorazione PAS e analisi microscopica, a differenza saggi biochimici di glicogeno, fornisce informazioni relative alla distribuzione di glicogeno nella cellula, che può essere diffusa o concentrata in una determinata parte della cellula. Tuttavia, anche se le differenze stime PAS colorazione in accumulo glicogeno tra condizioni diverse, non è quantitativa 11. Un anticorpo monoclonale di topo originariamente realizzato utilizzando condilare mandibolare cartilagine come antigene ha dimostrato di reagire con glicogeno in cellule e con glicogeno purificato in vitro 12. Dato che questo anticorpo riconosce specificamente catene di zuccheri glicogeno riscontrato, è un utile strumento per la rilevazione di glicogeno mediante immunoistochimica in maniera più specifica della colorazione PAS. </p&gt; La microscopia elettronica è un&#39;altra tecnica che permette la visualizzazione di grani di glicogeno nelle cellule e la valutazione del grado di glicogeno accumulo. Infatti, le particelle β glicogeno sono facilmente riconoscibili con un microscopio elettronico come elettroni densi granuli 1.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>31966.047</td><td></td></tr><tr><td>Kit di analisi del glicogeno</td><td>Abcam</td><td>ab65620</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Spettrometro a fluorescenza</td><td>PerkinElmer</td><td>LS 50B</td><td></td></tr></tbody></table>

titolazione biochimica di glicogeno<em&gt; in vitro</em

Biochemical Titration of Glycogen In vitro

Il glicogeno è la principale polimero energetico del glucosio negli animali vertebrati e svolge un ruolo fondamentale nel metabolismo del corpo intero e nel metabolismo cellulare. Esistono già molti metodi per rilevare glicogeno, ma solo pochi sono di tipo quantitativo. Descriviamo qui un metodo che utilizza il kit di analisi Abcam Glicogeno, che si basa sulla specifica degradazione del glicogeno in glucosio da glucoamilasi. Il glucosio viene ossidato specificamente ad un prodotto che reagisce con la sonda OxiRed per produrre fluorescenza. La titolazione è preciso, sensibile e può essere realizzato su estratti cellulari o sezioni di tessuto. Tuttavia, a differenza di altre tecniche, non dà informazioni sulla distribuzione del glicogeno nella cellula. Come esempio di questa tecnica, descriviamo qui la titolazione di glicogeno in due linee cellulari, cinese CCL39 fibroblasti di polmone di criceto e LS174 carcinoma del colon umano, incubati in normossia (21% O 2) rispetto ipossia (1% O 2). Abbiamo ipotizzato che l&#39;ipossia è un segnalenale che prepara le cellule per sintetizzare e conservare glicogeno per sopravvivere 1.

Un basso livello di ossigeno (ipossia) in segnali tumori a cellule tumorali la necessità di immagazzinare energia per gestire conseguente esaurimento degli elementi nutritivi, in modo da sopravvivere. Come glicogeno è il principale polimero energetico del glucosio nelle cellule di mammifero, abbiamo studiato la regolazione della glicogenosi in ipossia. Il calcolo e la standardizzazione della concentrazione di glicogeno in lisati cellulari devono essere eseguite sui dati grezzi di fluorescenza come mostrato nelle <strong...

Descriviamo qui un metodo biochimico accurato, riproducibile e conveniente per la titolazione del glicogeno in vitro. Questa tecnica utilizza il kit di analisi Abcam glicogeno e si basa sulla successiva idrolisi del glicogeno in glucosio e titolazione mediante fluorescenza.

Titolazione biochimica di glicogeno<em&gt; In vitro</em

Glycogen is the main energetic polymer of glucose in vertebrate animals and plays a crucial role in whole body metabolism as well as in cellular ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di titolare il glicogeno in vitro in campioni cellulari. Ciò si ottiene prima lizzando le cellule mediante disgregazione meccanica. Il secondo passo consiste nell'idrolizzare il glicogeno con l'alfa amilasi per ottenere il glucosio.Successivamente, il glucosio viene ossidato producendo una specie fluorescente. Il passaggio finale consiste nel misurare la fluorescenza. In definitiva, la titolazione biochimica del glicogeno viene utilizzata per mostrare i cambiamenti nel contenuto di glicogeno nelle cellule.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti è che è competitiva, sensibile, accurata e molto specifica. Per iniziare questa procedura, seminare le cellule a una concentrazione da 0,5 a 2 milioni per piatto di 100 millimetri di diametro. Incubare le cellule per 24, 48 o 72 ore in ipossia in una postazione di lavoro anaerobica impostata all'1% di ossigeno, al 94% di azoto e al 5% di anidride carbonica.Parallelamente, incubare un altro set di cellule in normossia per ogni condizione di ossigeno. Cambiare il terreno contenente glucosio da 25 millimolari ogni 24 ore per ridurre al minimo le variazioni della concentrazione di glucosio durante l'esperimento dopo il trattamento. Lavare le cellule due volte con PBS per rimuovere le tracce di glucosio dal terreno di coltura.Quindi raschiare le cellule nella centrifuga PBS fredda, la soluzione PBS a 1000 RPM per cinque minuti. Scartare il surnatante e lavare il pellet una volta con PBS. Successivamente, sospendere nuovamente il pellet in 100 microlitri di acqua distillata e aggiungere 100 microlitri del tampone di idrolisi del glicogeno ottenuto da un kit per il dosaggio del glicogeno.Far bollire il lisato a 95 gradi Celsius per cinque minuti per inattivare gli enzimi. Una volta che il lisato si è raffreddato a temperatura ambiente, agitare e centrifugare. Il lisato a 13.000 volte.Gravità per 10 minuti per rimuovere i prodotti insolubili. Quindi mettere da parte il surnatante per normalizzare i livelli di glicogeno al contenuto proteico tra i campioni. Quantificare le proteine con 25-35 microlitri di surnatante utilizzando il saggio dell'acido bsico.Dopo questa miscelazione, 50 microlitri del surnatante dei passaggi precedenti con un microlitro della miscela enzimatica per idrolisi. Incubare la miscela per 30 minuti a temperatura ambiente e mettere da parte per preparare la curva di calibrazione standard, diluire il kit standard glicogeno con tampone di idrolisi per dare una concentrazione finale di 10 microgrammi per millilitro. Quindi, aggiungi 0, 4, 8, 12, 16 e 20 microlitri dei 10 microgrammi per millilitro.Standard in sei provette separate diluire ogni standard con tampone di idrolisi per ottenere un volume finale di 50 microlitri e una concentrazione di glicogeno rispettivamente di 0,04, 0,08, 0,12, 0,16 e 0,2 microgrammi per millilitro. Aggiungere un microlitro di miscela enzimatica per idrolisi agli standard e incubare per 30 minuti a temperatura ambiente per ogni condizione di ossigeno. Etichettare la provetta uno come concentrazione di glucosio libero e le provette due e tre come concentrazione di glucosio totale.Quindi aggiungere 15 microlitri del surnatante estratto alla prima provetta seguita da 35 microlitri del tampone di idrolisi per ottenere un volume finale di 50 microlitri. La fluorescenza corrispondente alla concentrazione di glucosio libero sarà misurata in seguito. Aggiungere quattro microlitri di glicogeno idrolizzato alla provetta due e regolare fino a un volume finale di 50 microlitri con tampone di idrolisi.Per mantenere i valori di fluorescenza entro le concentrazioni della curva di calibrazione, aggiungere due microlitri di glicogeno idrolizzato alla provetta tre e regolare fino a un volume finale di 50 microlitri con tampone di idrolisi. Successivamente, preparare una soluzione di sviluppo per tutti i campioni e gli standard mescolando 48,7 microlitri di tampone di sviluppo, un microlitro di miscela di enzimi di sviluppo e 0,3 microlitri di sonda Oxy Redd. Per ogni campione standard, aggiungere 50 microlitri di questa miscela a ciascuna provetta e incubare al buio per 30 minuti.A temperatura ambiente per la misurazione della fluorescenza, impostare la fessura a tre nanometri per l'eccitazione e l'emissione, quindi misurare la fluorescenza. La regolazione dell'immagazzinamento e dell'ipossia del glicogeno è stata studiata poiché il glicogeno è il principale polimero energetico del glucosio nelle cellule di mammifero. Il calcolo e la standardizzazione della concentrazione di glicogeno negli stati cellulari sono stati eseguiti sui dati grezzi della fluorescenza.Come mostrato qui dalle misurazioni fluorescenti, è stata calcolata la concentrazione totale di glucosio libero. Utilizzando questi risultati, è stata determinata la quantità di glucosio derivata dal glicogeno. Il test biochimico per il glicogeno ha confermato che gli aggregati densi di elettroni osservati sulle micrografie elettroniche delle cellule ccl 39 erano particelle di glicogeno.L'accumulo di glicogeno e ipossia dipende dal fattore di trascrizione. Il fattore uno inducibile dall'ipossia, il principale fattore di trascrizione coinvolto nell'adattamento cellulare all'ipossia in diverse linee cellulari tumorali e non tumorali, il glicogeno immagazzinato può essere rapidamente metabolizzato dalla cellula in meno di sei ore. Inoltre, l'uso del glicogeno protegge dalla morte cellulare in condizioni di carenza di glucosio Seguendo questa procedura.Inoltre, è possibile eseguire metodi come la microscopia elettronica e la colorazione periodica con spostamento acido per rispondere a ulteriori domande come la distribuzione del glicogeno nelle cellule.

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Saggio spettrofotometrico per determinare l'attività della glicogeno sintasi

In questo video, descriviamo un saggio spettrofotometrico qualitativo per determinare l'entità della ramificazione in un campione di glicogeno con una struttura non caratterizzata. Il confronto dei massimi di assorbanza del campione non caratterizzato con quello dei polisaccaridi con strutture ramificate note indica la presenza di ramificazioni nel campione non caratterizzato.

Saggio di ramificazione del glicogeno per misurare il grado di ramificazione del glicogeno

Qui presentiamo un test affidabile e facile per misurare il contenuto di glicogeno nelle cellule cianobatteriche. La procedura prevede precipitazione, depolimerizzazione selezionabile e rilevazione di residui di glucosio. Questo metodo è adatto sia per ceppi selvatici che geneticamente modificati e può facilitare l'ingegnerizzazione metabolica dei cianobatteri.

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Vengono presentate le tecniche per misurare l'attività degli enzimi chiave del metabolismo del glicogeno, utilizzando un semplice spettrofotometro operante nell'intervallo visibile.

Metodi spettrofotometrici per lo studio del metabolismo del glicogeno eucariotico

È stata determinata una concentrazione ottimale di saccarosio per l'estrazione del glicogeno epatico utilizzando la centrifugazione a gradiente di densità del saccarosio. L'aggiunta di una fase di ebollizione di 10 minuti per inibire gli enzimi che degradano il glicogeno si è rivelata utile.

L'estrazione di molecole di glicogeno epatico per la determinazione della struttura del glicogeno

Il test sui tessuti animali utilizza la rilevazione a scintillazione nucleare per determinare l'attività enzimatica della glicogeno sintasi misurando l'incorporazione del glucosio radiomarcato nel glicogeno.

Valutazione radiochimica dell'attività dell'enzima glicogeno sintasi nei tessuti animali

In questo video, dimostriamo un metodo alternativo per il rilevamento e la titolazione di virus utilizzando una tecnica di rilevazione enzimatica antigene conosciuto come un saggio immunoperossidasi. Qui, vi mostreremo come raccogliere i campioni virali, preparare le cellule per il test, e infine il saggio immunoperossidasi utilizzando diluizioni seriali per determinare il titolo virale.

Titolazione del coronavirus umani utilizzando un test immunoperossidasi

Dopo la formazione del tubo neurale, il neuroepitelio restringe e le pieghe mentre il tubo si riempie di liquido cerebrospinale embrionale (eCSF) per formare i ventricoli del cervello embrionale. Abbiamo sviluppato questa tecnica ventricolo iniezione per visualizzare meglio lo spazio pieno di liquido in contrasto con la forma neuroepiteliale in un embrione vivo.

Zebrafish Cervello iniezione ventricolo

Un protocollo generale per l'uso di calorimetria isotermica di titolazione per monitorare la termodinamica vincolante per i sistemi biologici con moderata affinità di legame è presentato.

Calorimetria isotermica di titolazione di misura macromolecola-ligando di affinità

Ricostituzione biochimica dei recettori di steroidi • Complessi proteina Hsp90 e la riattivazione del Ligand Binding

Impara la titolazione biochimica del glicogeno in vitro mediante idrolisi con alfa-amilasi e misurazione della fluorescenza. Questo metodo offre un'analisi accurata e riproducibile dei livelli di glicogeno cellulare.

Titolazione biochimica di glicogeno

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