Name: In situ trasversale retto addominale miocutaneo Flap: un modello di ratto di miocutaneo ischemia riperfusione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 12 s
Description: Scopri il modello chirurgico TRAM nel ratto per studiare la precondizionamento nei lembi miocutanei. Questo metodo permette di valutare la viabilità tissutale e migliorare gli esiti della chirurgia ricostruttiva.

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Questo lavoro è stato finanziato dal Medical Research Council concessione G1000299. L&#39;autore corrispondente desidera ringraziare Gary Borthwick, Università di Edimburgo, per l&#39;assistenza durante l&#39;intervento. Gli autori desiderano ringraziare consigli da Helen Douglas e Iain Mackay e che ci permette di osservare il loro epigastrica inferiore profonda (DIEP) Procedura di lembo (Canniesburn Unità di Chirurgia Plastica, Glasgow Royal Infirmary, 84 Castle Street, Glasgow G4 0SF, UK). Gli autori desiderano inoltre ringraziare Gary Blackie presso l&#39;Università di Edimburgo per il suo aiuto nel produrre il video di questo articolo.

Tutto intervento viene eseguito in conformità con le linee guida stabilite dal parte del Regno Unito Home Office e l&#39;Università di Dipartimento Servizi Veterinari di Edimburgo. 1. Procedura di Set-up chirurgico Note <ol><li> Cambiare in scrub pulite chirurgico, abito, berretto scrub e maschera. Pulire tutte le superfici della sala operatoria comprese le attrezzature con 2% di clorexidina in alcool isopropilico al 70%. </li><li> Prima dell&#39;intervento, autoclave tutte le forniture e gli strumenti che saranno utilizzati nella procedura chirurgica. Confezioni sterili per operazione dovrebbero includere: 3 tende, garze, cotone punta applicatori, teli di silicone e gli strumenti chirurgici, vedere la tabella dei materiali chirurgici e gli strumenti specifici e nella Figura 1. Pesare il ratto e misurare il volume appropriato di buprenorfina (0,04 mg / kg) da somministrare per via sottocutanea 1 ora prima di completare la procedura. Lay out; 3 x 1 ml siringhe per la somministrazione sottocutanea di liquidi durante Surgery, 2 x 6-0 suture Vicryl, 1 x 5-0 suture ETHILON, un marker sterile con righello e un bisturi monouso 10-blade, 4 - 5 paia di guanti sterili e un&#39;unità di cauterio portatile. </li><li> Place 4 x 10 ml sterile, 0,9% fiale saline in un bagno di acqua riscaldata a 37 ° C. Questo verrà utilizzato per la sostituzione del fluido sottocutaneo (1 ml / kg / ora) e per sciacquare il sito chirurgico. Impostare la coperta omeotermi, sonda rettale, lampada di calore, microscopio operatorio e anestesia rig. Accendere il laser e il suo software, set-up un altro impianto di anestetico e mettere un pad termico sotto il nero opaco su cui l&#39;animale getterà durante la scansione. </li><li> Utilizzare maschili, Lewis ratti di peso 250-300 g. Casa ratti per 7 giorni con cibo e acqua ad libitum con 12 hr cicli luce-buio prima di qualsiasi intervento chirurgico viene eseguito. </li></ol> 2. Anestesia e preparazione della pelle <ol><li> Posizionare il topo in camera di induzione del anestetico rig e somministrare 4% isoflurano con 1L/min O 2 per2-3 min per indurre anestesia. Rimuovere il ratto anestetizzato dalla camera e posizionarlo supino sul pulito, tappetino riscaldato. Mantenere isoflurano al 1,5% con un cono di naso. Applicare agenti lacrilube o simile per impedire abrasione corneale durante la procedura. Eseguire un test di pinch piede-pad per garantire l&#39;animale è adeguatamente anestetizzato prima di procedere. Ripetere questo ultimo test prima di ogni importante passo nella procedura e regolare la concentrazione di anestetico inalatorio conseguenza. </li><li> Strettamente radere l&#39;addominale anteriore con un rasoio elettrico in modo che l&#39;intera superficie addominale è esposto. Applicare depilazione crema per la durata consigliata dal fornitore. Togliere la crema e lavare accuratamente la pelle con riscaldato soluzione salina sterile per rimuovere tutte le tracce di crema. Applicare 2% di clorexidina in alcool isopropilico al 70% per la pelle e lasciare asciugare prima di procedere. Questa è la preparazione della pelle di serie nella nostra unità sulla base di prove di corrente di infezione del sito chirurgico. Favore 34 discuss con il dipartimento di Veterinaria ciò che è procedura standard nella vostra unità prima di eleggere un protocollo di preparazione della pelle. </li><li> Mettere 2 tende lati del ratto e aver cura di mantenerli sterili. Indossare guanti sterili e con l&#39;aiuto di un assistente aprire le confezioni sterili. Mettere tutti gli strumenti su un drappo e le suture, garze, applicatori di cotone, teli di silicone e sterile marcatore penna con righello d&#39;altro. </li><li> Identificare la linea mediana utilizzando xiphisternum e la coda come punti di riferimento. Segnare la linea mediana. Misurare 0,8 centimetri sotto il xiphisternum e segnare questo punto. Tracciare una linea perpendicolare alla linea mediana da questo punto. Prendendo la linea mediana come il centro del segno lembo di uscita 1 cm e 2 cm a sinistra e la destra della linea mediana. Disegnare linee verticali parallele alla linea mediana dai punti. Misura 4 cm al di sotto della linea orizzontale originale e tracciare un altro parallelo ad esso. Seguendo le istruzioni di un 4 x 4 cm lembo diviso in 4 strisce uguali si delinea(Vedi Figura 2). </li></ol> 3. Laser Doppler Imaging <ol><li> Portarlo con attenzione nel ratto per l&#39;ogiva del secondo impianto di anestetico a scanner LDI. Continuare l&#39;anestesia al 1,5% isoflurano, 1L/min O 2. Accendere il laser e seguire le istruzioni del produttore per avviare la scansione. Dopo aver salvato il file digitalizzato restituire il ratto di nuovo al primo impianto di perforazione e reinserire la sonda rettale della coperta omeotermale utilizzando vaselina bianca come lubrificante. </li></ol> . 4 in situ lembo TRAM - miocutaneo Modello di IRI <ol><li> Mani Re-macchia e indossare i guanti sterili freschi. Tagliare un cerchio di diametro 5 cm al centro del restante garza sterile ed inserire questo sull&#39;addome esposta per creare un campo sterile-drappeggio. </li><li> Praticare un&#39;incisione lungo il marcato bordo laterale sinistro (Figura 3A e B). Ottenere l&#39;emostasi. Fare incisioni simili giù le linee orizzontalialla sinistra della linea mediana. Ottenere l&#39;emostasi. </li><li> Il grasso sovrastante la guaina del muscolo retto inferiore sinistro dovrebbe essere visibile. Utilizzando attentamente pinze e forbici belle iris arrivare sotto di questo grasso. Fare attenzione a non danneggiare le perforanti provenienti attraverso l&#39;, guaina del muscolo retto anteriore sinistra. L&#39;aereo aperto da tale dissezione è che immediatamente sopra la fascia parete addominale anteriore. Continuare dissezione in questo piano attorno ai margini delimitate. Nella fossa iliaca sinistra si trova il grande, superficiale circonflessa iliaca navi di questi possono essere legati o cauterizzato. Quindi estendere la dissezione mediale con cautela e solo per quanto riguarda il margine laterale del muscolo retto sinistro. Vi è un cambiamento di colore ovvio a questo punto dal rosa al quasi bianco (Figura 3C). Irrigare delicatamente la zona con soluzione salina sterile e verificare che l&#39;emostasi è stata ottenuta prima di garza umida su tutta l&#39;area. </li><li> Ripetere la procedura sul lato controlaterale, ma questa volta si estendono tØ la linea alba (metà linea). Avrà cura di individuare e cauterizzare tutte le perforanti muscolocutaneo che sorgono nel centro della destra muscolo retto addominale (Figura 3D). Se questo non viene fatto correttamente può risultare in un ematoma postoperatorio ea falsi risultati. Allo stesso modo ottenere l&#39;emostasi, irrigare e posizionare garza umida sopra il lembo sollevato. </li><li> Tornare al margine inferiore del muscolo retto anteriore sinistra (Figura 3E e F). Cauterizzare la più inferiore perforatore visto. Procedere a tagliare una piccola finestra (circa 0,6 centimetri x 0,6 cm) in guaina del muscolo retto anteriore utilizzando microscissors e indicò curvo pinze Graeffe. Blunt sezionare lentamente lungo il margine laterale del muscolo fino a quando il muscolo si dirada, ma prima la guaina posteriore è violato. Quindi ruotare la pinza e smussare sezionare medialmente fino al ventre del muscolo è in cima al bordo curvo della pinza e le punte sono gratuiti al margine mediale. Alimentare approssimativaly 6 centimetri di 5-0 Ethilon nelle fauci della pinza e legare la guaina del muscolo retto inferiore. Al termine di questa fase il lembo miocutaneo è isolato su una nave-le dominante profondi vasi epigastrici superiori. Coprire con una garza umida. </li><li> Tagliare il rivestimento in silicone in ovali con curve lisce, (Figura 3G). Questi dovrebbero essere abbastanza grande da coprire la maggior parte della superficie esposta sotto le porzioni fasciocutanei del lembo. Tuttavia, bisogna fare attenzione a garantire che il bordo pelle può essere chiuso senza alcuna tensione e la curva mediale dell&#39;ovale può dover essere accoppiato indietro per evitare che il flusso attraverso alterando i restanti perforanti. Questi vengono poi suturate sul posto con 6-0 Vicryl (Figura 3H). Coprire con una garza umida. </li><li> Utilizzando semplici interrotto &#39;peg out&#39; 5-0 ETHILON sutura del lembo per ridurre il calore e la perdita di acqua (Figura 3I). Coprire con una garza umida. </li><li> Estendere la ferita superiormente alla sinistra delxiphisternum (Figura 3I). Suturare questo al quadrante superiore sinistro migliorare il campo di vista. </li><li> Tagliare il grasso sovrastante per rivelare il, sinistra, guaina del muscolo retto anteriore superiore. Tagliare un piccolo (0,6 cm x 0,6 cm) finestra in questa guaina (Figura 3J). Estendere la ferita medialmente fino a un cambiamento di traiettoria fibre muscolari da verticale a obliqua e coerenza da fitto a fibrille sciolti si vede. </li><li> Inserire le pinze curve attentamente tra questi due muscoli e di aprire un aereo per via smussa. Tagliare con cautela verso il basso solo per quanto riguarda la superficie superiore di queste pinze curve taglio attraverso il ventre del muscolo retto addominale sinistro per rivelare il sottostante profonda, l&#39;arteria epigastrica superiore e vena (Figura 3K). </li><li> Utilizzando micro-strumenti e ad alta potenza sul microscopio operatorio, separare con cura l&#39;arteria e la vena e togliere il grasso circostante. </li><li> Applicare atraumatica morsetti Acland a unrtery e vena (B-1, di tipo &quot;V&quot;) e avviare il timer per il conto alla rovescia del periodo ischemico 30 min. Irrigare il peduncolo bloccato e coprire con garza. Noi non utilizziamo dilatatori dei vasi, come verapamil o pabavarine ma dovremmo vaso spasmo essere un problema, dovrebbero essere considerati tali farmaci. </li><li> Amministrare la buprenorfina (0,04 mg / kg) e riscaldato, soluzione salina sterile (1 ml / kg / ora). </li><li> A partire dall&#39;angolo in alto a sinistra, suturare il lembo in posizione con 6-0 punti di sutura Vicryl sottocuticolare arresto e legatura al xiphisternum. </li><li> Quando la min tempo ischemico 30 è finito, rimuovere con attenzione i morsetti e irrigare il peduncolo con soluzione salina riscaldata. Verificare che il flusso è stato ristabilito. Si prega di notare che questa volta ischemico è stato stipulato dal Regno Unito Casa autorità Office. I ricercatori che lavorano in altri enti possono essere in grado di estendere questo periodo. L&#39;estensione del tempo di ischemia porteranno probabilmente a peggiorare il risultato clinico. </li><li> Suturare i bordi tagliati del retto al suo posto con il 6-0 Vicryl.Fare attenzione a non applicare troppa tensione come questo può portare a attorcigliamento dei vasi. </li><li> Completare la sutura sottocutanea avendo cura di seppellire tutti i nodi sotto la pelle (Figura 3K). </li><li> Pulire la zona ferita e lasciare asciugare. Ridisegnare le zone sulla patta. </li><li> Nuovamente la scansione degli animali per ottenere un&#39;immagine postoperatorio. </li><li> Riapplicare lacrilube per gli occhi dell&#39;animale e metterlo in una incubatrice riscaldata (37 ° C) per 1 ora di recuperare prima di tornare l&#39;unità di allevamento. </li></ol> Fasi critiche all&#39;interno del protocollo Il punto cruciale della procedura è di individuare le profonde, vasi epigastrici superiori. Questo è mostrato chiaramente nel film di accompagnamento. In breve, una finestra è tagliata nella guaina del retto anteriore per esporre le fibre muscolari sottostanti che eseguiranno longitudinalmente. Estendendo la dissezione superficiale della guaina del retto anteriore medialmente un cambiamento nella fibra muscolare traiettoria viene osservata from longitudinale a obliquo. Inserire smussare chiuso, curvo, Graeffe pinze (o simili) nel punto di intersezione di questi due fasci di fibre muscolari. Blunt sezionare lateralmente. Tagliato, usando forbici micro, sulla superficie superiore delle pinze curve tenute in questo piano tra i fasci di fibre muscolari. Sulla rimozione del Graeffe forcipe il profondo, l&#39;arteria epigastrica superiore e vena sarà osservato al punto medio del muscolo retto addominale corpo. Spellare la sovrastante grasso le navi che utilizzano micro strumenti e applicare le fascette. Le porzioni fasciocutanei del lembo TRAM ratto sono abbastanza sottile da permettere il lembo di prendere come un trapianto di cute a tutto spessore. Per evitare questo e per garantire che questo è un vero modello di IRI un sottile foglio di silicone flessibile è posto al di sotto delle porzioni fasciocutanei del lembo. 35 Questo passo è stato adottato da altri ricercatori che intraprendono modelli TRAM ratto. 17,21,25 Ratti masticano throunodi gh in modo da assicurarsi che tutti i punti di sutura sono sottocuticolare e tutti i nodi sono sepolti. Nello svolgimento meticolosa sutura autocannabilism di lembi come riportato da altri ricercatori possono essere evitati. 24 Dopo la somministrazione di buprenorfina a ridurre l&#39;anestesia di manutenzione per 1% isoflurano (1L/min O 2).

Non abbiamo informazioni integrative.

Le modifiche e la risoluzione dei problemi Il protocollo qui presentato riproduce la IRI visto in trasferimento libero del tessuto in un sistema sperimentale che consente un&#39;ulteriore comprensione di tale processo e fornisce un mezzo per indagare mezzo di ameliorating IRI e migliorando risultato. Questo potrebbe essere facilmente modificato per produrre una lesione più grave se fosse basata sulla non-dominante, profondo, inferiore peduncolo epigastrico o se sono state aumentate il tempo isc...

L&#39;obiettivo di questo protocollo è quello di dimostrare un modello affidabile e riproducibile del danno da ischemia-riperfusione osservata in trasferimento libero del tessuto per consentire strategie interventistiche da indagare. Trasferimento libero tessuto è definito come il distacco vascolare di un blocco di isolati di tessuto seguita da trapianto autologo di quel tessuto con anastomosi dei vasi sezionati della patta vasi nativi nel sito ricevente. La procedura è nota come FTT e il tessuto in fase di trasferimento indicato come il lembo libero. Trasferimento di tessuto libero è l&#39;approccio gold standard per la correzione dei difetti complessi e compositi in cui le opzioni locali non idonei o non disponibili. 1-4 ischemia riperfusione (IRI) è inevitabile in trasferimento libero del tessuto, contribuisce a battere fallimento 5,6 e non ha trattamento efficace. La natura elettiva di interventi chirurgici lembo libero permette la somministrazione farmacologica diAgenti cal a condizione contro IRI. IRI risultati in flusso alterato attraverso il microcircolo di attivazione endoteliale e disfunzione metabolica, 7 aumento della permeabilità capillare e conseguente edema interstiziale 7, afflusso di cellule infiammatorie, 8 rilascio di mediatori infiammatori, specie reattive 9 e complemento di deposizione. 10 Questo complesso processo di ipossia e successiva riperfusione alla fine porta alla morte delle cellule. Un modello di miocutaneo IRI consente l&#39;efficacia delle strategie di precondizionamento su esiti clinici da valutare. Un recente lavoro ha convalidato l&#39;uso di modelli animali di studi dell&#39;IRI come surrogato per IRI umano confrontando i cambiamenti molecolari osservati in soggetti umani e animali esistenti. 10,11 Il ratto trasversale retto addominale miocutaneo (TRAM) lembo è stato descritto nel 1987 in tedesco e 12 nel 199313 in inglese. Questo modello ha guadagnato grande popolarità 13-25 come, robusto modello economico per indagare diverse strategie per ridurre IRI associato con il trasferimento del tessuto gratis. 14,17-22 La maggior parte di questi studi sono stati progettati come lembi TRAM unipedicled basati sul profondo, inferiore, . epigastrico peduncolo vascolare 15-18,20-22 confronto dei dati di questi studi è complicata con l&#39;uso di diverse isole cutanee dimensioni (10,5-30 cm 2) e diverse lunghezze di follow-up postoperatorio (2 - 10 giorni). La percentuale di superficie lembo necrosi medio totale nel braccio di controllo di questi studi è di 69 ± 6,2% (media ± SEM). Va notato che questi sei documenti impiegano tutti il ​​muscolo retto dell&#39;addome come un vettore per il peduncolo vascolare ma non espongono, dividere e microanastomose o bloccare i vasi. Zhang et al. 23 hanno descritto una vera, libera ratto lembo TRAM base ai vasi epigastrici superiori in cui la fgiri sono state sollevate, vasi divisi e il lembo miocutaneo trasferiti e microanastomosed ai vasi dell&#39;inguine. Questa tecnica difficile necessaria la microanastomosi di ,45-,5 vasi di calibro mm. Solo quindici anni sono stati eseguiti e di questi il 67% è sopravvissuto. 23 Il modello descritto da Zhang et al. 23 è un ottimo modello per il lembo TRAM microchirurgico umano in quanto rispecchia veramente l&#39;infortunio sostenute durante FTT. Gli altri modelli pubblicati su un lembo TRAM ratto riflettere più accuratamente le ferite subite durante un TRAM peduncolato umano, ma non riflettono accuratamente la IRI come questi lembo non sottoporsi ad un periodo di ischemia seguita da riperfusione, come il peduncolo vascolare è mai bloccato o diviso e microanastomosi eseguita. Questo protocollo e video descrivono un nuovo modello di trasferimento di tessuto gratis utilizzando il TRAM ratto in cui l&#39;IRI si replica utilizzando microclamps. Questo riproduce più fedelmente IRI rispetto ai predecessori TRAM peduncolo, ma è tecnicamente più facile che performing il microanastomosi. Microclamps sono stati ampiamente utilizzati da ricercatori di trapianto di ricreare IRI associato con trapianto di organi solidi; 26-33 tuttavia, questa è la prima volta che è stato descritto nel lembo TRAM ratto.

<table><tbody><tr>Scanner <td></td><td></td><td>di imaging laser doppler LD12 Moor</td><td><a href="http://gb.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8" target="_blank">http://gb.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8</a></td></tr>Sistema <tr><td>completo di coperte omeotermiche con sonda flessibile. Piccolo. 230 VAC, 50 Hz</td><td></td><td>507221F</td><td><a href="http://www.harvardapparatus.com" target="_blank">www.harvardapparatus.com</a></td></tr><tr><td>Graeffe pinze 0.8 mm punte curve</td><td></td><td>11052-10</td><td>2, <a href="http://www.finescience.de" target="_blank">http://www.finescience.de</a></td></tr><tr><td>Acland clamps</td><td></td><td>00398 V</td><td>B-1 &#8217; V&#8217; pinze per modelli utilizzate sia sull'arteria che sulla vena. <a href="http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf" target="_blank">http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf</a></td></tr><tr><td>Applicatore</td><td></td> di morsetti <td>CAF-4</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf" target="_blank">http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf</a></td></tr><tr><td>Unità cauterica</td><td></td> Gemini <td>726067</td><td><a href="www.harvardapparatus.com" target="_blank">www.harvardapparatus.com</a></td></tr><tr><td>Dilatatori per microvasi 11 cm punte da 0,3 mm 00124</td><td></td><td>D-5a.2</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Micro Jewellers Pinze 11cm angolate 00109</td><td></td><td>JFA-5b</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Micro Jewellers Pinze 11 cm dritte 00108</td><td></td><td>JF-5</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Acland Morsetti singoli B-1V (coppia)</td><td></td><td>396</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Micro Forbici Manici Tondi 15 cm Dritto</td><td></td><td>67</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Forbici Iris 11.5 cm Curve EASY-CUT</td><td></td><td>EA7613-11</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Forbici Mayo 14 cm Lame Smussate Diritte EASY-CUT</td><td></td><td>EA7652-14</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Derf Portaaghi 12 cm TC</td><td></td><td>703DE12</td><td><a href="http://www.merciansurgical.com" target="_blank">http://www.merciansurgical.com</a></td></tr><tr><td>Ethilon 5-0</td><td></td><td>W1618</td><td><a href="http://www.farlamedical.co.uk/" target="_blank">http://www.farlamedical.co.uk/</a></td></tr><tr><td>Vicryl rapide 6-0</td><td></td><td>W9913</td><td><a href="http://www.millermedicalsupplies.com/" target="_blank">http://www.millermedicalsupplies.com/</a></td></tr><tr><td>Instrapac - Pinza dentata Adson (Extra Fine)</td><td></td><td>7973</td><td><a href="http://www.millermedicalsupplies.com/" target="_blank">http://www.millermedicalsupplies.com/</a></td></tr><tr><td>Portaaghi</td><td></td> Castroviejo <td>12565-14</td><td><a href="http://s-and-t.ne" target="_blank">http://s-and-t.ne</a></td></tr><tr><td>Lampada</td><td></td><td></td> termica<td><a href="http://www.chicken-house.co.uk" target="_blank">http://www.chicken-house.co.uk</a></td></tr><tr><td>Foglio di silicone 0.3 mm traslucido</td><td></td><td></td><td><a href="http://www.silex.co.uk/" target="_blank">http://www.silex.co.uk/</a></td></tr><tr><td>Immagine J software</td><td></td><td></td><td><a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a></td></tr><tr><td>Zeiss OPMI pico</td><td></td><td></td><td><a href="http://www.zeiss.co.uk/" target="_blank">http://www.zeiss.co.uk/</a></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td></td><td></td><td></td>operatorio</tr><tr><td>Vet tech solution isofluorane rig</td><td></td><td></td><td><a href="http://www.vet-tech.co.uk/" target="_blank">http://www.vet-tech.co.uk/</a></td></tr><tr><td>Vet tech solution isofluorane rig</td><td></td><td></td><td><a href="http://www.vet-tech.co.uk/" target="_blank">http://www.vet-tech.co.uk/</a></td></tr></tbody></table>

in situ trasversale retto addominale miocutaneo flap: un modello di ratto di miocutaneo ischemia riperfusione

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Trasferimento di tessuto libero è il gold standard della chirurgia ricostruttiva per riparare difetti complessi non suscettibili di opzioni locali o quelli che richiedono tessuto composito. Ischemia riperfusione (IRI) è una causa nota di guasto lembo libero parziale e non ha alcun trattamento efficace. Creazione di un modello di laboratorio di questo pregiudizio può rivelarsi costoso sia in termini finanziari, come i mammiferi più grandi sono convenzionalmente usate e le competenze necessarie per la difficoltà tecnica di queste procedure in genere richiede l&#39;impiego di un microsurgeon esperto. Questa pubblicazione e video dimostrano l&#39;uso efficace di un modello di IRI in ratti che non richiede esperienza microchirurgica. Questa procedura è un modello in situ di un abdominis miocutaneo trasversale (TRAM) lembo pinze atraumatiche dove sono utilizzati per riprodurre il danno da ischemia-riperfusione associato a questa chirurgia. Un Doppler Imaging (LDI) scanner laser è impiegato per valutare la perfusione lembo e l&#39;immagine di elaborazione softwari, Immagine J per valutare percentuale dell&#39;area sopravvivenza pelle come una misura di esito primario di lesioni.

Modelli di ratto sono più economici rispetto alle grandi modelli animali, 36 sono resistenti alle malattie in natura e può essere manipolato geneticamente. Animali scuoiati sciolti, come i roditori, sono stati pensati per avere una diversa disposizione di afflusso di sangue cutaneo rispetto agli animali scuoiati fissi quali gli esseri umani e suini. In sciolto animali dalla pelle, la pelle è fornita principalmente dai vasi sanguigni cutanei diretti che passano attraverso il grasso sottocutaneo per la pelle so...

Trasferimento di tessuto libero è ampiamente utilizzata in chirurgia ricostruttiva per ripristinare la forma e la funzione a seguito di resezione oncologica e traumi. Precondizionamento questo tessuto prima della chirurgia può migliorare l&#39;esito. Questo articolo descrive una<em&gt; In situ</em&gt; Trasversale retto addominale miocutaneo lembo (TRAM) nei ratti come mezzo per testare le strategie di precondizionamento.

In situ trasversale retto addominale miocutaneo Flap: un modello di ratto di miocutaneo ischemia riperfusione

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Il mio nome è Marie Claire Edmonds. Sono una borsista per la ricerca clinica presso l'Università di Edimburgo. L'obiettivo di questa presentazione video è dimostrare il nostro modello di leso cutanea miocutanea a peduncolo muscolo-cutaneo trasverso del retto addominale come modello di lesione da ischemia-riperfusione miocutanea nel ratto.Questa è la nostra configurazione chirurgica. Dietro al tavolo operatorio si possono vedere il sistema anestetico e la scatola rossa per l'induzione. Il tavolo operatorio è predisposto in modo che l'animale venga posizionato in posizione supina su una coperta termoregolata, utilizzata in combinazione con una fonte di calore esterna e con la temperatura corporea centrale mantenuta tramite retroazione attraverso una sonda rettale.Gli strumenti chirurgici vengono disposti a destra dell'animale, mentre il materiale di sutura in garza, il silicone e il MicroPen vengono posizionati a sinistra dell'animale, entrambi su campi operatori monouso. Questi strumenti vengono disposti solo al termine della deflazione e l'animale viene quindi preparato e coperto per l'intervento chirurgico, in conformità alle linee guida stabilite. In primo luogo, l'animale viene anestetizzato con fluoruro di ISO al 4%.L'anestesia viene mantenuta al 1-1,5% di isoflurano per tutta la durata della procedura. La parete addominale anteriore viene rasata utilizzando un rasoio elettrico e applicando una crema depilatoria commerciale. Questo passaggio è fondamentale per ottenere rilevamenti accurati con la macchina di imaging laser Doppler.La crema viene rimossa e l'area viene lavata con soluzione salina sterile tiepida. Successivamente viene applicato sulla pelle il clorhexidina al 2% in alcol isopropilico al 70%. Si lascia asciugare.Si consiglia di seguire le linee guida locali per la preparazione della cute. Il lembo mostrato sarà basato sui vasi epigastrici superiori profondi sinistri e sulle zone numerate come descritto da SCH Neal nel 1982. Per il lembo T tram umano, è possibile basare il lembo sui vasi profondi, inferiori o superiori, sia destri che sinistri.È tuttavia importante notare che i vasi superiori sono i vasi dominanti nel ratto. A differenza dell'anatomia umana corrispondente, delimitare i margini piatti per identificare la linea alba utilizzando lo sterno ZA e la coda come punti di riferimento. Segnare la linea mediana a 0,8 centimetri al di sotto dello sterno ZA e contrassegnare questo punto; tracciare una linea perpendicolare alla linea mediana a partire dal punto precedentemente segnato al di sotto dello sterno ZA, considerando la linea mediana al centro del lembo.Segnare un centimetro e due centimetri a destra e a sinistra della linea mediana. Tracciare una linea verticale parallela alla linea mediana partendo da questi punti. Misurare quattro centimetri al di sotto della linea orizzontale originale e tracciare un'altra linea parallela ad essa.Seguendo queste istruzioni, verrà delineata una lemba di quattro per quattro centimetri composta da quattro zone di uguali dimensioni. Le zone sono numerate secondo la descrizione di Perle et al., in modo che la zona uno sia l'integumento sovrastante il muscolo addominale diretto fornito dal peduncolo vascolare. La zona due è l'integumento sovrastante il muscolo retto controlaterale.La zona tre è laterale rispetto alla zona uno e la zona quattro alla zona due. Al termine, il ratto viene trasferito in modo asettico e sotto anestesia al dispositivo di imaging Doppler a laser, dove è presente un ulteriore sistema anestetico per mantenere l'anestesia. L'imaging Doppler a laser può fornire un mezzo non invasivo per valutare il flusso sanguigno nel lembo. Una sorgente di luce monocromatica viene emessa dalla testa dello scanner.Questa luce istantanea mostrata in blu in questa animazione viene dispersa dagli eritrociti in movimento all'interno del tessuto. L'entità dello spostamento è correlata alla velocità degli eritrociti. La luce spostata, mostrata in verde in questa animazione, viene misurata dal fotodetettore all'interno della testa dello scanner e viene calcolata la perfusione.La misurazione ottenuta è espressa in unità arbitrarie note come unità di perfusione, e i dati sono visualizzati in un'immagine simile a una mappa meteorologica, in cui la perfusione è graduata da alta a bassa e a ogni valore è assegnato un colore specifico. Ogni strumento viene calibrato in modo che tutte le letture effettuate con lo stesso scanner e con le stesse impostazioni possano essere confrontate. Utilizzando il software fornito con lo scanner, è possibile sovrapporre un'area di interesse all'immagine LDI e calcolare la perfusione media di tale zona. Ciò consente di valutare e confrontare l'intero lembo o singole aree.Dopo la scansione LDI, riportare i ratti in posizione supina sulla coperta termica nel loro alloggio sul tavolo operatorio, rivestire nuovamente le mani con guanti sterili freschi e coprire l'animale con drappi chirurgici sterili. Chiedere all'assistente di eseguire un test di pizzicamento della pianta del piede per verificare un'adeguata anestesia prima di procedere. Praticare un'incisione in senso longitudinale.Il margine laterale sinistro dell'animale. Eseguire incisioni simili lungo le linee orizzontali a sinistra della linea mediana. Assicurarsi che sia stabilito l'emostasi utilizzando un dispositivo cordy portatile.Individuare la tonaca adiposa superiore, la guaina erettore inferiore sinistra, utilizzando pinze e forbici fini a iris per aprire un piano al di sotto di questo tessuto adiposo. Prestare attenzione a non danneggiare eventuali perforanti che emergono attraverso la guaina retto addominale anteriore sinistra. Il piano aperto mediante tale dissezione si trova direttamente al di sopra della fascia della parete addominale.Continuare il dissezione in questo piano e lungo i margini delimitati. Successivamente, procedere medialmente. Fino al margine laterale del muscolo retto sinistro, in corrispondenza di questo punto si osserva un evidente cambiamento di colore, dal rosa al bianco, come evidenziato da questa linea bianca.Il campo chirurgico dovrebbe ora apparire come nell'immagine. Ripetere la procedura sul lato controlaterale, ma questa volta estendere la dissezione mediale fino alla linea alba mediana e cauterizzare i perforanti che attraversano la guaina del retto anteriore destro. Non appena vengono visualizzati, ottenere l'emostasi, irrigare e posizionare una garza umida sulla lemba sollevata.Le porzioni fasciali cutanee del lembo tram del ratto sono abbastanza sottili da permettere al lembo di ricevere un innesto cutaneo a tutto spessore. Per evitare ciò e garantire che si tratti di un modello reale di IRI, un sottile foglio di silicone flessibile viene posizionato al di sotto delle porzioni fasciali cutanee del lembo. Questo passaggio è stato adottato da altri ricercatori che realizzano modelli di lembo tram nei ratti, i quali tagliano il foglio di silicone in forme ovali.Questi devono essere abbastanza grandi da coprire la maggior parte della zona al di sotto delle porzioni fascio-cutanee del lembo. Tuttavia, è necessario prestare attenzione per assicurarsi che il margine cutaneo possa essere chiuso senza alcuna tensione e che non vi sia pressione sui perforanti che attraversano il centro della guaina del muscolo retto anteriore sinistro. I fogli di silicone vengono quindi suturati in posizione con punti di Vicryl 6-0, coperti con garza umida, tornando al margine inferiore del muscolo retto anteriore sinistro; viene cauterizzato il perforante più inferiore visibile, quindi si pratica una piccola finestra nella guaina del retto anteriore utilizzando forbici microchirurgiche e pinze curve a punta grigia.Dissezionare in modo ottuso lungo il margine mediale del muscolo retto sinistro fino a quando il muscolo si assottiglia, ma prima che venga perforata la guaina posteriore del retto; ripetere sul lato laterale, quindi dissezionare in modo ottuso in direzione mediale finché la parte centrale del muscolo si trova sopra il bordo curvo della pinza e le punte risultano libere al margine mediale. Inserire sei centimetri di cinque etolon in corrispondenza delle ganasce della pinza e legare il muscolo retto inferiore. In questo modo, si ottiene un lembo miocutaneo irrorato da un unico peduncolo vascolare, costituito dai vasi epigastrici superiori profondi, che viene ricoperto con garza umida.Utilizzando semplici punti interrompenti, fissare la lemba per ridurre la perdita di umidità come mostrato. Estendere la ferita superiormente appena a sinistra dello sterno a cerniera. Suturare questo tessuto al quadrante superiore sinistro per migliorare il campo visivo.Praticare una finestra nella guaina superiore del retto anteriore sinistro. Estendere la ferita in senso mediale fino a quando si osserva un evidente cambiamento nella traiettoria delle fibre muscolari, passando da fibre verticali strettamente addossate del retto a fibre allentate dell'OBL. Inserire con attenzione la pinza curva tra questi piani muscolari ed estendere lateralmente mediante dissezione ottusa.Tagliare con attenzione utilizzando forbici microchirurgiche sulla superficie superiore chiusa di queste pinze. Tagliare attraverso il ventre del muscolo retto addominale sinistro per esporre i vasi epigastrici superiori profondi sinistri, utilizzando strumenti microchirurgici e un ingrandimento elevato al microscopio operatorio. Separare con cura l'arteria e la vena ed eliminare ogni grasso circostante.Applicare pinze traumatiche LAN all'arteria e alla vena e avviare il cronometro per contare i 30 minuti del periodo ischemico. Irrigare la cavità creata intorno alle pinze e coperta con garza umida. Chiedere all'assistente di somministrare la buprenorfina e il fluido riscaldato a partire dal quadrante superiore sinistro dell'animale.Suturare la lemba utilizzando punti sottocutanei continui con filo Vicryl 6-0. Procedere lungo il margine inferiore della ferita. Continuare lungo il margine della lemba sul lato destro dell'animale e lungo il margine superiore.Fermarsi e fare un nodo quando si arriva allo sterno con la cerniera lampo. Al termine del periodo ischemico di 30 minuti, rimuovere le pinze e irrorare l'area con soluzione salina calda. Ricucire i margini tagliati della guaina rettale nella posizione originaria con sette punti di Vicryl 6-0.Avendo molta cura di non danneggiare il peduncolo vascolare sottostante. Non applicare troppa tensione, poiché ciò provocherebbe una piegatura dei vasi. Quindi completare la sutura sottocutanea.Avendo cura di seppellire tutti i nodi sotto la pelle. Pulire l'area della ferita e lasciarla asciugare. Ridisegnare le zone della lemba. Riscansionare l'animale per ottenere una valutazione postoperatoria della percentuale di area perfusa; l'intera zona di necrosi piatta è mostrata in questa figura (N = 10; media e SEM sono indicate). La perfusione assoluta è mostrata in questa figura ai quattro diversi tempi. Preoperatorio, postoperatorio, 24 e 48 ore (n = 10; media e SEM indicate). Le immagini del laser doppler e le fotografie corrispondenti ai quattro tempi per tre animali sono mostrate qui.La parete addominale anteriore del ratto presenta una quantità significativamente inferiore di grasso sottocutaneo rispetto alla parete addominale anteriore della maggior parte delle donne sottoposte a chirurgia con lembi T tram per la ricostruzione mammaria. Il modello descritto in questo testo è stato progettato specificamente come un modello di ischemia e breve danno da riperfusione in lembi miocutanei, in modo che gli effetti delle terapie di precondizionamento possano essere valutati utilizzando la necrosi cutanea e la perfusione come misure di esito. La procedura dettagliata in questo articolo non modella specificamente complicazioni come la necrosi del tessuto adiposo, che si verificano nei lembi tramp umani quando vengono prelevati deliberatamente lembi con componenti adipose significative al fine di creare proiezione per ricostruzioni mammarie di grandi dimensioni.In vivo diretto. L'osservazione della microcircolazione non è dimostrata in questo protocollo, ma è stata descritta nel modello muscolare chma e in un lembo osteomiotegumento. Il modello T tram è un modello di lembo miotegumento.Se i ricercatori sono particolarmente interessati al lembo osteomiocutaneo, questo modello non è appropriato, ma in letteratura è stato descritto un modello alternativo. Riteniamo che questo sia un modello affidabile e riproducibile di lesione da ischemia da deflusso in un lembo miocutaneo.

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