Question 1

Qual è la differenza tra linee cellulari immortalizzate e linee cellulari staminali?

Accepted Answer

Le linee cellulari immortalizzate derivano da organismi multicellulari con mutazioni che influenzano la regolazione del ciclo cellulare, permettendo una proliferazione indefinita. Le linee cellulari staminali sono generate isolando cellule multipotenti, auto-rinnovanti, da tessuti adulti o embrionali. Entrambe possono essere mantenute indefinitamente in coltura in condizioni appropriate, ma le cellule staminali mantengono la pluripotenza mentre le cellule immortalizzate no.

Question 2

Perché è importante cambiare regolarmente il terreno di coltura cellulare?

Accepted Answer

I metaboliti tossici si accumulano nei mezzi di coltura cellulare nel tempo, abbassando il pH e riducendo la disponibilità di nutrienti. I mezzi freschi mantengono la salute delle cellule e supportano l'espansione continua. Gli indicatori di colore del mezzo come il rosso fenolo segnalano quando sono necessarie modifiche—l'arancio indica mezzi freschi, il giallo indica condizioni acide che richiedono un cambio immediato del mezzo e il rosa suggerisce che il pH è troppo basico.

Question 3

Che cosa significa il 90% di confluenza e perché è importante per il passaggio cellulare?

Accepted Answer

La confluenza si riferisce alla percentuale della superficie del contenitore di coltura coperta dalle cellule. Al 90% di confluenza, le cellule aderenti coprono la maggior parte del fondo del contenitore e devono essere passate per prevenire la crescita eccessiva e mantenere la salute cellulare. Il monitoraggio della confluenza assicura che le cellule siano separate al momento ottimale per l'espansione e previene l'accumulo di metaboliti tossici.

Question 4

Quali sono i componenti essenziali dei mezzi di coltura cellulare completi?

Accepted Answer

Il terreno completo richiede siero come il Siero Bovine Fetal trattato termicamente per i fattori di crescita, antibiotici come penicillina e streptomicina per prevenire la contaminazione e ulteriori fattori di crescita come il fattore di crescita dei fibroblasti per prolungare l'espansione. Ogni linea cellulare richiede un cocktail specifico di supplementi di crescita adatto alle sue esigenze. Conservare il terreno completo a 4°C quando non in uso.

Question 5

Come viene utilizzata la tripsina per rimuovere le cellule aderenti dalle piastre di coltura?

Accepted Answer

La tripsina è un enzima digestivo che scinde le proteine che legano le cellule alle superfici di plastica. Le cellule vengono prima lavate con soluzione salina tamponata con fosfato priva di calcio e magnesio, poi viene aggiunta la tripsina e incubata a 37°C per circa 5 minuti. Una tempistica attenta è fondamentale per evitare di danneggiare le proteine della superficie cellulare. Si aggiunge media fresco per fermare la proteolisi prima di trasferire le cellule in un tubo conico per il conteggio utilizzando metodi e applicazioni di emaciatometro.

Question 6

Quali sono i metodi alternativi per rimuovere le cellule che sono troppo aderente per il trattamento standard con tripsina?

Accepted Answer

Per le cellule sensibili alla digestione enzimatica o estremamente aderente alle piastre, un raschietto per cellule può rimuovere delicatamente le cellule dal fondo del contenitore di coltura. In alternativa, una pipetta serologica può essere utilizzata con un movimento di raschiatura deciso durante il risciacquo con il terreno di coltura. La dissociazione meccanica richiede attenzione, poiché le cellule delicate possono essere danneggiate da questi metodi.

Question 7

Come possono le colture cellulari essere espanse più rapidamente di quanto consentano i flaconi a singolo strato?

Accepted Answer

I flaconi multistrato espandono le colture cellulari da 3 a 5 volte rispetto ai flaconi a singolo strato, consentendo un aumento di scala più rapido e riproducibile dell'espansione cellulare. Questi vasi di coltura specializzati forniscono una superficie maggiore per la crescita cellulare, rendendoli ideali per generare grandi numeri di cellule in modo efficiente mantenendo condizioni di coltura appropriate.

Passaggio delle cellule - Quiz di valutazione