Un efficace manuale disosso metodo per preparare intatto il mouse tessuto nasale con organizzazione anatomica Conservato

Ciao, sono David Dunton del laboratorio del Dott. Wung Lynn presso l'UMBC. In questo video, mostriamo una tecnica efficace per preparare il tessuto nasale di topo mantenendone l'organizzazione anatomica. Questa tecnica permette di ottenere un singolo campione contenente quasi l'intero tessuto nasale, inclusi i tessuti respiratorio e olfattivo, epiteliale e sottopiteliale.

Mostriamo la rimozione passo dopo passo di varie ossa facciali che circondano il tessuto nasale, preservando anche i tessuti più delicati, come le terminazioni dell'epitelio olfattivo principale. Il nostro metodo presenta significativi vantaggi rispetto ai metodi di decalcificazione, poiché evita trattamenti chimici aggressivi e la rimozione dell'osso può essere completata in 20-30 minuti. Altri vantaggi di questa tecnica sono che non è limitata dall'età del topo e può essere eseguita utilizzando tessuto fissato o fresco.

Questi vantaggi rendono la nostra tecnica ideale per studi morfologici, immunohistochimici e fisiologici. Qui mostriamo un diagramma schematico dell'aspetto dorsale delle ossa del cranio e del naso. In questo video, ci concentreremo sulla dissezione delle ossa del naso.

Questo è un diagramma schematico dell'aspetto ventrale delle ossa del cranio e del naso. Si tratta di una vista dorsale con un cranio e un naso non dissecati nella parte superiore e un naso dissecati nella parte inferiore. Sono ora mostrati i termina dell'epitelio olfattivo principale.

Qui mostriamo le ossa del naso a partire dall'aspetto dorsale. Questa è la parte dorsale della piastra zigomatica, seguita dall'arco zigomatico. Questo è l'osso nasale e successivamente viene mostrata la piastra cribiforme situata in posizione caudale.

La posizione più anteriore è occupata dal ganglio di Grünberg. Da una prospettiva laterale, mostriamo la porzione dell'osso etmoide che ricopre il turbinato dell'epitelio olfattivo umano, il ganglio di Grünberg, la mascella e gli incisivi anteriori. Passando a una vista ventrale, mostriamo i molari, gli incisivi anteriori, l'osso palatino e l'osso vomere.

Iniziare la rimozione dell'osso vulner osservando l'aspetto ventrale del naso. Per rimuovere l'osso vulner, utilizzare una pinzetta per fratturare l'osso lungo la sua lunghezza, quindi rimuovere i frammenti ossei ribaltandoli lontano dal tessuto sottostante, al fine di evitare danni all'organo nasale RO. Per questa operazione, utilizzare i jurat per fratturare la parte ventrale degli incisivi frontali.

Utilizzare un movimento di compressione e frantumare gli incisivi anteriori verso la posizione dell'osso ulmer. Una volta frantumati gli incisivi anteriori, rimuovere i frammenti ossei residui collegati al tessuto utilizzando pinze. Per allentare il mascellare, partire dall'aspetto ventrale e frantumare il mascellare appena ventrale all'arco zigomatico.

Ruotare il muso verso l'aspetto dorsale e fratturare il mascellare appena anteriormente all'arcata zigomatica. Per allentare il mascellare ed asportare la porzione destra dell'osso nasale, rimuovere la restante parte del frontale adiacente al lato destro dell'osso nasale. Per questo compito si utilizzeranno le pinze Ron.

È necessario esercitare cautela durante l'utilizzo dei Ron jurors per evitare di danneggiare la sottile lamina cribrosa, poiché il danno alla lamina cribrosa può causare la divisione del naso in due parti. Sollevare e rimuovere l'osso fratturato. Successivamente, ruotare la parte dorsale della lamina zigomatica lontano dal tessuto sottostante.

Separare l'osso nasale lungo la sua linea mediana. Utilizzando una pinzetta o una gomma, afferrare quest'osso con la pinzetta e muoverlo delicatamente da un lato all'altro sollevandolo. Questa procedura deve essere eseguita con una certa delicatezza poiché è facile danneggiare il tessuto sottostante durante la rimozione dell'osso. Una volta rimosso l'osso, è possibile vedere separatamente il tessuto sottostante, come mostrato in questa immagine fissa.

Per rimuovere l'osso, tagliarlo semplicemente con pinzette o forbici. Procedere ora con la rimozione del mascellare anteriore. Se non fosse già stato rimosso a questo punto, il mascellare anteriore è già sciolto, quindi eliminarlo spezzando eventuali connessioni residue con il tessuto.

Da una vista dorsale a U, rimuovere l'osso frontale che si trova appena accanto al lato sinistro dell'osso nasale. Utilizzare i Ron jurors per frantumare l'osso frontale. È possibile utilizzare pinze grezze o pinzette per rimuovere quel frammento dell'osso frontale.

È possibile allentare anche la mascella in questo momento, anche se ciò non è necessario. Per rimuovere il lato sinistro dell'osso nasale, utilizzare la pinzetta e separare delicatamente l'osso nasale da molti degli ossi circostanti. Quindi afferrare quest'osso con la pinzetta e muoverlo generalmente da un lato all'altro mentre lo si solleva per staccarlo dal tessuto sottostante.

Quando il tessuto sottostante si stacca dall'osso, a volte è possibile utilizzare una vista laterale per osservare il tessuto ancora collegato all'osso. Utilizzare la pinzetta per separare delicatamente il tessuto attaccato all'osso, quindi rimuovere l'osso con forbici o pinzetta. Dopo aver rimosso l'osso nasale, rimuovere il mascellare anteriore sul lato sinistro del naso utilizzando la stessa tecnica impiegata per rimuovere il mascellare anteriore sul lato destro del naso.

Il passo successivo consiste nel rimuovere la piastra zigomatica sul lato sinistro del naso. Potrebbe esserci ancora qualche adesione tra la piastra zigomatica e i tessuti sottostanti; in tal caso, è possibile utilizzare le pinze grezze per clampare delicatamente e allentare la parte dorsale della piastra zigomatica. Osservare l'aspetto ventrale del naso.

Per identificare i molari e l'osso palatino, è possibile rimuovere o i molari o l'osso palatino. In primo luogo, questa è una vista della faccia laterale del naso, e questa vista mostra la rimozione dei molari sul lato destro del naso. Utilizzando l'urs con il lato destro del mascellare rimosso, viene asportato l'osso palatino.

Successivamente, frantumare la mascella e i molari rimanenti ed eliminare tutti i frammenti ossei di grandi dimensioni dall'osso palatino o dalla mascella. Staccare ed asportare eventuali residui dell'osso etmoide che sporgono verso l'epitelio olfattivo. Posizionare la pinzetta fine al di sotto dell'osso e sollevarlo per staccarlo dal tessuto sottostante.

In alternativa, utilizzare il leccio come mostrato qui per fratturare l'osso e quindi usare la pinzetta fine per separare l'osso dal tessuto sottostante. Questo è l'aspetto del turbinato dell'epitelio olfattivo umano. Una volta rimosso l'osso molle, questo osso verrà eliminato.

Successivamente, è coddle e mediale rispetto all'osso nasale, e questo osso verrà rimosso utilizzando gers. Prestare cautela durante questo passaggio per evitare di danneggiare la lamina cribrosa. Una volta che l'osso è fratturato, utilizzare la pinza per rimuoverlo.

Di seguito è mostrata una vista del naso. Una volta rimosso questo osso, l'ultima zona da controllare è quella intorno all'organo nasale vomeronasale. Poiché esiste un osso che separa i tubi appaiati dell'organo nasale vomeronasale, che in questa dissezione sto rimuovendo proprio ora.

Questa è la vista dorsale di un naso che è stato dissezionato utilizzando la nostra tecnica. Successivamente, abbiamo ruotato un naso per mostrarne i vari aspetti. Questa è la vista dorsale, seguita dalla vista laterale del lato sinistro del naso e dalla vista ventrale.

Ora mostriamo in dettaglio le caratteristiche di un naso completamente dissezionato utilizzando la nostra tecnica, partendo dall'aspetto dorsale del naso. La prima parte che mostriamo è costituita dai turbinati dell'epitelio olfattivo principale. Sono presenti bolle d'aria nel tessuto sottostante le ossa nasali, e queste bolle d'aria vengono rimosse aspirando il campione dal punto di vista laterale.

Mostriamo il turbinato intatto dell'epitelio olfattivo umano. Si noti la presenza di bolle d'aria all'interno dei turbinati. Il tessuto ghiandolare si trova nella parte anteriore del turbinato ed è visibile l'epitelio respiratorio da questa prospettiva laterale.

Dalla vista ventrale, è visibile l'organo nasale vulnerabile. Questa immagine mostra un'estensione della nostra tecnica di dissezione, in cui bulbi olfattivi cerebrali e naso vengono rimossi in un unico campione. Per preparare il tessuto al taglio, prendere innanzitutto uno stampo di plastica e riempirlo con mezzo di temperatura ottimale per il taglio.

Posizionare il tessuto di interesse nello stampo riempito e collocare lo stampo all'interno di un cerchio di grasso al silicone su una capsula di plastica; verrà posizionata una fiala sul cerchio di grasso al silicone per creare una tenuta ermetica per il vuoto. Il nostro laboratorio utilizza un vuoto generato dal flusso d'acqua. Una volta creato il vuoto mediante il flusso d'acqua, le bolle d'aria vengono estratte dal tessuto.

Il vuoto viene interrotto spegnendo l'acqua e rilasciando il tubo. Successivamente, recuperare lo stampo di plastica. Qui sto posizionando il tessuto nell'orientamento desiderato prima di congelarlo.

Il nostro laboratorio utilizza anidride solida per congelare i tessuti. Questi sono risultati rappresentativi del sezionamento di un naso mediante la nostra tecnica di dissezione e colorazione con rosso neutro. Si tratta di una sezione orizzontale che mostra i turbinati dell'epitelio effettore, il tessuto ghiandolare e l'epitelio respiratorio.

La seconda sezione è una sezione coronale che mostra il modello ripiegato e convoluto dei turbinati dell'epitelio olfattivo principale. In questo video, mostriamo una tecnica per rimuovere manualmente l'osso dal naso ed ottenere un campione ideale per studi morfologici, immunohistochimici o fisiologici.