Name: Un efficace manuale disosso metodo per preparare intatto il mouse tessuto nasale con organizzazione anatomica Conservato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 40 s
Description: Impara una tecnica manuale per preparare il tessuto nasale del topo preservandone l'organizzazione anatomica. Questo metodo rapido evita trattamenti chimici aggressivi e consente di ottenere campioni intatti per studi morfologici e immunistochimici.

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Questo lavoro è stato sostenuto da borse di ricerca (NIH / NIDCD 009.269, 012.831 e ARRA amministrative supplemento sovvenzioni NIH) a Weihong Lin. Noi in particolare ringraziamo il signor Tim Ford a UMBC per la sua assistenza tecnica in videoregistrazione e l&#39;elaborazione. Desideriamo inoltre ringraziare il Dott. Daphne Blumberg, la signora Chere Petty a UMBC e il signor Nicola McCollum da Olympus America Inc. per la loro assistenza materiale in videoregistrazione.

1. Topo Preparazione Naso Abbiamo usato adulto C57BL / 6 topi sfondo in questo studio. Tutte le cure e le procedure di animali sono approvati dalla cura degli animali e utilizzare i comitati (IACUC) della University of Maryland, Baltimore County. 1.1 Acquisire il naso da topi paraformaldahyde-fissi <img src="/files/ftp_upload/50538/50538fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50538/50538fig1highres.jpg"/> Figura 1. Le ossa di un cranio del mouse A:. Vista dorsale del cranio B:. Vista ventrale del cranio con la mandibola rimosso. Il cranio è stato preparato da un 40 giorni vecchio topo. Singole ossa sono colorati per una migliore visualizzazione. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50538/50538fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire la figura</a> . <ol><li> Profumato transcardially di fissare singoli topi a seguito di the protocollo di Lin, et al., (2008) 16. In breve, i topi sono stati anestetizzati profondamente con tribromoethanol (Avertin 250 mcg / g di peso corporeo), perfusi con transcardiaca 0.1M tampone fosfato (PB, 30-50 ml), seguito da un fosfato tamponata fissativo contenente 3% paraformaldeide, 19 mM di L-lisina monocloridrato, e 0,23% di sodio m-periodato (circa 35-50 ml). Si può anche seguire la procedura descritta in questo articolo JoVE per la perfusione degli animali 35. </li><li> Utilizzare un paio di forbici per tagliare mandibola (o mascella inferiore) e rimuovere la pelle sulla testa. </li><li> Separare l&#39;intera testa dal resto del corpo. </li><li> Rimuovere il palato. Inoltre pulire e rimuovere il tessuto connettivo e muscolare rimanente sulla superficie del cranio per ottenere il campione mostrato nelle figure 1A e 1B. </li><li> Sotto un microscopio dissezione, togliere l&#39;osso del cranio che copre il cervello e bulbi olfattivi. Tagliare il tessuto in eccesso e ossa. Note, per la preparazione dei tessuti prolungato in cui il cervello e il naso rimangono collegati, solo le ossa del cranio vengono rimossi. Per gli esperimenti di immunoistochimica, il tessuto era post-fissato per 1,5 ore e trasferito 0.1M tampone fosfato (PBS) con il 25% di saccarosio durante la notte. Nasale tessuto deve essere mantenuta per tutta la dissezione umidificato mediante immersione nella soluzione di saccarosio tamponata più volte. </li></ol> 1.2 Acquisire il naso da topi appena eutanasia <ol><li> Singoli topi sono stati trasferiti in una gabbia pulita ed esposti a gas CO 2, a cui è seguito dislocazione cervicale 5 minuti dopo l&#39;ultimo respiro. Per ridurre il sangue nel tessuto naso, usare un paio di forbici per aprire la cassa e tagliare il cuore per permettere al sangue di defluire. </li><li> Ripetere i passaggi da 1.1.2 a 1.1.5, tranne il post-fissazione e crioprotezione con il 25% di saccarosio. Il campione deve essere conservato e mantenuto umidificato con soluzione salina contenente Tyrode (in mm): 140 NaCl, 5 KCl, 1 MgCl2, 1 CaCl 2, 10 Na piruvato, 10 D-glucosio, 10 e N-2-Hydroxyethylpiperazine-N&#39;-2-etano tampone acido (HEPES, regolato a pH 7,4). In alternativa, piegare un pezzo di Kimwipes, immergerlo con la soluzione di Tyrode, e posto sotto il provino durante la dissezione e, occasionalmente, immergere il campione in soluzione del Tyrode o far cadere qualche soluzione sul tessuto per tenerlo umidificata per mantenere la vitalità delle cellule e dei tessuti . </li></ol> 2. Incisivo, anteriore Vomer e Mascella rimozione ossea <ol><li> Inizia da un punto di vista ventrale. Individuare l&#39;osso vomere e rompere l&#39;osso vomere lungo la sua lunghezza con un rongeur o pinze con i denti per rompere il ventrale maggior parte dell&#39;osso. </li><li> Utilizzando seghettate pinze, rimuovere i segmenti spezzati dell&#39;osso vomere per l&#39;esercizio di un&#39;attività delicatamente i frammenti ossei dal organo vomeronasale (VNO). Si noti, per i topi di meno di un mese, o anche solo interessati al MOE, questi due steps può essere saltato. </li><li> Tenere la testa saldamente con una pinza. Utilizzare il rongeur per rompere la porzione anteriore di entrambe incisivi e la regione snodato di mascella anteriore tra i due incisivi e l&#39;osso vomere. </li><li> Rompere la parte ventrale del mascellare superiore destra alla regione appena anteriormente al zigomatica fino al livello della piastra dorsale zigomatico. </li><li> Capovolgere il naso per un punto di vista dorsale. Utilizzare il rongeur per rompere il diritto mascellare anteriore della piastra zigomatico dorsale. Tutta la destra mascella anteriore del piatto zigomatico dovrebbe essere sciolto. Utilizzare i pinza sottile per separare delicatamente qualsiasi tessuto nasale alla base della mascella, quindi sollevare delicatamente via il frammento osseo. </li><li> Ripetere i passi 2.4 e 2.5 per allentare l&#39;incisivo sinistro e sinistro mascellare anteriore e togliere loro dopo l&#39;osso nasale è stato rimosso. </li></ol> 3. Osso nasale e Dorsale rimozione Piastra zigomatico <ol><li> Usate il forcipe o dentata il rongeur di rispostare il resto delle ossa frontali appena caudalmente ossa nasali. Dopo la rimozione di questo pezzo di osso, la parte caudale dell&#39;osso nasale può essere afferrato con pinze. </li><li> Utilizzare il rongeur per rompere la porzione anteriore dell&#39;arco zigomatico, che è collegato alla piastra zigomatico. </li><li> Prendete le pinza sottile sul bordo laterale della fine dorsale della piastra zigomatico e capovolgere delicatamente l&#39;osso e rimuoverlo. Se l&#39;osso non è allentata, utilizzare il rongeur per premere delicatamente per allentare la rimozione. </li><li> Utilizzare le pinze sottili o una lama di rasoio per allentare la sutura mediale tra destra e sinistra ossa nasali. </li><li> Utilizzare il seghettato pinze per afferrare l&#39;estremità caudale dell&#39;osso nasale destra. Spostare delicatamente l&#39;osso da un lato all&#39;altro per separarlo dalla base del tessuto. È utile per spostare la pinza lungo il terzo caudale dell&#39;osso nasale per spostare il lato dell&#39;osso a lato. Come separa l&#39;osso nasale, sollevare lentamente l&#39;osso dall&#39;estremità caudale. </li><li> Mentre tegli osso nasale è leggermente sollevato, inclinare l&#39;osso lateralmente per rivelare un affioramento laterali del midollo che è rivestito con sottile tessuto epiteliale respiratorio. Utilizzare una pinza sottile per rilasciare delicatamente il tessuto dall&#39;osso nasale. Continuare a sollevare l&#39;osso nasale. Quando l&#39;osso è completamente separato dal tessuto sottostante, usare le forbici per tagliare l&#39;osso nasale, alla fine rostrale. </li><li> Ripetere i punti 3.1, 3.5 e 3.6 per la rimozione di osso nasale sinistra. </li><li> Ripetere i punti 3.2 e 3.3 per il lato sinistro del naso. </li></ol> 4. Laterale rimozione Piastra zigomatico <ol><li> Rimuovere la piastra zigomatico un lato alla volta. O piastra zigomatico può essere rimosso per primo. </li><li> Da un punto di vista ventrale, rompere la mascella inferiore al zigomatica fino pausa raggiunge il zigomatica. </li><li> Da un punto di vista dorsale, afferrare delicatamente il zigomatica e sollevare in avanti e laterale. Se la piastra zigomatico è ancora attaccato a qualsiasi tessuto, prendere la multaforcipe e recidere delicatamente le connessioni tra il tessuto e l&#39;osso. </li><li> Ripetere per la piastra zigomatico sull&#39;altro lato del naso. </li></ol> 5. Orbit rimozione ossea <ol><li> Da un punto di vista ventrale, rompere l&#39;osso Palatina tra i molari del naso. </li><li> Utilizzare il rongeur per rompere i 3 ei molari del mascellare su ciascun lato del naso. </li><li> Rompere e rimuovere eventuali pezzi rimanenti spessore di osso ventrale e posteriore alle turbinati su ciascun lato del naso. </li></ol> 6. Etmoide rimozione ossea <ol><li> Rompere qualsiasi parte dell&#39;osso etmoide sporgente caudale ai turbinati. Ciò è necessario per evitare la perdita di tessuto turbinate nel rimuovere pezzi sottili di osso etmoide coprono turbinati. </li><li> Per il lato destro del naso, posizionare i pinza sottile sul bordo anteriore dell&#39;osso etmoide e rimuoverla delicatamente. Se una porzione dell&#39;osso rimane, ripetere questa procedura finché tuttil&#39;osso sottile che copre i turbinati è stato rimosso. Le ossa turbinati non devono essere rimossi nella maggior parte delle preparazioni. In topi anziani, la lamina cribrosa diventa fragile. Se è necessaria criosezionamento del tessuto nasale, rimuovere piccoli pezzi della piastra con una pinza sottile per ridurre il potenziale danno causato dalla osso. </li><li> Ripetere il punto 6.2) per il lato sinistro del naso. </li><li> Rimuovere eventuali frammenti di ossa rimanenti prima del sezionamento. Nota: in animali più di un anni, la regione posterodorsal dell&#39;osso setto è alquanto denso e duro. Si può rimuovere questa parte con una pinza sottile. Inserire la punta della pinza in entrambi lato dell&#39;osso per separare la porzione dorsale del setto osseo e il tessuto di rivestimento epiteliale. Utilizzare un paio di pinze per afferrare l&#39;osso e tenere il campione. Utilizzare un altro paio di pinze per rompere la parte ossea superiore della porzione cartilaginea inferiore del setto e rimuoverla delicatamente. </li></ol><ol><li> Impostare la pompa del vuoto aspiratore. </li><li> Mettere il naso in uno stampo embedding. Immergere il naso in OCT media. </li><li> Utilizzare un aspirapolvere per rimuovere le bolle d&#39;aria intrappolate all&#39;interno del tessuto naso. Questo processo può richiedere fino a 5 min. </li><li> Dopo la rimozione di bolle d&#39;aria, il tessuto impostare l&#39;orientamento desiderato. </li><li> Congelare l&#39;ottobre e il tessuto nello stampo usando ghiaccio secco. Il tessuto incorporato può quindi essere cryosectioned immediatamente o conservato a -80 ° C per un uso futuro. </li></ol>

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

Qui, abbiamo dimostrato una procedura passo-passo per isolare il tessuto olfattivo e respiratorio intatta dal naso mouse sequenzialmente rimuovendo le ossa circostanti, risparmiando il tessuto sottostante. Abbiamo dimostrato che un&#39;attenta rimozione ossea può conservare anche i tessuti più delicati nella loro interezza. Condividiamo anche spaccato eventuali modifiche di questa tecnica, in cui isolare sia il cervello e il tessuto naso insieme per preservare il collegamento nervo. Questo nuovo metodo fornisce un mezzo...

La cavità nasale mammiferi contiene vari tipi di tessuti ed organi che servono funzioni distinte. La cavità nasale costituisce la porzione di imbocco del tratto respiratorio superiore, che permette di viaggiare aria dentro e fuori i polmoni. Aria inalata passa attraverso la cavità nasale dove subisce temperatura e umidità condizionata 1 così come la pulizia o filtrazione per rimuovere sostanze irritanti e tossiche e microrganismi infettivi 2. Entrambi i trattamenti sono effettuati da nasale epiteli e tessuti subepiteliali, tra cui le ghiandole e vasi e sono fondamentali per la protezione delle vie respiratorie inferiori e dei polmoni. Oltre al suo ruolo nella respirazione e difesa epiteliale, il tessuto nasale contiene anche apparati sensoriali periferici dei sistemi olfattivi e trigemino, che rilevano una vasta gamma di sostanze chimiche in aria che passa. A seconda del sistema è attivato, il rilevamento sensoriale di sostanze chimiche nel naso può suscitare siaun senso di odore, irritazione o dolore 3,4. Il sistema olfattivo periferico è complesso e costituito da diversi organi sensoriali olfattivi anatomicamente separate all&#39;interno della cavità nasale. Tra questi, il principale epitelio olfattivo (MOE) è la più grande, che costituisce circa il 45-52% degli epiteli nasali nei roditori 5 e si trova nella regione posteriore. Nella regione anteroventrale, vi è una coppia di strutture tubolari noti come vomeronasal organo 6, che siedono lungo ogni lato del setto nasale. Altri due piccoli gruppi di neuroni sensoriali olfattivi, noto come l&#39;organo del setto di Masera 7,8 e il ganglio Gruneberg 9, risiedono lungo il setto ventrale e la regione dorsale ingresso della cavità nasale, rispettivamente. Questi organi periferici contengono neuro-epiteli con caratteristiche di spicco nella morfologia, espressione marcatore della cella, e la funzione fisiologica. Insieme, essi rilevano migliaia di odorimolecole con squisita sensibilità 10-12. Oltre agli organi sensoriali olfattivi, la cavità nasale ospita anche altri sistemi sensoriali. E &#39;noto che le fibre del nervo trigemino peptidergico sono presenti nell&#39;epitelio nasale, specialmente l&#39;epitelio respiratorio 13,14. Alcune di queste fibre di rilevare sostanze chimiche irritanti e tossici e sono responsabili per l&#39;avvio di riflessi protettivi come tosse e starnuti 4,15. Composti odorosi e amaro irritanti possono essere rilevati anche da una popolazione di cellule recentemente scoperto chemosensoriali solitarie (SCC), molti dei quali sono innervate da fibre nervose del trigemino 16-19. Questi SCC si trovano a maggiore densità nella zona ingresso della cavità nasale e delle vie d&#39;ingresso vomeronasali, suggerendo che esse possono servire anche una funzione protettiva 16-18. Così, epiteli nasali possono differire sostanzialmente in funzione, morfologia e composizione delle cellule a seconda della lorosedi anatomiche. Anche all&#39;interno di un unico e specializzato epitelio, ci sono differenze regionali. Il MOE è un esempio. Le linee MOE vari turbinati, che sono complicate e arricciati strutture. Grazie a loro, diverse regioni delle esperienze diverse portate d&#39;aria MOE e, quindi, diversa diffusione e di clearance delle molecole di odore nell&#39;aria 20. Inoltre, è noto che i neuroni sensoriali olfattivi (OSN) esprimenti un dato recettore odore sono situati in una delle quattro aggirato zone del MOE 21,22. Come questa differenza di posizione influenza la risposta di un OSN per odoranti non è ampiamente noto. Inoltre, alcune popolazioni OSN mostrano preferenza regionale. OSN guanylyl ciclasi-D (GC-D)-esprimenti hanno distribuzioni zonali favorendo le regioni cul-de-sac delle ectoturbinates 23,24. Più di recente, abbiamo trovato una sottopopolazione di OSN canoniche che esprime transitoria recettore potenziale canale M5 (trPM5) ed è preferenzialmente situati nelle regioni laterali e ventrali 25. Questi risultati indicano che MOE non è uniforme. Tuttavia, come queste differenze regionali influenzano codifica olfattivi non è compreso. Questo è in parte perché accurata indagine fisiologica del MOE e il naso è stato limitato dalla difficoltà di ottenere intatta nasale epiteli con organizzazione anatomica conservata con i metodi attuali. La nasale epiteli sono prevalentemente circondato dalle ossa anteriori del cranio, compreso il naso, mascella, palatino, zigomatico, e le ossa etmoidali. In topi adulti e altri modelli di roditori, queste ossa sono dure e difficili da rimuovere senza danneggiare il tessuto nasale strettamente associata, in particolare dei turbinati delicati. Spesso, decalcificazione chimici a base viene usato per ammorbidire le ossa per consentire criosezionamento dei tessuti nasali per morfologica, immunoistochimica, e in studi di ibridazione in situ, tuttavia, dipending l&#39;età dell&#39;animale, il processo di decalcificazione può durare durante la notte fino a 7 giorni 24,26-28. Questo trattamento è limitata anche perché richiede tessuto fissativo essere conservato. Inoltre, decalcificazione chimica può essere dura e influenzare la immunomarcatura di alcuni anticorpi sensibili 29,30. Per gli studi fisiologici, è richiesta tessuto vivo, e, quindi, questi esperimenti sono spesso condotti su OSN isolate o fette MOE ottenuti da neonati le cui ossa del cranio sono sottili e morbidi 17,31,32. Studi fisiologici possono anche utilizzare i preparati montare tutto, dividendo la testa 25,33,34, ma di solito solo la superficie mediale del naso è facilmente accessibile, limitando le registrazioni fisiologiche su altre aree. Qui, descriviamo un efficace metodo di disossamento manuale per preparare i tessuti nasali intatte con conservato organizzazione anatomica e morfologia. Noi sequenziale rimuoviamo le principali ossa del anterioreè necessaria cranio sotto un microscopio dissezione per esporre un epitelio nasale quasi totalmente intatto, mantenendo le sottili ossa turbinati intatto a meno che i topi sono molto vecchi e criosezionamento. Abbiamo anche estendere il metodo per conservare la connessione tra i tessuti nasali e bulbi olfattivi, così come il resto del cervello, facilitando così esame simultaneo di entrambi i circuiti periferici e centrali. Il nostro metodo può essere utilizzato per preparare paraformaldeide-fisso, nonché fresco, tessuto nasale vivo. Così, il nostro metodo è previsto per facilitare gli studi morfologici, immunoistochimici e fisiologici della respirazione, l&#39;olfatto, e nasale danni e malattia.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Dissection</td></tr><tr><td>Rongeur, larghezza ganasce 1.0 mm</td><td>World Precision Instruments (WPI)</td><td>501333</td><td></td></tr><tr><td>Pinze fini, Dumont 3 </td><td>WPI</td><td>503235</td><td></td></tr><tr><td>Pinze fini, Dumont 55</td><td>WPI</td><td>14099</td><td></td></tr><tr><td>Pinze fini, Dumont AA</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11210-20</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per campioni, Forbici operatorie seghettate</td><td>VWR</td><td>82027-440</td><td></td></tr><tr><td></td><td>WPI</td><td>501753</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per iride, Straight</td><td>Miltex</td><td>V95-304</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Olympus</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Inclusione dei tessuti</td></tr><tr><td>Composto</td> <td>per temperatura di taglio ottimale (OCT)Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Stampo per inclusione in plastica</td><td>VWR</td><td>15160-215</td><td></td></tr><tr><td>Pompa a vuoto aspirante</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-960-2</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Colorazione della sezione </td></tr><tr><td>Rosso neutro</td><td>ACROS Organic</td><td>CAS 553-24-2</td><td>Colorazione dei nuclei</td></tr></tbody></table>

un efficace manuale disosso metodo per preparare intatto il mouse tessuto nasale con organizzazione anatomica conservato

An Effective Manual Deboning Method To Prepare Intact Mouse Nasal Tissue With Preserved Anatomical Organization

Il naso dei mammiferi è un organo multi-funzionale con le strutture interne complesse. La cavità nasale è rivestita con vari epiteli, come epiteli olfattivi, respiratori, e squamose che differiscono notevolmente in sedi anatomiche, morfologia e funzioni. In topi adulti, il naso è coperto con varie ossa del cranio, limitando l&#39;accesso sperimentale alle strutture interne, in particolare quelli del posteriore, come il principale epitelio olfattivo (MOE). Qui si descrive un metodo efficace per ottenere quasi tutto intatto e tessuti nasali con organizzazione anatomica conservata. L&#39;utilizzo di strumenti chirurgici sotto un microscopio da dissezione, abbiamo sequenziale rimuoviamo le ossa del cranio che circondano il tessuto nasale. Questa procedura può essere eseguita su entrambe le teste del mouse, dalla pelle paraformaldeide-fissi e appena sezionato. L&#39;intera procedura disossamento richiede circa 20-30 min, che è significativamente più breve del tempo richiesto per sperimentale convenzionale a base chimica decalcificazione. Inoltre, vi presentiamo un metodo semplice per rimuovere le bolle d&#39;aria intrappolate tra i turbinati, che è fondamentale per l&#39;ottenimento di sezioni orizzontali o coronale o sagittale sottili intatte dalla preparazione dei tessuti nasali. Tessuto nasale preparati usando il nostro metodo può essere utilizzato per tutta osservazione monte dell&#39;intero epiteli, nonché morfologica, immunocitochimica, RNA ibridazione in situ, e studi fisiologici, specialmente negli studi in cui regione specifica esame e confronto sono di interesse.

Usando questo metodo, si può attendibilmente ottenere tessuto nasale quasi completamente intatte. Figura 2A mostra un&#39;immagine esemplare adulto nasale da una testa paraformaldeide-fissa. In questo esemplare, tutti e quattro gli organi sensoriali sub-olfattive, tra cui il MOE, organo del setto, il ganglio Gruneberg e VNO, sono intatte. Inoltre, gli epiteli delle vie respiratorie e dei tessuti subepiteliali, come le ghiandole e vasi, sono conservati. Abbiamo utilizzato con successo questo metodo in un...

Un efficace manuale disosso metodo per preparare intatto il mouse tessuto nasale con organizzazione anatomica Conservato

The mammalian nose is a multi-functional organ with intricate internal structures.  The nasal cavity is lined with various epithelia such as olfactory, ...

Ciao, sono David Dunton del laboratorio del Dott. Wung Lynn presso l'UMBC. In questo video, mostriamo una tecnica efficace per preparare il tessuto nasale di topo mantenendone l'organizzazione anatomica. Questa tecnica permette di ottenere un singolo campione contenente quasi l'intero tessuto nasale, inclusi i tessuti respiratorio e olfattivo, epiteliale e sottopiteliale.Mostriamo la rimozione passo dopo passo di varie ossa facciali che circondano il tessuto nasale, preservando anche i tessuti più delicati, come le terminazioni dell'epitelio olfattivo principale. Il nostro metodo presenta significativi vantaggi rispetto ai metodi di decalcificazione, poiché evita trattamenti chimici aggressivi e la rimozione dell'osso può essere completata in 20-30 minuti. Altri vantaggi di questa tecnica sono che non è limitata dall'età del topo e può essere eseguita utilizzando tessuto fissato o fresco.Questi vantaggi rendono la nostra tecnica ideale per studi morfologici, immunohistochimici e fisiologici. Qui mostriamo un diagramma schematico dell'aspetto dorsale delle ossa del cranio e del naso. In questo video, ci concentreremo sulla dissezione delle ossa del naso.Questo è un diagramma schematico dell'aspetto ventrale delle ossa del cranio e del naso. Si tratta di una vista dorsale con un cranio e un naso non dissecati nella parte superiore e un naso dissecati nella parte inferiore. Sono ora mostrati i termina dell'epitelio olfattivo principale.Qui mostriamo le ossa del naso a partire dall'aspetto dorsale. Questa è la parte dorsale della piastra zigomatica, seguita dall'arco zigomatico. Questo è l'osso nasale e successivamente viene mostrata la piastra cribiforme situata in posizione caudale.La posizione più anteriore è occupata dal ganglio di Grünberg. Da una prospettiva laterale, mostriamo la porzione dell'osso etmoide che ricopre il turbinato dell'epitelio olfattivo umano, il ganglio di Grünberg, la mascella e gli incisivi anteriori. Passando a una vista ventrale, mostriamo i molari, gli incisivi anteriori, l'osso palatino e l'osso vomere.Iniziare la rimozione dell'osso vulner osservando l'aspetto ventrale del naso. Per rimuovere l'osso vulner, utilizzare una pinzetta per fratturare l'osso lungo la sua lunghezza, quindi rimuovere i frammenti ossei ribaltandoli lontano dal tessuto sottostante, al fine di evitare danni all'organo nasale RO. Per questa operazione, utilizzare i jurat per fratturare la parte ventrale degli incisivi frontali.Utilizzare un movimento di compressione e frantumare gli incisivi anteriori verso la posizione dell'osso ulmer. Una volta frantumati gli incisivi anteriori, rimuovere i frammenti ossei residui collegati al tessuto utilizzando pinze. Per allentare il mascellare, partire dall'aspetto ventrale e frantumare il mascellare appena ventrale all'arco zigomatico.Ruotare il muso verso l'aspetto dorsale e fratturare il mascellare appena anteriormente all'arcata zigomatica. Per allentare il mascellare ed asportare la porzione destra dell'osso nasale, rimuovere la restante parte del frontale adiacente al lato destro dell'osso nasale. Per questo compito si utilizzeranno le pinze Ron.È necessario esercitare cautela durante l'utilizzo dei Ron jurors per evitare di danneggiare la sottile lamina cribrosa, poiché il danno alla lamina cribrosa può causare la divisione del naso in due parti. Sollevare e rimuovere l'osso fratturato. Successivamente, ruotare la parte dorsale della lamina zigomatica lontano dal tessuto sottostante.Separare l'osso nasale lungo la sua linea mediana. Utilizzando una pinzetta o una gomma, afferrare quest'osso con la pinzetta e muoverlo delicatamente da un lato all'altro sollevandolo. Questa procedura deve essere eseguita con una certa delicatezza poiché è facile danneggiare il tessuto sottostante durante la rimozione dell'osso. Una volta rimosso l'osso, è possibile vedere separatamente il tessuto sottostante, come mostrato in questa immagine fissa.Per rimuovere l'osso, tagliarlo semplicemente con pinzette o forbici. Procedere ora con la rimozione del mascellare anteriore. Se non fosse già stato rimosso a questo punto, il mascellare anteriore è già sciolto, quindi eliminarlo spezzando eventuali connessioni residue con il tessuto.Da una vista dorsale a U, rimuovere l'osso frontale che si trova appena accanto al lato sinistro dell'osso nasale. Utilizzare i Ron jurors per frantumare l'osso frontale. È possibile utilizzare pinze grezze o pinzette per rimuovere quel frammento dell'osso frontale.È possibile allentare anche la mascella in questo momento, anche se ciò non è necessario. Per rimuovere il lato sinistro dell'osso nasale, utilizzare la pinzetta e separare delicatamente l'osso nasale da molti degli ossi circostanti. Quindi afferrare quest'osso con la pinzetta e muoverlo generalmente da un lato all'altro mentre lo si solleva per staccarlo dal tessuto sottostante.Quando il tessuto sottostante si stacca dall'osso, a volte è possibile utilizzare una vista laterale per osservare il tessuto ancora collegato all'osso. Utilizzare la pinzetta per separare delicatamente il tessuto attaccato all'osso, quindi rimuovere l'osso con forbici o pinzetta. Dopo aver rimosso l'osso nasale, rimuovere il mascellare anteriore sul lato sinistro del naso utilizzando la stessa tecnica impiegata per rimuovere il mascellare anteriore sul lato destro del naso.Il passo successivo consiste nel rimuovere la piastra zigomatica sul lato sinistro del naso. Potrebbe esserci ancora qualche adesione tra la piastra zigomatica e i tessuti sottostanti; in tal caso, è possibile utilizzare le pinze grezze per clampare delicatamente e allentare la parte dorsale della piastra zigomatica. Osservare l'aspetto ventrale del naso.Per identificare i molari e l'osso palatino, è possibile rimuovere o i molari o l'osso palatino. In primo luogo, questa è una vista della faccia laterale del naso, e questa vista mostra la rimozione dei molari sul lato destro del naso. Utilizzando l'urs con il lato destro del mascellare rimosso, viene asportato l'osso palatino.Successivamente, frantumare la mascella e i molari rimanenti ed eliminare tutti i frammenti ossei di grandi dimensioni dall'osso palatino o dalla mascella. Staccare ed asportare eventuali residui dell'osso etmoide che sporgono verso l'epitelio olfattivo. Posizionare la pinzetta fine al di sotto dell'osso e sollevarlo per staccarlo dal tessuto sottostante.In alternativa, utilizzare il leccio come mostrato qui per fratturare l'osso e quindi usare la pinzetta fine per separare l'osso dal tessuto sottostante. Questo è l'aspetto del turbinato dell'epitelio olfattivo umano. Una volta rimosso l'osso molle, questo osso verrà eliminato.Successivamente, è coddle e mediale rispetto all'osso nasale, e questo osso verrà rimosso utilizzando gers. Prestare cautela durante questo passaggio per evitare di danneggiare la lamina cribrosa. Una volta che l'osso è fratturato, utilizzare la pinza per rimuoverlo.Di seguito è mostrata una vista del naso. Una volta rimosso questo osso, l'ultima zona da controllare è quella intorno all'organo nasale vomeronasale. Poiché esiste un osso che separa i tubi appaiati dell'organo nasale vomeronasale, che in questa dissezione sto rimuovendo proprio ora.Questa è la vista dorsale di un naso che è stato dissezionato utilizzando la nostra tecnica. Successivamente, abbiamo ruotato un naso per mostrarne i vari aspetti. Questa è la vista dorsale, seguita dalla vista laterale del lato sinistro del naso e dalla vista ventrale.Ora mostriamo in dettaglio le caratteristiche di un naso completamente dissezionato utilizzando la nostra tecnica, partendo dall'aspetto dorsale del naso. La prima parte che mostriamo è costituita dai turbinati dell'epitelio olfattivo principale. Sono presenti bolle d'aria nel tessuto sottostante le ossa nasali, e queste bolle d'aria vengono rimosse aspirando il campione dal punto di vista laterale.Mostriamo il turbinato intatto dell'epitelio olfattivo umano. Si noti la presenza di bolle d'aria all'interno dei turbinati. Il tessuto ghiandolare si trova nella parte anteriore del turbinato ed è visibile l'epitelio respiratorio da questa prospettiva laterale.Dalla vista ventrale, è visibile l'organo nasale vulnerabile. Questa immagine mostra un'estensione della nostra tecnica di dissezione, in cui bulbi olfattivi cerebrali e naso vengono rimossi in un unico campione. Per preparare il tessuto al taglio, prendere innanzitutto uno stampo di plastica e riempirlo con mezzo di temperatura ottimale per il taglio.Posizionare il tessuto di interesse nello stampo riempito e collocare lo stampo all'interno di un cerchio di grasso al silicone su una capsula di plastica; verrà posizionata una fiala sul cerchio di grasso al silicone per creare una tenuta ermetica per il vuoto. Il nostro laboratorio utilizza un vuoto generato dal flusso d'acqua. Una volta creato il vuoto mediante il flusso d'acqua, le bolle d'aria vengono estratte dal tessuto.Il vuoto viene interrotto spegnendo l'acqua e rilasciando il tubo. Successivamente, recuperare lo stampo di plastica. Qui sto posizionando il tessuto nell'orientamento desiderato prima di congelarlo.Il nostro laboratorio utilizza anidride solida per congelare i tessuti. Questi sono risultati rappresentativi del sezionamento di un naso mediante la nostra tecnica di dissezione e colorazione con rosso neutro. Si tratta di una sezione orizzontale che mostra i turbinati dell'epitelio effettore, il tessuto ghiandolare e l'epitelio respiratorio.La seconda sezione è una sezione coronale che mostra il modello ripiegato e convoluto dei turbinati dell'epitelio olfattivo principale. In questo video, mostriamo una tecnica per rimuovere manualmente l'osso dal naso ed ottenere un campione ideale per studi morfologici, immunohistochimici o fisiologici.

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