Name: Cella della morte associata a mitosi anomalo osservato da Imaging confocale in cellule vive di cancro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 53 s
Description: Scopri gli effetti citotossici del derivato PJ-34 sulle cellule del cancro al seno MDA-MB-231 durante la mitosi. Questo metodo utilizza l'imaging confocale in vivo per analizzare il comportamento dei centrosomi e documentare l'attività citotossica in tempo reale.

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Le fonti di finanziamento di questa ricerca: un fondo comune di società dell&#39;Università di Tel Aviv, il trasferimento tecnologico, RAMOT e-Sheba Medical Center (M. CA e SI.), ICRF - israeliana Cancer Research Foundation (M. CA.) E Israel Science Foundation ( SI).

1. Cell Culture Preparazione MDA-MB-231 cellule sono state acquistate da ATCC (American Type Culture Collection) e conservati in azoto liquido. <ol><li> Seed 10 6 MDA-MB-231 cellule nel diametro 92 mm piastra di Petri in 10 ml di terreno completo contenente Dulbeco Modified Eagle Medium (DMEM), 10% siero di cavallo, 1% di L-glutammina, e 1% Penstrep-amfotericina B. Consentono alle cellule di proliferare a circa 80-100% di confluenza. </li><li> Togliere terreno di coltura dal piatto e scartare. </li><li> Lavare lo strato cella brevemente con 0,25% (w / v) Tripsina-EDTA soluzione per eliminare ogni traccia di siero. </li><li> Aggiungere 2,0 ml di soluzione di tripsina-EDTA per piatto e osservare le cellule al microscopio invertito fino strato di cellule viene dispersa (di solito entro 5-15 min). </li><li> Aggiungere 18 ml di terreno di crescita completo e aspirare delicatamente le cellule dalla pipetta. Trasferire in una provetta. </li><li> Centrifugare la sospensione cellulare a 1.200 giri al minuto. </li><li> Risospendere il pellet cellulare in 24 ml di culture medie. </li><li> Aggiungere 2 ml di sospensione cellulare a 35 millimetri di vetro piatti inferiori (circa il 25% di confluenza) e posto in incubatore (5% di CO 2, 37 ° C). </li><li> Soluzioni: <ol><li> Terreno completo per la proliferazione delle cellule: DMEM con 10% FBS, 1% Antibiotici (100 unità / ml di penicillina G, 100 mg / ml di streptomicina, soluzione Pen-Strep-Ampho) e 2 mM L-glutammina. </li><li> Soluzione di tripsina-EDTA, contenente 0,25% tripsina-EDTA. </li></ol></li><li> Piatti: Diametro 92 mm Petri. 35 mm Diametro poli-D-lisina rivestite con fondo di vetro piatti della cultura. </li></ol> 2. Preparazione di cellule per Live confocale <ol><li> Seed 2 x 10 5 MDA-MB-231 cellule nel fondo di vetro piatti cultura in 2 ml di terreno completo come indicato nella sezione 1. Quando la coltura cellulare raggiunge confluenza del 60-70% (circa 3-4 x 10 5 cellule per piatto), procedere con la trasfezione. </li><li> Trasfezione le cellule con due plasmidi ENCODzione delle proteine ​​di fusione γ-tubulina-GFP (per la rilevazione fluorescente di centrosomi) e istone-RED (H2b-RED, per la rilevazione fluorescente dei cromosomi) utilizzando il reagente di trasfezione liposomiale Jet-PI, seguendo il protocollo di produzione. Brevemente, mescolare 2 ug di ciascun plasmide in un tubo con 100 microlitri di NaCl (150 mM). Mescolare il reagente di trasfezione (100 pl) con 100 microlitri di NaCl (150 mM) in un secondo tubo, e incubare 5 min a temperatura ambiente (RT). Poi unire le due soluzioni, miscela (con vortice lieve) e spin-down. Incubare per 30 min a RT. </li><li> Durante l&#39;incubazione della miscela di trasfezione, lavare le cellule una volta con PBS e sostituire il mezzo cella con 2 ml di DMEM caldo senza integratori (37 ° C). </li><li> Aggiungere delicatamente la miscela di trasfezione per le cellule in DMEM e poi tornare celle verso l&#39;incubatore (37 ° C, 5% CO 2) per 8 ore. </li><li> Dopo 8 ore di incubazione, sostituire il DMEM con 2 ml di mezzo completo e incubare le cellule in incubatore per 24hr. </li><li> 24 ore dopo la trasfezione, sostituire il medium delle cellule con 2 ml di terreno completo contenente 20 mM PJ-34. </li><li> Incubare le cellule per ulteriori 18 ore (37 ° C, 5% CO 2). </li><li> Oggetto le cellule a vivere confocale per almeno 16 ore in camera di imaging mantenere le cellule al 5% di CO 2 e 37 ° C. </li><li> In parallelo, esaminare l&#39;efficacia di trasfezione 36 ore dopo la trasfezione usando la microscopia a fluorescenza come segue: <ol><li> Seme 2 x 10 5 MDA-MB-231 cellule in piastra da 6 pozzetti contenente 1 coprioggetto per pozzetto in 2 ml di mezzo completo. </li><li> Trasfezione le cellule come accennato nelle sezioni 2,2-2,5. </li><li> 36 ore dopo la trasfezione fissare le cellule transfettate montati su un vetrino da incubazione in metanolo freddo: acetone (1:1) soluzione, 7 min, -20 ° C. </li><li> Aspirare la soluzione di fissaggio e lasciare che il vetrino con le cellule montati a secco in una cappa chimica. </li><li> Applicare Prolungare reagente antifade Oro con DAPI e lasciate °e vetrino ad asciugare al buio per 6 ore. </li><li> Esaminare il vetrino al microscopio a fluorescenza e di calcolare la percentuale di cellule trasfettate (segnali rosso e verde) della popolazione totale di cellule (colorazione del DNA con DAPI). La percentuale desiderata transfezione è circa 20-40% 100-200 quando le cellule sono contate. </li></ol></li></ol> 3. Parametri tecnici delle impostazioni dello scanner confocale in diretta <ol><li> ScanMode XYZT; Pinhole [arioso] 1,00; Zoom 3,5; Risoluzione 8 bit; laser DPSS 561 nm; argon, laser visibile a 488 nm laser He / Ne visibile 633 nm; Obiettivo HCX PL APO CS 63X 1.40 OLIO UV; Apertura numerica 1.4; Velocità di scansione 700 Hz; indice di rifrazione 1.52. </li><li> Immagine 3-D di presentazione sono stati preparati da Imaris di imaging software 7.0. </li></ol> 4. Confocale di mitosi in cellule fissate <ol><li> Seed 2 x 10 5 MDA-MB-231 delle cellule di cancro al seno (ATCC), normali fibroblasti embrionali di topo (MEF), o PARP1 carente MEF (PARP - / -, preparato dal dottor Francoise Dantzer) su vetrini in 6 pozzetti in 2 ml di terreno completo. Coprioggetto sono stati lavati con etanolo al 96%, in seguito da lavaggio con acqua sterile DD, asciugata per 2 ore, e collocato in ciascun pozzetto di piatto 6-bene. </li><li> Aggiungere PJ-34 (10-30 mM) al mezzo e incubare le cellule per il periodo necessario (di solito fino a 96 ore). </li><li> Lavare i coprioggetti una volta con PBS (tampone fosfato), e fissare le cellule utilizzando incubazione in metanolo ghiacciata: (1:1) soluzione di acetone, 7 min, -20 ° C. </li><li> Aspirare la soluzione di fissaggio e lasciare che i coprioggetti ad asciugare in cappa chimica (in questa fase, i vetrini possono essere conservati a -20 ° C per diverse settimane). </li><li> Lavare i coprioggetti una volta con PBST (PBS supplementato con 0,1% di Tween-20) per permeabilize le membrane cellulari e di bloccare le cellule con 10% NDS (asino siero normale) in PBST (&#39;soluzione bloccante&#39;) per 1 ora a RT. </li><li> Incubare le cellule fisse permeabilizzate con Antibodi primariaes per 2 ore a temperatura ambiente (per i mandrini e centrosomi colorazione). Gli anticorpi sono diluiti nella soluzione bloccante come seguono: tubulina anti-α (diluizione 1:250) e anti-tubulina γ (diluizione 1:200). Anticorpi primari sono applicati come segue: applicare 100 microlitri (in una goccia) di una miscela di anticorpi in soluzione per ogni coprioggetto bloccaggio sulla copertina 6 pozzetti (il coperchio è capovolto). Mettere delicatamente il vetrino sulla goccia anticorpi, le cellule seminate di fronte alla caduta. Incubare i coprioggetti rivolti gli anticorpi per 2 ore a temperatura ambiente. </li><li> Posizionare i coprioggetti indietro nei pozzetti e lavare le cellule 3 volte con PBST. Quindi utilizzare la stessa procedura descritta in 4.6 per etichettare le cellule sui vetrini con gli anticorpi secondari fluorescenti. Incubare le cellule sui vetrini con gli anticorpi secondari per 1 ora, RT, al buio. Gli anticorpi sono diluiti in soluzione di blocco come segue: Alexa Fluor 488 (diluizione 1:1000; verde) e Alexa Fluor 568 (diluizione 1:1000;rosso). </li><li> Montare il coprioggetto utilizzando prolungare reagente antifade Oro con DAPI (per i cromosomi colorazione) e incubare una notte a temperatura ambiente al buio per asciugare. </li><li> Esaminare i vetrini al microscopio confocale. </li></ol> 5. La vitalità cellulare Misurato da produzione di ATP Produzione di ATP è misurata da un kit di analisi ATP rilevamento luminescente. <ol><li> Seed le cellule in piastra a 96 pozzetti, circa 20.000 cellule in 800 microlitri media in ciascun pozzetto. Tre pozzi vuoti dovrebbero essere utilizzati per la determinazione dello sfondo luminescenza del mezzo. </li><li> Preparare una serie di diluizioni standard di ATP da circa 10 micron a 100 micron e tenere in ghiaccio. </li><li> Aggiungere 50 ml di detersivo per ogni pozzetto e agitare la piastra per 5 minuti in agitatore orbitale, 700 giri. </li><li> Ricostituire ciascun flacone di &#39;sostrato liofilizzato&#39; con 5 ml di &#39;tampone substrato&#39; nel kit. </li><li> Aggiungere 50 ml della soluzione di substrato ricostituito ai pozzetti, e agitarela piastra per 5 minuti su agitatore orbitale, 700 giri. </li><li> Tenere la piastra al buio per 10 minuti. </li><li> Misurare luminescenza di ogni bene da ELISA lettore di micropiastre. </li></ol>

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

In diretta confocale ha fornito una documentazione in tempo reale l&#39;effetto citotossico di PJ-34 in cellule multi-centrosomica dal vivo durante la mitosi (figura 3 e le informazioni supplementari). Questa è stata la prima documentazione vivo attribuendo la citotossicità di PJ-34 in cellule tumorali umane di centrosomi de-clustering e di morte cellulare, suggerendo l&#39;induzione di morte cellulare mitotica Catastrophe da PJ-34 5-9. Al contrario, il clustering bi-focale di centrosomi supe...

Fenantrene deriva inibitori PARP1, tra cui PJ-34, sono stati progettati per proteggere le cellule quiescenti di morte cellulare per apoptosi indotta dal consumo di energia PARP1 mediata riparazione del DNA in condizioni di stress (ictus o infarto del miocardio) 1. Tuttavia, di recente abbiamo scoperto che PJ-34, a concentrazione due volte più alta di quella che induce PARP1 inibizione, può causare la morte delle cellule esclusivamente in cellule tumorali umane 2,3. Più rapida è la proliferazione della cellula era, più efficiente l&#39;eradicazione delle cellule era. L&#39;attività citotossica di PJ-34 è stato attribuito a extra-centrosomi de-clustering in mitosi 2. Molte cellule tumorali porto umano multicentrosomes 4,5. Incubazione di cellule umane di cancro al seno MDA-MB-231, che ospitano centrosomi soprannumero, con 20 micron PJ-34 efficientemente debellate queste cellule entro 72-96 ore senza danneggiare le cellule quiescenti o alcuni proliferativi benigni ospitare due centrosomi in mitosi <sup&gt; 2,3. Cellule benigne incluse cellule epiteliali mammarie umane MCF-10, cellule endoteliali umane (HUVEC) e cellule mesenchimali primari preparati da timo umano. Queste cellule erano resistenti alla attività citotossica di PJ-34. PJ-34 non ha interferito con il loro ciclo cellulare durante le 96 ore di incubazione o influenzare i loro centrosomi e formazione del fuso bi-focale 2,3. Bipolare assemblea centrosoma è cruciale per la formazione del fuso bipolare in mitosi 4,5. Pertanto, le cellule con più di due centrosomi hanno sviluppato un meccanismo molecolare poco capito, raggruppando i loro centrosomi ai due poli 4-9. Fallimento di montaggio bipolare dei loro centrosomi può causare multipolare distorto mandrini e aberrante cromosomi segregazione che arresta il ciclo cellulare in G2 / M arresto, e porta alla morte cellulare attribuite al fallimento mitotico 4,5. I meccanismi molecolari alla base di olio extra-centrosomi de-cluster sono intensamente studiate &lt;sup&gt; 10. La comprensione di questo meccanismo di morte consentirà eradicazione esclusivo delle cellule tumorali risparmiando i tessuti sani 5,10. Così, composti che attivano la morte cellulare mitotico catastrofe offrono una nuova modalità di una terapia del cancro selettivo, che può essere efficace in una vasta gamma di risultati cancers.Our solidi umani suggeriscono che l&#39;imaging confocale può essere utilizzato per identificare molecole che influenzano extra-cntrosome clustering in mitosi 2,3, rendendo questi composti cancro mira candidati farmaci. Abbiamo documentato l&#39;attività citotossica del fenantridina PJ-34 tramite la scansione cellule tumorali umane fisse e vivo (con alta presenza di extra-centrosomi in mitosi) contro le cellule normali. Un passo-passo le procedure di imaging utilizzate per identificare l&#39;attività citotossica di PJ-34 in cellule tumorali umane di seguito è incluso.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS </td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen (GIBCO)</td><td>41965</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>FBS (Siero fetale bovino)</td><td>Invitrogen (GIBCO)</td><td>12657</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Soluzione Pen-Strep-Ampho</td><td>Biological Industries, Israele</td><td>03-033-1B</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>L-glutammina</td><td>Invitrogen (GIBCO)</td><td>25030-024</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>0,25% tripsina-EDTA</td><td>Invitrogen (GIBCO)</td><td>25200</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Piastre di Petri 92 mm</td><td>Nunc,Thermo scientific</td><td>150350</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Piastre di coltura con fondo in vetro rivestito in poli-D-lisina da 35 mm</td><td>MatTek Corporation, USA</td><td>P35GC-0-14-C</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit di test di rilevamento ATP luminescente</td><td>Abcam</td><td>ab113849</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>NDS (siero d'asino normale)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>017-000-121</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpo anti &alfa;-tubulina</td><td>Sigma</td><td>T9026</td><td>diluizione 1:250 (IF)</td></tr><tr><td>Anticorpo anti &gamma;-tubulina</td><td>Sigma</td><td>T5192</td><td>diluizione 1:200 (IF)</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Capra Anti-Topo IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A-11017</td><td>1:1.000 diluizione (IF)</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Donkey Anti-Rabbit IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A-10042</td><td>1:1.000 diluizione (IF)</td></tr><tr><td>Reagente antisbiadimento ProLong Gold con DAPI (montaggio)</td><td>Invitrogen</td><td>P36935</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>JetPEI (reagente di trasfezione liposomiale) Polyplus</td><td></td> <td>101-10</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>Microscopio confocale</td><td>Leica (Mannheim, Germania)</td><td>TCS SP5II&</td><td>nbsp;</td></tr></tbody></table>

cella della morte associata a mitosi anomalo osservato da imaging confocale in cellule vive di cancro

Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells

Derivati ​​Fenantrene che agiscono come potenti inibitori PARP1 impedito il raggruppamento bi-focale di centrosomi soprannumerari nelle celle multi-centrosomica tumorali umane in mitosi. Il fenantridina PJ-34 è stata la più potente molecola. Declustering di extra-centrosomi provoca insufficienza mitotico e la morte cellulare nelle cellule multi-centrosomica. Tumori umani più solidi hanno alta presenza di extra-centrosomi. L&#39;attività di PJ-34 è stata documentata in tempo reale da imaging confocale di cancro al seno umano vivo MDA-MB-231 cellule trasfettate con vettori codificanti per fluorescente γ-tubulina, che è altamente abbondante nei cntrosome e per fluorescente istone H2b presente in i cromosomi. Cromosomi aberranti arrangiamenti e de cluster-foci γ-tubulina che rappresentano centrosomi declustered sono stati rilevati nelle transfettate cellule MDA-MB-231 dopo il trattamento con PJ-34. Un-cluster in più-centrosomi nei due poli del fuso preceduto la loro morte cellulare. Questi risultati legati for la prima volta l&#39;attività citotossica esclusivo recentemente rilevata del PJ-34 in cellule tumorali umane con supplemento cntrosome-de-clustering in mitosi e insufficienza mitotico che porta alla morte cellulare. Secondo i risultati precedenti osservati con l&#39;imaging confocale di cellule fisse, PJ-34 cellule tumorali debellata esclusivamente con il multi-centrosomi senza danneggiare le cellule normali subiscono mitosi con due centrosomi e mandrini bi-focale. Questa attività citotossica di PJ-34 non è stata condivisa da altri potenti inibitori PARP1, ed è stata osservata in PARP1 deficienti MEF extracentrosomes ospitano, suggerendo la sua indipendenza di PARP1 inibizione. Vivere confocale offerto uno strumento utile per l&#39;individuazione di nuove molecole sradicare le cellule durante la mitosi.

PJ-34 è un acqua stabile solubile fenantridina 1 (Figura 1). I nostri risultati precedenti hanno rivelato la morte cellulare e la de-raggruppati extra-centrosomi in diversi tipi di cellule tumorali a più centrosomica fissi che sono stati trattati con PJ-34. Al contrario, le cellule proliferanti normali non hanno perso di valore 2,3. Centrosomi sono stati identificati mediante doppia marcatura con anticorpi diretti contro centrine1 e γ-tubulina nelle cellule fisse extra-centrosomica...

L&#39;attività citotossica della fenantridina PJ-34 in cellule tumorali in mitosi è stata documentata in tempo reale dai confocale vivo. PJ-34 sradicato cancro al seno umano MDA-MB-231 cellule che ospitano in più-centrosomi nella mitosi. A differenza della normale mitosi bi-focale, l&#39;extra-centrosomi non sono stati raggruppati in due poli del fuso in presenza di PJ-34.

Cella della morte associata a mitosi anomalo osservato da Imaging confocale in cellule vive di cancro

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è osservare l'effetto citotossico del derivato philanthr PJ 34 durante la mitosi in cellule tumorali umane multicentrosomiali. Questo viene ottenuto etichettando i centrosomi con GFP tubulina gamma e i cromosomi con H two B rosso mediante trasfezione. L'obiettivo della trasfezione è consentire il tracciamento della migrazione e del raggruppamento dei centrosomi e dell'assetto dei cromosomi durante la mitosi in cellule tumorali umane multicentrosomiali vive.Come secondo passaggio, alcune delle cellule trasfettate vengono trattate con PJ 34, una molecola che agisce come agente aggiuntivo per l'eliminazione degli extra-centrosomi. Successivamente, le cellule tumorali vive trasfettate vengono analizzate mediante microscopia confocale al fine di catturare gli eventi associati alla migrazione di centrosomi e cromosomi durante la mitosi. Le immagini sequenziali rielaborate o raggruppate mostrano gli effetti di eliminazione degli extra-centrosomi e quelli citotossici del trattamento con PJ 34 nelle cellule tumorali durante la mitosi, basati sull'imaging confocale di cellule vive.Le implicazioni di questa tecnica si estendono a una terapia oncol

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Qui si descrive un protocollo di base per l'immagine e quantificare i tempi mitotico delle cellule dei tessuti dei mammiferi vivono cultura dopo trasfezione di siRNA.

Time-lapse imaging di mitosi dopo la trasfezione di siRNA

Progenitrici neurali mitosi è un parametro critico della neurogenesi. Gran parte della nostra comprensione delle progenitrici neurali mitosi si basa sull'analisi del tessuto fisso. Vivo imaging in fettine cerebrali embrionali è una tecnica versatile per valutare mitosi con alta risoluzione temporale e spaziale in un ambiente controllato.

Immagini dal vivo della mitosi in via di sviluppo embrionali di topo Cortex

Utilizzando topi reporter transgenici ed etichette fluorescenti iniettabili, la microscopia confocale a disco rotante intravitale a lungo termine consente la visualizzazione diretta del comportamento delle cellule mieloidi nell'adenoma intestinale nel modello di cancro colorettale ApcMin/+.

In tempo reale Imaging di cellule mieloidi Dynamics in Apc Min / + Intestinale tumori da Spinning Disk Microscopia confocale

Il termine anastasi si riferisce al fenomeno in cui le cellule morenti invertono un processo di suicidio cellulare in una fase avanzata, si riparano e infine sopravvivono. Qui dimostriamo i protocolli per rilevare e tracciare le cellule sottoposte ad anastasi.

Strategie per l&#39;inseguimento Anastasis, una cellula di sopravvivenza fenomeno che Inverte Apoptosis

Questo protocollo studia in modo efficiente divisione cellulare dei mammiferi in matrici di collagene 3D integrando sincronizzazione della divisione cellulare, monitoraggio degli eventi di divisione in matrici 3D utilizzando la tecnica di imaging cellule vive, microscopia risolta in tempo di riflessione confocale e quantitative analisi di imaging.

Divisione delle cellule dei mammiferi in matrici 3D tramite microscopia confocale quantitativa di riflessione

Vi presentiamo un protocollo per la sincronizzazione della timidina doppia delle cellule HeLa seguita da analisi mediante microscopia confocale ad alta risoluzione. Questo metodo è la chiave per ottenere il numero elevato di celle che procedono in modo sincrono dalla fase S alla mitosi, permettendo studi sui ruoli mitotici delle proteine multifunzionali che possiedono anche funzioni di interfase.

Combinazione di sincronizzazione cellulare mitotica e microscopia confocale ad alta risoluzione per studiare il ruolo delle proteine del ciclo cellulare multifunzione durante la mitosi

Formazione immagine della vivere-cella fornisce una ricchezza di informazioni su singole cellule o di intere popolazioni che è irraggiungibile da cella fissa imaging da solo. Qui, i protocolli di imaging di cellule vive per valutare le decisioni di destino delle cellule dopo il trattamento con il paclitaxel della droga anti-mitotico sono descritti.

A lungo termine Live cell Imaging per valutare il destino delle cellule in risposta a Paclitaxel

Qui presentiamo un protocollo per valutare la dinamica della formazione del mandrino e della progressione mitotica. La nostra applicazione di imaging time-lapse consente all'utente di identificare le cellule in varie fasi della mitosi, monitorare e identificare i difetti mitotici e analizzare la dinamica del mandrino e il destino delle cellule mitotiche dopo l'esposizione a farmaci anti-mitotici.

Live Cell Imaging per valutare la dinamica della temporizzazione metafase e del destino delle cellule a seguito di perturbazioni mitotiche del mandrino

Questo studio presenta un protocollo di immunocitochimica delle cellule 3D vive applicato ad una linea cellulare di glioma diffuso pediatrico della linea mediana, utile per studiare in tempo reale l'espressione delle proteine sulla membrana plasmatica durante processi dinamici come l'invasione e la migrazione delle cellule 3D.

Saggi di immunocitochimica delle cellule 3D del glioma diffuso della linea mediana pediatrica

Qui presentiamo un protocollo per studiare il tasso di inizio della morte cellulare programmata mediante imaging continuo delle foglie inoculate dopo l'induzione della morte cellulare.

Studiare l'inizio della morte cellulare utilizzando un microscopio digitale

Scopri gli effetti citotossici del derivato PJ-34 sulle cellule del cancro al seno MDA-MB-231 durante la mitosi. Questo metodo utilizza l'imaging confocale in vivo per analizzare il comportamento dei centrosomi e documentare l'attività citotossica in tempo reale.

Cella della morte associata a mitosi anomalo osservato da Imaging confocale in cellule vive di cancro

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