Renale Capsule xenotrapianto e sottocutanea Pellet impianto per la valutazione di carcinogenesi della prostata e dell'iperplasia prostatica benigna

Le tecniche illustrate in questo video sono utili negli esperimenti, valutando la regolazione ormonale della carcinogenesi e la crescita benigna della prostata. Prime presse d'appello utilizzate per produrre pellet ormonali che consentiranno una somministrazione continua. Successivamente, le pipette di vetro con punte arrotondate vengono preparate dopo che il rene è stato esteriorizzato.

La punta della pipetta viene utilizzata per facilitare l'inserimento dell'innesto. I pellet ormonali compressi vengono quindi impiantati per via sottocutanea. In definitiva, si ottengono risultati che mostrano gli effetti del trattamento ormonale sulla crescita di xenotrapianti tissutali benigni.

Le tecniche presentate in questo video sono semplici da eseguire e riproducibili. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sul campo, come ad esempio il modo in cui gli ormoni sono implicati nella trasformazione delle cellule benigne in malignità, nonché il modo in cui la crescita benigna della prostata è regolata dagli ormoni. Le implicazioni di questa tecnica si estendono a potenziali nuove terapie e strategie di prevenzione per l'iperplasia protesica benigna e il cancro alla prostata.

In generale, gli individui che sono nuovi a questa tecnica avranno difficoltà con l'aspetto tecnico della capsula renale. I pellet di xenotrapianto vengono preparati in una cappa di sicurezza chimica mentre si indossano dispositivi di protezione adeguati per iniziare a pulire accuratamente l'attrezzatura per la produzione di pellet con etanolo al 70% per evitare la contaminazione incrociata. Quindi, pesare la quantità desiderata di polvere ormonale, lasciando circa il 5% di materiale in più per compensare la perdita durante la pressatura.

Alcuni ormoni richiedono un agente legante o un riempitivo, che viene miscelato prima del produttore del pellet. Qui l'estradiolo è combinato con un riempitivo di colesterolo ottenendo un pellet da 25 milligrammi. Una volta che tutto è pesato e amalgamato, trasferite la polvere nel dset.

Posizionare il colorante sotto la pressa e spingere con decisione la leva verso il basso per comprimere il pellet. Utilizzare una pressione costante per mantenere costante il rapporto superficie/volume. Quindi, invertire il portacolorante e spingere nuovamente la leva verso il basso per rilasciare il pellet.

Ispezionare l'integrità del pellet e determinare se la massa finale rientra nell'intervallo desiderato. I pellet possono essere preparati prima dell'intervento chirurgico e conservati in base alla stabilità dell'ormone o del farmaco utilizzato mentre si indossa una protezione adeguata. Passare la punta di una pipetta di vetro da pastier attraverso la fiamma, un bruciatore bunsen per creare una punta arrotondata e lucidata a fuoco.

Mantenere un movimento costante e leggero della pipetta per evitare punti caldi. Quindi, posizionare la pipetta nella fiamma con un angolo di circa 60 gradi per creare una punta curva e arrotondata. Questa punta verrà utilizzata per creare una tasca per l'innesto sotto la capsula renale.

Prima di iniziare la procedura chirurgica, sterilizzare tutti gli strumenti necessari e preparare l'area di lavoro. Una volta che l'animale è adeguatamente anestetizzato, disinfettare il sito chirurgico con ripetute applicazioni di Betadine e alcool. Dopo l'applicazione di teli sterili sull'area, viene eseguita un'incisione della linea mediana dorsale di due o tre centimetri.

Quindi, separare il derma sottostante dalla parete del corpo. Separare entrambi i lati dell'incisione per l'innesto bilaterale o solo uno per l'innesto unilaterale. Una volta separato, posizionare il topo in posizione laterale e localizzare il rene visualizzando il profilo renale attraverso la parete muscolare.

L'applicazione di una leggera pressione con il pollice e l'indice può aiutare a visualizzare gli organi interni utilizzando sottili forbici dell'iride e facendo attenzione a evitare i vasi principali e i nervi spinali. Praticare un'incisione di un centimetro nella parete del corpo parallela alla colonna vertebrale. Allarga questa incisione a un centimetro e mezzo o due aprendo delicatamente le forbici.

Dopo averli inseriti nell'incisione iniziale, esteriorizzare il rene applicando una leggera pressione all'esterno della parete muscolare su entrambi i lati del rene. Quindi, infilare i bordi della pelle sotto il rene esteriorizzato, che poggerà sulla parete del corpo. Se sono presenti anche altre strutture, possono essere delicatamente infilate mentre il rene viene esteriorizzato.

Mantenere l'idratazione della capsula renale applicando soluzione fisiologica sterile. Sollevare delicatamente la capsula renale e praticare un'incisione da due a quattro millimetri. La dimensione dell'incisione è determinata dalla dimensione dell'innesto, ma deve essere ridotta al minimo per mantenere l'integrità della capsula.

Inserire l'estremità chiusa arrotondata della pipetta preparata in precedenza sotto la capsula tangente alla superficie del rene. Una volta inseriti, aprire delicatamente una piccola tasca per gli innesti facendo molta attenzione a non danneggiare il rene. Gli innesti di tessuto parenchimatico sono preparati da tessuto prostatico fresco ottenuto durante la resezione chirurgica.

Sollevare il bordo tagliato della capsula renale e inserire l'innesto nella tasca. Utilizzando la punta della pipetta, è possibile posizionare diversi innesti sotto la capsula renale e distanziarli uniformemente sulla superficie renale. Al termine dell'innesto, sollevare delicatamente i lati dell'incisione della parete muscolare per riposizionare il rene nella cavità corporea.

Assicurarsi che l'innesto non scivoli fuori da sotto la capsula. Una singola sutura viene utilizzata per chiudere la parete muscolare prima di procedere con l'impianto sottocutaneo del pellet. Al termine dell'innesto, separare il derma sottostante dalla parete corporea in direzione cranica.

Sollevare delicatamente l'aspetto cranico dell'incisione cutanea per creare una tasca mentre si tiene il pellet ormonale Delicatamente con una pinza seghettata diritta, inserire il pellet sulla collottola. Usando una pinza dentata, allineare i bordi della pelle e applicare due o tre clip per ferite chirurgiche per chiudere l'incisione. In questo esempio, xenotrapianti di tessuto primario da pazienti con iperplasia prostatica benigna sono stati integrati con testosterone esogeno.

Per un mese, le punte di freccia denotano le posizioni degli xenotrapianti. L'innesto di capsula renale può essere utilizzato anche per valutare la carcinogenesi ormonale. Qui, i ricombinanti cellulari contenenti epitelio prostatico benigno e mechy urogenitale induttivo formano crescite benigne in topi non trattati.

In questo esempio, lo stesso innesto viene coltivato in un ospite che ha ricevuto pellet di testosterone ed estradiolo per via sottocutanea per quattro mesi e ha scelto il carcinoma prostatico che invade la capsula renale. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come produrre e impiantare pellet ormonali compressi, nonché di come creare una pipetta di vetro lucidato a fuoco per la chirurgia ed eseguire lo xenotrapianto di capsula renale. Quando si tenta questa procedura, è importante ricordarsi di maneggiare delicatamente la capsula renale, mantenere l'umidità ed evitare di danneggiare il parenchima renale Dopo questa procedura.

Possono essere eseguiti altri metodi, come l'istologia, l'immunoistochimica e le tecniche molecolari per rilevare R-N-A-D-N-A o proteine di interesse. Ciò consentirà una migliore valutazione della natura della crescita benigna o maligna osservata. Non dimenticare che gli ormoni utilizzati in questi esperimenti sono potenzialmente teratogeni e cancerogeni.

Il produttore di pellet di ormoni compressi deve sempre essere eseguito in una cappa di sicurezza chimica. I dispositivi di protezione individuale adeguati devono essere sempre indossati per ogni fase della procedura descritta in questo video.