Name: Isolamento Manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umani (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-26T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Impara l'isolamento manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umano mediante digestione enzimatica con collagenasi. Questo metodo consente di ottenere cellule vitali per studi di differenziazione e applicazioni in medicina rigenerativa.

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Gli autori desiderano ringraziare e ringraziare quei personale di ricerca aggiuntivi che hanno contribuito allo sviluppo del protocollo descritto e il suo isolamento di ASC, tra cui: Dr. H. Peter Lorenz, MD, il dottor Hiroshi Muzuno, MD, Dr. Jerry Huang, MD , Dr. Adam Katz, MD, Dr. William Futrell, MD, Dr. Rong Zhang, DDS, PhD, Dr. Larissa Rodriguez, MD, Dr. Alfonso Zeni, PhD, e il dottor John Fraser, PhD. I risultati presentati sono stati finanziati, in parte, da borse di ricerca dal National Institutes of Health, compresi i NIAMS e NIDCR Istituti.

<ol><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-lineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).</li>
<li>Rodbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+isolated+fat+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metabolism of isolated fat cells.</a> J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).</li>
<li>Poznanski, W. J., Waheed, I., Human Van, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fat+cell+precursors.+Morphologic+and+metabolic+differentiation+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">fat cell precursors. Morphologic and metabolic differentiation in culture.</a> Lab Invest. 29 (5), 570-576 (1973).</li>
<li>Zuk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+Stem+Cells+in+Tissue+Regeneration%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived Stem Cells in Tissue Regeneration: A Review.</a> ISRN Stem Cells. , in press (2012).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).</li>
<li>Mitchell, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotype+of+human+adipose-derived+cells%3A+temporal+changes+in+stromal-associated+and+stem+cell-associated+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers.</a> Stem Cells. 24 (2), 376-385 (2006).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypical+and+functional+characterization+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissue-derived stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16 (1), 91-104 (2007).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+freshly+isolated+and+cultured+cells+derived+from+the+fatty+and+fluid+portions+of+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates.</a> J Cell Physiol. 208 (1), 64-76 (2006).</li>
<li>Zannettino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+human+adipose-derived+stromal+stem+cells+exhibit+a+perivascular+phenotype+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo.</a> J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).</li>
<li>Chung, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD90+%28Thy-1%29+Positive+Selection+Enhances+Osteogenic+Capacity+of+Human+Adipose-Derived+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">CD90 (Thy-1) Positive Selection Enhances Osteogenic Capacity of Human Adipose-Derived Stromal Cells.</a> Tissue Eng Part A. , (2012).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+potential+of+adipose+stem+cell+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Adipogenic potential of adipose stem cell subpopulations.</a> Plast Reconstr Surg. 128 (3), 663-672 (2011).</li>
<li>Rada, T., Reis, R. L., Gomes, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+stem+cells+subpopulations+isolated+from+human+adipose+tissue+exhibit+different+chondrogenic+and+osteogenic+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Distinct stem cells subpopulations isolated from human adipose tissue exhibit different chondrogenic and osteogenic differentiation potential.</a> Stem Cell Rev. 7 (1), 64-76 (2011).</li>
<li>Heydarkhan-Hagvall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Adipose+Stem+Cells%3A+A+Potential+Cell+Source+for+Cardiovascular+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Human Adipose Stem Cells: A Potential Cell Source for Cardiovascular Tissue Engineering.</a> Cells Tissues Organs. 187 (4), 263-274 (2008).</li>
<li>Jack, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processed+lipoaspirate+cells+for+tissue+engineering+of+the+lower+urinary+tract%3A+implications+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+bladder+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Processed lipoaspirate cells for tissue engineering of the lower urinary tract: implications for the treatment of stress urinary incontinence and bladder reconstruction.</a> J Urol. 174 (5), 2041-2045 (2005).</li>
<li>Banas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+hepatic+fate+specification+of+adipose-derived+stem+cells+and+their+therapeutic+potential+for+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Rapid hepatic fate specification of adipose-derived stem cells and their therapeutic potential for liver failure.</a> J Gastroenterol Hepatol. 24 (1), 70-77 (2009).</li>
<li>Schreml, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harvesting+human+adipose+tissue-derived+adult+stem+cells%3A+resection+versus+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Harvesting human adipose tissue-derived adult stem cells: resection versus liposuction.</a> Cytotherapy. 11 (7), 947-957 (2009).</li>
<li>Oedayrajsingh-Varma, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+yield+and+growth+characteristics+are+affected+by+the+tissue-harvesting+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure.</a> Cytotherapy. 8 (2), 166-177 (2006).</li>
<li>Ahmad, J., Eaves, F. F., Rohrich, R. J. 3rd, Kenkel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+American+Society+for+Aesthetic+Plastic+Surgery+%28ASAPS%29+survey%3A+current+trends+in+liposuction%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Surg+J%22%5BJournal%5D)">The American Society for Aesthetic Plastic Surgery (ASAPS) survey: current trends in liposuction.</a> Aesthet Surg J. 31 (2), 214-224 (2011).</li>
<li>Tierney, E. P., Kouba, D. J., Hanke, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+tumescent+and+laser-assisted+liposuction%3A+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22J+Drugs+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Safety of tumescent and laser-assisted liposuction: review of the literature.</a> J Drugs Dermatol. 10 (12), 1363-1369 (2012).</li>
<li>Mojallal, A., Auxenfans, C., Lequeux, C., Braye, F., Damour, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+negative+pressure+when+harvesting+adipose+tissue+on+cell+yield+of+the+stromal-vascular+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Mater+Eng%22%5BJournal%5D)">Influence of negative pressure when harvesting adipose tissue on cell yield of the stromal-vascular fraction.</a> Biomed Mater Eng. 18 (4-5), 193-197 (2008).</li>
<li>Matsumoto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+preservation+at+various+temperatures+on+liposuction+aspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of preservation at various temperatures on liposuction aspirates.</a> Plast Reconstr Surg. 120 (6), 1510-1517 (2007).</li>
<li>Francis, M. P., Sachs, P. C., Elmore, L. W., Holt, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+from+lipoaspirate+blood+and+saline+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Isolating adipose-derived mesenchymal stem cells from lipoaspirate blood and saline fraction.</a> Organogenesis. 6 (1), 11-14 (2010).</li>
<li>Boquest, A. C., Shahdadfar, A., Brinchmann, J. E., Collas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+stromal+stem+cells+from+human+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of stromal stem cells from human adipose tissue.</a> Methods Mol Biol. 325, 35-46 (2006).</li>
<li>Bunnell, B. A., Flaat, M., Gagliardi, C., Patel, B., Ripoll, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells%3A+isolation%2C+expansion+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells: isolation, expansion and differentiation.</a> Methods. 45 (2), 115-120 (2008).</li>
<li>Dubois, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+adipose-derived+stem+cells+from+biopsies+and+liposuction+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of human adipose-derived stem cells from biopsies and liposuction specimens.</a> Methods Mol Biol. 449, 69-79 (2008).</li>
<li>Mosna, F., Sensebe, L., Krampera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow+and+adipose+tissue+mesenchymal+stem+cells%3A+a+user%27s+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells: a user's guide.</a> Stem Cells Dev. 19 (10), 1449-1470 (2010).</li>
<li>Zachar, V., Rasmussen, J. G., Fink, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+growth+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and growth of adipose tissue-derived stem cells.</a> Methods Mol Biol. 698, 37-49 (2011).</li>
<li>Williams, S. K., McKenney, S., Jarrell, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase+lot+selection+and+purification+for+adipose+tissue+digestion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Collagenase lot selection and purification for adipose tissue digestion.</a> Cell Transplant. 4 (3), 281-289 (1995).</li>
<li>Wang, H., Van Blitterswijk, C. A., Bertrand-De Haas, M., Schuurman, A. H., Lamme, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+enzymatic+isolation+of+fibroblasts+for+the+creation+of+autologous+skin+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Improved enzymatic isolation of fibroblasts for the creation of autologous skin substitutes.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 40 (8-9), 268-277 (2004).</li>
<li>Pilgaard, L., Lund, P., Rasmussen, J. G., Fink, T., Zachar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+highly+defined+proteases+for+the+isolation+of+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of highly defined proteases for the isolation of adipose tissue-derived stem cells.</a> Regen Med. 3 (5), 705-715 (2008).</li>
<li>Kurita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+centrifugation+on+cells+and+tissues+in+liposuction+aspirates%3A+optimized+centrifugation+for+lipotransfer+and+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Influences of centrifugation on cells and tissues in liposuction aspirates: optimized centrifugation for lipotransfer and cell isolation.</a> Plast Reconstr Surg. 121 (3), 1033-1041 (2008).</li>
<li>Poloni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dedifferentiated+adipocytes+show+similar+properties+to+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dedifferentiated adipocytes show similar properties to bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 30 (5), 965-974 (2012).</li>
<li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells%3A+a+new+tool+for+regenerative+medicine+and+tissue+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine and tissue banking.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li>
<li>Tallone, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+adipose+tissue+contains+several+types+of+multipotent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Adult human adipose tissue contains several types of multipotent cells.</a> J Cardiovasc Transl Res. 4 (2), 200-210 (2011).</li>
<li>De Francesco, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD34%2FCD90+ASCs+are+capable+of+growing+as+sphere+clusters%2C+producing+high+levels+of+VEGF+and+forming+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human CD34/CD90 ASCs are capable of growing as sphere clusters, producing high levels of VEGF and forming capillaries.</a> PLoS One. 4 (8), e6537(2009).</li>
<li>Haasters, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+immunocytochemical+characteristics+indicate+the+yield+of+early+progenitors+and+represent+a+quality+control+for+human+mesenchymal+stem+cell+culturing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Morphological and immunocytochemical characteristics indicate the yield of early progenitors and represent a quality control for human mesenchymal stem cell culturing.</a> J Anat. 214 (5), 759-767 (2009).</li>
</ol>

Gli autori di questo manoscritto sono co-inventori su un brevetto di proprietà di The Regents dell&#39;Università della California e in licenza a Cytori Therapeutics.

Il tessuto adiposo per l&#39;isolamento di ASC può venire in molte forme: da pezzi solidi di tessuto ottenuti con la resezione o liposuzione in piccoli pezzi ottenuti attraverso sia l&#39;estrazione siringa o liposuzione aspirazione assistita (cioè liposuzione). Se le cellule più SVF (e quindi ASC) possono essere ottenuti da campioni adiposi resecati o aspirati non è chiaro come gli studi contrastanti sono stati presentati 16, 17. E &#39;possibile che sia sotto forma di tessuto adiposo è più adatto p...

Nel 2001, una popolazione putativo di cellule staminali multipotenti dal tessuto adiposo è stato descritto nella Tissue Engineering 1 rivista. Queste cellule sono stati dati i nomi trasformati lipoaspirato o PLA cellule a causa della loro derivazione dal tessuto lipoaspirato trasformati ottenuti attraverso la chirurgia estetica. Il metodo di isolamento descritto in questo articolo è stato basato sulle strategie enzimatiche esistenti per l&#39;isolamento della frazione stromale vascolare (SVF) dal tessuto adiposo 2. Il SVF è stata definita come una popolazione minimamente trasformati dei globuli rossi, fibroblasti, cellule endoteliali, cellule muscolari lisce, periciti e pre-adipociti che devono ancora aderire ad una cultura substrato tessuto 2, 3. Coltura di questa SVF nel tempo si propone di eliminare molte di queste popolazioni cellulari contaminanti e provocare un aderente, popolazione fibroblastica. Questi fibroblasti sono stati identificati in letteratura per gli ultimi 40 anni ad essere pre-adipociti. Tuttavia, il nostro gruppo di ricerca ha dimostrato che queste cellule possedevano mesodermal multipotency e rinominato la popolazione SVF aderenti come cellule PLA. Studi successivi da numerosi altri gruppi di ricerca hanno aggiunto a questo potenziale, proponendo sia endodermico e potenziali ectodermica (per la recensione vedi 4). Da allora, numerosi termini supplementari per queste cellule sono apparsi in letteratura. Al fine di fornire un certo tipo di consenso, il termine di cellule staminali derivate da tessuto adiposo o ASC è stata adottata in occasione della conferenza annuale nd IFATS 2. Come tale, il termine ASC verrà utilizzato in questo articolo. Il protocollo descritto in questo articolo è una procedura relativamente semplice che richiede attrezzature di laboratorio standard e utilizza reagenti semplici come soluzione salina fosfo-buffered, reagenti mezzi di coltura dei tessuti standard e collagenasi. Si può produrre un gran numero di ASC seconda della quantità di volume del tessuto adiposo di partenza e successiva ctempo ulture. Tuttavia, il trattamento di una tale quantità di tessuto adiposo può presentare alcuni problemi fisici che possono essere attenuato utilizzando questo protocollo. Inoltre, questo protocollo richiede tessuti sterili strutture di coltura e le cappe di biosicurezza approvati, richiedano quindi l&#39;uso di un impianto di coltura tissutale approvato. Questo requisito può anche diminuire l&#39;utilità della popolazione ASC in applicazioni cliniche meno che non siano isolati in buone pratiche di fabbricazione (GMP strutture) approvati progettati per l&#39;isolamento e l&#39;espansione di materiali per uso clinico. In alternativa, sistemi automatizzati in grado di isolare ASC in un sistema chiuso in sala operatoria sarebbe evitare questo problema fondamentale e consentire l&#39;utilizzo immediato di ASC, senza necessità di successiva espansione in vitro. Ad oggi, ci sono sei sistemi automatizzati che sono disponibili in commercio per l&#39;isolamento di cellule da tessuto umano. Questi sistemi possono consentire di isolare unnumero significativo di ASC di grandi quantità di tessuto adiposo subito dopo il suo raccolto. Questi ASC potrebbero poi essere reintrodotti nel paziente per una varietà di scopi rigenerativi, senza che il paziente dover mai lasciare la sala operatoria. In aggiunta a questo protocollo descrive l&#39;isolamento manuale di ASC, un protocollo per l&#39;isolamento automatizzato di ASC utilizzando il sistema Celution è data anche in un altro articolo.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagent</td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco&#8217; s Modifica di Eagle&#8217; Mediatech</td> <td>Cellgro</td><td>10-013-CV</td><td>con 4,5 g/ml di glucosio, L-glutammina, piruvato di sodio</td></tr><tr><td>Penicillina/Streptomicina</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-002-CI</td><td>10.000 UI/ml penicillina/10.000 &#956; g/ml streptomicina</td></tr><tr><td>Amfotericina B</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>30-003-CF</td><td>250 &#956; g/ml amfotericina B</td></tr><tr><td>10X PBS (soluzione salina fosfo-tamponata)</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td>senza calcio, senza magnesio</td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA</td><td>Mediatech Cellgro</td><td>20-031-CV</td><td>0,25 % tripsina/2,21mM EDTA</td></tr><tr><td>Collagenasi tipo IA (da Clostridium histolyticum)</td><td>Preparato grezzo Sigma</td><td>C2674</td><td>; < 125 unità di digestione del collagene/mg solido</td></tr><tr><td>FBS (Fetal Bovine Serum) inattivato a caldo</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100106</td><td>fonte USDA, inattivato a calore </td></tr><tr><td>Pipette sierologiche da 10 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sierologiche da 25 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-106</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga in polipropilene da 50 ml</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-106</td><td></td></tr><tr><td>piastre per coltura tissutale da 100 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>piastre per coltura tissutale da 150 mm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>Unità filtranti Stericup da 500 ml</td><td>Membrana Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>PES, 0,22 &#956; Filtri cellulari a poro</td></tr><tr><td></td><td>m FisherBrand</td><td>22-363-549</td><td>100 &#956; m rete di nylon</td></tr><tr><td>desametasone - solubile in acqua</td><td>Sigma</td><td>D-2915</td><td></td></tr><tr><td>acido L-ascorbico 2 fosfato</td><td>Sigma</td><td>A-8960</td><td></td></tr><tr><td>&#946;-glicerofosfato sale disodico </td><td>Sigma</td><td>G-9422</td><td>noto anche come glicerofosfato</td></tr><tr><td>insulina</td><td>Sigma</td><td>I-6634</td><td>a base di indometacina pancreas bovina</td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>I-7378</td><td></td></tr><tr><td>apo-transferrina</td><td>Sigma</td><td>T-4382</td><td></td></tr><tr><td>TGF&#946; 1</td><td>R& D Systems</td><td>240-B-002</td> olio <td>umano ricombinante</td></tr><tr><td>Rosso O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>Blu Alciano</td><td>Sigma</td><td>A-5268</td><td></td></tr><tr><td>Nitrato d'argento</td><td>Sigma</td><td>S-0319</td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Fisher Scientific</td><td>30525-89-4</td><td>fornito come stock</td></tr> <tr>del 16 %<td colspan="4">[intestazione]</td></tr><tr><td colspan="4">Attrezzatura necessaria </td></tr><tr><td>Classe II A/B Cappa di biosicurezza</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>assicura che la cappa sia dotata di linee di vuoto per l'aspirazione</td></tr><tr><td>Centrifuga da banco</td><td>Hermle Labnet</td><td>Z383</td><td>Rotore oscillante per provette da 50 ml richiesto, capace di 1200xg</td></tr><tr>Bagno<td>d'acqua </td><td>Fisher Scientific Isotemp</td><td>S52602Q</td><td>capacità di 5-10 litri, capace di 37C</td></tr><tr><td>Pipette Aid Automatizzate</td><td>Drummond Pipette Aid XL</td><td>4-000-105</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubatore</td><td>Thermo Scientific</td><td>Forma 310</td> a <td>calore diretto o con rivestimento ad acqua</td></tr></tbody></table>

isolamento manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umani

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

Nel 2001, i ricercatori della University of California, Los Angeles, ha descritto l&#39;isolamento di una nuova popolazione di cellule staminali adulte dal tessuto adiposo liposuzione che inizialmente chiamati celle lipoaspirato trasformati o cellule PLA. Da allora, queste cellule staminali sono stati rinominati in cellule staminali derivate da tessuto adiposo o ASC e sono andati a diventare uno dei più popolari popolazioni di cellule staminali adulte nel campo della ricerca sulle cellule staminali e la medicina rigenerativa. Migliaia di articoli ora descrivono l&#39;uso di ASC in una varietà di modelli animali di rigenerazione, compreso rigenerazione ossea, la riparazione dei nervi periferici e ingegneria cardiovascolare. Articoli recenti hanno cominciato a descrivere la miriade di usi per ASC nella clinica. Il protocollo illustrato in questo articolo è descritta la procedura di base per mano e enzimaticamente isolare ASC da grandi quantità di lipoaspirato ottenuti da procedure cosmetiche. Questo protocollo può essere facilmente scalato verso l&#39;alto o verso il basso per alloggiomangiato il volume di lipoaspirato e può essere adattato per isolare ASC dal tessuto grasso ottenuti attraverso abdominoplasties e in altri procedimenti analoghi.

Lo schema di protocollo di cui sopra descrive un metodo enzimatico manuale per l&#39;isolamento di un SVF da un ampio campione lipoaspirato volume. All&#39;interno di questo SVF sono numerose popolazioni cellulari, tra cui il ASC. Numerosi studi suggeriscono che la coltura di questo SVF in condizioni di coltura di tessuti normali selezionerà per una popolazione fibroblasti aderenti rischia di essere composta principalmente di tipo ASC. Coerentemente con questo, abbiamo dimostrato, mediante citometria a flusso ed immunof...

Nel 2001, i ricercatori della UCLA hanno descritto l&#39;isolamento di una popolazione di cellule staminali adulte, chiamate cellule o ASC staminali derivate da tessuto adiposo, dal tessuto adiposo. Questo articolo descrive l&#39;isolamento di ASC da lipoaspirato utilizzando un protocollo digestione enzimatica manuale mediante collagenasi.

Isolamento Manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umani

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare cellule staminali derivate dal tessuto adiposo dal grasso ottenuto sotto forma di aspirato lipidico. Questo viene ottenuto innanzitutto rimuovendo la soluzione chirurgica e lavando l'aspirato per eliminare i globuli rossi contaminanti. Il secondo passaggio consiste nel rilasciare le cellule staminali mediante digestione enzimatica dell'aspirato lipidico lavato con collaghenasi.Successivamente, le cellule rilasciate sotto forma di frazione stromale vascolare o SVF vengono raccolte mediante centrifugazione. L'ultimo passaggio consiste nel rimuovere il soprannatante e piastrare le cellule SVF per la selezione e la coltura degli ASC aderenti. Infine, l'induzione in vitro di questi ASC coltivati verso il tessuto osseo, adiposo e cartilagineo.Le linee cellulari possono essere utilizzate per confermare la presenza di queste cellule nella coltura, oltre a verificarne la multipotenzialità. In generale, le persone alle prime esperienze con questo metodo incontreranno difficoltà a causa delle problematiche logistiche legate alla manipolazione di grandi volumi di lipoaspirato prima del raccolto cellulare. Preparare una soluzione sterile di col

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Biology

Biologia

Questo protocollo descrive l'isolamento di adiposo cellule stromali di lipoaspirate e la creazione di un millimetro 4 critico imprese difetto cranica per valutare rigenerazione scheletrico.

Riparazione di un critico di dimensioni modello Difetto cranica Usando derivate da tessuto adiposo cellule stromali raccolte da Lipoaspirate

Questo video mostra una tecnica per isolare e coltivare cellule staminali derivate dalla cresta neurale (ADSC) derivate da creste neurali marcate in modo fluorescente da tessuto adiposo dell'arco periaortico murino. Dopo l'isolamento, le NCADSC vengono rilevate, selezionate utilizzando la smistamento cellulare attivata dalla fluorescenza e successivamente coltivate su una piastra, promuovendo la proliferazione cellulare.

Isolamento di cellule staminali di derivazione adiposa da tessuto adiposo periaortico murino

Qui, presentiamo un protocollo per ottenere frazione vascolari stromali da tessuto adiposo attraverso una serie di processi meccanici, che includono emulsificazione e centrifugazioni multiple.

Micronizzazione meccanici di Lipoaspirates per la terapia rigenerativa

Questo protocollo fornisce un metodo privo di enzimi per isolare le cellule staminali mesenchymal da campioni di abdominoplastica e lipoaspirati utilizzando un metodo explant. L'assenza di enzimi duri o passaggi di centrifugazione prevede cellule staminali clinicamente rilevanti che possono essere utilizzate per studi in vitro o trasferite di nuovo alla clinica.

Un metodo privo di enzimi per l'isolamento e l'espansione delle cellule staminali mesenchimale derivate dall'Adipo

Qui, presentiamo micro-frammentazione senza enzimi adiposi umani utilizzando un dispositivo di sistema chiuso. Questo nuovo metodo consente l'ottenimento di ammassi sub-millimetrici di tessuto adiposo adatto per il trapianto in vivo, la coltura in vitro e l'ulteriore isolamento e caratterizzazione delle cellule.

Tessuto Adiposo Umano Microframmentazione per la Fenotipizzazione Cellulare e la Caratterizzazione del Secretome

Questo protocollo descrive l'approccio tecnico per isolare sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi di tessuto adiposo bianco (WAT) murino intra-addominale mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza o separazione di microsfere immunomagnetiche.

Isolamento di sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi adiposi intra-addominali murini

Il presente protocollo descrive una metodologia migliorata per l'isolamento ADSC con conseguente enorme resa cellulare con guadagno di tempo rispetto alla letteratura. Questo studio fornisce anche un metodo semplice per ottenere un numero relativamente elevato di cellule vitali dopo la crioconservazione a lungo termine.

Tecnica per ottenere cellule staminali mesenchimali dal tessuto adiposo e dalla caratterizzazione della frazione vascolare stromale nella crioconservazione a lungo termine

I prodotti xenogenici (chimici o di derivazione animale) introdotti nelle fasi di preparazione/manipolazione della terapia cellulare sono associati ad un aumentato rischio di reattività immunitaria e trasmissione patogena nei pazienti ospiti. Qui viene descritto un metodo completamente privo di xenogenici per l'isolamento e l'espansione in vitro di cellule staminali derivate da adiposo umano.

Isolamento e coltura di cellule staminali umane derivate da adiposio con un innovativo metodo xenogenico-free per la terapia umana

Questo protocollo descrive una metodologia per isolare e identificare le cellule staminali mesenchimali (MSC) derivate dal tessuto adiposo da ratti Sprague Dawley.

Isolamento e identificazione di cellule staminali mesenchimali derivate dal tessuto adiposo di ratti Sprague Dawley

Questo protocollo descrive l'isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale (SVF) dal tessuto adiposo murino per ottenere preadipociti e ottenere la differenziazione degli adipociti in vitro. L'uso di un dissociatore tissutale per la digestione della collagenasi riduce la variazione sperimentale e aumenta la riproducibilità.

Isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale dal tessuto adiposo bianco murino mediante un dissociatore tissutale

Qui presentiamo un metodo standard per isolare in modo efficiente cellule staminali e adipociti derivati dalle adipoci, caratterizzato da una riduzione del &gt;90% dei tempi di lavorazione, un'elevata vitalità cellulare e una compatibilità ampia.

Isolamento efficiente di cellule staminali e adipociti derivati dall'adiposo dal tessuto adiposo suino

Impara l'isolamento manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umano mediante digestione enzimatica con collagenasi. Questo metodo consente di ottenere cellule vitali per studi di differenziazione e applicazioni in medicina rigenerativa.

Isolamento Manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umani

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