Name: Un chip microfluidica per la Versatile analisi chimica di singole cellule (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-15T17:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 41 s
Description: Scopri l'analisi di singole cellule con un chip microfluidico per quantificare proteine intracellulari mediante saggi fluorescenti e immunoassay. Questo metodo consente studi dettagliati sull'eterogeneità cellulare.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori ringraziano Tom Robinson per la lettura delle bozze del manoscritto, C. Bärtschi e H. Benz per la realizzazione del sistema di controllo della pressione custom-built. Vorremmo inoltre ringraziare l&#39;uso della funzione stanza pulita prima e la microscopia ottica Center (LMC), sia presso l&#39;ETH di Zurigo. Il lavoro è stato finanziato dalla Merck Serono e dal Consiglio europeo della ricerca (CER) nell&#39;ambito del 7 ° Programma Quadro (ERC Starting Grant, progetto n. 203.428, nμLIPIDs).

1. SU-8 master Fabrication Preparare entrambe stampi principali per i canali (fluidici e di controllo, per schemi e dimensioni vedere Figura 2) con il seguente protocollo ma con differenti modelli di maschera. Il processo è mostrato nella figura 3a. <ol><li> Inizia riscaldando un wafer di silicio da 4 pollici per 10 min a 180 ° C. Caricare il wafer disidratato in uno spin-torre di verniciatura e utilizzare il seguente protocollo per spin-coating SU-8 2015: <ol><li> Spin wafer a 100 rpm per 20 sec (coperchio aperto di spin-coater, dispensare SU-8 durante questa fase, chiudere il coperchio dopo la dispensazione). </li><li> Spin wafer a 500 rpm per 10 sec (estenderebbe l&#39;resistere sull&#39;intero wafer). </li><li> Spin wafer a 1.750 rpm per 30 sec (definisce l&#39;altezza del resist a 20 micron). </li></ol></li><li> Rimuovere resistere dal bordo del wafer con acetone (utilizzare un tampone) poiché ciò altrimenti aderire alla piastra nella fase successiva. Trasferire il wafer ahotplate a 95 ° C e calore per 4 min. Dopo la softbake, esporre il resist attraverso un fotomaschera attaccata al vetro sodalime in un allineatore maschera con luce UV (150 mJ / cm 2, misurata a 365 nm). </li><li> Dopo l&#39;esposizione, riscaldare il wafer di nuovo a 95 ° C per 5 min su una piastra. Raffreddare il wafer di RT e poi immergerlo in un bagno di SU-8 sviluppatore per 4 min. Agitare delicatamente per rimuovere impressionate SU-8. Lavare il wafer con clean-room grado isopropanolo e asciugare con azoto. Controllare al microscopio se lo sviluppo ha avuto successo (soprattutto le trappole cellulari). Se le trappole cellulari sono completamente sviluppati, il riflesso del wafer di silicio dovrebbe essere visibile. Se necessario, sviluppare nuovamente il wafer per alcuni minuti. </li><li> Cuocere il wafer in stufa per 2 ore a 180 ° C per rimuovere tutto il solvente residuo. Controllare l&#39;altezza dei canali con un profiler passo. Se l&#39;altezza differisce dalla altezza desiderata, ripetere questo protocollo partendo dal punto 1.1 con una nuova wafer ecambiare lo spin-velocità (fase 1.1.3). Finalizzare la fabbricazione di stampo master silanizzante la cialda con 1H, 1H, 2H, 2H-Perfluorodecyl-dimethylchloro-silano in un essiccatore durante la notte. </li></ol> 2. Fabrication Master stampa microcontact <ol><li> Per preparare maestri stampi per la stampa microcontact, disidratare un wafer di silicio per 10 min a 180 ° C. Spin-coat 1 ml HDMS su questo wafer a 7.500 rpm per 30 sec (resist aderisce meglio alla superficie silanizzata). Spin-cappotto 2 ml di AZ1518 positivo resistono con questo protocollo: <ol><li> Erogazione statica del resist al wafer. </li><li> Spin wafer per 5 secondi a 500 giri al minuto. </li><li> Spin wafer per 60 sec a 4000 giri. </li></ol></li><li> Dopo un secondo softbake 50 a 100 ° C su una piastra, esporre il resist di luce UV (21 mJ / cm 2 a 365 nm) attraverso una fotomaschera ed un allineatore maschera. Sviluppare il resist in un bagno di AZ 726 per 75 sec. Sciacquare il wafer sviluppato con acqua demineralizzata e colpo dry con azoto. Rimuovere il solvente residuo riscaldando il wafer a 115 ° C per 50 sec. Silanizzazione wafer sottovuoto durante la notte. </li></ol> 3. Realizzazione della Microfluidic Chip Un disegno dispositivo a due strati viene utilizzato per questi esperimenti. I due strati sono preparati separatamente e sono legati insieme, prima che il chip viene finalmente incollato su un vetrino (Figura 3b). Questo passaggio descrive la produzione dei PDMS strati e il timbro PDMS per la stampa microcontact. <ol><li> Preparare una miscela di PDMS 10:01 e agente indurente. Preparare circa 80 g di PDMS in totale (usando le nostre idee, questo si tradurrà in 10 gettoni). Mescolare le due parti vigorosamente e degassarla PDMS finché il composto è bolla libera (~ 30 min). </li><li> Posizionare il wafer con lo strato di controllo all&#39;interno di una capsula di Petri e nastro sul fondo. Successivamente, versare ~ 50 g di PDMS sulla parte superiore e mettere il wafer per almeno 2 ore in un forno a 80 ° C per assicurare la completaindurimento delle PDMS. Ripetere la stessa procedura per il wafer stampa microcontact, per questo è necessario ~ 20 g PDMS. </li><li> Spin-coat PDMS sul wafer con lo strato fluidico ad una velocità di rotazione di 2.000 rpm per formare uno strato di circa 40 micron alta PDMS. Curare le PDMS in un forno per almeno 1 ora a 80 ° C. </li><li> Quando entrambe le parti sono guariti, rimuovere lo strato di controllo dal wafer e tagliato a pezzi con una lama di rasoio. Perforare connessione pressione utilizzando una biopsia perforatore ad 1 mm. Per lo stoccaggio, si consiglia di mettere un pezzo di nastro sui canali. </li><li> Per legare i due strati, prendere l&#39;ostia spin-rivestito e la parte superiore e metterli in un pulitore del plasma 23. Dopo il trattamento al plasma, allineare rapidamente entrambe le parti sotto un microscopio con grande distanza di lavoro. Aggiungere alcuni pezzi di PDMS intorno alle parti superiori collocati. Questo passaggio non è obbligatorio, tuttavia facilita la rimozione dei PDMS dal wafer. Posizionare il wafer in un forno a 80 ° C per almeno 1 ora. </li><li> Utilizzare un bisturi per rimuovere con attenzione le PDMS dal wafer e tagliare i microchip. Punch fori di accesso per i collegamenti fluidici con biopsia perforatore 1,5 millimetri. </li><li> Il chip PDMS è terminata e può essere conservato per mesi. Facoltativo: Se il chip è utilizzato con un serbatoio, tagliare la parte superiore di una punta di pipetta 200 microlitri e utilizzare alcune ricambio, PDMS semi-indurito per incollarla sopra. Mettere il chip in forno nuovamente a 80 ° C per almeno 1 ora. </li></ol> 4. Bonding per vetrino Per utilizzare il dispositivo per saggi enzimatici diretti, l&#39;unico passo necessario dopo l&#39;incollaggio è il blocco di superfici. Per questo protocollo, procedere ad A. Tuttavia, per utilizzare il chip microfluidica per test immunologici o ELISA, si prega di fare riferimento al protocollo B per limitare i siti di legame solo al vetrino (vale a dire per la microscopia TIRF o SPR). Se questa limitazione non è importante, fare riferimento ad A, ma utilizzare coniugati biotinilato in fase 4.3 e continuare con la fase 4.8nel protocollo B per creare una superficie completamente funzionale. Prima di eseguire protocollo A e B: Si consiglia di filtrare tutte le soluzioni proteiche utilizzato prima di introdurli nel chip. Detriti e aggregati proteici possono altrimenti bloccare trappole cellulari, riducendo così il numero di camere che possono essere utilizzati per l&#39;analisi. A questo scopo, utilizzare un nonprotein unità filtro assorbente per filtrare tutte le soluzioni prima di introdurli nei canali. Protocollo A (saggi enzimatici) <ol><li> Per finalizzare il dispositivo microfluidica, legare le parti PDMS su un vetrino. Per fare questo, prima pulire un vetrino con sapone, acqua distillata ed etanolo. Essiccare vetrino utilizzando un flusso di azoto. Pulire la parte PDMS con lo scotch. </li><li> Mettere la parte PDMS e il vetrino pulito nel pulitore plasma per 45 sec a 18 W. Per garantire un legame stretto, mettere il chip su una piastra calda (100 ° C) per 5 min. </li><li> Dopo l&#39;incollaggio, riempire il chip con fLUID. Un modo semplice per raggiungere questo obiettivo è quello di utilizzare la forza centrifuga. Tagliare la parte inferiore della punta di 200 microlitri pipetta. Per i canali fluidici, riempirli con la soluzione di saturazione (albumina di siero bovino (4% w / v) o poli-L-lisina) glicole polietilene innestato (0.05% w / v) e posizionare le punte nelle prese. Riempire le insenature livello di controllo con acqua o con una soluzione isosmotic, ad esempio PBS. Posizionare il chip nella centrifuga (800 xg) per 5 min. I canali dovrebbero essere ora pieni di liquido completamente. In caso contrario, ripetere questo passaggio. </li><li> Incubare la soluzione di saturazione per almeno 30 minuti a temperatura ambiente. Lavare la soluzione di strato di fluido con PBS ad una portata di 10 microlitri / min utilizzando una pompa a siringa. Il dispositivo è ora pronto per esperimenti sulle cellule. </li></ol> Protocollo B (i dosaggi) Per una panoramica completa della modifica della superficie dal punto 4.7 in poi, si prega di fare riferimento alla Tabella 1. <ol start="5"><li> InPDMS cubate Stamp per la stampa microcontact con una soluzione bBSA / BSA (es 1-100). Dopo 30 min, pulire i francobolli accuratamente con acqua distillata e asciugare il timbro in corrente di azoto. Introdurre rapidamente i francobolli su un vetrino pulito (Figura 4). </li><li> Esporre il vetrino con il timbro insieme alla parte superiore del chip microfluidica di plasma di ossigeno per 45 sec a potenza massima (18 W) e un detersivo plasma. Dopo il trattamento al plasma, rimuovere il timbro e allineare la superficie stampata sotto le microchambers del dispositivo. Posizionare il chip per 30 min su una piastra calda a 50 ° C. </li><li> Per bloccare la rimanente superficie, introdurre soluzione filtrata sterile BSA (4% (w / v) in PBS) nel chip con una centrifuga (vedi fase 4.2). Incubare per 1 ora e lavare la soluzione fuori dello strato di fluido con PBS (vedi passo 4.3). Il chip può essere utilizzato direttamente o conservata fino a 2 settimane a 4 ° C in un contenitore umido. </li><li> Per un tensioattivo vincolante completamente funzionalee, introdurre avidina (0,025% (w / v) in PBS) nel serbatoio. Utilizzare un flusso di 5 ml / min per 30 min a ritirare la soluzione avidina attraverso i canali del fluido. Successivamente, lavare PBS per 10 min. Sciacquare accuratamente il serbatoio. </li><li> Successivamente, aggiungere proteine ​​G (0,0025% (w / v) in PBS) e filo per altri 30 min. Lavare con PBS per altri 10 min dopo. Successivamente, aggiungere l&#39;anticorpo di interesse (0,0001% (w / v) in PBS) per 10 min. Dopo 10 minuti, fermare il flusso per 15 minuti per consentire il legame. Successivamente, lavare con PBS per 10 min. </li></ol> 5. Esperimenti cellulari Il protocollo è scritto in termini generali, a causa della varietà di possibili saggi. Come esempio i reagenti necessari per il saggio di tossicità G6PDH sono dati. La cella cattura efficienza iniziale del dispositivo è di circa 2,5%, vale a dire 5 di 200 cellule saranno intrappolati. L&#39;occupazione finale delle trappole cellula dipende fortemente dalla linea cellulare utilizzata, il protocollo di sospenderela linea cellulare e il tempo le cellule sono irrigati attraverso il canale. Per le cellule naturalmente crescono in sospensione (ad esempio U937), singole cellule possono essere trovati in circa il 75% delle camere dopo pochi minuti. Le altre camere non sono o pieni, o occupati da due o più celle. In generale, l&#39;occupazione cella singola è minore per linee cellulari aderenti. Quando si utilizza il protocollo di sospensione piuttosto mite qui presentato, la percentuale diminuisce a circa il 30% (HEK, cellule MLT). L&#39;occupazione singola cellula può essere migliorata mediante trattamento con tripsina delle cellule, ma puo anche alterare i risultati degli esperimenti. A seconda della molecola bersaglio, adsorbimento o assorbimento di PDMS possono influenzare i risultati. Adsorbimento può essere ridotta bloccando le superfici con BSA o PLL-g-PEG. L&#39;assorbimento è improbabile che la maggior parte delle biomolecole idrofile, ma dovrebbe essere controllato per (piccoli) componenti cellulari lipofile. <ol><li> Preparare le cellule secondo il protocollo specifico (ad esempio </em&gt; tossicodipendenza). Per cellule in sospensione, aggiungere celle direttamente al chip. Per linee cellulari adesive, utilizzare tampone dissociazione senza enzima per produrre una sospensione cellulare. Filtrare le cellule prima di introdurle al chip per ridurre la quantità di gruppi di cellule. </li><li> Caricare le cellule sul chip mediante una pompa a siringa e portata avanti, piuttosto che di ritirare la sospensione cellulare. Utilizzare un flusso di 5 ml / min per linee cellulari sospensione e portate maggiori di 10-20 ml / min per le cellule adesive da ridurre attaccamento aspecifica delle cellule sulle pareti del canale. </li><li> Quando le trappole sono pieni, chiudere le camere. Se molte cellule aderiscono non specifico alla superficie, cercare di lavarli via con tampone di dissociazione cellulare ad una portata di 10-30 ml / min. </li></ol> Protocollo A (saggi enzimatici) <ol start="4"><li> Prelevare tampone di lisi attraverso il chip. Per questo esempio, questo buffer è un buffer hypoosmolar con aggiunta di Tween 20 (10 mM Tris-HCl, 10mM KCl, 1,5 mM MgCl 2, 1% (v / v) di Tween 20). Per lisi, camere rapidamente aprire e chiudere (cioè 500 msec per portate di 10-50 ml / min 7,21). Per il saggio G6PDH, aggiungere 2 mM di glucosio-6-fosfato, NADP 0,5 mM, 0,5 U / ml diaforasi e 0,3 mM resazurin al tampone di lisi. Avviare il monitoraggio della cinetica di reazione subito dopo la lisi. </li></ol> Nota: Scegliere una tampone che è adatto per il test, ma nudo in mente che detergenti aggressivi (come Triton, SDS), le cellule Lisare immediatamente e porterà ad una perdita di analita durante l&#39;apertura della camera. Protocollo B (i dosaggi) Per una breve descrizione degli esperimenti ELISA cellulari (le portate, stato da camera, ecc), si prega di fare riferimento alla Tabella 1. <ol start="5"><li> Per ELISA, aggiungere il reagente di rilevamento richiesto (es anticorpo secondario, antigene marcato) direttamente al tampone di lisi. Il presente documento ha aggiunto Tween 20 riduce l&#39;adsorbimento non specifico. Lisare le celle in base al punto 5.4. Incubare la miscela per 10-15 minuti per consentire la rilegatura (tempo di incubazione a seconda dell&#39;antigene utilizzato e anticorpo). </li><li> Coniugati anticorpo enzimatico che adsorbiti aspecifico alle pareti del canale possono portare ad una conversione del reagente di rilevamento già all&#39;interno del serbatoio e canali. Per ridurre i problemi di questa adsorbimento, lavare un inibitore permanente dell&#39;enzima rilevamento utilizzato attraverso il chip durante il tempo di incubazione (camere chiuse, prima di aggiungere il reagente di rilevamento). Per HRP, usare HCl 20 mM in acqua per inattivare gli enzimi aspecifico definitivamente assorbiti. </li><li> Dopo il tempo di incubazione, introdurre il reagente di rilevamento (es Amplex rosso e perossido di idrogeno per HRP) al chip. Aprire le camere di nuovo brevemente per lavare l&#39;anticorpo secondario nonbound distanza e aggiungere il reagente di rilevamento. Avviare il monitoraggio della reazione cinetica immediatamente. </li><li> Calibrazione: Immobilizzarel&#39;anticorpo contro il bersaglio di interesse. Chiudere camere. Preparare diverse concentrazioni di analita in tampone o in lisato cellulare off-chip. Applicare una concentrazione al chip e scambiare rapidamente il volume all&#39;interno delle camere (500 msec tempo di apertura). Questo tempo di apertura è sufficientemente breve per evitare un ulteriore accumulo si verifica da analita lavaggio, e solo un numero specifico di molecole dal volume della microcamera vengono rilevati. Dal noto concentrazione dell&#39;antigene all&#39;interno della soluzione e il volume della camera (625 pl), calcolare la quantità all&#39;interno della camera. Successivamente, continuare con il passo 5.5 e introdurre la parte di rivelazione. </li></ol>

<ol><li>Walling, M. A., Shepard, J. R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+heterogeneity+and+live+cell+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Cellular heterogeneity and live cell arrays.</a> Chem. Soc. Rev. 40 (7), 4049-4076 (2011).</li>
<li>Schmid, A., Kortmann, H., Dittrich, P. S., Blank, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+biological+single+cell+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Chemical and biological single cell analysis.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 20 (1), 12-20 (2010).</li>
<li>Lecault, V., White, A. K., Singhal, A., Hansen, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+single+cell+analysis%3A+from+promise+to+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Microfluidic single cell analysis: from promise to practice.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 16 (3-4), 381-390 (2012).</li>
<li>Faley, S., Seale, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+platform+for+real-time+signaling+analysis+of+multiple+single+T+cells+in+parallel%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Microfluidic platform for real-time signaling analysis of multiple single T cells in parallel.</a> Lab Chip. 8 (10), 1700-1712 (2008).</li>
<li>Huang, B., Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+low-copy+number+proteins+in+a+single+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Counting low-copy number proteins in a single cell.</a> Science. 315 (5808), 81-84 (2007).</li>
<li>Di Carlo, D., Aghdam, N., Lee, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+enzyme+concentrations%2C+kinetics%2C+and+inhibition+analysis+using+high-density+hydrodynamic+cell+isolation+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Single-cell enzyme concentrations, kinetics, and inhibition analysis using high-density hydrodynamic cell isolation arrays.</a> Anal. Chem. 78 (15), 4925-4930 (2006).</li>
<li>Cecala, C., Rubakhin, S. S., Mitchell, J. W., Gillette, M. U., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hyphenated+optical+trap+capillary+electrophoresis+laser+induced+native+fluorescence+system+for+single-cell+chemical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">A hyphenated optical trap capillary electrophoresis laser induced native fluorescence system for single-cell chemical analysis.</a> Analyst. 137 (13), 2965-2972 (2012).</li>
<li>Eyer, K., Kuhn, P., Hanke, C., Dittrich, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microchamber+array+for+single+cell+isolation+and+analysis+of+intracellular+biomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A microchamber array for single cell isolation and analysis of intracellular biomolecules.</a> Lab Chip. 12 (4), 765-772 (2012).</li>
<li>Agresti, J. J., Antipov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrahigh-throughput+screening+in+drop-based+microfluidics+for+directed+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Ultrahigh-throughput screening in drop-based microfluidics for directed evolution.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (9), 4004-4009 (2010).</li>
<li>Ma, C., Fan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinical+microchip+for+evaluation+of+single+immune+cells+reveals+high+functional+heterogeneity+in+phenotypically+similar+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">A clinical microchip for evaluation of single immune cells reveals high functional heterogeneity in phenotypically similar T cells.</a> Nat. Methods. 17 (6), 738-743 (2011).</li>
<li>Shi, Q., Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+proteomic+chip+for+profiling+intracellular+signaling+pathways+in+single+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Single-cell proteomic chip for profiling intracellular signaling pathways in single tumor cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (2), 419-424 (2012).</li>
<li>Powell, A. A., Talasaz, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+profiling+of+circulating+tumor+cells%3A+transcriptional+heterogeneity+and+diversity+from+breast+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Single cell profiling of circulating tumor cells: transcriptional heterogeneity and diversity from breast cancer cell lines.</a> PLoS ONE. 7 (5), e33788(2012).</li>
<li>Martin-Belmonte, F., Perez-Moreno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+polarity%2C+stem+cells+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell polarity, stem cells and cancer.</a> Nature. 12 (1), 23-38 (2012).</li>
<li>Unger, M. A., Chou, H. P., Thorsen, T., Scherer, A., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolithic+microfabricated+valves+and+pumps+by+multilayer+soft+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Monolithic microfabricated valves and pumps by multilayer soft lithography.</a> Science. 288 (5463), 113-116 (2000).</li>
<li>Thorsen, T., Maerkl, S. J., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+large-scale+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Microfluidic large-scale integration.</a> Science. 298 (5593), 580-584 (2002).</li>
<li>Gao, Y., Majumdar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+valve-enabled+microfluidic+cell+co-culture+platform+and+demonstration+of+its+applications+to+neurobiology+and+cancer+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Microdevices%22%5BJournal%5D)">A versatile valve-enabled microfluidic cell co-culture platform and demonstration of its applications to neurobiology and cancer biology.</a> Biomed. Microdevices. 13 (3), 539-548 (2011).</li>
<li>White, A. K., VanInsberghe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+microfluidic+single-cell+RT-qPCR%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">High-throughput microfluidic single-cell RT-qPCR.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (34), 13999-14004 (2011).</li>
<li>Schwanhäusser, B., Busse, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+quantification+of+mammalian+gene+expression+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Global quantification of mammalian gene expression control.</a> Nature. 473 (7437), 337-342 (2011).</li>
<li>Kortmann, H., Kurth, F., Blank, L. M., Dittrich, P. S., Schmid, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+real+time+analysis+of+protein+secretion+from+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Towards real time analysis of protein secretion from single cells.</a> Lab Chip. 9 (21), 3047-3049 (2009).</li>
<li>Huang, Y., Cai, D., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-+and+Nanotechnologies+for+Study+of+Cell+Secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Micro- and Nanotechnologies for Study of Cell Secretion.</a> Anal. Chem. 83 (12), 4393-4406 (2011).</li>
<li>Huang, N. T., Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+microfluidic+platform+for+in+situ+cellular+cytokine+secretion+immunophenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">An integrated microfluidic platform for in situ cellular cytokine secretion immunophenotyping.</a> Lab Chip. 12 (20), 4093-4101 (2012).</li>
<li>Eyer, K., Stratz, S., Kuhn, P., Küster, S. K., Dittrich, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implementing+enzyme-linked+immunosorbent+assays+on+a+microfluidic+chip+to+quantify+intracellular+molecules+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Implementing enzyme-linked immunosorbent assays on a microfluidic chip to quantify intracellular molecules in single cells.</a> Anal. Chem. 85 (6), 3280-3287 Forthcoming.</li>
<li>Aebi, U., Pollard, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+glow+discharge+unit+to+render+electron+microscope+grids+and+other+surfaces+hydrophilic%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Electron+Microsc.+Tech%22%5BJournal%5D)">A glow discharge unit to render electron microscope grids and other surfaces hydrophilic.</a> J. Electron Microsc. Tech. 7 (1), 29-33 (1987).</li>
<li>Pandolfi, P. P., Sonati, F., Rivi, R., Mason, P., Grosveld, F., Luzzatto, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+disruption+of+the+housekeeping+gene+encoding+glucose+6-phosphate+dehydrogenase+%28G6PD%29%3A+G6PD+is+dispensable+for+pentose+synthesis+but+essential+for+defense+against+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Targeted disruption of the housekeeping gene encoding glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD): G6PD is dispensable for pentose synthesis but essential for defense against oxidative stress.</a> EMBO J. 14 (21), 5209-5215 (1995).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

La tecnologia microfluidica ha aperto nuove e affascinanti possibilità per l&#39;analisi singola cellula. In particolare, la possibilità di intrappolare e immobilizzare le cellule singolarmente dagli strumenti di microfluidica ha permesso studi sistematici a breve e lungo termine sulle proprietà monocellulari e la risposta. Inoltre, incapsulamento di cellule in microgocce alta frequenza, generati su un microchip, ha consentito studi di secrezione di cellule singole, che non possono essere eseguite con dispositivi citome...

Molti studi in passato hanno rivelato cellula-cellula differenze all&#39;interno di una vasta popolazione di cellule 1-3, in particolare segnalazione elabora 4 o la quantità di biomolecole come proteine ​​intracellulari 5,6, metaboliti e cofattori 7,8. Queste eterogeneità sono considerati di fondamentale importanza per l&#39;adattamento delle cellule e l&#39;evoluzione 9, ma anche svolgere un ruolo chiave nella nascita e nel trattamento di malattie come il cancro 10-13. Pertanto, studi sul livello di singola cellula sono di grande interesse nella ricerca biologica e farmacologica, soprattutto se questi studi rivelano le diverse risposte delle cellule dopo trattamento con sostanze chimiche bioattive. Negli ultimi anni, molte piattaforme analitiche sono state sviluppate che facilitano l&#39;analisi di cellule viventi singole o la composizione chimica del contenuto cellulare. Mentre fluorescente delle cellule attivate (FACS) è l&#39;oro stAndard per analisi molto alto-capacità di singole cellule viventi, il metodo non può essere impiegato per la quantificazione di composti intracellulari o secrete. L&#39;emergere di piattaforme microfluidica ha promesso nuove strategie analitiche per il posizionamento, il trattamento e l&#39;osservazione delle singole cellule. Una pietra miliare nella microfluidica è stato raggiunto con l&#39;integrazione di PDMS valvole flessibili realizzate da Quake e collaboratori 14,15. Queste valvole sono utili poiché possono isolare regioni sul chip, ad esempio separare due culture 16. Inoltre, sono particolarmente applicabile per l&#39;analisi di singole cellule e quindi contribuire a ridurre i problemi di diluizione degli analiti. La potenza di questo approccio per l&#39;analisi singola cellula è stato recentemente dimostrato da Hansen e colleghi, che hanno analizzato l&#39;espressione genica da centinaia di singole cellule in parallelo 17. Quando il targeting proteine ​​e metaboliti, l&#39;analisi è molto difficile a causa della mancanza di un adeguatometodi mplification, il gran numero di diversi composti presenti, e le loro variazioni di natura chimica. Inoltre, la maggior parte delle biomolecole intracellulari dovrebbero essere presenti in basso numero di copie nell&#39;ordine di qualche decina di migliaia 18, da cui il metodo analitico utilizzato deve avere una elevata sensibilità. Saggi più potenti come immunosaggi e immunoenzimatici (ELISA) sono difficili da integrare in dispositivi microfluidici quanto richiedono vari lavaggi e le fasi di incubazione e immobilizzazione superficie. A causa di questi problemi, non è sorprendente che solo alcuni esempi sono stati riportati in cui le proteine ​​o metaboliti sono stati quantificati a livello di singola cellula. Per esempio, studi sulla secrezione di composti fluorescenti sono stati segnalati 19,20. Recentemente, l&#39;implementazione con ELISA è stata presentata per l&#39;analisi di secrete (non fluorescente) proteine ​​da una coltura cellulare (cellule THP-1) 21 e singolo (immune) cellule 10. Targeting proteine ​​intracellulari, Shi et al. Sviluppato un dispositivo microfluidico che ha facilitato l&#39;identificazione di proteine ​​intracellulari per l&#39;analisi delle vie di segnalazione nelle cellule tumorali mediante un immunodosaggio 11. Tuttavia, solo quantità relative di proteine ​​sono stati determinati e nessuna amplificazione enzimatica è stato utilizzato per aumentare il segnale per le proteine ​​a bassa abbondanza. Recentemente, siamo stati in grado di combinare una cella singola cattura Microdevice con saggi di fluorescenza 8 e immunoassays 22 (Figura 1). Le cellule sono passivamente intrappolati in strutture ostacolo microsized, che permettono di alimentazione e (rapido) scambio di medie e di altri agenti chimici senza alcun movimento delle cellule. Una valvola ad anello attorno a ciascuna trappola consente l&#39;isolamento della cella in un volume molto piccolo (&quot;microcamera&quot;). Questa valvola viene attivata subito dopo aver introdotto una cella-lisi (hypoosmolar) tampone, eglince prevenire molecole intracellulari o molecole secrete a diffondere via. Ancora più importante, a causa delle ridotte dimensioni del volume (625 pl) è evitata grande diluizione delle molecole. Inoltre, poiché lisi e analisi vengono eseguite nella stessa posizione nel chip, non vi è alcuna perdita di analiti dovuti al trasporto. La progettazione di chip qui descritto comprende 8 righe alterne di 7 o 8 microchambers, per un totale di 60 microchambers. Le camere sono azionati in file, in modo che la contaminazione incrociata lungo una linea è preclusa. La piattaforma può essere utilizzata in combinazione con saggi di fluorescenza e test immunologici (Figura 1D). Per questi ultimi, abbiamo stabilito protocolli per l&#39;immobilizzazione degli anticorpi, che sono compatibili con la produzione di chip e processo di assemblaggio. Quindi la piattaforma apre la strada a test sensibile, affidabili e quantificabili a livello di singola cellula. Fino ad ora, abbiamo utilizzato il dispositivo per l&#39;analisi di ienzimi ntracellular e secrete (quantificazione relativa da saggi enzimatici), cofattori intracellulari, proteine ​​e piccole molecole (quantificazione assoluta mediante saggi endpoint o ELISA). Nel seguito si descrive il processo di fabbricazione di chip mediante multistrato litografia morbida e protocolli per patterning degli anticorpi tramite stampa microcontact e chimica di superficie. Inoltre, alcuni esempi di utilizzo del chip e le operazioni sono dati.

<table><tbody><tr><td>REAGENTS:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nome del reagente</td><td>Azienda</td><td>Numero di catalogo</td><td>Commenti (opzionale)</td></tr><tr><td>SU-8 2015</td><td>MicroChem Corp. (Netwon, MA)</td>n.a.1H,1H,2H,2H-Perfluorodecyl-dimethylchloro-silano <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>ABCR (Karlsruhe, Germania)</td><td>AB103608</td><td></td></tr><tr><td>4-Methylumbelliferyl &beta;-D-N,N&prime;-diacetilchitobioside idrato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M9763</td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Merck VWR (Darmstadt, Germania)</td><td>100014</td><td></td></tr><tr><td>Avidin</td><td>AppliChem (Axon Lab AG)</td><td>A-2568</td><td></td></tr><tr><td>AZ 1518</td><td>AZ Electronic Materials (Wiesbaden, Germania)</td><td>n.a.AZ</td><td></td></tr> <tr><td>726 sviluppatore</td><td>AZ Electronic Materials (Wiesbaden, Germania)</td><td>n.a.</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A-4503</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina, biotina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A-8549</td><td></td></tr><tr><td>Tampone di dissociazione cellulare</td><td>Invitrogen</td><td>13151-014</td><td></td></tr><tr><td>Esametiltililazano (HDMS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>40215</td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Fluka</td><td>84422</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Merck VWR (Darmstadt, Germania)</td><td>109634</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato</td><td>Fluka</td><td>63068</td><td></td></tr><tr><td>MR developer 600</td><td>Microresist technology GmbH (Berlino, Germania)</td><td>n.a.PBS</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Invitrogen</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>PLL-g-PEG innestato</td><td>SuSoS, (D&uuml; bendorf, Svizzera)</td><td>n.a.PLL-g-PEG</td><td></td></tr> <tr><td>biotina innestata</td><td>SuSoS, (D&uuml; bendorf, Svizzera)</td><td>n.a.Cloruro</td><td></td></tr> di <tr><td>potassio</td><td>Fluka</td><td>60132</td><td></td></tr><tr><td>Proteina G, biotina</td><td>Sigma Fine Chemicals</td><td>41624</td><td></td></tr><tr><td>Wafer di silicio</td><td>Si-Mat (Kaufering, Germania)</td><td>n.a.Sylgard</td><td></td></tr> <tr><td>184 Silicone Elastomer Kit (PDMS)</td><td>Dow Corning</td><td>39100000</td><td></td></tr><tr><td>Tris(idrossimetil)-amminomethan</td><td>Biorad</td><td></td><td></td>1610716</tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biorad</td><td>1706531</td><td></td></tr><tr><td>ATTREZZATURA:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Materiale Nome</td><td>Azienda</td><td>Numero</td><td>di catalogo Commenti (opzionale)</td></tr><tr><td>0.22 &; m Filtro per siringa in PES</td><td>TRP</td><td>99722</td><td></td></tr><tr><td>Perforatore per biopsia da 1/1,5 mm</td><td>Miltex, York PA</td><td>33-31AA/33-31A</td><td></td></tr><tr><td>Filtro Trics cellulare 20 &; m</td><td>Partec</td><td>04-004-2325</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga Sigma 3-18K</td><td>Kuehner</td><td>n.a.Piastra</td><td></td></tr> <tr><td>riscaldante HP 160 III BM</td><td>Sawatec, Sax, Svizzera</td><td>n.a.MA-6</td><td></td></tr> <tr><td>allineatore maschera</td><td>Karl Suess</td><td>n.a.Multizoom</td><td></td></tr> <tr><td>AZ100M microscopio</td><td>Nikon Corporation</td><td>n.a.Photomask</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Microlitho, Essex, U.K.</td><td>n.a</td><td></td></tr><tr><td>Pulitore al plasma PDC-32G</td><td>Harrick</td><td>n.a.Spin</td><td></td></tr> <tr><td>coater Modell WS-400 BZ-6NPP/LITE</td><td>Laurell</td><td>n.a.Moduli</td><td></td></tr> <tr><td>di centrifuga SM 180 BM</td><td>Sawatec, Sax, Svizzera</td><td>n.d.Step</td><td></td></tr> <tr><td>profiler Dektak XT Advanced</td><td>Bruker</td><td>n.a.Pompa</td><td></td></tr> <tr><td>a siringa neMESYS</td><td>Cetoni</td><td>n.a.</td><td></td></tr></tbody></table>

un chip microfluidica per la versatile analisi chimica di singole cellule

A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

Presentiamo un dispositivo microfluidico che consente la determinazione quantitativa di biomolecole intracellulari in più celle singole in parallelo. A questo scopo, le cellule sono passivamente intrappolati nel mezzo di una microcamera. All&#39;attivazione del livello di controllo, la cella è isolato dal volume circostante in una piccola camera. Il volume circostante può quindi essere scambiati senza compromettere la cellula isolata. Tuttavia, dopo breve apertura e la chiusura della camera, la soluzione nella camera può essere sostituito entro poche centinaia di millisecondi. A causa della reversibilità delle camere, le cellule possono essere esposti a soluzioni diverse sequenzialmente in un modo altamente controllabile, ad esempio per incubazione, lavaggio, infine, lisi cellulare. I microchambers ermeticamente chiusi consentono il mantenimento del lisato, minimizzare e controllare la diluizione dopo lisi cellulare. Poiché lisi e analisi avvengono nello stesso luogo, l&#39;alta sensibilità viene mantenuta perché senza ulteriori dilution o la perdita degli analiti avviene durante il trasporto. Il design microcamera consente pertanto l&#39;analisi affidabile e riproducibile di piccolissimi numeri di copie di molecole intracellulari (attomoli, zeptomoles) rilasciate dalle cellule singole. Inoltre, molti microchambers possono essere organizzati in un formato matrice, consentendo l&#39;analisi di molte celle contemporaneamente, dato che gli strumenti ottici adatti vengono utilizzati per il monitoraggio. Abbiamo già utilizzato la piattaforma per proof-of-concept studi per analizzare le proteine ​​intracellulari, enzimi, cofattori e secondi messaggeri in maniera quantificabile sia relativo o assoluto.

La nostra piattaforma è in grado di analizzare una varietà di intracellulare nonché molecole secrete o produce da singole cellule. Ecco, vorremmo presentare diversi studi di esempio per sottolineare la varietà di possibili saggi. Daremo un esempio di un enzima secreto (Figura 5a), così come un enzima intracellulare (Figura 5b) e proteine ​​(figure 5c e d). Per altri esempi, come cofattori o piccole molecole, consultare Eyer et al. (2012) e Eyer...

In questo articolo vi presentiamo un chip microfluidica per l&#39;analisi singola cellula. Esso consente la quantificazione delle proteine ​​intracellulari, enzimi, cofattori, e secondi messaggeri per mezzo di saggi fluorescenti o immunologici.

Un chip microfluidica per la Versatile analisi chimica di singole cellule

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è analizzare lisati di singole cellule mediante saggi a fluorescenza o immunosaggi. Questo viene ottenuto innanzitutto creando un dispositivo microfluidico e rivestendo la camera interna con anticorpi. Successivamente, le singole cellule vengono immobilizzate nelle trappole ed esposte a diversi reagenti per indurre una risposta cellulare in un secondo passaggio.Una valvola a forma di anello viene chiusa rapidamente e il buffer di lisi viene fatto passare attraverso il dispositivo. La valvola a forma di anello viene quindi aperta per un breve periodo e le cellule vengono lisate all'interno della microcamera, consentendo alle proteine rilasciate di legarsi agli anticorpi a elevata concentrazione grazie al ridotto volume. Successivamente, la valvola a forma di anello viene aperta.La camera viene lavata e i reagenti di rilevamento sono introdotti nella camera microfluidica chiusa. L'aumento dell'intensità di fluorescenza viene monitorato nel tempo mediante un microscopio a fluorescenza; i risultati dimostrano la capacità di questo sistema di rilevare in modo quantitativo e affidabile un analita di interesse rilasciato da singole cellule. Qu

a-microfluidic-chip-for-versatile-chemical-analysis-single

Research

Ricerca

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingegneria

Piattaforme microfluidica gocce a base sono candidati promettenti per la sperimentazione ad alto rendimento in quanto sono in grado di generare picolitri, auto-compartimenti imbarcazioni a buon mercato a prezzi kHz. Attraverso l'integrazione con veloce, sensibile e ad alta risoluzione metodi di spettroscopia di fluorescenza, la grande quantità di informazioni generate all'interno di questi sistemi possono essere estratte in modo efficiente, sfruttato ed utilizzato.

Metodi di rilevamento a fluorescenza per piattaforme goccia microfluidica

Dispositivi Millifluidic sono utilizzati per la sintesi controllata dei nanomateriali, analisi risolta nel tempo dei meccanismi di reazione e catalisi flusso continuo.

Millifluidics per sintesi chimica e risolte nel tempo meccanicistici Studies

Vi presentiamo un biochip elettrochimico basato microfluidica-per la rilevazione ibridazione DNA. A seguito di ssDNA sonda funzionalizzazione, la specificità, sensibilità, e il limite di rilevazione sono studiati con obiettivi ssDNA complementari e non complementari. I risultati illustrano l'influenza degli eventi di ibridazione DNA sul sistema elettrochimico, con un limite di rilevazione di 3,8 nM.

Un Biochip elettrochimica Microfluidic-based per la libera-Label Ibridazione DNA Analysis

Vi presentiamo un sistema di introduzione del campione goccia discreto per accoppiamento induttivo spettrometria di massa di plasma (ICPMS). Si basa su un chip microfluidico economico e getta che genera goccioline altamente monodisperse in una gamma di dimensioni di 40-60 micron a frequenze da 90 a 7.000 Hz.

Un chip microfluidico per ICPMS introduzione del campione

I dispositivi microfabbricati integrati con componenti fluidici forniscono una piattaforma in vitro per studi cellulari che imitano il microambiente in vivo. Abbiamo sviluppato chip microfluidici a base di polimetilmetacrilato per lo studio delle risposte cellulari sotto stimoli di stress chimico/elettrico/di taglio singoli o coesistenti.

Progettazione di dispositivi microfluidici per lo studio Risposte cellulare in singolo o Coesistenza chimico / elettrico / Shear stress stimoli

Abbiamo dimostrato una piattaforma microfluidica con una rete elettrodo superficie integrato che combina rilevamento di impulsi resistivo (RPS) con code division multiple access (CDMA), per multiplare rilevazione e dimensionamento delle particelle a più canali microfluidici.

Piattaforma microfluidica con multiplex di rilevamento elettronico per spaziale monitoraggio di particelle

Qui presentiamo indirizzabile gocciolina microarrays (ADMs), un metodo di matrice basata gocciolina in grado di determinare l'abbondanza assoluta della proteina in cellule singole. Dimostriamo la capacità di ADMs per caratterizzare l'eterogeneità nell'espressione della proteina oncosoppressore p53 in una linea cellulare di cancro umano.

Proteine in singole cellule con gocciolina indirizzabile Microarrays di conteggio

Questo rapporto descrive un metodo microfluidico basato su chip per impostare un esperimento di coltura a cella singola in cui è possibile ottenere l'abbinamento ad alta efficienza e l'analisi microscopica di più cellule singole.

Stabilire coculture basate su una singola cellula in modo deterministico con un chip microfluidico

Presentiamo un sistema microfluidico per studi ad alta produttività su macchinari di vita complessi, composto da 1500 unità di coltura, una serie di pompe peristaltiche potenziate e un modulo di miscelazione in loco. Il chip microfluidico consente l'analisi delle condizioni micro-ambientali altamente complesse e dinamiche in vivo.

Generazione di condizioni ambientali dinamiche utilizzando un dispositivo microfluidico ad alta produttività

Il chip microfluidico clinico è un'importante tecnica di analisi biomedica che semplifica la pre-elaborazione del campione di sangue del paziente clinico e colora immunofluorescentmente le cellule tumorali circolanti (CTC) in situ sul chip, consentendo la rapida rilevazione e identificazione di un singolo CTC.

Piattaforma di chip microfluidici clinici per l'isolamento di cellule tumorali circolanti versatili

Il protocollo descrive una piattaforma microfluidica avanzata per misurare quantitativamente le dinamiche di secrezione di citochine di singole cellule mononucleate del sangue periferico umano. La piattaforma misura fino a tre citochine in parallelo (IL-6, TNFα e IL-1β) per ogni singola cellula stimolata con lipopolisaccaride come esempio.

Approccio microfluidico per risolvere la secrezione simultanea e sequenziale di citochine di singole cellule polifunzionali 

Scopri l'analisi di singole cellule con un chip microfluidico per quantificare proteine intracellulari mediante saggi fluorescenti e immunoassay. Questo metodo consente studi dettagliati sull'eterogeneità cellulare.

Un chip microfluidica per la Versatile analisi chimica di singole cellule

Esplora altri video