Resezione del nervo tibiale - Un modello standardizzato per Denervation indotta scheletrico atrofia muscolare nei topi

L'obiettivo generale di questo video è dimostrare il modello di transezione del nervo tibiale dell'atrofia del muscolo scheletrico nei topi. Ciò si ottiene isolando il nervo sciatico e i suoi tre rami, il tibiale, il silico e il peroneo. Una volta isolato, il nervo tibiale viene sezionato.

Dopo la denervazione, la ferita viene sigillata e le condizioni dell'animale vengono attentamente monitorate. In definitiva, si ottengono campioni che mostrano una progressiva diminuzione della massa muscolare dopo la denervazione. Il modello di trassezione del nervo tibiale dell'atrofia del muscolo scheletrico indotta da denervazione è un modello comunemente impiegato in un modello ben validato nei ratti, e questo ha una morbilità molto inferiore rispetto a quella associata alla transezione del nervo sciatico.

Abbiamo adattato questo modello per l'uso nei topi, che dimostreremo qui. Ciò consente allo sperimentatore di sfruttare l'esistenza di topi geneticamente modificati e studiare il processo di atrofia muscolare in assenza di proteine che sono cruciali per la regolazione della massa muscolare scheletrica, inducendo una morbilità minima nell'animale. Innanzitutto, registra il peso del topo dopo aver confermato un'adeguata anestesia con il pizzico delle dita, identifica la tacca sciatica alla palpazione e rade la coscia laterale e il gluteo da lì al ginocchio.

Successivamente, pulire l'area con applicazioni ripetute di alcol e pro iodio. Posizionare il mouse su un lato sotto un microscopio operatorio o da dissezione indossando guanti sterili. Identificare l'incisura sciatica mediante palpazione.

Incidere la pelle della coscia laterale dalla tacca sciatica al ginocchio. Allargare delicatamente la pelle. Identifica il muscolo bicipite femorale, che è il muscolo superficiale piatto della coscia laterale immediatamente sotto la pelle usando le forbici sottili.

Dividi il muscolo bicipite femorale lungo le fibre muscolari e inserisci un divaricatore a molla. Per esporre il nervo sciatico e i suoi rami, identificare il nervo sciatico immediatamente sotto il muscolo bicipite femorale. Può essere identificato dal suo caratteristico colore bianco lucido e ha un diametro di circa 0,8 millimetri.

Va dalla tacca sciatica al ginocchio, ramificandosi nei nervi tibiale, peroneo e sal a livello della fossa poplitea. Separare delicatamente la tibia dai rami del nervo peroneo e sallo con una pinza ultra fine e forbici da micro dissezione a molla. Il nervo tibiale è il ramo più grande ed è solitamente centrale.

La manipolazione delicata del nervo sciatico e dei suoi rami è essenziale per il successo di questa procedura. Fare attenzione che i rami del sal e del nervo perineale non siano danneggiati o allungati. Se questi rami vengono danneggiati o allungati, questo deninerà anche i loro bersagli.

Tenere il nervo solo sullo strato avventiziale esterno con la pinza ultra fine e mantenere il nervo allentato eviterà lo schiacciamento del nervo e la lesione da trazione per la denervazione temporanea Con la reazione completa prevista in due o quattro settimane, schiacciare il nervo tibiale con una pinza ultra fine per 15 secondi per una denervazione completa e duratura. Tagliare il nervo tibiale con le forbici da dissezione micro il più distalmente possibile. Evitare accuratamente i vasi poplitei se è necessaria la completa denervazione.

Sutura l'estremità del nervo tibiale sezionato alla superficie anteriore del muscolo bicipite femorale con 10 T di nylon e riapprossimazione del bicipite femorale con cinque T Vicryl per prevenire la reazione aberrante dei muscoli gastro e soleo. Una volta completata la denervazione, chiudere la pelle con una sutura Vicryl da cinque colpi. Quando è pronto, spegnere l'anestetico inalato, ma mantenere il flusso di ossigeno.

Dopo aver somministrato un analgesico singolarmente, ospita il topo in una gabbia calda e pulita senza lettiera. Tenere il mouse sotto osservazione diretta fino alla deambulazione. Quando si è completamente ripreso, trasferisci il mouse in una gabbia dal fondo solido e pulita con un'ampia lettiera morbida.

Ispezionare quotidianamente l'arto operativo e il piede per lo sviluppo di ulcere da decubito o prove di problemi minori di masticazione possono essere gestiti con antibiotici topici o antisettici, come l'odina. Gli indicatori finali che richiedono l'eutanasia dell'animale sono la perdita di peso, l'evidenza di scarsa cura di sé e la postura curva. Inoltre, dovrebbero essere sacrificati anche gli animali con ferite o ulcere che non guariscono con una o due settimane di cura delle ferite.

Inoltre, tutti gli animali che soffrono di dolore eccessivo Al momento postoperatorio, i tessuti desiderati vengono raccolti per l'analisi. Dopo l'eutanasia, radere l'aspetto mediale delle gambe di controllo operatorie e controlaterali e pulire con alcool lavorando al microscopio da dissezione, incidere la pelle mediale del polpaccio con un bisturi dalla caviglia al ginocchio e circonferenzialmente intorno alla caviglia sull'arto operatorio. Quindi, tirare delicatamente la pelle dal muscolo e prossimalmente verso la coscia.

Per esporre tutti i muscoli della gamba, identificare il muscolo gastro, che è il muscolo del polpaccio che va dal ginocchio alla caviglia sulla parte posteriore della gamba. Quindi, individuare l'inserzione distale del muscolo bicipite femorale prossimale al muscolo gastro sulla parte mediale del ginocchio. Alla sua inserzione distale, il bicipite femorale appare sottile e filmoso e si sovrappone alla porzione più prossimale del gastro utilizzando forbici e dissezione terminale smussata.

Separare delicatamente l'inserzione distale del bicipite femorale dal muscolo gastro. Aggiungi la sua inserzione distale nel calcagno, il muscolo gastrosemolo si assottiglia nel tendine d'Achille. Identifica il tendine d'Achille che appare bianco e sinuoso.

Tenere il tendine d'Achille con una pinza. Facendo attenzione a non trattenere o schiacciare il muscolo gastrico e dividere il tendine d'Achille dall'inserzione del calcagno. Usando le forbici che tengono ancora il tendine, sollevare delicatamente il muscolo gastro rosso pallido dal soleo rosso più profondo dall'inserzione distale verso la sua origine al ginocchio, usando una trazione molto delicata.

Per facilitare il processo, sezionare il gastro dalla gamba dividendo l'origine del gastro dai condili del femore mediale e laterale. Usando le forbici. Fare attenzione a non schiacciare il muscolo.

Il soleo sarà ora chiaramente visibile immediatamente sotto la vista dei gastro. Sollevare il sous dalla sua inserzione sul tendine d'Achille alla sua origine sul polpaccio posteriore. Una volta rimossi, pesare i muscoli separatamente su una bilancia di precisione.

Successivamente, dividere i muscoli verticalmente, metà per il congelamento rapido e l'azoto liquido e metà per l'istologia. Infine, ripetere queste procedure sul lato di controllo non classificato per raccogliere i muscoli gastro e soleo di controllo. I muscoli gastro sono stati prelevati dagli arti posteriori denervati e di controllo controlaterale a una, due o quattro settimane ed espressi come rapporto.

La denervazione induceva nel tempo una progressiva perdita di massa muscolare. L'area della sezione trasversale delle miofibre è stata misurata dopo l'immunocolorazione, come si vede qui. Macchie marroni a contrazione rapida di tipo due fibre e fibre di tipo uno a contrazione lenta, macchie bianche di tipo due veloci.

Le fibre di contrazione hanno dimostrato una progressiva diminuzione dell'area della sezione trasversale nel muscolo denervato. Più di quattro settimane Dopo aver visto questo video, dovresti essere in grado di eseguire la transezione del nervo tibiale nei topi. Ciò fornisce un modello riproducibile, robusto e ben convalidato di atrofia del muscolo scheletrico indotta da denervazione.