Quantitative In vitro Assay misurare Adesione neutrofili attivati ​​per primarie umane endoteliali microvascolari in condizioni statiche

L'obiettivo generale di questa procedura è determinare l'entità dell'attivazione infiammatoria delle cellule endoteliali microvascolari quantificando il numero relativo di neutrofili che aderiscono alle cellule endoteliali in vitro in condizioni statiche. Ciò si ottiene trattando prima i monostrati confluenti sani di cellule endoteliali microvascolari con lo stimolo sperimentale desiderato durante la seconda fase. I neutrofili di volontari umani sani vengono isolati e quindi marcati con calcium am.

Successivamente, i neutrofili marcati vengono aggiunti alle cellule endoteliali e lasciati aderire per 20 minuti, durante i quali si ottiene una misurazione pre-lavaggio mediante spettrometria di fluorescenza. Nella fase finale, i neutrofili non aderenti vengono lavati via, dopodiché si ottiene una misurazione post-lavaggio. In definitiva, è possibile determinare la percentuale e l'aderenza relativa dei neutrofili marcati con calcio ai monostrati di cellule endoteliali in ciascuna condizione di trattamento.