Inchworming: A Novel Motor stereotipia nel BTBR T ⁺ Itpr3 ^Tf / J modello murino di autismo

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di utilizzare un test di gioco giovanile modificato per visualizzare il comportamento di sverminazione in pollici, un nuovo stereotipo motorio. Ciò si ottiene isolando socialmente ogni topo 12 ore prima dell'inizio del test con cibo e acqua indipendenti. Il secondo passo consiste nell'installare la videocamera con un angolo di 45 gradi rispetto all'involucro di prova.

Successivamente, i topi isolati vengono posti in coppia all'interno del recinto dove vengono videoregistrati per una durata di 11 minuti al buio. Il passaggio finale consiste nell'analizzare il comportamento di sverminazione in pollici dal video per misurare la durata, la frequenza e la latenza in pollici di vermi. In definitiva, questo metodo consente l'analisi delle neuropatie motorie e può essere utilizzato come indicatore per la sperimentazione di nuovi interventi terapeutici.

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dell'autismo, come gli incidenti e la regolazione delle stereotipie motorie. La dimostrazione visiva di questa procedura è fondamentale per l'apprendimento del compito perché il fenotipo comportamentale è difficile da identificare e il comportamento di sverminazione si verifica in modo rapido e ripetitivo. Preparare il BTBR e i sei topi neri per la procedura isolandoli in gabbie separate per 12 ore durante la notte.

Prima del test, i topi BTBR utilizzati in questo studio mostrano tutti gli aspetti principali dei disturbi dello spettro autistico riscontrati nei topi, sei topi neri vengono utilizzati come controlli il giorno dell'esperimento. Posizionare i topi isolati nella sala di analisi comportamentale per 30 minuti prima del test in modo che gli animali possano abituarsi al nuovo ambiente. Quindi posiziona una scatola di plexiglass di 30 x 30 centimetri con un coperchio rimovibile in diagonale sul tavolo.

Nella sala prove, retroilluminare la scatola utilizzando una luce a infrarossi per ridurre al minimo l'abbagliamento. La posizione successiva, una videocamera che possiede una funzione di zoom elevato con funzionalità a infrarossi con un angolo di 45 gradi in modo da poter registrare l'intero pavimento dell'armadio e del mouse. Metti a fuoco la telecamera sull'involucro in modo che i mouse possano essere visualizzati in tutta la scatola.

Una volta che la scatola e la fotocamera sono state installate, coprire l'intero pavimento della scatola con lettiera di segatura in modo che sia profondo circa un pollice. Posiziona contemporaneamente due topi BTBR o sei mouse neri all'interno dell'involucro di prova e spegni le luci nella sala di prova. Quindi avvia la videocamera per registrare e uscire dalla stanza per prevenire, sperimentare o influenzare il comportamento dei topi.

Registra l'attività per 11 minuti. Una volta completata la registrazione, rientra nella sala di prova e riporta i topi nelle loro gabbie domestiche originali. Smaltire la lettiera di segatura.

Lavare l'intera scatola di prova con etanolo al 70%, quindi posizionare una nuova lettiera di segatura sul fondo dell'involucro di prova a circa un pollice di profondità. Ripeti l'intera procedura per il resto delle coppie di ceppi di interesse e riporta i topi alle loro gabbie di casa originali. Al termine, per verificare l'affidabilità dei dati di sverminazione in pollici, ripetere la procedura nei giorni successivi con diverse combinazioni di coppie di ceppi BTBR e neri a sei interessi.

In questo modo si garantisce che il comportamento osservato non sia influenzato da un partner specifico nell'involucro. Guarda e assegna un punteggio manuale a ogni video due volte, una per ogni mouse per accertare la durata totale, la frequenza e la latenza al worm in pollici. Nei video.

Analizza ogni video per 10 minuti, iniziando dal punto temporale di tre secondi fino a 10 minuti. Tre secondi. Definisci la sverminazione in pollici come il movimento sincrono, verso l'interno e verso l'esterno delle quattro zampe posteriori degli animali con un minimo di un movimento concomitante verso l'interno e poi un successivo movimento verso l'esterno che sposta efficacemente la lettiera Segna la durata del riscaldamento in pollici come il tempo totale che ogni topo trascorre impegnato nel comportamento di riscaldamento in pollici.

Per segnare questo aspetto della sverminazione in pollici, usa un timer che può essere avviato e fermato. Avvia il cronometraggio quando il mouse inizia a fare il verme e ferma il timer quando il mouse si ferma. Se il mouse ricomincia a girare la vite senza fine, riavviare il timer ed eseguirlo finché il mouse non si ferma di nuovo.

Questo genererà un punteggio di durata del riscaldamento in pollici compreso tra zero e 10 minuti. Definisci la frequenza di riscaldamento in pollici come il numero di volte in cui il mouse si impegna nel comportamento di riscaldamento in pollici. Nel periodo di osservazione di 10 minuti, viene assegnato un singolo conteggio ogni volta che il mouse si avvia e si ferma.

Sverminazione in pollici. Definire la latenza per il worm in pollici come il tempo che passa prima della prima insorgenza del worming in pollici. Avvia il timer all'avvio del video e ferma il timer quando il mouse si attiva per la prima volta.

Se il mouse non visualizza il comportamento di worming in pollici, la latenza per inchworm sarà di 10 minuti. Quindi, calcola la frequenza totale e la durata della sverminazione in pollici per ogni mouse nel video. La media dei due mouse viene utilizzata come frequenza totale e durata per quel video.

Quindi determinare il tempo richiesto per il primo topo della coppia verme da due pollici per la latenza verme da due pollici Per quella specifica coppia di topi, rimuovere i topi che non riescono a inchworm per la durata del periodo di test dalla popolazione campione per assicurarsi che i risultati siano pertinenti a una popolazione di topi che mostrano il comportamento di sverminazione in pollici. Calcola la durata media, la frequenza e la latenza da scavare per ciascun gruppo sperimentale nell'analisi e quindi utilizza i test Innova o T per confrontare i dati tra i ceppi nei gruppi sperimentali. Dopo il secondo giorno di test, utilizzare una misura ripetuta Innova per assicurarsi che non ci siano stati effetti di prova successivi o effetti di accoppiamento nei dati mostrati.

Ecco la frequenza media, la durata e la latenza al verme visualizzato da coppie di topi BTBR e sei topi neri. Il ceppo BTBR ha mostrato una frequenza e una durata significativamente più elevate di sverminazione in pollici, nonché una latenza significativamente più breve rispetto al ceppo di controllo black six. Quando questi test sono stati ripetuti con accoppiamenti alternativi, non sono state riscontrate differenze significative, assicurando che gli effetti non dipendessero né da specifici accoppiamenti di topi né dalla ripetizione dei test Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di segnare solo in sciamatura come il movimento sincrono verso l'interno e verso l'esterno delle zampe anteriori e posteriori dell'animale Dopo la padronanza di questa procedura.

Altri metodi, come la somministrazione di farmaci, possono essere aggiunti al paradigma per esaminare ulteriori questioni, come i bersagli terapeutici per i comportamenti stereotipati.