Name: A Single-fly saggio per comportamento alimentare in Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-04T21:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Impara un saggio automatizzato per misurare il comportamento alimentare in Drosophila melanogaster. Questo metodo quantifica i cambiamenti comportamentali indotti dalla fame e studia la ricerca olfattiva del cibo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato sostenuto da borse di ricerca a JWW dal National Institute of Health (R01DK092640) e la National Science Foundation (0.920.668).

1. Fly Raccolta e fame <ol><li> Posteriore linea sperimentali in condizioni di temperatura e umidità controllate (ad esempio 21 ° C, 50-60% di umidità relativa) su una luce di 12 ore / ciclo scuro. </li><li> Raccogliere femminile vola il giorno della eclosion e luogo loro, insieme con 4-5 maschi, in nuove fiale alimentari (massimo 30 per fiala). Età vola 2-5 giorni. </li><li> Preparare le camere per volare fame. <ol><li> Spingere un singolo tessuto (4,8 x 8,4 pollici) fino al fondo di una fiala di plastica vuoto. Completamente bagnare il tessuto con acqua distillata. Utilizzare un oggetto da spingere verso il basso sul tessuto e delicatamente spremere l&#39;acqua in eccesso. </li><li> Capovolgere il flaconcino per eliminare l&#39;acqua in eccesso. Ci dovrebbe essere abbastanza acqua per mantenere in linea idratata e la camera di fame umida, ma non abbastanza per annegare le mosche. </li></ol></li><li> Trasferire le mosche dal flaconcino cibo in una camera di fame e collegare il flaconcino circa 18-24 ore prima dell&#39;inizio dell&#39;esperimento. Conservare ilfiale in condizioni di temperatura e umidità controllate durante la notte fino a quando l&#39;esperimento ha inizio il giorno successivo. </li></ol> 2. Preparazione del cibo odore <ol><li> Preparare una soluzione di agarosio 1% aggiungendo 0,1 g di bassa temperatura di fusione agarosio a 10 ml di acqua distillata in un pallone di vetro. Riscaldare la soluzione di agarosio in un forno a microonde solo fino a quando non comincia a bollire, ma ben prima che trabocca. <ol><li> Arrestare il forno a microonde e agitare il pallone una volta. Ripetere questa operazione altre due volte fino a quando l&#39;agarosio è completamente sciolto. Conservare la soluzione di agarosio allo stato liquido, mantenendo il caldo pallone su una piastra riscaldante a 50 ° C. </li></ol></li><li> Aggiungere 990 ml di soluzione di agarosio 1% e 10 ml di aceto di mele in una provetta da 1,5 ml Eppendorf per ottenere una soluzione di aceto di sidro di mele 1%. Vortex la soluzione fino mista e posto in un incubatore bagno secco impostato a 50 ° C. </li></ol> 3. Test ambientale e l&#39;impostazione della Camera comportamento <ol><li&gt; Impostare la sala prove alle condizioni desiderate (ad esempio temperatura e umidità). </li><li> Accendere il pannello LED (660 nm). </li><li> Sciacquare i setacci e le piastre di prova con acqua calda e riscaldare in forno fino a quando tutta l&#39;umidità è evaporata. Raffreddare i setacci e piatti giù per la temperatura ambiente di test prima degli esperimenti di inizio. </li><li> Posizionare un piatto piano sulla parte superiore della piastra diffusore e riempire con acqua per aumentare l&#39;umidità locale e per mascherare l&#39;acqua nella goccia di agarosio. </li><li> Posizionare i setacci sopra il piatto d&#39;acqua. </li></ol> 4. Vola Loading nelle piastre di prova Diagrammi con le specifiche per le piastre di prova possono essere trovati nella sezione supplementare Files. La piastra di prova è fatta di acrilico e si compone di 6 arene di prova. Un semplice dispositivo di scorrimento contiene in possesso di camere che permettono fly carico, il contenimento temporaneo, e il rilascio simultaneo di 6 mosche nelle loro rispettive camere al&#39;inizio dell&#39;esperimento. Reticolo inciso al centro di ogni arena nella piastra indicano dove devono essere pipettati odoranti. <ol><li> Inserire i cursori nella piastra test acrilico. </li><li> Fare scorrere delicatamente l&#39;aspiratore nel flaconcino passato il tappo di cotone e attendere circa 6 mosche di camminare nella aspirator.it è fondamentale per essere i più dolci possibili nella loro movimentazione. Si può approfittare di comportamento mosca phototactic per indurre le mosche a strisciare verso l&#39;aspiratore puntando l&#39;apertura flaconcino verso una fonte di luce fioca. Se necessario, si può anche applicare delicata aspirazione per aspirare circa 6 mosche di sesso femminile. </li><li> Inserire la punta dell&#39;aspiratore nel primo foro della piastra di prova. Lasciare una mosca per passare nella cella di detenzione e delicatamente avanzare il cursore in avanti per caricare una mosca nel foro successivo. Continuare fino a quando le mosche occupare tutti e 6 i titolari di cellule della piastra. </li><li> Pipettare 5 ml di sidro di mele soluzione all&#39;1% di aceto agarosio direttamente sul centro della crOSS-peli sulla faccia interna della lastra di prova. </li></ol> 5. Posizionamento della piastra Testing <ol><li> Per centrare la piastra di prova, aprire il file denominato &quot;Posizionamento Tool.vi.&quot; &quot;LabVIEW VI per il posizionamento Tool. vi si possono trovare nella sezione supplementare Files. Eseguire il file facendo clic sulla freccia bianca nell&#39;angolo superiore sinistro dello schermo. </li><li> Posizionare la lastra di prova sopra il setaccio tale che l&#39;apertura dell&#39;arena affronta il pavimento setaccio e la porta odore è sul soffitto della piastra. Allineare il reticolo incisi nel retro della piastra di test con il mirino sullo schermo del monitor. </li><li> Quando l&#39;allineamento è stato completato, interrompere l&#39;esecuzione cliccando sul puntino rosso che si trova vicino all&#39;angolo superiore sinistro del monitor. </li></ol> 6. Registrare il Fly posizione durante l&#39;esperimento <ol><li> Per monitorare e registrare le coordinate del volo durante ogni prova ricerca di cibo, aprire il file del software di acquisizione &quot;Fly Tracking -. Six Zones.vi &quot;LabVIEW per&quot; Fly Tracking - Six Zones.vi &quot;si possono trovare nella sezione Supplemental Files Eseguire il file facendo clic sulla freccia bianca nell&#39;angolo in alto a sinistra del monitor. . </li><li> Assegnare un nome al file e fare clic su &quot;OK&quot;. </li><li> Anticipo i cursori nelle camere di prova per rilasciare le mosche nelle arene di prova. Fare attenzione a non spostare le camere test come questo porterà ad allineamento improprio con le coordinate software di analisi. </li><li> Fare clic su &quot;Start&quot; (inizio registrazione) e garantire che l&#39;unica fonte di luce nella camera di prova è il pannello LED 660 nm. </li><li> Quando la prova è terminato, rimuovere il setaccio e camera di comportamento. Sollevare la piastra di prova dal setaccio e rimuovere le mosche immergendo la lastra di ghiaccio. Pulire delicatamente la piastra con acqua calda e rimuovere eventuali detriti agarosio. Posizionare le piastre di prova in un forno di essiccazione per rimuovere l&#39;umidità. </li><li> Ventilare l&#39;area di prova girando su un smalventilatore l per circa 2 min. Accendere il ventilatore e caricare il successivo gruppo di mosche nel piatto test successivo. </li></ol> 7. Analisi dei dati Utilizzo di software personalizzato &quot;Analisi dei dati per Fly rilevamento a sei zone&quot; può essere trovato nella sezione supplementare Files. Durante l&#39;acquisizione dei dati, le coordinate della posizione mosca individuo record software di acquisizione per ogni punto temporale in un file di testo. Una fotocamera digitale singolo posizionato sopra le piastre di prova acquisisce immagini ad un frame rate di 0,5 Hz. Il programma software di analisi &quot;Analisi dei dati per Fly Tracking-sei zone&quot; estrae le informazioni dal file di testo per a) calcolare la velocità media, b) determinare il punto di tempo in cui una mosca che si trova con successo la fonte dell&#39;odore, e c) costruire finestre grafiche che permetterà all&#39;utente di visualizzazione: volare la posizione, la distanza della mosca dalla fonte odore nel tempo e la velocità media mosca nel corso del tempo. Formatta anche i dati per una facile esportazione in un SPREprogramma adsheet. In questa macro, il cibo ricerca di latenza è definito come il punto di tempo in cui vola spendere almeno 5 sec entro un raggio di 5 mm dal centro dell&#39;arena. <ol><li> Aprire il file del software di analisi &quot;Analisi dei dati per Fly Tracking - sei zone&quot;. Nella scheda &quot;Windows&quot;, fare clic su &quot;Crea nuova tabella&quot;. Ripetere questa operazione fino a quando sono stati creati sei tavoli. </li><li> Nella scheda &quot;macro&quot;, cliccare su &quot;Foodfinding&quot;. Un pannello principale dovrebbe apparire con le seguenti opzioni: File Open Data Raw per il layout, Apri file Raw dati per il file di dati, Fly Posizione, Distanza, velocità, layout; FormatDataFile. </li><li> Per visualizzare i dati grezzi senza aggiungere valori a un file di testo, fare clic su &quot;Apri file Raw dati per Layout.&quot; Individuare e selezionare il file di dati sperimentali nella finestra del browser che viene visualizzata. Fare clic su &quot;Apri&quot;. </li><li> Clicca su &quot;Fly Location&quot; per visualizzare la posizione di ogni volo in ciascuna delle sei arene (sei piazzole XY raffiguranti ciascuna fly &#39;posizione s nel tempo dovrebbe apparire sullo schermo). </li><li> Clicca su &quot;Distanza&quot; per visualizzare la distanza di ogni mosca dalla fonte dell&#39;odore (sei appezzamenti raffiguranti la distanza della mosca dalla fonte dell&#39;odore nel tempo dovrebbe apparire sullo schermo). La linea orizzontale y = 5 MM, indica la soglia a cui la mosca si considera situato alla fonte di cibo. </li><li> Clicca su &quot;Speed&quot; per visualizzare la velocità media di ciascun volo durante il processo (sei appezzamenti raffiguranti la velocità della mosca nel tempo dovrebbe apparire sullo schermo). </li><li> Clicca su &quot;layout&quot; per visualizzare un layout con tutte le posizione mosca, distanza e velocità grafici oltre alla velocità media (durante i primi 50 sec) e la latenza di trovare la fonte odori per ciascun volo (Figura 1). Per visualizzare correttamente il layout, può essere necessario regolare i margini. Per fare questo, prima di fare clic sulla finestra di layout. Nella scheda &quot;File&quot;, cliccare su &quot;Imposta pagina per il layout.&quot; Azzera i margini per0,2 pollici e fare clic su &quot;OK&quot;. Subito a sinistra di ogni appezzamento posizione è un piccolo tavolo con le rubriche &quot;Speed&quot; e &quot;Latency&quot;. I valori inseriti in ciascuna voce indicano la velocità media in mm / sec e ricerca di cibo la latenza in secondi. Voci vuote sotto Latency indicano la mosca non è riuscito a individuare la fonte degli odori. Cucina latenza di ricerca è definito come il punto di tempo in cui le mosche trascorso almeno 5 secondi entro un raggio di 5 mm dal centro della camera. </li><li> Per stampare un layout, fare clic sull&#39;area di layout (aggiornamenti layout file corrente). Fare clic su &quot;File&quot; e poi cliccate su &quot;Layout di stampa&quot;. </li><li> Per visualizzare il file successivo, è sufficiente fare clic su &quot;Apri file Raw dati per Layout.&quot; Fare clic sul seguente file di dati grezzi che si desidera visualizzare e fare clic su &quot;OK&quot;. Fare clic sulla finestra di layout per aggiornare la finestra con il nuovo file di dati. </li><li> Le impostazioni possono essere salvate in un file di esperimento per un uso successivo. </li></ol> 8. Esportare i dati dail software di analisi dati in un programma di foglio di calcolo <ol><li> Per esportare i dati di velocità e latenza per ogni file, fare clic su &quot;Apri file Raw dati per file di dati.&quot; Selezionare un file di dati sperimentali e cliccare su &quot;Apri&quot;. Apparirà una nuova finestra del browser. </li><li> Nella nuova finestra del browser, fate clic destro su &quot;Nuovo&quot; e quindi fare clic su &quot;Documento di testo&quot;. Assegnare al nuovo documento di testo. Selezionare il file di testo nuovo nome e fare clic su &quot;Apri&quot;. Questo memorizza i dati dal file di dati grezzi in file di testo. </li><li> Per esportare i dati da un altro file, clicca su &quot;Apri file Raw dati per il file di dati.&quot; Fare clic su un altro file e fare clic su &quot;Apri&quot;. Selezionare il file di testo dal punto 8.2). Continuare questo processo per i file di dati rimanenti che si desidera esportare. </li><li> Una volta che tutti i file di dati desiderati sono stati aggiunti al file di testo, fare clic su &quot;File Formato dati&quot;. Selezionare il documento di testo utilizzato per memorizzare i dati provenienti dai passaggi precedenti e cliccare su &quot;Apri&quot; (una nuova window si aprirà automaticamente). </li><li> Creare un nuovo documento di testo nella finestra, assegnare un nome al file e fare clic su &quot;Salva&quot;. Questo crea un file di testo che contiene il nome del file, la velocità media, e la latenza per ogni mosca e possono essere importati in un foglio di calcolo. </li><li> Piazzole cumulativi sono costruiti da dati sul numero totale di mosche raggiungimento dell&#39;obiettivo odore cibo come funzione del tempo (Figura 3). </li><li> Dati sperimentali sono analizzati per la significatività statistica utilizzando un test z per proporzioni. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDethier%2C+VG+%22The+hungry+fly+%3A+a+physiological+study+of+the+behavior+associated+with+feeding%22">The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding</a>. , Harvard University Press. (1976).</li>
<li>Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+facilitation+by+neuropeptide+signaling+mediates+odor-driven+food+search%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search.</a> Cell. 145, 133-144 (2011).</li>
<li>Root, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+presynaptic+gain+control+mechanism+fine-tunes+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior.</a> Neuron. 59, 311-321 (2008).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+of+Drosophila+to+biogenic+levels+of+carbon+dioxide+depend+on+life-stage%2C+sex+and+olfactory+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context.</a> J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71, 708-712 (1974).</li>
<li>Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+behavior+mediated+by+single+larval+olfactory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila.</a> Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14, 341-351 (1995).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano assenza concorrente interesse finanziario.

In questo protocollo, si descrive una procedura step-by-step per il saggio comportamento di ricerca di cibo. Oltre agli odori legati all&#39;alimentazione, può anche essere adattato per lo studio della capacità della mosca per individuare altri oggetti odore. Ad esempio, può essere applicato verso lo studio del comportamento localizzazione compagno in mosche maschio 3 Ci sono diverse considerazioni aggiuntive per questo protocollo che citeremo qui quest&#39;azienda procedura.: In ...

Stati di fame promuovere due tipi di comportamenti appetitivi: ricerca di cibo e di consumo alimentare 1. Questo semplice test comportamentale è utile per lo studio dei comportamenti chemiotattici associati foraggiamento 2,3. In particolare, si rintraccia la posizione fly, velocità di piedi e la latenza per l&#39;individuazione di un obiettivo odore di cibo. Latenza di trovare cibo serve come parametro per i cambiamenti nella sensibilità del sistema di rilevamento dell&#39;odore della mosca valle delle variazioni del suo stato appetitivo interna di misura. Una versione manuale di questo test è stato precedentemente utilizzato per mostrare segnalazione dei recettori GABA-B è importante per il comportamento localizzazione odore adulto vola 3. L&#39;attuale versione automatizzata del test è stato determinante nello studio di come a breve neuropeptide-F (SNPF) Segnalazione rimodella la mappa olfattiva in Drosophila e le influenze appetitiva comportamenti 2. Test è fatto in una, temperatura e umidità ambiente controllata scuro. Digitaletelecamere fissate sopra le chiare piastre di prova acrilico tiene in linea retroilluminato da 660-nm illuminazione a LED. Informazioni della telecamera viene elaborato in tempo reale da un computer di stanza vicino alla zona test. Usiamo software di acquisizione dati per registrare e memorizzare le coordinate delle posizioni mosca durante il periodo di prova. In questo paradigma, il soggetto viene rilasciato in un&#39;arena che contiene un odore di cibo al centro, l&#39;oggetto odore crea una sfumatura odore di cibo all&#39;interno dell&#39;arena che induce il cibo comportamento di ricerca in tempo reale. Un analogo protocollo di ricerca odore è stata applicata verso lo studio di chemosensation in single larve di Drosophila 7. Mentre altri test comportamentali, come il quattro di campo olfattometro 4,5 o la t-labirinto 6 valutano odore di avversione o attrazione comportamenti, questo paradigma è più adatto per valutare i comportamenti sensibilità e chemiotassi olfattive. Diversi vantaggi chiave accompagnano questo assay. In primo luogo, permette una rapida acquisizione di grandi insiemi di dati, poiché la raccolta e l&#39;analisi dei dati sono per lo più automatizzati. In secondo luogo, questo saggio isola e misura il comportamento dei singoli mosche, eliminando così stimoli olfattivi sociali che possono influenzare i loro comportamenti. Terzo, la semplicità del protocollo e semplice disegno sperimentale rendono il dosaggio efficiente e facile da insegnare agli altri. Inoltre, questo test può essere utilizzato per sondare ulteriormente i circuiti neurali sottostanti cibo comportamento di ricerca combinandolo con l&#39;ampia toolkit genetica a disposizione di Drosophila melanogaster 8. Espressione mirata di transgeni che silenzio o eccitare i neuroni possono essere raggiunti con strumenti come il sistema GAL4-UAS, nonché la ts1 UAS-shibire, UAS-tetano-tossina, e UAS-TRPA1 (B) transgeni 9-12.

<table><tbody><tr><td>Aceto di sidro di mele</td><td>Spectrum</td><td></td><td>disponibile in commercio</td></tr><tr><td>Agarosio, Tipo VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td> Piastra <td></td></tr><tr><td></td><td>di prova acrilica</td> per agarosio a bassa temperatura di gelificazione La piastra <td>personalizzata</td><td>contiene 6 arene. Ogni arena ha un diametro di 60 mm e un'altezza di 6 mm. Vedere i diagrammi delle piastre di prova per misurazioni specifiche.</td></tr><tr><td>Piattaforma LabVIEW V.8.5</td><td>National Instruments</td><td>776670-09</td><td>per programmi: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi NOTA: "elapsed time.vi", "time into file.vi" e "two object detect.vi" sono subroutine incluse che devono essere disponibili per l'esecuzione del programma di acquisizione dati principale "FlyTracking--Six zones.vi".</td></tr><tr><td>LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Acquisition Software 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Builder AI 3.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro V.6</td><td>Wavemetric, Inc.</td><td></td><td>piattaforma per macro: analisi dei dati per il Fly Tracking - Sei zone</td></tr><tr><td>Basler scA1390-17fm</td><td>National Instruments</td><td>779980-01</td><td>Fotocamera digitale NOTA: driver per fotocamera disponibile su Baslerweb.com</td></tr><tr><td>obiettivo da 8 mm</td><td>National Instruments</td><td>780024-01</td><td>Obiettivo per fotocamera digitale Basler</td></tr><tr><td>Piastra diffusore in vetro smerigliato</td><td>Edmund Optics</td><td>personalizzato</td><td>Diffonde la luce, 25 cm x 30 cm</td></tr><tr><td>US Std. No. 100</td><td>Fischer Scientific</td><td>04-881X</td><td>Setaccio con apertura nominale di 150 &mu; m</td></tr><tr><td colspan="4">Opzione di illuminazione: 1</td></tr><tr><td>LED retroilluminazione: 660 nm (20 cm x 20 cm)</td><td>Spectra West</td><td>BL47192</td><td>un'opzione di illuminazione più semplice ma più costosa.</td></tr><tr><td>Alimentatore per retroilluminazione a LED</td><td>Spectra West</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Opzione di illuminazione 2</strong</td></tr><tr><td>>660 nm LED</td><td>Superbrightleds</td><td>RL5R1330</td><td>lunghezza d'onda 660 nm (circa 7 x 7 array di LED per un pannello da 14,7 pollici x 9,75 pollici)</td></tr><tr><td>Alimentatore CC lineare</td><td>GW Instek</td><td>GPS-1830D</td><td>Alimentatore per pannello LED</td></tr><tr><td>Breadboard senza saldatura</td><td>Digikey</td><td>922354-ND</td><td>Breadboard per LED</td></tr></tbody></table>

a single-fly saggio per comportamento alimentare in drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

Per molti animali, la fame promuove cambiamenti nel sistema olfattivo in un modo che facilita la ricerca di fonti di cibo adeguate. In questo articolo video, descriviamo un test automatico per misurare l&#39;effetto della fame o sazietà su olfattiva dipende comportamento di ricerca di cibo nel frutto adulto Drosophila melanogaster. In una scatola a tenuta di luce illuminato da luce rossa che è invisibile ai moscerini della frutta, una telecamera legata al software di acquisizione dati personalizzato controlla la posizione di sei mosche contemporaneamente. Ogni mosca si limita a camminare nelle singole arene contenenti un odore di cibo al centro. Le arene di test poggiano su un pavimento poroso che funziona per prevenire l&#39;accumulo di cattivi odori. Latenza per localizzare la sorgente odore, un parametro che riflette la sensibilità olfattiva sotto diversi stati fisiologici, è determinata mediante analisi software. Qui, discutiamo i meccanismi critici di funzionamento di questo paradigma comportamentale e copriamo questioni specifiche riguardanti fly loading, contaminazione odore, la temperatura del test, qualità dei dati e l&#39;analisi statistica.

Il software di analisi dei dati e il layout, di cui un esempio può essere visto in Figura 1, sono utilizzate per valutare le prestazioni di ciascun volo durante la sua prova di 10 min secondo un insieme di criteri di analisi. I seguenti criteri sono utilizzati per determinare se i dati di ogni volo saranno utilizzati per l'analisi dei dati e sono progettati per eliminare le mosche che sono in grado di eseguire l'operazione di ricerca alimentare a causa di infortunio, malattia, stress, o la mancanza di m...

In questo articolo video, descriviamo un test automatico per misurare l&#39;effetto della fame o sazietà su olfattiva dipende comportamento di ricerca di cibo nel frutto adulto Drosophila melanogaster.

A Single-fly saggio per comportamento alimentare in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quantificare i cambiamenti comportamentali innescati dalla privazione di cibo nella mosca adulta Salala Melanogaster. Ciò si ottiene facendo morire di fame le mosche per 18-24 ore. Il secondo passo consiste nel caricare le singole mosche in camere comportamentali, ognuna delle quali contiene una fonte di odore attraente al centro.Successivamente, un sistema informatico con una fotocamera digitale traccia la posizione di ogni mosca nel tempo e registra. Le sue coordinate per la successiva analisi dei dati. Il passaggio finale consiste nel determinare la latenza di ogni mosca per raggiungere la fonte dell'odore utilizzando un software personalizzato.In definitiva, questo saggio del comportamento di ricerca del cibo ad alto rendimento può essere utilizzato per studiare la relazione tra la funzione del circuito neurale e le risposte comportamentali. Il vantaggio principale di questo test rispetto al metodo esistente, come i compagni di squadra, è che quantifica il comportamento chemiotattico nei singoli moscerini. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande in neurobiologia, come ad esempio quali circuiti neurologici sono importanti per il comportamento chemiotattico e come questi circuiti neurologici sono moderati dallo stato fisiologico interno dell'animale.L'obiettivo di questo metodo è ottenere grandi set di dati comportamentali in breve tempo. Sebbene questo metodo ci abbia fornito informazioni sul comportamento di foraggiamento, può anche essere utilizzato per studiare altri comportamenti come la localizzazione. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale.La corretta gestione delle mosche e l'esecuzione del software del computer sono entrambi essenziali per il successo di questo esperimento. In generale, le persone che si avvicinano per la prima volta a questo metodo possono avere un po' di difficoltà all'inizio perché ci vuole un po' di tempo e pazienza per imparare a maneggiare le mosche con delicatezza, dimostrando che la procedura sarà intorno all'ago. Raggiungi un tecnico per il mio laboratorio Prima della raccolta delle mosche.Allevare le mosche sperimentali in condizioni di temperatura e umidità controllate con un ciclo di buio e luce di 12 ore. Il giorno dell'esplosione dell'EEC, anestetizzare le mosche sotto l'anidride carbonica prima di asessuarle al microscopio. Diversi criteri di base possono essere utilizzati per distinguere tra maschi e femmine.I maschi hanno una macchia di setole nere sulle quattro zampe chiamate pettini sessuali che le femmine non hanno. Inoltre, la punta dell'addome maschile è coperta da una cuticola scura e mostra genitali che non si vedono nelle femmine, raccogli le mosche femmine e mettile insieme a quattro o cinque maschi dagli occhi bianchi in nuovi file alimentari con un massimo di 30 mosche per età della fiala. Le mosche per due o cinque giorni preparano le camere per la fame di mosche spingendo prima un singolo fazzoletto sul fondo di una fiala di plastica vuota, immergendo completamente il tessuto con acqua distillata.Quindi utilizzare un oggetto per spingere verso il basso il fazzoletto e strizzare delicatamente l'acqua in eccesso. Capovolgere la fiala per eliminare l'acqua in eccesso. Dovrebbe esserci abbastanza acqua per mantenere le mosche idratate e la camera di fame umida, ma non abbastanza per affogare le mosche.Circa 18-24 ore prima dell'inizio dell'esperimento, trasferire le mosche dalla fiala di cibo in una camera di fame e tappare la fiala. Conservare le fiale a temperatura e umidità controllate per una notte fino all'inizio dell'esperimento. Preparare una soluzione agro all'1% aggiungendo 100 milligrammi di aros a bassa temperatura di fusione a 10 millilitri di acqua distillata.In un pallone di vetro. Scaldare la soluzione agro in un forno a microonde fino a quando non inizia a bollire, ma prima che bolle, fermare il microonde e far roteare il pallone una volta. Ripeti questo passaggio altre due volte fino a quando l'aros non si è completamente sciolto.Mantenere la soluzione di Aros allo stato liquido mantenendo il pallone caldo su una piastra calda. Impostato a 50 gradi Celsius, aggiungere 990 microlitri della soluzione all'1% aro e 10 microlitri di aceto di sidro di mele a un tubo DF capovolto da 1,5 millilitri. Per preparare una soluzione di aceto di sidro di mele all'1%, agitare la soluzione fino a quando non si mescola prima di metterla in un'incubatrice a bagno secco impostata a 50 gradi Celsius, impostare la sala prove alle condizioni desiderate come temperatura e umidità.Accendi il pannello LED a 660 nanometri. Sciacquare i setacci e le piastre di prova con acqua calda e scaldarli in un forno di essiccazione fino a quando tutta l'umidità non sarà evaporata. Bello. I setacci e le piastre fino alla temperatura della camera di prova.Prima di iniziare gli esperimenti, posizionare un piatto poco profondo sopra la piastra del diffusore e riempirlo d'acqua per aumentare l'umidità locale e mascherare l'acqua nella gocciolina di aros. Infine, posizionare i setacci sopra la ciotola dell'acqua. La piastra di prova è realizzata in acrilico trasparente ed è composta da sei arene di prova.Un cursore contiene camere di contenimento che consentono il caricamento al volo, il contenimento temporaneo e il rilascio simultaneo di sei mosche nelle rispettive camere. All'inizio dell'esperimento, i mirini incisi al centro di ogni arena nella piastra indicano che gli odori devono essere pipettati. Inserire i cursori nella piastra di prova in acrilico.Far scorrere delicatamente l'aspiratore nella fiala oltre il tappo di cotone e lasciare che circa sei mosche entrino nell'aspiratore. È fondamentale essere il più delicati possibile nel maneggiarli. Si può sfruttare la tattica fotografica, il comportamento delle mosche per indurre le mosche, camminare verso l'aspiratore puntando l'apertura della fiala verso una fonte di luce fioca.Se necessario, è possibile applicare un'aspirazione delicata per aspirare circa sei mosche femmine. Evita di selezionare mosche maschi dagli occhi bianchi. Inserire la punta dell'aspiratore nel primo foro della piastra di prova.Lascia che una singola mosca passi nella cella di contenimento e fai avanzare delicatamente il cursore in avanti per caricare un'altra mosca nel foro successivo. Continuare fino a quando non vola. Occupare tutte e sei le celle di supporto della piastra.Quindi pipettare cinque microlitri di una soluzione di agarro all'aceto di sidro di mele all'1% direttamente al centro del mirino sulla faccia interna della piastra di prova. Per centrare la piastra di prova, aprire il file denominato Strumento di posizionamento vi. Esegui il file facendo clic sulla freccia bianca nell'angolo in alto a sinistra dello schermo.Posizionare la piastra di prova sopra il sib in modo che l'apertura dell'arena sia rivolta verso il pavimento SIV e il bersaglio dell'odore sia sul soffitto della piastra. Allineare il mirino della piastra di prova con le arie trasversali sullo schermo del monitor quando l'allineamento è stato completato. Interrompi l'esecuzione facendo clic sul punto rosso situato vicino all'angolo in alto a sinistra del monitor per tracciare e registrare le coordinate del volo.Durante ogni prova di ricerca alimentare, aprire il file del software di acquisizione. Fly tracking six vi. Esegui il file facendo clic sulla freccia bianca nell'angolo in alto a sinistra del monitor.Assegnare un nome al file, quindi fare clic su OK. Fai avanzare i cursori nelle camere di prova per rilasciare le mosche nelle arene di prova. Fare attenzione a non spostare le camere di prova in quanto ciò comporterebbe una registrazione impropria delle coordinate.Fare clic su Start e assicurarsi che l'unica fonte di luce nella camera di prova sia il pannello LED. Al termine della prova, rimuovere il setaccio e la camera di comportamento. Sollevare la piastra di prova dal setaccio e rimuovere le mosche immergendo la piastra nel ghiaccio.Pulire delicatamente la piastra con acqua calda e rimuovere eventuali residui di agros. Mettere le piastre di prova in un forno di essiccazione per rimuovere l'umidità. Ventilare l'area di prova accendendo una piccola ventola per circa due minuti.Spegnere la ventola e caricare il gruppo successivo di mosche nella piastra di prova successiva. Procedere all'esecuzione dell'analisi dei dati utilizzando un software personalizzato come descritto nel protocollo di testo. Il software di analisi dei dati e il layout vengono utilizzati per valutare le prestazioni di ogni mosca durante i suoi 10 minuti di prova secondo una serie di criteri di analisi.Questi criteri vengono utilizzati per determinare se i dati di ciascuna mosca verranno utilizzati per l'analisi dei dati e sono progettati per eliminare quelle mosche che non sono in grado di eseguire l'attività di ricerca del cibo a causa di lesioni, malattie, stress o mancanza di motivazione, le mosche che rimangono inattive per più di 300 secondi sono considerate inattive e vengono rifiutate dal set di dati a meno che non siano già riuscite a localizzare la fonte di cibo o il reperto. Una velocità media superiore a 10 millimetri al secondo per almeno 100 secondi dopo il periodo di inattività per selezionare solo quelle mosche che mostrano velocità sane durante le prime fasi dell'odore attivo. Le mosche che si muovono entro un certo intervallo di velocità per i primi 50 secondi della prova sono accettate per l'analisi dei dati, le mosche che non si muovono attraverso tutti e quattro i quadranti nell'arena e si dirigono direttamente verso la fonte di cibo dopo l'inizio della prova vengono respinte.Si ritiene che le mosche che si avvicinano e si allontanano dalla fonte di cibo entro un raggio di 10 millimetri per un minimo di 50 secondi abbiano trovato con successo la fonte di cibo. Il grafico che descrive la distanza della mosca dalla fonte dell'odore nel tempo può essere utilizzato per valutare questo raro caso di arene con artefatti visibili in posizione di mosca. Anche la traccia viene rifiutata.Gli artefatti possono essere creati da qualsiasi evento in cui il software di acquisizione dati rileva un oggetto diverso dalla mosca. Spesso appaiono come lunghe linee rette che attraversano l'arena o si irradiano dal suo centro. I moscerini adulti affamati da 18 a 24 ore mostrano una maggiore sensibilità olfattiva agli odori legati al cibo rispetto alle loro controparti nutrite.Un grafico della percentuale cumulativa di mosche che individuano con successo una fonte di odore di cibo mostra che il 30% di tutte le mosche affamate riesce entro una finestra di 10 minuti. Al contrario, solo il 7% di tutte le mosche nutrite lo fa. Le mosche affamate dovrebbero mostrare un'attrazione significativamente maggiore per l'aceto rispetto a un veicolo agricolo da solo, e questa osservazione può essere utilizzata per risolvere le condizioni di test.Ad esempio, quando questo esperimento di ricerca alimentare che è stato eseguito a 32 gradi Celsius con un'umidità ambientale del 35% utilizzando mosche di tipo selvatico, non è stata rilevata alcuna differenza significativa tra l'attrazione delle mosche per l'aceto e il controllo dell'aros, ciò è probabilmente dovuto a una crescente attrazione per l'acqua che si trova nella gocciolina di agros a temperature di prova più calde. Aumentando l'umidità del test tra il 50 e il 60%, questo cambiamento comportamentale è stato corretto ed è stata ripristinata la differenza significativa tra l'attrazione per l'aceto e il veicolo agros. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 12, compresa la prova sperimentale di 10 minuti se eseguita correttamente.Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordarsi di maneggiare le mosche con molta delicatezza per evitare di ferirle o disturbarle. Si prega di ricordare che le piastre di prova e i setacci di prova possono essere estremamente caldi quando si trovano nel forno di essiccazione, e quindi devono essere rimossi mentre si indossano guanti da forno dopo il loro sviluppo. Questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della neurobiologia per esplorare i comportamenti chemiotattici.Questa tecnica può anche essere adattata per studiare la capacità della mosca di localizzare altri oggetti odorosi. Ad esempio, può essere applicato allo studio del comportamento di localizzazione del compagno nei moscerini maschi. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come prepararti per l'esperimento, regolare le condizioni sperimentali, eseguire l'esperimento e analizzare le prestazioni di ogni mosca, che alla fine ti fornirà un grafico cumulativo che mostra la percentuale di mosche che hanno localizzato con successo la fonte dell'odore.

a-single-fly-assay-for-foraging-behavior-in-drosophila

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Test per misurare il comportamento delle funzioni locomotore, apprendimento, memoria e abilità...

Deficit Locomotore dosaggio, apprendimento e memoria in Drosophila Modelli di neurodegenerazione

Drosophila melanogaster è un sistema genetico e comportamentale del modello trattabile che è stato utilizzato per comprendere le basi molecolari e cellulari di molti importanti processi biologici per oltre un secolo 1. Drosophila è stata ben sfruttata per acquisire conoscenze in base genetica del comportamento mosca.

Metodi per test Drosophila Comportamento

Le femmine di Drosophila scelgono tra i substrati e selezionano i siti che sono attraenti per la deposizione delle uova. Questo video descrive un test comportamentale che mette alla prova il loro processo decisionale, chiamato saggio delle preferenze di deposizione delle uova. La clip in primo piano mostra la procedura con una configurazione personalizzata, che consente ai ricercatori non solo di testare il comportamento di molte femmine allo stesso tempo, ma è anche compatibile con la...

drosofila Saggio sulle preferenze di deposizione delle uova: un metodo per testare il processo decisionale nelle mosche

Qui, presentiamo un protocollo per quantificare l'evitamento degli individui stressati. Questo paradigma è potente ma facile da usare e può essere utilizzato per valutare l'influenza dei geni e dell'ambiente su un tipo di interazione sociale in Drosophila melanogaster.

Assay Semplice per la quantificazione della Social Prevenzione in Drosophila melanogaster

Il Flywalk sistema automatizzato di monitoraggio è utilizzato per ad alta risoluzione quantificazione del comportamento odore guidati in Drosophila melanogaster.

Ad alta risoluzione quantificazione del comportamento Odor-guidata<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Utilizzo della<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigm

Forniamo un protocollo dettagliato per un saggio di Drosophila melanogaster sulla lunghezza del percorso di foraggiamento. Discutiamo della preparazione e della manipolazione degli animali da laboratorio, di come eseguire il test e di analizzare i dati.

Foraggiamento protocollo percorso di lunghezza per<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Le larve

Descriviamo qui un metodo di configurazione comportamentale e di analisi dei dati per analizzare le risposte olfattive di un massimo di 100 mosche dell'aceto (Drosophila melanogaster). Questo sistema può essere utilizzato con stimoli olfattivi singoli o multipli e può essere adattato per l'attivazione optogenetica o il silenziamento di sottogruppi neuronali.

Comportamenti olfattive analizzati da Computer di monitoraggio di<em&gt; Drosophila</em&gt; In un Olfattometro quattro quadranti

Presentiamo un protocollo per un saggio di alimentazione a due scelte per le mosche. Questo test di alimentazione è veloce e facile da eseguire ed è adatto non solo per la ricerca di laboratorio su piccola scala, ma anche per schermi comportamentali ad alta produttività nelle mosche.

Un saggio rapido di preferenza alimentare in Drosophila

Il presente protocollo valuta l'attività locomotoria di Drosophila tracciando e analizzando il movimento delle mosche in un'arena fatta a mano utilizzando il software open source Fiji, compatibile con plugin per segmentare i pixel di ogni fotogramma in base alla registrazione video ad alta definizione per calcolare i parametri di velocità, distanza, ecc.

Una semplice tecnica per analizzare l'attività locomotoria nella Drosophila

Questo protocollo descrive un test comportamentale per la registrazione del comportamento di ricerca indotto dallo zucchero utilizzando Drosophila melanogaster. Il test può essere utilizzato per studiare i comportamenti legati all'alimentazione e al foraggiamento, nonché i meccanismi neuronali sottostanti.

Monitoraggio del comportamento di ricerca locale indotto dallo zucchero in Drosophila

Il disturbo dello spettro autistico (ASD) è associato a un comportamento sociale e comunicativo alterato e all'emergere di comportamenti ripetitivi. Per studiare l'interrelazione tra i geni ASD e i deficit comportamentali nel modello di Drosophila , in questo articolo vengono descritti cinque paradigmi comportamentali per valutare il distanziamento sociale, l'aggressività, il corteggiamento, l'adescamento e il comportamento di assuefazione.

Paradigmi per la valutazione comportamentale nel modello di Drosophila del disturbo dello spettro autistico

Impara un saggio automatizzato per misurare il comportamento alimentare in Drosophila melanogaster. Questo metodo quantifica i cambiamenti comportamentali indotti dalla fame e studia la ricerca olfattiva del cibo.

A Single-fly saggio per comportamento alimentare in Drosophila

Esplora altri video