Name: Embrionali di topo di sviluppo in un embrione di tutta la cultura di sistema privo di siero (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Impara a coltivare embrioni di topo in un sistema privo di siero ossigenato per studiare lo sviluppo embrionale. Questo metodo permette di manipolare lo sviluppo mantenendo la vascolarità intatta.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Vorremmo ringraziare il Dott. Julie Gordon e il Dr. Nancy Manley per il loro consiglio utile con la tecnica cultura. Questo lavoro è stato sostenuto da Glaucoma Fondazione dei Bambini e Sharon-Stewart aniridia Research Trust.

Cultura embrione di topo: Tutte le procedure sperimentali sono state condotte in stretta conformità con le linee guida del National Institutes of Salute seguente protocollo # A2010 07-119, che è stato esaminato e approvato dalla University of Georgia Institutional Animal Care ed uso commissione, che mantiene costante supervisione regolamentare. 1. Preparazione of Culture Media <ol><li> Preparare terreno di coltura utilizzando supporti e integratori di cellule staminali disponibili in commercio nei seguenti importi: KnockOut DMEM, KnockOut Serum Replacement (KSR) (10%), N-2 Supplementare (1x), albumina, da siero bovino (2%), penicillina ( 50 UI / ml), streptomicina (50 mg / ml) e Amfotericina B-(1,25 mg / ml). Il mezzo di coltura preparato è simile a quello precedentemente descritto 15 con le seguenti modifiche: aggiunta di antimicotici e utilizzando due volte la concentrazione di antibiotici (per dettagli di reagenti e attrezzature specifiche, vedere List dei Materiali). Nota: la concentrazione di antibiotici usati in precedenza (. Moore-Scott, et al 15) era sufficiente per le culture embrioni effettuate fino a 24 ore periodo di tempo. Tuttavia, quando la cultura era continuata oltre 24 ore, abbiamo sperimentato la contaminazione della cultura e questo è stato controllato con successo raddoppiando la concentrazione di antibiotico. </li><li> Conservare i componenti Media a 4 ° C oa -20 ° C secondo le raccomandazioni del produttore. KSR e N-2 Supplemento devono essere conservati in aliquote a -20 ° C per evitare ripetuti di congelamento e scongelamento. KnockOut DMEM una volta aperto deve essere utilizzato entro 30 giorni secondo la raccomandazione del costruttore. Prima dell&#39;uso, riscaldare le parti in un bagno d&#39;acqua a 37 ° C. </li><li> Preparare il supporto in condizioni sterili. Disinfettare la superficie di tutte le apparecchiature e le bottiglie contenenti i componenti multimediali con il 70% spruzzo di alcol prima di metterli nel cofano cultura. </li><li> I componenti media possono essere addizionate sia in un becher sterile o direttamente nel sistema di filtro (Corning). Primo aggiungere la polvere di albumina per il ko DMEM. Mescolare accuratamente scuotendo delicatamente fino a quando l&#39;albumina si scioglie completamente. Quindi aggiungere il N-2 Supplement, KSR e gli antibiotici e mescolare accuratamente con una pipetta. Poi filtrare sterilizzare i media usando un filtro dimensione dei pori 0,22 micron con aspirazione a vuoto. Erogare i media in 50 ml provette coniche e conservare a 4 ° C fino all&#39;uso. I media una volta preparati devono essere utilizzati entro 4-5 giorni per la cultura. </li></ol> 2. Preparazione delle attrezzature Cultura <ol><li> Sterilizzare le bottiglie di coltura di vetro e tappi di gomma. Avvolgere le bottiglie di coltura in un foglio di alluminio e mettere i tappi delle bottiglie di gomma in un bicchiere di acqua e sterilizzare in autoclave. </li><li> Sterilizzare la camera di coltura (Precision Incubator Unit) con il 70% spruzzo alcol e riscaldare a 37 ° C prima dell&#39;inizio della coltura. La camera di cultura escherzato con un disco di rotolamento al centro che tiene le bottiglie di coltura. Il flusso di gas nella camera è regolata da un manometro e la portata può essere regolata osservando la fuoriuscita di bolle d&#39;aria attraverso l&#39;acqua in un tubo di vetro alla fine. Questo rotolamento apparecchio di coltura bottiglia è una versione modificata dell&#39;apparecchiatura originale introdotte dalla New Cockroft e 17. </li><li> Collegare una bombola di gas contenente una miscela di gas di 95% O 2/5% di CO 2 alla camera di coltura e regolare il flusso di gas a &quot;una bolla d&#39;aria al secondo&quot; che fornisce una portata di 50 cc / min e assicura un adeguato apporto di ossigeno per gli embrioni di cultura. </li></ol> 3. Mouse Embryo Raccolta e preparazione per la Cultura <ol><li> Per ottenere wild type embrioni di topo, abbiamo utilizzato topi di C57BL/6J e CD-1 (Charles River Laboratories) ceppi background genetico. </li><li> Controllare i topi femmina per tappi vaginali ogni giorno mattina. Il mezzogiorno del giorno di trovare the spina vaginale dovrebbe essere considerato come E0.5 DPC (giorni dopo il coito). </li><li> Raccogliere embrioni di topo a E10.5 DPC dai eutanasia topi in gravidanza seguenti protocolli standard. I topi sono stati sacrificati mediante un dispositivo di inalazione di CO 2, come specificato dalla American Veterinary Medical Association (AVMA) Linee guida per l&#39;eutanasia degli animali (2013). Per assicurare morte, dislocazione cervicale è stata eseguita dopo esposizione a CO 2. </li><li> Spray etanolo al 70% sulla superficie addominale ventrale per evitare incollaggio di capelli addominale agli strumenti. Quindi aprire la cavità addominale ventrale utilizzando un tagliente-smussato forbici operativi e un paio di 4-3/4 in microdissecting pinze per individuare l&#39;utero. Utilizzando una pinza 4 in microdissecting sollevare l&#39;intero utero e separarlo dal corpo tagliando con una leggera forbici operativi al corpo uterino e alle punte delle corna uterine. </li><li> Sciacquare rapidamente l&#39;intero utero in 1x PBS riscaldato a 37 ° Cper rimuovere qualsiasi incollaggio sangue verso l&#39;utero e collocare immediatamente in DMEM riscaldato a 37 ° C in una piastra di Petri. Sterilizzare gli strumenti del 70% di etanolo spray prima ulteriore utilizzo. Nota: preriscaldamento soluzioni compresa la PBS, DMEM e mezzo di coltura e mantenendole a 37 ° C durante l&#39;intera procedura è consigliata. </li><li> Sotto un microscopio da dissezione, l&#39;utero deve essere segmentalmente sezionato con una leggera forbice operativi. Ciò si traduce in piccole aperture ai lati dell&#39;utero segmentato attraverso la quale una coppia di modificati (estremità smussate) pinzette microdissecting può essere inserito delicatamente per allargare l&#39;apertura. Ciò permette l&#39;esposizione del decidua placentare, che può poi essere rimosso strappando delicatamente con una pinzetta microdissecting per esporre il sacco vitellino parietale (PYS) con membrana della Reichert. Utilizzando un bordo della pinzetta perforare delicatamente la membrana del Reichert insieme ai PYS e separare da the sottostante viscerale sacco vitellino (VYS) strato per esporre gli embrioni con VYS intatti. Il cono ectoplacental ei derivati ​​trophoectoderm possono essere rimossi sia con la decidua placentare o con membrana di Reichert. Si deve prestare attenzione per evitare la rottura del VYS come gli embrioni pop immediatamente. </li><li> Gli embrioni con VYS intatti dovrebbero essere trasferiti in una piastra Petri contenente il terreno di coltura riscaldata a 37 ° C con una pipetta di plastica trasferimento. Nota: Trasferimento a mezzo di coltura subito dopo la separazione dall&#39;utero aiuta per un migliore sviluppo dell&#39;embrione nella cultura. </li><li> Una piccola apertura dovrebbe essere effettuato nel sacco vitellino con un paio di pinzette microdissecting evitando principali vasi sanguigni. Un forte pinzetta può essere usato per fare l&#39;apertura forando delicatamente in una zona adiacente alla regione della testa. In alternativa, due paia di pinzette smussate possono essere utilizzati per tenere il sacco vitellino e delicatamente strappare a fare una piccola apertura.Poi allargare leggermente l&#39;apertura espandendo con la pinzetta a una dimensione appena sufficiente per adattarsi alla testa embrionale. La membrana amniotica che è strettamente avvolgendo l&#39;embrione dovrebbe essere tenuto delicatamente via dal corpo e strappata usando un paio di pinzette. La testa embrionale e poi dell&#39;intera embrione dovrebbero essere esteriorizzato delicatamente dal sacco vitellino mantenendo l&#39;integrità del sistema vascolare embrionale con quello del sacco vitellino 15. Nota: Eventuali danni alla vascolarizzazione sacco vitellino potenzialmente in grado di influenzare lo sviluppo dell&#39;embrione in coltura. Tali embrioni con vasi danneggiati non devono essere utilizzati per la coltura e possono essere utilizzati per mettere in scena gli embrioni che può essere successivamente scartati. </li><li> Criteri di stadiazione embrionali: esaminare gli embrioni sotto il microscopio da dissezione e di gruppo in base a criteri morfologici, tra cui corpo e la dimensione della testa, degli arti e la morfologia degli occhi e stage contando il numero di somite (s) per almeno due embrioni di ogni gruppo. &lt;strong&gt; Nota: Solitamente embrioni ottenuti dalle stesse differenze lettiera mostra di sviluppo in utero e si differenziano per le dimensioni del corpo, caratteristiche morfologiche e il numero di somiti. Tuttavia, abbiamo scoperto che gli embrioni raggruppati per i nostri criteri morfologici solitamente esposte numero somite simile (± 1). Per questo motivo, non è necessario contare somiti per ogni embrione come questo sarebbe ritardare il tempo per avviare la coltura. Nota: non utilizzare gli embrioni che sono stati utilizzati per contare i somiti per la cultura. Contare le somiti dopo aver avviato la coltura per altri embrioni per evitare il ritardo nell&#39;iniziare la cultura. Gli embrioni che sono stati ritardati alla cultura dopo la separazione dall&#39;utero di solito mostrano scarso sviluppo. </li><li> Trasferire gli embrioni immediatamente ad una piastra di Petri con coltura fresco medio riscaldato a 37 ° C e portarlo alla cappa cultura in cui gli embrioni devono ancora essere trasferiti ad una piastra di Petri sterile con culture supporti prima di metterle in bottiglie di coltura con terreno per iniziare la cultura. Nota: I trasferimenti multipli media per gli embrioni prima cultura aiuta a prevenire la contaminazione come le diverse fasi di prelievo e dissezione sono state eseguite sotto un microscopio da dissezione che non è stato installato nella cappa coltura. Nota: Quando la dimensione della cucciolata è di grandi dimensioni (&gt; 12 embrioni), processo la metà degli embrioni e avvia la cultura o metterli in un piatto con terreno di coltura e collocarlo in un incubatore CO 2 a 37 ° C. Quando gli embrioni sono stati lasciati fuori per periodi più lunghi (&gt; 35-40 min) abbiamo osservato il battito cardiaco a rallentare e questo influenzerà il successivo sviluppo nella cultura. </li></ol> 4. Coltura di embrioni di topo <ol><li> Aprire le bottiglie di coltura in autoclave nel cofano cultura e correttamente li etichetta. Trasferire 3 ml di terreno di coltura riscaldata a 37 ° C per ciascuna di tegli bottiglie e poi gli embrioni di topo devono essere trasferite delicatamente le bottiglie di coltura utilizzando sterili pipette di plastica. Le bottiglie di coltura devono poi essere tappate con i tappi di bottiglia in gomma che aiutano a tenere le bottiglie di coltura per il disco di laminazione nell&#39;apparato cultura. Nota: Le bottiglie di coltura con i media possono essere preparati e immessi sul disco rotolamento dell&#39;apparato cultura prima eutanasia topi. Questo riduce il tempo di trasferimento di embrioni in bottiglie di coltura. Nota: embrioni di topo possono essere coltivate singolarmente o come co-colture con due o tre embrioni nella stessa bottiglia cultura. </li><li> Le bottiglie di coltura devono essere effettuate asetticamente all&#39;apparecchio coltura a 37 ° C e strettamente agganciarli ai fori sul disco rotolamento con i tappi di gomma. Accendere il disco laminazione a ruotare ad una velocità costante di 35 giri al minuto (rpm), che consente il libero galleggiamento del embryos nei media e aiuta anche in cambio gas libero dal tessuto embrionale. Il gas dal cilindro collegato alla camera di coltura fluisce attraverso il disco di rotolamento e tappi di gomma nelle bottiglie di coltura. </li><li> Cultura gli embrioni per 16-40 ore e controllare regolarmente per il deflusso dei gas e la temperatura camera di coltura. Nota: la manipolazione degli embrioni Mouse in cultura: Lasciate che gli embrioni vengono adattate alle condizioni di coltura per almeno 30 min. Poi embrioni che eseguono male e mostra il battito cardiaco debole possono essere scartati e le restanti embrioni possono essere utilizzati per ulteriori studi di manipolazione. Manipolazioni Embrione come l&#39;elettroporazione 5,9,16, microiniezioni 18, perlina impianto 16, il trattamento farmacologico e le altre procedure possono essere eseguite in questo momento. Abbiamo eseguito con successo l&#39;impianto di affi-gel agarosio perle trattati con determinate molecole di segnalazione per studiare il loro ruolo nello sviluppo dell&#39;occhio presto. Gli embrioni dopomanipolazioni possono essere restituiti indietro in un mezzo fresco e proseguite nella cultura. </li><li> Sostituire i terreni di coltura totalmente con mezzi freschi a intervalli specifici dopo 9-10 ore e 18-19 ore di cultura in cui la cultura è stata continuata per 40 ore. Nota: Culture sostituzione supporto non può essere richiesta se la cultura viene fermato da 16-18 ore. </li><li> Misure di successo nella cultura: la sopravvivenza embrionali in coltura deve essere determinato dal battito cardiaco visibile e la circolazione del sangue nel corpo durante la crescita embrionale nella cultura dovrebbe essere valutata da aumento di dimensioni del corpo, il numero somite e sviluppo morfologico della testa, degli arti, cuore e gli occhi. </li><li> In utero sviluppato embrioni a E11.0 DPC (~ 40-41 s) e E12.0 DPC (~ 49-50 s) dovrebbe essere utilizzato come controllo per il confronto embrioni coltivati ​​per 16-18 ore e 38-40 ore, rispettivamente. </li><li> Lo sviluppo embrionale in diversi momenti durante la cultura e per a tappe utero può essere Captrato sotto dissezione microscopio. Software di imaging spot è stato utilizzato per catturare le immagini e successivamente elaborati utilizzando il software di elaborazione delle immagini. </li></ol>

<ol><li>Behesti, H., Holt, J. K., Sowden, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+level+of+BMP4+signaling+is+critical+for+the+regulation+of+distinct+T-box+gene+expression+domains+and+growth+along+the+dorso-ventral+axis+of+the+optic+cup%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The level of BMP4 signaling is critical for the regulation of distinct T-box gene expression domains and growth along the dorso-ventral axis of the optic cup.</a> BMC Dev. Biol. 6, 62 (2006).</li>
<li>Gray, J., Ross, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+tube+closure+in+mouse+whole+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Neural tube closure in mouse whole embryo culture.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li>
<li>Tam, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postimplantation+mouse+development%3A+whole+embryo+culture+and+micro-manipulation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Postimplantation mouse development: whole embryo culture and micro-manipulation.</a> Int. J. Dev. Biol. 42, 895-902 (1998).</li>
<li>Miura, S., Mishina, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-embryo+culture+of+E5.5+mouse+embryos%3A+development+to+the+gastrulation+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Whole-embryo culture of E5.5 mouse embryos: development to the gastrulation stage.</a> Genesis. 37, 38-43 (2003).</li>
<li>Osumi, N., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Gene transfer into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Methods. 24, 35-42 (2001).</li>
<li>Yokoo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+in+rodent+whole-embryo+culture+are+reprogrammed+to+contribute+to+kidney+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells in rodent whole-embryo culture are reprogrammed to contribute to kidney tissues.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 3296-3300 (2005).</li>
<li>Sadler, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+early+somite+mouse+embryos+during+organogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Culture of early somite mouse embryos during organogenesis.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 49, 17-25 (1979).</li>
<li>Kitchin, K. T., Ebron, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+development+of+rodent+whole+embryo+culture%3A+solvent+toxicity+and+water+insoluble+compound+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Further development of rodent whole embryo culture: solvent toxicity and water insoluble compound delivery system.</a> Toxicology. 30, 45-57 (1984).</li>
<li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Growth+Different%22%5BJournal%5D)">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Dev. Growth Different. 50, 485-497 (2008).</li>
<li>Cuthbertson, R. A., Beck, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postimplantation+whole+embryo+culture%3A+a+new+method+for+studying+ocular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Postimplantation whole embryo culture: a new method for studying ocular development.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 31, 1653-1656 (1990).</li>
<li>New, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+explanted+rat+embryos+in+circulating+medium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Development of explanted rat embryos in circulating medium.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 17, 513-525 (1967).</li>
<li>Chung, K. C., Park, J. H., Kim, C. H., Ahn, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor-alpha+and+phorbol+12-myristate+13-acetate+differentially+modulate+cytotoxic+effect+of+nitric+oxide+generated+by+serum+deprivation+in+neuronal+PC12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor-alpha and phorbol 12-myristate 13-acetate differentially modulate cytotoxic effect of nitric oxide generated by serum deprivation in neuronal PC12 cells.</a> J. Neurochem. 72, 1482-1488 (1999).</li>
<li>Sasaoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+a+functional+role+of+Shc+proteins+in+mitogenic+signaling+induced+by+insulin%2C+insulin-like+growth+factor-1%2C+and+epidermal+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Evidence for a functional role of Shc proteins in mitogenic signaling induced by insulin, insulin-like growth factor-1, and epidermal growth factor.</a> J. Biol. Chem. 269, 13689-13694 (1994).</li>
<li>Chotani, M. A., Mitra, S., Eid, A. H., Han, S. A., Flavahan, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+cAMP+signaling+pathways+differentially+regulate+alpha2C-adrenoceptor+expression%3A+role+in+serum+induction+in+human+arteriolar+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distinct cAMP signaling pathways differentially regulate alpha2C-adrenoceptor expression: role in serum induction in human arteriolar smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288, 69-76 (2005).</li>
<li>Moore-Scott, B. A., Gordon, J., Blackburn, C. C., Condie, B. G., Manley, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+serum-free+in+vitro+culture+technique+for+midgestation+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">New serum-free in vitro culture technique for midgestation mouse embryos.</a> Genesis. 35, 164-168 (2003).</li>
<li>Gordon, J., Moore, B. A., Blackburn, C. C., Manley, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum-Free+Culture+of+Mid-gestation+Mouse+Embryos%3A+A+Tool+for+the+Study+of+Endoderm-Derived+Organs%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Serum-Free Culture of Mid-gestation Mouse Embryos: A Tool for the Study of Endoderm-Derived Organs.</a> Methods Mol. Biol. 1092, 183-194 (2014).</li>
<li>New, D. A., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rotating+bottle+culture+method+with+continuous+replacement+of+the+gas+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Experientia%22%5BJournal%5D)">A rotating bottle culture method with continuous replacement of the gas phase.</a> Experientia. 35, 138-140 (1979).</li>
<li>Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+in+culture+of+rat+foetuses+explanted+at+12.5+and+13.5+days+of+gestation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Development in culture of rat foetuses explanted at 12.5 and 13.5 days of gestation.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 29, 473-483 (1973).</li>
<li>Zeeb, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+manipulation+of+blood+and+lymphatic+vascularization+in+ex+vivo-cultured+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Pharmacological manipulation of blood and lymphatic vascularization in ex vivo-cultured mouse embryos.</a> Nat. Protoc. 7, 1970-1982 (2012).</li>
<li>Wawersik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP7+acts+in+murine+lens+placode+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">BMP7 acts in murine lens placode development.</a> Dev. Biol. 207, 176-188 (1999).</li>
<li>Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large-scale+in+situ+screen+provides+molecular+evidence+for+the+induction+of+eye+anterior+segment+structures+by+the+developing+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens.</a> Dev. Biol. 231, 63-76 (2001).</li>
<li>Greenfield, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+lowers+Alzheimer+beta-amyloid+generation+by+stimulating+trans-Golgi+network+vesicle+biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Estrogen lowers Alzheimer beta-amyloid generation by stimulating trans-Golgi network vesicle biogenesis.</a> J. Biol. Chem. 277, 12128-12136 (2002).</li>
<li>Cheng, J., Dutra, A., Takesono, A., Garrett-Beal, L., Schwartzberg, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+generation+of+C57BL%2F6J+mouse+embryonic+stem+cells+in+a+defined+serum-free+media%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Improved generation of C57BL/6J mouse embryonic stem cells in a defined serum-free media.</a> Genesis. 39, 100-104 (2004).</li>
<li>Kim, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+reprogramming+of+human+neural+stem+cells+by+OCT4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct reprogramming of human neural stem cells by OCT4.</a> Nature. 461, 649-643 (2009).</li>
<li>Totonchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-+and+serum-free+establishment+and+expansion+of+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Feeder- and serum-free establishment and expansion of human induced pluripotent stem cells.</a> Int. J. Dev. Biol. 54, 877-886 (2010).</li>
</ol>

Noi non abbiamo interessi finanziari concorrenti.

Embrioni metà della gestazione topo fase sono state coltivate in un mezzo di coltura privo di siero in un&#39;atmosfera di 95% O 2/5% di CO 2 in un apparecchio di coltura bottiglia rotolamento a 37 ° C. Sviluppo embrionale ex utero è criticamente dipendente da molteplici fattori ad ogni passo durante la procedura dal momento in cui il utero è isolato dai topi sacrificati al completamento della coltura (Figura 1). Il fattore più importante che influenza lo sviluppo è il tem...

In vitro metodi colturali che utilizzano embrioni integrali sono adatti a studiare meccanismi di segnalazione coinvolti nella organogenesi embrionale che sono altrimenti di difficile accesso in utero. Embrioni integrali forniscono l&#39;integrità dei tessuti e un sostegno adeguato per le interazioni dei tessuti che sono cruciali per la tempestiva presenza di meccanismi di segnalazione essenziali per i diversi processi cellulari durante l&#39;organogenesi. Mentre intere culture embrione di fornire una piattaforma per una pletora di applicazioni come gli studi di trapianto, manipolazioni genetiche e biologiche, studi tallone di impianto, gli studi tossicologici, ecc., Sistemi di coltura di embrioni attualmente utilizzati sono prevalentemente a carico del siero per la corretta crescita e il mantenimento degli embrioni nella cultura 1-9. Il siero è stato utilizzato come uno dei principali componenti che vanno dal 10-100% dei terreni di coltura 6-8, 10, 11., Tuttavia, la composizione del siero non è ben definito e può differire da un animale all&#39;altro e ogni volta il siero viene raccolto. Mentre la preparazione del laboratorio di siero molto tempo e comporta procedure rigorose, siero procurato esibisce in commercio una notevole variabilità tra i diversi lotti e aumenta i costi sperimentali. In aggiunta a questi, il siero può contenere incognite, quali fattori di crescita, ormoni o altre proteine, che possono potenzialmente influenzare l&#39;esito di alcuni esperimenti, in particolare quelli che riguardano lo studio di molecole di segnalazione importanti nelle interazioni tissutali. Studi hanno dimostrato che l&#39;aggiunta di siero di cultura può potenzialmente alterare i livelli intracellulari di alcune molecole di segnalazione come adenosina monofosfato ciclico (cAMP) e proteine ​​coinvolte nella segnalazione mitogenico e phosphoinositide 3 (PI 3)-chinasi vie di segnalazione 12-14. Contrariamente a questi, un sistema esente da siero fornisce i vantaggi di ambiente antigene libero,astinenza da enzimi biologicamente attivi che possono alterare i processi cellulari e permette la coerenza tra esperimenti. Nel presente studio, abbiamo utilizzato un mezzo di coltura privo di siero preparato da integratori multimediali cellule staminali disponibili in commercio per cultura stadio intermedio di gravidanza embrioni interi in un&#39;atmosfera di 95% O 2/5% di CO 2 in un apparecchio di coltura bottiglia laminazione a 37 ° C 15,16. Embrioni di topo in coltura per 16 a 40 ore in queste condizioni definite esposti progressione in sviluppo morfologico delle strutture corporee e diversi embrionali quali il cuore, arti, cervello e occhi indicando adeguati livelli di proliferazione cellulare, la migrazione, la differenziazione e interazioni tissutali. Analisi molecolare dello sviluppo embrionale nella cultura di uno dei sistemi di organi complessi come l&#39;occhio rivelato lo sviluppo oculare essere coerente con quello osservato nel tessuto oculare in embryos sviluppo in utero (Kalaskar e Lauderdale, in preparazione). Così dimostriamo che gli embrioni di topo coltivate in fase metà della gestazione, mostrano una progressiva crescita e sviluppo morfologico paragonabile a quella osservata negli embrioni di sviluppo in utero.

<table><tbody><tr><td>KnockOut DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>10829-018</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut Siero di ricambio</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>N-2 Integratore</td><td>Invitrogen</td><td>17502-048</td><td>Stock: 100x</td></tr><tr><td>Albumina, da siero bovino</td><td>Sigma</td><td>A9418-50G</td><td>Stock: 100%</td></tr><tr><td>Antibiotico - Soluzione antimicotica</td><td>Cellgro</td><td>30-004-Cl</td><td>Stock: Penicillina (10.000 UI/ml); Streptomicina (10.000 &micro; g/ml; Amfotericina (250 &micro; g/ml)&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM&nbsp; &nbsp;</td><td>Cellgro</td><td>15-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Unità incubatrice di precisione</td><td>B.T.C. Engineering Milton Cambridge England</td><td>Id.No. 840-374</td><td></td></tr><tr><td>Bottiglie di vetro per unità rotante</td><td>B.T.C. Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gomma siliconica Cork</td><td>B.T.C. Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>95% O2/5% CO2 Cilindro</td><td>AirGas Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione Stemi SV11 Apo</td> Microscopio <td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stemi SV6 Incubatore</td><td>con</td> rivestimento d'acqua CO<td></td><td></td></tr><tr><td>2</td><td>Forma Scientific</td><td>Modello: 3110</td><td></td></tr><tr><td>Cappa di coltura</td><td>Nuaire Armadi di sicurezza biologica Classe II TipoA2</td><td>Modello: Nu-425-600</td><td></td></tr><tr><td>Bagno d'acqua</td><td>Fisher Scientific</td><td>IsoTemp205</td><td></td></tr><tr><td>Bilancia per centrifuga</td><td>Mettler Toledo</td><td>AG285</td><td></td></tr><tr><td>, 50 ml</td><td>Forbici operative Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>Light</td><td>Roboz</td><td>RS-6702</td><td></td></tr><tr><td>Forbici operative affilate&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>RS-6812</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per microdissezione, 4 in</td><td>Roboz</td><td>RS-5211</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per microdissezione - Hudson (cWALD), 4-3/4 in</td><td>Roboz</td><td>RS-5237</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette per microdissezione (5/45)</td><td>Roboz</td><td>RS-5005</td><td>modificato - Le estremità affilate sono state smussate</td></tr><tr><td>Pinzette per microdissezione (5)</td><td>Roboz</td><td>RS-5060</td><td>modificato - Le estremità affilate sono state rese smussate</td></tr><tr><td>Pinzette per microdissezione (55)</td><td>Roboz</td><td>RS-5063</td><td>Modificato - Le estremità affilate sono state realizzate smussate</td></tr><tr><td>Vassoio strumenti</td><td>Roboz</td><td>RT-1401S</td><td></td></tr><tr><td>Vassoio strumenti Coperchio</td><td>Roboz</td><td>RT-1401L</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri-100 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>087571Z</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri-60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>0875713A</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dish-35 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>0875711YZ</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di filtraggio ( 0,22 & micro; m Acetato di cellulosa)-150 ml</td> Sistema di filtraggio <td>431153</td><td></td><td>Corning</td></tr><tr><td>(0,22 & micro; m Acetato di cellulosa)-250 ml</td><td>Corning</td><td>430756</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di filtraggio (0,22 &; micro; m Acetato di cellulosa)-500 ml</td><td>Corning</td><td>430758</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-aid Pipettor</td><td>Drummond Scientific Co.</td><td>D57849</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica-10 ml</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica monouso-25 ml</td><td>Corning</td><td>4251</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta di trasferimento - 7,7 ml</td><td>Thermo Scientific</td><td>202-20S</td><td></td></tr></tbody></table>

embrionali di topo di sviluppo in un embrione di tutta la cultura di sistema privo di siero

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Embrioni metà della gestazione del mouse fase sono state coltivate utilizzando un mezzo di coltura privo di siero preparato da disponibili in commercio integratori multimediali cellule staminali in un sistema di coltura bottiglia di laminazione ossigenato. Embrioni di topo a E10.5 sono stati attentamente isolati dal dell&#39;utero con intatta sacco vitellino e, in un processo che coinvolge manovra chirurgica precisione gli embrioni sono stati gentilmente esteriorizzato dal sacco vitellino, pur mantenendo la continuità vascolare dell&#39;embrione con il sacco vitellino. Rispetto agli embrioni preparati con intatta sacco vitellino o con il sacco vitellino rimosso, questi embrioni esposti tasso di sopravvivenza superiore e progressione evolutiva quando coltivate in condizioni simili. Abbiamo dimostrato che questi embrioni di topo, quando coltivate in un mezzo definito in un&#39;atmosfera di 95% O 2/5% di CO 2 in un apparecchio di coltura bottiglia rotolamento a 37 ° C per 16-40 ore, mostrano crescita e sviluppo morfologico paragonabile a gli embrioni in via di sviluppo in utero. Crediamo thè il metodo sarà utile per gli investigatori che hanno bisogno di utilizzare tutta la cultura dell&#39;embrione per studiare le interazioni di segnalazione importanti nell&#39;organogenesi embrionale.

Sviluppo di embrioni di topo ex utero dipende da molteplici fattori a partire dal momento in cui l'utero è isolato dal corpo al tempo gli embrioni sono coltivate. Come illustrato nella Figura 1, la procedura prevede una serie di operazioni, in particolare, la separazione di utero gravido dal corpo (Figura 1A), l'isolamento degli embrioni con intatta sacco vitellino (Figura 1B), esteriorizzazione degli embrioni dal sacco vitellino ( Figura 1C) e...

Il siero utilizzato nelle culture embrione contiene componenti sconosciuti che possono influenzare l&#39;esito degli esperimenti soprattutto in studi che coinvolgono le interazioni di segnalazione. Qui abbiamo utilizzato un sistema di coltura ossigenato senza siero e dimostrare che embrioni di topo metà della gestazione in coltura per 16-40 ore esibiscono sviluppo morfologico paragonabile agli embrioni in via di sviluppo in utero.

Embrionali di topo di sviluppo in un embrione di tutta la cultura di sistema privo di siero

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di utilizzare un sistema di coltura ossigenato privo di siero per studiare e manipolare aspetti specifici dello sviluppo embrionale del topo. Ciò si ottiene isolando prima l'utero con gli embrioni del topo madre. Il secondo passo consiste nel separare gli embrioni con un sacco vitellino intatto dalla decidua placentare dopo la dissezione segmentale dell'utero.Successivamente, gli embrioni devono essere delicatamente esteriorizzati dal sacco vitellino mantenendo l'integrità della vascolarizzazione embrionale. Il passaggio finale consiste nel coltivare gli embrioni in un apparecchio di coltura in bottiglia ossigenato senza siero a 37 gradi Celsius per un determinato periodo di tempo. In definitiva, questo intero sistema di coltura embrionale, che supporta lo sviluppo di diverse strutture sia a livello morfologico che molecolare, può essere utilizzato per lo studio dello sviluppo di embrioni di topo utilizzando una varietà di tecniche.Questo metodo può rispondere a domande chiave nel campo della biologia dello sviluppo, come il ruolo di diversi meccanismi di segnalazione nella specificazione del solfato e nella morfogenesi tissutale nell'embrione di mammifero in via di sviluppo. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto l'isolamento degli embrioni con un sacco vitellino intatto e le successive fasi di izzazione o qualsiasi danno difficile da apprendere al sistema vascolare embrionale o al sistema vascolare OSAC possono influenzare lo sviluppo dell'embrione nella coltura. Per iniziare, disinfettare tutte le superfici di lavoro con alcol al 70% e spruzzare ogni oggetto prima di inserirlo nella cappa di coltura.Quando è pronto, preparare il terreno di coltura e tutti gli integratori necessari per la procedura Innanzitutto, aggiungere la polvere di albumina al DMEM knockout e mescolare accuratamente fino a completa dissoluzione. Quindi, aggiungi l'integratore N due, KSR, e gli antibiotici mescolano accuratamente e filtrano sterilizzando. Conservare il terreno in provette coniche da 50 millilitri a quattro gradi Celsius fino al momento dell'uso Prima di iniziare la dissezione, preriscaldare le soluzioni necessarie a 37 gradi Celsius e mantenerle calde durante la procedura.A questo punto, anche le bottiglie di coltura devono essere preparate e poste nell'apparato di coltura per pregassare e mantenerle a 37 gradi Celsius. Ciò consentirà anche di risparmiare tempo nel trasferimento degli embrioni in un secondo momento. Per iniziare, posiziona l'animale soppresso su una superficie di lavoro sterile e spruzza la superficie addominale ventrale con etanolo.Per evitare che i peli si attacchino agli strumenti, aprire la cavità addominale per individuare l'utero. Sollevare l'utero con una pinza e utilizzare delle forbici da lavoro leggere per tagliare il corpo uterino e la punta delle corna uterine. Per separarlo rapidamente, sciacquare l'intero utero in PBS caldo per rimuovere il sangue e metterlo immediatamente in una capsula di Petri riempita con DMEM caldo.Sterilizzare gli strumenti con etanolo al 70% Prima di procedere al microscopio da dissezione, sezionare segmentalmente l'utero con forbici da manovra leggere per produrre piccole aperture su entrambi i lati. Inserire delicatamente un paio di micro pinzette da dissezione smussate per allargare l'apertura con la placenta decidua esposta. Strappalo delicatamente con un paio di micro pinzette da dissezione per esporre il sacco vitellino parietale con la membrana del riker.Usa un bordo delle pinzette per perforare delicatamente entrambi e separarli dal sacco vitellino viscerale sottostante per esporre gli embrioni embrioni. Con le sacche visciali intatte, le sacche vitellino devono essere trasferite immediatamente in un terreno di coltura caldo dopo la separazione dall'utero. Per favorire lo sviluppo dell'embrione in coltura, praticare una piccola apertura nel sacco vitellino con un paio di pinzette affilate perforando delicatamente un'area adiacente alla regione della testa, facendo attenzione a evitare i principali vasi sanguigni.In alternativa, è possibile utilizzare due paia di pinzette smussate per tenere il sacco vitellino e strappare delicatamente per creare una piccola apertura. Espandi l'apertura con le pinzette a una dimensione sufficiente per adattarsi alla testa embrionale. Tenere la membrana amniotica, avvolgendo delicatamente l'embrione lontano dal corpo e strapparlo con un paio di pinzette, la testa embrionale, e successivamente l'intero embrione dovrebbe essere delicatamente esteriorizzato dal sacco vitellino mantenendo l'integrità della vascolarizzazione embrionale.Qualsiasi danno al sistema vascolare del sacco vitellino può influire sullo sviluppo e tali embrioni non devono essere utilizzati per la coltura. Successivamente, esamina gli embrioni e raggruppali in base a criteri morfologici, tra cui le dimensioni del corpo e della testa, la morfologia degli arti e degli occhi. Mettili in scena contando il numero di somiti.Trasferire immediatamente gli embrioni in una piastra di Petri con terreno di coltura fresco e caldo e portarla nella cappa di coltura dove gli embrioni devono essere nuovamente trasferiti in una piastra di Petri Con i terreni di coltura sterili che lavorano nella cappa di coltura, utilizzare una pipetta di plastica sterile per inserire un embrione di topo in ogni flacone preparato in precedenza. Quindi, portare le bottiglie di coltura in modo asettico all'apparato di coltura. Fissarli al disco rotante e attivare la rotazione.Ciò consente agli embrioni di fluttuare liberamente nel terreno e aiuta anche il libero scambio di gas. Il gas fluisce da un cilindro vicino nella camera e poi nelle bottiglie attraverso la coltura di sughero di gomma. Gli embrioni per 16-40 ore e controllano regolarmente il deflusso del gas e la temperatura della camera di coltura.I terreni di coltura devono essere completamente sostituiti con terreni nuovi a intervalli di tempo specifici. È meglio lasciare che gli embrioni si adattino alle condizioni di coltura per almeno 30 minuti prima di eseguire qualsiasi manipolazione: gli embrioni che si comportano male e mostrano battiti cardiaci deboli possono essere scartati e gli embrioni rimanenti che mostrano un buon battito cardiaco possono essere utilizzati per ulteriori studi. Queste immagini dimostrano che gli embrioni in coltura si replicano nello sviluppo in utero.Circa il 58% degli embrioni in coltura presenta uno sviluppo paragonabile a quello degli embrioni sviluppati in utero. Uno sviluppo intermedio si osserva in circa il 28% degli embrioni C e il 14% degli embrioni mostra uno scarso sviluppo nella coltura D. Le differenze di sviluppo si verificano quando gli embrioni di topo sono embrioni in co-coltura che appaiono simili all'inizio della co-coltura A e B mostrano differenze nel loro sviluppo embrionale. Dopo 16 ore, A e B Once padroneggiano, questa tecnica può essere eseguita in 25-30 minuti per una dimensione successiva di 10-12 embrioni.Abbiamo scoperto che questo sistema di coltura embrionale è un'aggiunta preziosa ai nostri studi in vivo sullo sviluppo embrionale.

mouse-embryonic-development-serum-free-whole-embryo-culture

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Questo video dimostra nuova cultura, un metodo con cui sono coltivati ​​embrioni di pollo al di fuori l'uovo per un massimo di 24 ore. Questo metodo permette di studiare lo sviluppo precoce (stria primitiva a 14 som.), Un periodo corrispondente a E7-9 nel topo. Le applicazioni di questa tecnica sono elettroporazione, ibridazione in situ e immunoistochimica.

Metodo per la Cultura di Chick primi embrioni ex vivo (Nuova Cultura)

In questo articolo presentiamo una metodologia semplice per permettere a lungo...

Un Ex-ovo Sistema di embrioni di pollo Cultura Adatto per applicazioni di imaging e Microchirurgia

Un metodo che consente la manipolazione diretta farmacologica di embrioni di topo durante neurulazione che aggira il metabolismo materno è descritto. La tecnica può essere adattata per studiare diversi aspetti della neurulazione variando il punto di tempo e agente farmacologico.

La chiusura del tubo neurale in Cultura embrione di topo intero

La coltura di embrioni interi di mammiferi (WEC) è ampiamente utilizzata in teratologia e biologia dello sviluppo. Il siero di ratto immediatamente centrifugato è comunemente fornito come terreno sia per la WEC di topo che di ratto. In questo video, dimostriamo il nostro protocollo standard per la preparazione di siero di ratto di alta qualità adatto alla WEC dei mammiferi.

Preparazione di Rat Siero Adatto per mammiferi tutta la cultura Embrione

Questo protocollo descrive in dettaglio il metodo per generare progenitori neurali da cellule staminali embrionali utilizzando un metodo monostrato privo di siero. Questi progenitori possono essere utilizzati per derivare tipi di cellule neurali mature o per studiare il processo di specificazione neurale e sono suscettibili di ridimensionamento in formato multipozzetto per lo screening dei composti.

Differenziamento neurale delle cellule staminali embrionali di topo in siero privo monostrato Cultura

Questo protocollo fornisce un metodo per la raccolta di cellule staminali embrionali di topo (Mesc) medio -conditioned (Mesc-CM) derivato dal siero (siero fetale bovino, FBS) - e di alimentazione (fibroblasti embrionali di topo, MEF) Condizioni senza glutine per una cella approccio-free. Può essere applicabile per il trattamento di invecchiamento e malattie associate invecchiamento.

Raccolta di di siero e senza alimentatore staminali embrionali di topo medio-Cell condizionata per un approccio libero-Cell

Qui, presentiamo un organotipiche coltura protocollo per crescere organi embrionali di pollo in vitro. Utilizzando questo metodo, lo sviluppo del tessuto embrionale pollo può essere studiato, pur mantenendo un elevato grado di controllo dell'ambiente di cultura.

Metodo di coltura organotypic per studiare lo sviluppo dei tessuti embrionali di pollo

Una piattaforma potenziata per la coltura di embrioni interi consente uno sviluppo continuo e robusto in ex utero di embrioni di topo post-impianto per un massimo di sei giorni, dalle fasi di pre-costruzione fino all'organogenesi avanzata. In questo protocollo, descriviamo in dettaglio la procedura standard per la coltura embrionale di successo utilizzando piastre statiche e sistemi di bottiglie rotanti.

Ex Utero Coltura di embrioni di topo dalla pregastrulazione all'organogenesi avanzata

Presentiamo un protocollo dettagliato per la coltura e l'imaging di embrioni di topo che consente l'imaging 3D + tempo delle cellule progenitrici cardiache. Questo video-toolkit affronta le competenze chiave necessarie per immagini live di successo altrimenti difficili da acquisire da pubblicazioni di solo testo.

Imaging dal vivo dei primi progenitori cardiaci nell'embrione di topo

Questo protocollo descrive le metodologie per stabilire un modello di impianto embrionale in vitro semplice ed efficiente per valutare le molecole rilevanti che influenzano il processo di impianto dell'embrione.

Istituzione di un modello di impianto embrionale in vitro

Questo protocollo descrive procedure per la maturazione in vitro degli ovociti di topo, la fecondazione in vitro e la successiva coltura embrionale fino allo stadio di blastocisti.

Maturazione in vitro, fecondazione e coltura degli embrioni pre-impianto di ovociti di topo

Impara a coltivare embrioni di topo in un sistema privo di siero ossigenato per studiare lo sviluppo embrionale. Questo metodo permette di manipolare lo sviluppo mantenendo la vascolarità intatta.

Embrionali di topo di sviluppo in un embrione di tutta la cultura di sistema privo di siero

Esplora altri video