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DOI: 10.3791/50803-v
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This study explores a serum-free oxygenated culture system for mouse embryos, demonstrating that mid-gestation embryos can develop morphologically similar to in utero conditions. The method allows for the manipulation of embryonic development while avoiding unknown serum components.
Il siero utilizzato nelle culture embrione contiene componenti sconosciuti che possono influenzare l'esito degli esperimenti soprattutto in studi che coinvolgono le interazioni di segnalazione. Qui abbiamo utilizzato un sistema di coltura ossigenato senza siero e dimostrare che embrioni di topo metà della gestazione in coltura per 16-40 ore esibiscono sviluppo morfologico paragonabile agli embrioni in via di sviluppo in utero.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di utilizzare un sistema di coltura ossigenato privo di siero per studiare e manipolare aspetti specifici dello sviluppo embrionale del topo. Ciò si ottiene isolando prima l'utero con gli embrioni del topo madre. Il secondo passo consiste nel separare gli embrioni con un sacco vitellino intatto dalla decidua placentare dopo la dissezione segmentale dell'utero.
Successivamente, gli embrioni devono essere delicatamente esteriorizzati dal sacco vitellino mantenendo l'integrità della vascolarizzazione embrionale. Il passaggio finale consiste nel coltivare gli embrioni in un apparecchio di coltura in bottiglia ossigenato senza siero a 37 gradi Celsius per un determinato periodo di tempo. In definitiva, questo intero sistema di coltura embrionale, che supporta lo sviluppo di diverse strutture sia a livello morfologico che molecolare, può essere utilizzato per lo studio dello sviluppo di embrioni di topo utilizzando una varietà di tecniche.
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