Drosophila Manutenzione

Il successo della ricerca sulla Drosophila melanogaster dipende dalla corretta manutenzione e allevamento di questo prezioso organismo modello. Il seguente video discuterà i passaggi necessari necessari per fornire una corretta alimentazione, alloggio e manipolazione della mosca.

Sebbene comunemente ciò sia conosciuto come il moscerino della frutta, Drosophila melanogaster in realtà sussiste sui microrganismi, come il lievito, che crescono sulla fermentazione della frutta. In laboratorio, la dieta della mosca viene modificata per scopi pratici. Sono disponibili diverse ricette, tutte contengono i componenti essenziali: zucchero e lievito. La seguente ricetta proviene dall’Università dell’Indiana a Bloomington, famosa per la sua vasta varietà di stock di mosche. Consiste di: acqua sterile, lievito, farina di soia, farina di mais gialla, agar per consistenza, sciroppo di mais e acido propionico per inibire la muffa e la crescita batterica. Questi ingredienti vengono combinati, riscaldati, mescolati e quindi distribuiti in flaconcini di plastica utilizzando una pompa. Dopo essere stati riempiti, i flaconcini vengono tappati con un tappo di cotone, avvolti e raffreddati a 4 °C. Una volta solidificato, il cibo viene sterilizzato tramite autoclave.

Ora che abbiamo imparato un po ‘su cosa mangiano le mosche, diamo un’occhiata a dove vivono e come vengono gestite.

Una varietà di contenitori viene utilizzata per ospitare le mosche. Le fiale sono utilizzate per la manutenzione delle mosche e contengono in modo ottimale 50-100 adulti. Le bottiglie sono utilizzate per culture più grandi e ospitano 300-600 mosche adulte. Gli incubatori controllano l’ambiente e sono in grado di contenere centinaia di fiale e bottiglie. Le normali condizioni di conservazione per le mosche sono 25 °C e 60-65% di umidità relativa.

Quando si lavora con le mosche, è importante praticare un’etichettatura e una documentazione adeguate e mantenere un ambiente pulito per mantenere l’integrità delle linee di volo e degli esperimenti. Un contenitore deve essere cambiato quando circa la metà delle pupe si è chiusa o ha lasciato l’involucro pupale. Gli involucri appariranno chiari.

A proposito, lo stadio pupale si verifica tra gli stadi larvale e adulto, ed è il momento in cui le larve incubano e si sviluppano in un adulto. Per identificare gli involucri pupali come chiari, tenere il contenitore fino a una fonte di luce e ispezionare la pupa.

Le mosche vengono trasferite in fiale con mezzi freschi – un nome di fantasia per il cibo volante – attraverso un processo noto come “mosche che girano”. Prima di lanciare le mosche, ispezionare il supporto per l’integrità. Le mosche non possono sopravvivere con cibo incrinato con secchezza o contaminato da muffe o batteri.

Per capovolgere le mosche, in primo luogo, toccare delicatamente la fiala della mosca sul bancone per far cadere le mosche dai lati della fiala. Quindi rimuovere rapidamente il tappo e invertire rapidamente le mosche dal vecchio contenitore in uno nuovo. Questo processo viene eseguito rapidamente, per evitare che le mosche fuoriesceno o vengano schiacciate dal tappo e per impedire alle mosche sciolte di entrare nella fiala durante il capovolgimento.

Mentre il lancio delle mosche è il metodo preferito per il trasferimento di massa di Drosophila, l’anestesia è necessaria per lo smistamento delle mosche. Due metodi di anestesia saranno discussi qui: il raffreddamento e l’uso di anidride carbonica. Per raffreddare le mosche mettere la coltura in un congelatore a -20 °C per 8-12 minuti. Quindi posiziona le mosche su uno spazio di lavoro refrigerato e piatto per la selezione. Le mosche possono anche essere anestetizzate usando il freddo raffreddandole direttamente su una superficie congelata.

L’anidride carbonica è un metodo preferito per l’anestesia perché non causa mortalità acuta nelle mosche o pericolo per il ricercatore. Il sistema di erogazione della CO2 è costituito da: un serbatoio di CO2; un tubo collegato a un ago, per anestetizzare le mosche in fiale e flaconi; e un tubo collegato a una piastra di CO2 per l’analisi al microscopio.

Per anestetizzare le mosche, inserire l’ago co2 attraverso il tappo. In alternativa, toccare il contenitore su una superficie, rimuovere l’arresto e invertire rapidamente le mosche su una piastra di CO2, mantenendo un sigillo chiuso fino a quando le mosche non sono immobili. Usando un pennello o una pinca, sposta delicatamente le mosche nel nuovo contenitore.

Per scartare le mosche indesiderate, scaricale in un obitorio di mosche, che consiste in una grande bottiglia piena di isopropanolo o etanolo e olio minerale sormontato da un imbuto.

Ora che abbiamo visto come le mosche vengono mantenute e gestite in laboratorio, diamo un’occhiata a come le condizioni di alloggiamento e alimentazione vengono modificate per diversi esperimenti.

Alcuni esperimenti richiedono un alloggiamento alternativo per contenere una maggiore quantità di mosche.

In questo esperimento, il ricercatore utilizza una gabbia di popolazione di mosche per raccogliere una grande quantità di embrioni. Una gabbia per la popolazione di mosche è una scatola di plastica chiara in grado di contenere migliaia di mosche. Il ricercatore rilascia le mosche desiderate da diverse bottiglie nella gabbia della popolazione di mosche, quindi posiziona piastre di agar nella gabbia per raccogliere gli embrioni.

Alcuni esperimenti richiedono la manipolazione della dieta della mosca.

In questo esperimento, il ricercatore vuole osservare la risposta di fuga delle mosche transgeniche che esprimono un canale ionico attivato dalla luce nei neuroni che regolano la risposta di fuga delle mosche. La dieta Drosophila è integrata con “all-trans-retinal”, che è un cofattore per questo canale e gli consente di funzionare. Questo viene fatto sciogliendo il cibo e aggiungendo il reagente. La mosca viene quindi esposta alla luce blu che attiva il canale e induce la risposta di fuga e il tempo impiegato per volare misurato.

Una varietà di condizioni di alloggiamento e movimentazione può essere manipolata per la sperimentazione.

In questo esperimento, viene creata un’elaborata “torre di potere” per studiare gli effetti dell’esercizio sulla Drosophila. La torre di potenza è una macchina che sale e scende continuamente, sfruttando la risposta naturale della mosca per muoversi verso l’alto, contro la gravità, che è nota come “geotaxi negativa”.

Le prestazioni delle mosche esercitate nella torre di potenza vengono misurate utilizzando un test rapid iterativo negativo Geotaxis, o test RING in breve. Le mosche in fiale vuote sono poste davanti a una telecamera. Le fiale vengono toccate e le distanze scalate vengono registrate. Questo esperimento mostra che rispetto a un gruppo di controllo l’esercizio ha avuto un impatto positivo sull’attività nel tempo.

Questo video Di JoVE ha coperto la manutenzione e l’allevamento di Drosophila melanogaster. Dopo aver visto questo video dovresti essere in grado di preparare supporti per il cibo delle mosche, identificare correttamente l’alloggiamento appropriato, capovolgere le mosche ed eseguire semplici esperimenti. Grazie per l’attenzione!