Name: Valutare Miogenica risposta e Vasoactivity nelle arterie di resistenza mesenteriche Utilizzando Myography Pressione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Impara a valutare la risposta miogenica e la vasoattività nelle arterie mesenteriche di resistenza utilizzando la miografia a pressione. Questo metodo consente di studiare il tono vascolare indotto dalla pressione.

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Sandeep Khurana è supportato dal NIH (K08DKO81479). Vikrant Rachakonda è supportato da (T32DK067872).

Gli esempi qui riportati sono da esperimenti approvati dal IACUC presso la Georgia Regents University - Protocollo n: # 2011-0408 1. Preparazione dei reagenti <ol><li> Preparare la soluzione dissezione magazzino: per 500 ml di soluzione madre dissezione (5x), sciogliere 21,18 g NaCl, 0,875 g KCl, 0,739 g MgSO4, 1.049 g MOPS e 0.019 g di EDTA in 450 ml di acqua Milli-Q. Regolare il pH a 7,3-7,4 con 1 N NaOH. Portare al volume di 500 ml con acqua Milli-Q. Soluzione madre può essere conservata fino a 7-10 giorni. Vedi Tabella 1 per un elenco delle sostanze chimiche e dei loro fornitori. Vedere la Tabella 2 per la concentrazione in mm. </li><li> Preparare la soluzione dissezione di lavoro: Preparare la soluzione dissezione di lavoro fresco ogni giorno. Per 100 ml di soluzione di lavoro, sciogliere 0,091 g di glucosio, 0,016 g NaH 2 PO 4 e 0,022 g di sodio piruvato in 79,8 ml di acqua Milli-Q. Aggiungere la soluzione 0,2 dissezione ml 1M CaCl 2 e 20 ml di brodo di portare volume a 100 ml. </li><li> Preparare soluzione salina fisiologica (PSS): Per preparare 1.000 ml PSS, sciogliere 0,365 g KCl, 6,545 g di NaCl, 0,296 g MgSO4, 0,163 g KH 2 PO 4, 2.072 g di glucosio, 2.184 g NaHCO 3 e 2.383 g HEPES a 950 ml di acqua Milli-Q. Regolare il pH a 7,3-7,4 con 1 N NaOH. Portare al volume di 1000 ml con acqua Milli-Q. Rimuovere 2 ml di soluzione e sostituirlo con 2 ml di 1 M CaCl 2. (Fresh PSS deve essere preparato al giorno) </li><li> Preparare calcio (Ca 2+) PSS libero: per 100 ml PSS senza Ca 2+, sciogliere 0,036 g KCl, 0,654 g di NaCl, 0,029 g MgSO4, 0.016 g KH 2 PO 4, 0,207 g di glucosio, 0.218 g NaHCO 3, 0.238 g HEPES, 0,015 g EGTA e 0,0026 g di sodio nitroprussiato (SNP) in 95 ml di acqua Milli-Q. Regolare il pH a 7,3-7,4 con 1 N NaOH. Portare al volume di 100 ml con acqua Milli-Q. </li></ol> 2. Preparazione di vetro cannule <ol><li> Pull pipette di vetroper generare i 100-150 micron cannule capovolti con un estrattore pipetta secondo le linee guida del produttore. </li><li> Bevel le punte della cannula di vetro con un beveller microelettrodo, fuoco li lucidare e piegare le punte della cannula di vetro da ~ 45 ° con una sonda di riscaldamento. </li><li> Caricare le cannule nel supporto micropipetta e fissare il supporto micropipetta al camera di perfusione. </li></ol> 3. Preparazione di perfusione Camera <ol><li> Sciacquare camera di perfusione con acqua Milli-Q seguita da dissezione soluzione per 5 minuti ciascuno. Caricare la camera con 2 ml di soluzione di dissezione. </li><li> Soluzione dissezione di aspirazione attraverso cannula utilizzando siringa da 10 ml e compilare accuratamente l&#39;intera cannula e il tubo attaccato senza bolle. Applicare delicatamente aspirazione per impedire la produzione di bolle. </li><li> Preparare due punti di sutura con un mezzo nodo ciascuno con pinze smussato. Poiché suture monofilamento di nylon oftalmiche (10-0, 0,2 metrico) vengono utilizzati per preparare i nodi che sono solo1-2 mm di diametro, può essere necessario microscopio dissezione. </li><li> Visualizzare al microscopio dissezione, usare il forcipe dissezione per caricare entrambe le cannule con nodi di sutura parzialmente chiuse un po &#39;lontano dalla punta. In seguito questi nodi verranno fatti scorrere con attenzione sulle estremità arteriose cannulate e chiuso completamente. </li></ol> 4. Raccolta di mesenterica Arcade di ratti Sprague-Dawley <ol><li> Cercate approvazione dell&#39;Ordinario del luogo Istituzionale Cura e Comitato uso degli animali (IACUC) prima di effettuare questi esperimenti. Animali Casa nella struttura animale con temperatura controllata e l&#39;illuminazione e consentire il libero accesso all&#39;acqua e un chow roditore commerciale. </li><li> Anestetizzare topi mediante iniezione intraperitoneale di ketamina (80 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg). Confermare profonda anestesia da punta pinch e se amministra necessario anestetici supplementari. </li><li> Dopo aver confermato l&#39;anestesia chirurgica, eutanasia dell&#39;animale per decapitazione. Seguire le linee guida AAALAC per utilizing metodi appropriati per l&#39;eutanasia degli animali. </li><li> Utilizzare una forbice dissezione e una pinza per eseguire una laparotomia linea mediana da bacino a sterno. Questo viene fatto in due fasi: in primo luogo, incidere la pelle e il secondo, incise lo strato muscolare sottostante. Bisogna fare attenzione a non danneggiare gli organi intra-addominali. </li><li> Tagliare l&#39;estremità prossimale dell&#39;intestino pressi piloro e l&#39;estremità distale vicino alla giunzione ileo-cecale. Tie entrambe le estremità separatamente per evitare perdite di chimo e feci evitando così la contaminazione di soluzione di balneazione extracellulare. Incidere il mesentere alla sua base, vicino al alimentazione vascolare cioè, arteria mesenterica superiore e trasferire l&#39;intero piccolo letto mesenterica intestinale per un bicchiere da 50 ml contenente soluzione di dissezione ghiacciata. </li><li> Lasciare che il tessuto raccolto per rimanere in ghiaccio soluzione dissezione a freddo per 5 minuti e risciacquare con soluzione dissezione fresco per sbarazzarsi di sangue. </li></ol> 5. Isolamento e Incannulazione di 4 ° </sup&gt; Ordine mesenterica <ol><li> Definire con precisione l&#39;estremità prossimale dell&#39;intestino sul lato destro in un piatto Sylgard rivestite. Estendere l&#39;intestino rimanente in un percorso antiorario, pinning segmento giù per diffondere mesentere ed esponendo i vasi sanguigni (Figura 1). Nota: isolare segmenti arteriosi a temperatura ambiente. In caso contrario, abbiamo posto l&#39;arcata mesenterica contenente piatto sul ghiaccio. Alcuni laboratori, comprese quelle presso il nostro istituto, utilizzano refrigeratori di sezionare le arterie a 4 ° C. </li><li> Al microscopio zoom stereo sezionare fuori 3 ° e 4 ° ordine piccole arterie mesenteriche (~ 260 micron) parallelo al piccolo intestino utilizzando piccole forbici. Prima sezionare via tutto il grasso di copertura. Poi sezionare fuori la vena e isolare l&#39;arteria con punto di diramazione a forma di V. Fare attenzione a non forare il segmento selezionato. Avviare sviscerare il grasso nei pressi di una filiale per 2 ° e trovare il modo di 3 ° e 4 ° ordvasi er. <ol><li> Nota: arterie e le vene si distinguono in base alla loro spessore della parete - parete arteriosa è più spessa di vena di. Inoltre, quando adiacente il tessuto connettivo è tirato delicatamente perpendicolarmente alla navi, vene crollo prontamente mentre le arterie non lo fanno. Poiché arterie con diametro del lume &lt;400 micron sono maggiori siti di resistenza vascolare sistemica, per questo protocollo abbiamo usato 4 ° ordine ratto arterie mesenteriche (lume diametro &lt;300 micron). </li></ol></li><li> Isolare una sezione 4-5 mm dell&#39;arteria parallelo al piccolo intestino. Visualizza tutte le 5 filiali ° ordine incorporamento in tenue e tagliarli un po &#39;lontano dall&#39;origine di rami e di preservare una porzione. Queste porzioni conservati di rami servono come possesso siti (con una pinza dissezione) per il trasferimento di segmenti arteriosi in una camera di perfusione e, successivamente, la loro guida incannulamento. </li><li> Poi tagliare i segmenti arteriosi facendo 2 incisioni distaleIl 5 ° rami ordine su ogni lato dell&#39;arteria e trasferirlo alla camera di perfusione (Figura 1C e legenda). </li><li> Cannulate una estremità dei vasi su uno dei micropipetta di vetro (diametro: 100-150 micron) con pinze dissezione tenendo le punte del segmento arterioso con una pinza per dissezione. Far scorrere il precedentemente caricato sutura parzialmente chiusa sull&#39;estremità cannulato e fissarlo. Nota: Estremità prossimale dell&#39;arteria può essere incannulata sulla cannula di vetro che è collegato al dispositivo di regolazione della pressione servocomandato per simulare in ambiente situ. </li><li> Fissare una soluzione dissezione caricata siringa da 10 ml al rubinetto collegato a questo cannula tale soluzione dissezione nel tubo di collegamento della cannula e rubinetto si fonde con quella nella siringa. Alzare delicatamente la siringa. La forza gravitazionale sulla soluzione rimuoverà il sangue vascolare intra dall&#39;estremità aperta del recipiente. Dopo aver rimosso il sangue intra-arteriosa, Chiudere il rubinetto. Nota: Alternativamente, collegare il rubinetto al regolatore di pressione, accenderlo e aumentare leggermente la pressione di 5-10 mm Hg per ottenere lo stesso risultato. </li><li> Tie la estremità distale dei vasi su una seconda cannula vetro portando lentamente l&#39;altro cannula il più vicino possibile alla fine slegato del segmento arterioso. Far scorrere il precedentemente caricato sutura parzialmente chiusa sull&#39;estremità cannulato e fissarlo. Bisogna fare attenzione a non tirare o tirare sui segmenti arteriosi. Assicurarsi che rubinetti collegati a entrambe le cannule sono chiusi. </li><li> Trasferire camera di perfusione alla fase di microscopio invertito dotato di registrazione video dal vivo. </li><li> Collegare il rubinetto della cannula legata all&#39;estremità prossimale del segmento arteriosa ad un dispositivo di regolazione della pressione servocomandato e assicurarsi che rubinetto collegato a altra cannula rimane chiuso per mantenere la pressione intraluminale stabile. </li><li> Quindi, collegare il tubo di vuoto alla bocca di aspirazione unnd la perfusione tubazione alla porta della camera di perfusione. Nota: la porta ago smussato viene utilizzato per l&#39;aspirazione e la porta smussata ago per perfusione. </li><li> Avviare perfusione del vaso con calda PSS attraverso riscaldatore singola soluzione linea (37 ° C, equilibrata con miscela di gas: 5% CO 2, 5% O 2 e 90% N per mantenere il pH neutro e un&#39;adeguata ossigenazione 17) a 2 ml / min usando una pompa peristaltica. Accendere il vuoto su pure. Inserire un termistore nella camera per controllare la temperatura in continuo. </li><li> Come la temperatura del PSS nella camera avvicina ~ 37 ° C (di solito entro 5 min), lentamente aumentare la pressione intraluminale da 20 a 100 mmHg e controllare vasi eventuali perdite. Questo viene fatto usando l&#39;impostazione automatica della pressione del regolatore di pressione. Eliminare le navi con perdita e sostituirlo con un altro segmento. I vasi con perdite non saranno in grado di mantenere la pressione. </li><li> Valutare il segmento arterioso per curve mantenendo la pressione a 100 mmHg.Utilizzando la vite leva, spostare la cannula per raddrizzare il segmento arterioso. Non più di allungare i segmenti arteriosi; l&#39;obiettivo è quello di simulare in vivo lunghezza segmento arterioso. </li><li> Ridurre la pressione a 70 mmHg (per imitare in pressione vivo nella galleria mesenterica 18) e permettere al segmento arterioso per stabilizzare e sviluppare il tono miogena. Le arterie possono essere sotto pressione variabile (40-70 mmHg) in base alla strategia sperimentale e letto vascolare. Una revisione precedentemente pubblicato fornisce un&#39;eccellente recensione di variabilità in MT in segmenti arteriosi provenienti da diversi distretti vascolari 8. </li></ol> 6. Misurazione del diametro arterioso <ol><li> Guarda le arterie a obiettivo 10X su un microscopio dotato di una fotocamera dispositivo video in bianco e nero ad accoppiamento di carica. Misurare il diametro luminale usando frame video grabber e il sistema di bordo di rilevamento in tempo reale. Un elenco delle attrezzature utilizzate sono riportate nella tabella 3. </li><li> Monitorare e registrare nave diameter continuamente. </li><li> Osservare per lo sviluppo di MT. Nota: Abbiamo osservato che nel ratto arterie di resistenza mesenteriche, a 70 mmHg, sviluppo di MT è caratterizzata da ~ 20% di diminuzione di diametro. MT varia secondo letto e animali vascolari specie. </li><li> Confermare la vitalità vascolare valutando vasocostrittori e vasodilatatori risposte a 1 micron fenilefrina (Phe) e 1 micron acetilcolina (ACh). </li><li> Al termine di ogni esperimento, determinare diametro passiva (PD) incubando arterie Ca 2+ -free PSS per 20 min. </li></ol> 7. Risposta Miogenica <ol><li> Ridurre la pressione a 20 mm Hg e consentire il diametro si stabilizzi. Aumentare la pressione intraluminale in passi incrementali (20, 40, 60, 80 e 100) e ad ogni passo pressione consentono arterie per raggiungere un diametro stabile (di solito entro 5 min). </li><li> Ridurre la pressione endoluminale a 20 mmHg e incubare il segmento arterioso in Ca 2 + -free PSS contenente 0.39 mMSNP mM EGTA e 0.1. Lasciare che il diametro delle arterie di stabilizzarsi (15 min). </li><li> Ripetere la risposta pressoria passo a Ca PSS 2 + -free contenente 0.39 mM EGTA e 0,1 SNP mm. </li></ol> 8. Interpretazione dei risultati e calcolo dei dati <ol><li> Calcolare la MT come differenza percentuale di diametro osservato per Ca 2+ -contenenti rispetto Ca 2+ -free PSS ad ogni pressione secondo la seguente formula: <img alt="Equazione 1" fo:src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1.jpg" /></li><li> Per arterie sottoposti vasomotricità diametro può essere calcolato facendo la media della fase di plateau per 1 min. Esprimere i dati raccolti come percento di relax massima (% PD) secondo la relazione:% Pd = 100 x [ΔD / PD]; ΔD è la differenza tra il diametro prima e dopo l&#39;aggiunta di qualsiasi composto sperimentale (es Phe); PD è diametro passivo (anche ildiametro massimo). </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno conflitti finanziari.

Passaggi critici, risoluzione dei problemi e modifiche In una preparazione tipica imbarcazione isobarica, l&#39;arteria viene pressurizzato a 70 mmHg tra due cannule di vetro perfusi con acqua calda (37 ° C) PSS. Dopo 30-45 min, arterie sviluppano MT, caratterizzato dalla riduzione spontanea di diametro che stabilizza in 20-30 min. Le arterie di resistenza dai vari distretti vascolari sviluppano MT variabile. Per esempio resistenza ratto arterie mesenteriche sviluppano MT ~ 25% di PD, mentre le...

Arterie piccola resistenza sono i principali determinanti di SVR e svolgono un ruolo importante nella fisiopatologia di molte malattie 1,2. Condizioni come il diabete 3, la gravidanza 4, ischemia-riperfusione 5, obesità e ipertensione 6,7 sono spesso associati con la funzione microvascolare alterata. Myography vascolare può fornire non solo importanti conoscenze cambiamenti nella funzione microvascolare in varie malattie, ma anche aiutare a identificare target terapeutici e di valutare l&#39;efficacia di composti vasoattivi. Funzione vascolare è stata studiata utilizzando isolate piccole arterie in condizioni di nave isometriche o isobariche 8. Descrizione dettagliata di myography isometrica è fornito altrove 9. Tuttavia ci sono differenze tra i dati ottenuti da isometrica contro preparazioni isobariche 10-12. Poiché preparazioni arteriosi pressurizzati permettono lo studio della funzione microvascolare in condizioni pressoché fisiologiche, larisultati ottenuti possono correlare meglio con il comportamento in vivo del letto vascolare 8,13. Nel 1902 Bayliss descrisse per primo l&#39;effetto della pressione transmurale del diametro vascolare 14. Si osserva in piccole arterie di resistenza di vari distretti vascolari di conigli, cani e gatti che una diminuzione della pressione è stata seguita da vasodilatazione, e un aumento della pressione è stata seguita da vasocostrizione. Questo fenomeno è noto come risposta miogenico. Bayliss e gli investigatori successivi hanno osservato che in condizioni isobariche arterie piccola resistenza sviluppano costrizione sostenuta chiamato MT 15,16. Sia risposta miogenica e MT possono essere valutati utilizzando myography pressione (PM) tecnica. PM viene utilizzato principalmente per determinare vasoactivity delle piccole arterie, vene e altre imbarcazioni. Oltre a valutare l&#39;effetto dei composti vasoattivi sul diametro vascolare, PM - come indica il nome - viene utilizzato per valutare intravascolare ch-mediata pressioneanges del diametro vascolare. Nel corso degli ultimi decenni i progressi nel software per computer, che ha migliorato la microscopia video e pipetta di vetro tirando, hanno reso PM più facile da eseguire. Tuttavia, la dissezione di segmenti intatti vitali di piccoli vasi sanguigni rimane noiosa e talvolta impegnativo. Qui descriviamo un protocollo dettagliato per studiare la risposta miogenico nelle piccole arterie di resistenza mesenteriche isolati da ratti.

<table><tr><tbody><td colspan="4">Chimico</td></tr><tr><td>Acetilcolina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6625</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di calcio (CaCl2)Sigma</td> <td>Aldrich</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucosio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>Glicole etilenico-bis(2-amminoetiletere)-N,N,N',N',N'-acido tetra acetico (EGTA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Acido etilendiammina tetraacetico (EDTA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3784</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di magnesio (MgSO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M5162</td><td></td></tr><tr><td>Fenilefrina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6126</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio (KCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio (KH2PO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio (NaHCO3 )</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (NaCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Idrossido di sodio (NaOH)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>Sodio nitroprussiato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>13451</td><td></td></tr><tr><td>Sodio fosfato monobasico monoidrato (NaH2PO4)Sigma</td> <td>Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>Sodio piruvato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8574</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Table 1.</td></tr><tr><td colspan="4"><table border="1"> <tbody> <tr> <td>Soluzione salina fisiologica (1.000 ml)</td> <td> mM</td> <td></td> </tr> <tr> <td>KCl</td> <td>4.9</td> <td>0.365 g</ td> </tr> <tr> <td>NaCl</td> <td>112</td> <td>6.545 g</td> </tr> <tr> <td>MgSO4.7H2O</td> <td>1.2</td> <td>0.296 g</td> </ tr> <tr> <td>KH2PO4</td> <td>1.2</td> <td>0.163 g</td> </tr> <tr> <td>Glucosio</td> <td>11.5</td> <td>2.072 g</td> </tr> <tr> <td>NaHCO3</td> <td>26</td> <td>2.184 g</td> </tr> <tr> <td>HEPES</td> <td>10</td> <td>2.383 g</td> </tr> <tr> <td>CaCl2 </td> <td>2</td> <td>2 ml (1M stock)</td> </tr> <tr> <td>Acqua deionizzata</td> <td></td> <td>998 ml</td> </tr> <tr> <td>Ca2+ soluzione salina fisiologica libera (100 ml)</ forte></td> <td><forte> mM</forte></td> <td></td> </tr> <tr> <td>KCl</td> <td>4.9</td> <td>0.036 g</td> </tr> <tr> <td>NaCl</td> <td>112</td> <td> 0,645 g</td> </tr> <tr> <td>MgSO4.7H2O</td> <td>1.2</td> <td>0.029 g</td> </tr> <tr> <td>KH2PO4</ td> <td>1,2</td> <td>0,016 g</td> </tr> <tr> <td>Glucosio</td> <td>11,5</td> <td>0,207 g</td> </tr> <tr> <td>NaHCO3</td> <td>26</td> <td> 0,218 g</td> </tr> <tr> <td>HEPES</td> <td>10</td> <td>0,238 g</td> </tr> <tr> <td>EGTA </td> <td>0,39</td> <td>0,015 g</td> </tr> <tr> <td>Nitroprussiato di sodio </td> <td>0,1</td> <td>0,0026 g</td> </tr> <tr> <td>Acqua deionizzata</td> <td></td> <td>100 ml</td> </tr> <tr> <td>Soluzione di dissezione, stock (500 ml)</td> <td> mM</td> <td></td> </tr> <tr> <td>NaCl</td> <td>145</td> <td>21.18 g</td> </tr> <tr> <td>KCl</td> <td>4.7</td> <td>0,875 g</td> </tr> <tr> <td>MgSO4</td> <td>1.2</td> <td>0.739 g</td> </tr> <tr> <td>MOPS</td> <td>2</td> <td>1.049 g</td> </tr> <tr> <td>EDTA</td> <td>0.02</td> <td>0.019 g</td> </tr> <tr> <td>Acqua deionizzata</td> <td></td> <td>500 ml</td> </tr> <tr> <td>Soluzione di dissezione di lavoro (100 ml)</td> <td> mM</td> <td></td> </tr> <tr> <td>Soluzione di dissezione stock</td> <td>20 ml</td> </tr> <tr> <td>Glucosio</td> <td>1,2</td> <td>0,091 g</td> </tr> < tr> <td>NaH2PO4</td> <td>5</td> <td>0.016 g</td> </tr> <tr> <td>Piruvato di sodio</td> <td>2</td> <td>0.022 g</td> </tr> <tr> < td>CaCl2</td> <td>2</td> <td>0.2 ml (1M stock)</td> </tr> <tr> <td>Acqua deionizzata</td> <td></td> <td>79.8 ml</td> </tr> </tbody> </table></td></tr><tr><td colspan="4">Table 2. Composizione delle soluzioni esperimetiche</td></tr><td colspan="4">EquipmentCCD Telecamera monocromatica L'imaging Sorgente DMK 21AU04 Riscaldatore di soluzione in linea singolo Warner Instruments 64-0102 Termistore Warner Instruments 64-0108 Doppio regolatore di temperatura automatico Warner Instruments <tr></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>Estrattore per micropipette fiammante/marrone</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Interfaccia del sistema di fluorescenza</td><td>IonOptix</td><td>modello FSI-700</td><td></td></tr><tr><td>Pinze e forbici </td><td>World Precision Instruments Ion Wizard-Core</td><td></td><td></td></tr><tr><td>e analisi</td><td>IonOptix</td><td>Ion Wizard 6.0</td><td></td></tr><tr><td>Tubi da laboratorio</td><td>Silastic</td><td>508-005</td><td></td></tr><tr><td>Maschio Sprague Dawley ratto</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Master flex console drive</td><td>Cole-parmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Plus Ultrapure Water System</td><td>Millipore</td><td>ZD5211584</td><td></td></tr><tr><td>Sutura oftalmica in nylon monofilamento </td><td>Ethicon</td><td>9007G</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio per fotometria e dimensionamento</td><td>Motic</td><td>AE31</td><td></td></tr><tr><td>Servo Controller di pressione con pompa peristaltica e trasduttore di pressione</td> Sistemi <td>viventi Strumentazione</td><td>PS-200</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Nikon Instruments Inc</td><td>SMZ660</td><td></td></tr><tr><td>Camera del vaso</td> Sistemi <td>viventi Strumentazione</td><td>CH-1</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di dissezione</td><td>Sistemi viventi Strumentazione</td><td>DD-90-S</td><td></td></tr><tr><td>Capillari in vetro a parete sottile</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW120-6</td><td></td></tr><tr><td>Microforge</td><td>Stoelting</td><td>51550</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Table 3.</td></tr></tbody></table>

valutare miogenica risposta e vasoactivity nelle arterie di resistenza mesenteriche utilizzando myography pressione

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Le piccole arterie di resistenza restringono e si dilatano rispettivamente in risposta ad un aumento o diminuzione della pressione endoluminale; questo fenomeno noto come risposta miogenico è un regolatore chiave di flusso ematico locale. In condizioni isobariche piccole arterie di resistenza sviluppano sostenuti costrizione noto come tono miogenico (MT), che è un importante determinante di resistenze vascolari sistemiche (SVR). Quindi, ex vivo preparazioni pressione di piccole arterie di resistenza sono i principali strumenti per studiare la funzione microvascolare negli stati vicini-fisiologico. Per ottenere questo, un segmento intatto fresco isolato di una piccola arteria resistenza (diametro ~ 260 micron) è montata su due cannule piccolo vetro e pressurizzato. Queste preparazioni arteriose conservano più a caratteristiche vivo e la valutazione permesso del tono vascolare in tempo reale. Qui forniamo un protocollo dettagliato per la valutazione vasoactivity in pressurizzati piccole arterie resistenza mesenterici di ratti; queste arterie sviluppanovasocostrizione sostenuta - circa il 25% del diametro massimo - quando sotto pressione a 70 mmHg. Queste preparazioni arteriose possono essere utilizzati per studiare l&#39;effetto dei composti in fase di sperimentazione in relazione tra pressione intra-arteriosa e vasoactivity e determinare alterazioni della funzione microvascolare in modelli animali di varie malattie.

Rappresentazione schematica di un miografo pressione tipico set-up è mostrata in Figura 1. Le due estremità del recipiente sono cannulati con una micropipetta di vetro e fissati con suture su entrambi i lati. Via tubo e un rubinetto aperto, una cannula viene collegato ad un regolatore di pressione servocomandato; l&#39;altra cannula è collegata ad un rubinetto chiuso. La camera è perfuso con PSS e diametro vascolare cambiamenti sono osservati da un microscopio invertito collegato ad una telecamera CCD. ...

Myography pressione è utilizzato per valutare vasoactivity di piccole arterie che si sviluppano costrizione sostenuta quando sotto pressione. Questo manoscritto fornisce un protocollo dettagliato per valutare in segmenti isolati di piccole arterie mesenterici di ratto, vasoactivity e l&#39;effetto della pressione intraluminale del diametro vascolare.

Valutare Miogenica risposta e Vasoactivity nelle arterie di resistenza mesenteriche Utilizzando Myography Pressione

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

L'obiettivo generale di questa procedura è determinare l'effetto di un agente farmacologico o di uno stato patologico sul tono vascolare indotto dalla pressione in arterie mesenteriche di piccola resistenza. Questo viene raggiunto innanzitutto isolando l'arcata mesenterica da un modello murino. Il secondo passaggio consiste nel dissezionare le arterie di piccola resistenza del quarto ordine.I passaggi successivi sono la cannullazione, la pressurizzazione e l'incubazione del preparato arterioso. Nel PSS, l'ultimo passaggio consiste nella valutazione dell'integrità fisiologica del preparato arterioso, dimostrata dallo sviluppo spontaneo del tono vascolare e da una risposta reversibile appropriata a un vasocostrittore e a un vasodilatatore. Infine, può essere misurata la costrizione indotta dalla pressione.L'implicazione di questa tecnica riguarda la terapia o la diagnosi di ipertensione, ipotensione o disfunzione vascolare. Poiché questa tecnica identifica i meccanismi chiave alla base delle variazioni indotte dalla pressione nel tono vascolare, che rappresenta un determinante fondamentale della resistenza vascolare, della perfusione e della pressione sanguigna. Questa procedura sarà

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Un metodo myography automatizzato per misure di forza in arterie mesenteriche isolato è descritto. Si avvale di un Mulvany-Halpern miografo filo doppio Auto 510A per determinare le risposte a fenilefrina e calcio extracellulare. Il metodo permette la determinazione costante di risposte isometrica per agonisti in piccoli vasi di diametro di 60-300 micron, in modo indipendente.

Contrazione Arteria mesenterica e Studi Relax Utilizzando Myography automatica Wire

Misure di KV7 (KCNQ) canale attività di potassio in miociti isolati arteriosi (utilizzando tecniche elettrofisiologiche di patch clamp) in parallelo con misure di constrictor / dilatatore risposte (usando myography pressione) può rivelare importanti informazioni sul ruolo di KV7 canali in fisiologia vascolare muscolatura liscia e farmacologia.

Esplorare arteriosa Muscolo liscio KV7 Funzione canale del potassio con morsetto Elettrofisiologia Patch e Myography pressione

In myography pressione, un piccolo segmento intatta di una nave è attaccato su due piccole cannule e pressurizzato ad una pressione luminale adatto. Qui, descriviamo il metodo per misurare la risposta di vasodilatazione del mouse...

Valutare Murino Resistenza Funzione Arteria Utilizzando myography Pressione

Questo manoscritto descrive protocolli di video microscopia in vitro per valutare la funzione vascolare nelle arterie di resistenza cerebrale del ratto. Il manoscritto descrive anche tecniche per la valutazione di densità del microvessel con aspersione di lectine e tessuto fluorescente contrassegnato utilizzando flussometria del Laser Doppler.

Valutazione dei meccanismi di controllo vascolare utilizzando Video microscopia del arterie di resistenza isolata dei ratti

La tecnica di myograph di filo è utilizzata per studiare le funzioni muscolari lisce e schermo nuove droghe. Segnaliamo un protocollo dettagliato per misurare la contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica del mouse e per lo screening di nuovi farmaci rilassanti di muscolo liscio vascolare.

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

Il protocollo descrive l'uso della Miografia dei fili per valutare la tensione isometrica transmurale delle arterie mesenteriche isolate dai topi, con particolare attenzione alla modulazione da fattori rilasciati da cellule endoteliali e tessuti adiposi perivascolare.

Valutazione della reattività del tono vascolare utilizzando arterie mesenteriche isolate con un focus sulla modulazione dei tessuti adiposi perivascolare

Il presente protocollo descrive i concetti e l'applicazione tecnica della tecnica del miografo tensometrico utilizzando un sistema miografo multicamera nella valutazione sperimentale ex vivo della funzione endoteliale aortica del topo.

Misurazione della vasorilassazione endotelio-dipendente nell'aorta toracica del topo mediante miografia tensometrica a camera di piccolo volume

Una nuova tecnica per registrare le pressioni all'interno del cranio è descritto. Il metodo minimamente invasivo utilizza una fibra ottica sistema di rilevamento della pressione per misurare accuratamente la pressione endocranica (ICP) in ratti anestetizzati senza causare traumi significativi cervello. La tecnica può essere utilizzata in un'ampia gamma di modelli sperimentali.

Epidurale Misurazione della pressione intracranica in ratto utilizzando una fibra ottica trasduttore di pressione

L'intestino tenue è spesso esposto alle tossine che possono influenzare il flusso di sangue e di influenzare negativamente l'assorbimento dei nutrienti. Utilizzando un multimyograph e mesenterica arteria e vena isolati, composti o tossine di interesse possono essere sottoposti a screening per vasoactivity.

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Questo manoscritto fornisce un protocollo per l'impianto di telemetri nel topo allo scopo di misurare le pressioni intrauterine durante la gravidanza.

Telemetria intrauterina misurare mouse contrattile Pressione<em&gt; In Vivo</em

Impara a valutare la risposta miogenica e la vasoattività nelle arterie mesenteriche di resistenza utilizzando la miografia a pressione. Questo metodo consente di studiare il tono vascolare indotto dalla pressione.

Valutare Miogenica risposta e Vasoactivity nelle arterie di resistenza mesenteriche Utilizzando Myography Pressione

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