Metodi Latte di raccolta per topi e Reeves 'Muntjac

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare come raccogliere il latte da un topo o da un cervo muntjak di Reeves per utilizzarlo in una varietà di esperimenti scientifici. Questo viene ottenuto somministrando prima ossitocina all'animale per stimolare l'espulsione del latte, quindi si anestetizza l'animale. Successivamente, un ricercatore espelle manualmente il latte mentre un secondo ricercatore lo raccoglie.

L'ultimo passaggio consiste nell'assicurare la sicurezza dell'animale durante il risveglio dall'anestesia. In definitiva, è possibile raccogliere circa da cinque a trenta millilitri di latte di mutt jack per sessione, oppure fino a 450 microlitri di latte di topo per sessione. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come quelli che richiedono attrezzature specializzate, è che essa è relativamente economica e facile da apprendere.

Questo metodo può contribuire a rispondere a diverse domande scientifiche, ad esempio se un patogeno possa essere trasmesso dalla madre alla prole attraverso il latte. Le persone nuove a questo metodo tendono generalmente a scoraggiarsi perché occorre pratica per eseguire correttamente l'estrazione del latte. A supportarmi in questa procedura sarà Stephanie Fullaway, una tecnica del nostro laboratorio, per stimolare il rilascio di latte in un topo in allattamento.

Somministrare due unità internazionali per chilogrammo di ossitocina per via intraperitoneale immediatamente prima del prelievo del latte, anestetizzare il topo e applicare una piccola quantità di lubrificante oculare su ciascun occhio per evitare che gli occhi del topo si secchino durante l'attesa dell'effetto dell'anestetico. Preparare alcuni dischetti sterili imbevuti di alcol, una pipetta P200, punte sterili per pipetta e un contenitore per raccogliere il latte, come una provetta da 1,5 millilitri o una provetta criogenica da 1,2 millilitri. La mungitura richiede due ricercatori.

Uno, l'estratore di latte stabilizza l'animale ed estrae il latte, mentre l'altro. Il raccoglitore raccoglie il latte avendo cura di evitare la contaminazione del contenitore di raccolta. Utilizzando un tampone sterile imbevuto di alcol, l'estratore di latte pulisce delicatamente la zona mammaria prima della mungitura.

Dopo un minuto o due dall'iniezione di ossitocina, il rilascio del latte diventa visibile nella zona mammaria del topo. Espellere manualmente il latte dal capezzolo utilizzando pollice e indice per massaggiare delicatamente e comprimere il tessuto mammario con un movimento ascendente, fino a quando una goccia visibile di latte inizia a formarsi alla base del capezzolo. A questo punto, il raccoglitore di latte preme il pistone della pipetta P 200 fino al primo arresto per espellere l'aria dalla punta della pipetta e prepararsi al prelievo del latte.

Quindi il raccoglitore del latte posiziona la punta della pipetta in alto rispetto alla goccia di latte. Facendo attenzione a non avvicinare troppo la punta al capezzolo o alla pelle, rilascia lentamente la pressione sul pistone per aspirare il latte nella punta della pipetta, premendo la punta contro la parete del tubo di raccolta in modo da non perdere liquido. Il raccoglitore utilizza il pollice per premere il pistone oltre la prima arresto ed espellere il latte nel contenitore.

Continuare a esprimere manualmente il latte da ogni capezzolo muovendosi in senso orario o antiorario. È accettabile tornare a un capezzolo precedentemente trattato per esprimere ulteriore latte, specialmente se produce più latte rispetto agli altri capezzoli. Al termine della raccolta del latte, permettere al topo di risvegliarsi dall'anestesia.

Una volta che la femmina si muove agevolmente all'interno della gabbia, riposizionarla nella sua gabbia originale insieme alla sua nidiata per stimolare la fuoriuscita del latte. Nei cervi maschi mut jack in lattazione, somministrare 10 unità internazionali per chilogrammo di ossitocina per via intramuscolare, quindi anestetizzare immediatamente il mutt jack. Il livello di anestesia è considerato adeguato se vi sono soltanto lievi riflessi al contatto con le orecchie e se l'operatore può trattenere il mutt jack senza difficoltà.

Successivamente, applicare una piccola quantità di lubrificante su ciascun occhio per evitare che gli occhi del mut jack si secchino. Dotare sia l'estratte latte che il raccoglitore di latte di garze imbevute di etanolo e di diversi tubi conici in polipropilene da 15 millilitri per raccogliere il latte. Quando l'ossitocina inizia a fare effetto, il rilascio di latte diventa visibile nella zona mammaria dei mutt jack.

Sia l'operatore che esegue l'estrazione del latte sia il raccoglitore del latte devono indossare guanti e disinfettarli con garza imbevuta di etanolo. Utilizzare inoltre garza imbevuta di etanolo per disinfettare l'intero capezzolo e ciascun capezzolo singolo dell'animale, tenendo la testa del munch jack in una posizione confortevole per facilitare la respirazione e prevenire il rigurgito del rumine. Il raccoglitore del latte posiziona il tubo di raccolta vicino al capezzolo da cui si sta estraendo il latte, senza toccare la pelle.

L'estrattore manuale utilizza il pollice e l'indice per comprimere delicatamente il tessuto mammario con un movimento ascendente, fino a quando il capezzolo è pieno di latte, quindi fa scorrere dolcemente il latte fuori dal capezzolo e all'interno del tubo che il raccoglitore di latte tiene. Il latte fuoriesce sotto forma di getto, quindi è importante posizionare il tubo di raccolta in modo da sprecare il meno latte possibile. La mammella di Mt Jack è divisa in quadranti.

L'estratore del latte continua a estrarre latte da ogni quadrante fino a quando il latte non scorre più facilmente. Se non è possibile estrarre latte da un capezzolo, passare agli altri capezzoli ed estrarre da tutti gli altri prima di tornare al primo; al termine della raccolta del latte, somministrare aamaz per via sottocutanea per ottenere una rapida inversione dell'anestesia con bam; infine, monitorare la femmina fino a quando sarà in grado di camminare, mangiare e bere autonomamente. Questa figura indica che è possibile ottenere da un topo in lattazione da 100 a 450 microlitri di latte.

I volumi massimi di latte sono stati raccolti da otto a dodici giorni dopo il parto utilizzando due unità internazionali per chilogrammo di ossitocina. Qui viene mostrata la resa approssimativa di latte da un topo in lattazione, riportata in base alla dimensione della nidiata nel cervo Reeve's mut jack. Il volume di latte raccolto per ogni sessione è variato da cinque a trenta millilitri a seconda dell'anestetico utilizzato e del tempo trascorso dal parto; le date di inizio e fine delle raccolte di latte per le femmine mut Jack sono indicate in questa tabella.

Il latte è stato raccolto in media a 80 giorni, con un intervallo compreso tra 18 e 150 giorni. Una volta acquisita padronanza, questa tecnica può essere eseguita in circa un'ora, a seconda del numero di animali da cui si desidera effettuare la raccolta in una singola sessione. Nel tentativo di eseguire questa procedura, è sempre importante ricordare che la sicurezza degli animali viene prima di tutto. Dopo questa procedura, potrebbe essere necessario processare il latte, seguito da test in vitro o saggi biologici, che potrebbero aiutare a rispondere ad ulteriori domande sui componenti presenti nel latte.