Question 1

Quali condizioni di temperatura sono migliori per coltivare C. elegans in laboratorio?

Accepted Answer

C. elegans può essere allevato a 16, 20 o 25 °C a seconda dei requisiti sperimentali. La temperatura influisce direttamente sulla velocità del ciclo di vita: a 25 °C, i vermi completano il loro ciclo di vita 2,1 volte più velocemente rispetto a 16 °C. Una crescita più rapida significa che i vermi maturano più velocemente, depongono più uova e consumano più cibo, rendendo la selezione della temperatura fondamentale per la progettazione sperimentale.

Question 2

Cosa mangiano i C. elegans e come vengono nutriti in laboratorio?

Accepted Answer

C. elegans sono alimentati con OP50, un ceppo standardizzato di E. coli utilizzato in tutti i laboratori di vermi in tutto il mondo. In natura, i vermi si nutrono di materia vegetale in decomposizione, ma in laboratorio consumano OP50 coltivato su piastre di terreno di crescita dei nematodi (NGM) o in terreno liquido. Questa dieta standardizzata garantisce condizioni sperimentali coerenti tra le diverse strutture di ricerca.

Question 3

Come si preparano e si realizzano piastre NGM per la coltura di C. elegans?

Accepted Answer

Combinare gli ingredienti del terreno di crescita dei nematodi con acqua deionizzata, autoclavare per almeno 15 minuti, quindi raffreddare a 55 °C. Aggiungere additivi asettici se necessario, pipettare in piastre di Petri fino a 2/3 di pieno e asciugare durante la notte. Inoculare con E. coli OP50 risospeso a concentrazione 10X, asciugare durante la notte, quindi esporre alla luce UV per la sterilizzazione prima dell'uso.

Question 4

Che cos'è un pick per worm e come è costruito?

Accepted Answer

Un pick per vermi è uno strumento realizzato con un filo di platino-iridio da 30 gauge sigillato nella punta di una pipetta Pasteur. Il filo è appiattito all'estremità e piegato verso l'alto per formare una paletta, poi levigato fino a renderlo liscio. Il pick permette ai ricercatori di manipolare e trasferire singolarmente i vermi sotto un microscopio da dissezione senza danneggiarli o la superficie dell'agar.

Question 5

Come vengono congelati e recuperati i C. elegans per la conservazione a lungo termine?

Accepted Answer

Lavare le larve appena affamate in M9 Buffer, trasferirle in un cryotube, aggiungere un volume uguale di glicerolo al 30% in M9 Buffer e conservare a -80 °C. Per recuperarle, scongelare a temperatura ambiente, pipettare su piastre NGM fresche con OP50 e incubare a 20 °C. Dopo 2-3 giorni, trasferire gli animali su nuove piastre e consentire una generazione di riproduzione prima di valutare i fenotipi.

Question 6

Cosa succede a C. elegans quando sperimentano stress o sovraccarico?

Accepted Answer

Quando affamata o sovraffollata, C. elegans entra nella fase dauer, uno stadio larvale resistente allo stress in cui i vermi non invecchiano. Questo meccanismo di sopravvivenza permette alle popolazioni di persistere in condizioni avverse fino a quando le risorse diventano nuovamente disponibili, rendendo le larve dauer utili per la conservazione a lungo termine e la manipolazione sperimentale.

Question 7

Come viene utilizzata l'interferenza dell'RNA per studiare la funzione dei geni in C. elegans?

Accepted Answer

I ricercatori preparano piastre con E. coli che esprimono dsRNA del gene bersaglio, che i vermi consumano. I vermi allo stadio larvale quarto vengono trasferiti su piastre RNAi per deporre le uova, poi la progenie viene raccolta nelle fasi di sviluppo desiderate e valutata per i fenotipi. Questo approccio silenzi specifici geni per determinarne la funzione, sfruttando le intuizioni da sviluppo e riproduzione di caenorhabditis elegans per la ricerca sulle malattie.

C. elegans Manutenzione - Quiz di valutazione