Name: Simulazione pancreatica neuroplasticità: In Vitro Dual-neurone Plasticità Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-14T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Scopri un saggio in vitro per simulare la neuroplasticità pancreatica usando neuroni DRG e del plesso mioenterico di ratti neonati. Questo metodo permette di analizzare morfologia e funzione neuronale in risposta a estratti tissutali.

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Tutti gli autori hanno contribuito alla creazione e la validazione del test presentato e al progetto del manoscritto.

Tutte le procedure sperimentali animali nel protocollo seguono le linee guida per la cura degli animali della Technische Universität München, Germania. 1. Media / Estratto di preparazione <ol><li> Tissue omogeneizzazione La qualità di omogeneizzazione tessuto è fondamentale per la successiva rivelazione di alterazioni neuroplastici nei neuroni in coltura. Qui, un omogeneizzatore è raccomandato che consente dissociazione tessuto senza grande aumento della temperatura del tessuto. <ol><li> Trasferire 5 x 5 mm x 5 mm cubi di tessuto pancreatico direttamente da -80 ° C in azoto liquido e posto in una fase solida nel homogenator tessuto. Il homogenator ideale sarebbe dissociare il tessuto abbastanza veloce, senza farlo scongelare. </li><li> Subito dopo dissociazione, risospendere il solido, omogenato polverulenti in 300-500 ml di 0.1x tampone fosfato salino (PBS). Qui, non utilizzare alcun tampone di lisi (come RIPA), in quanto puo &#39;lisi i neuroni.</li><li> Centrifugare le omogeneizzati per almeno 15 minuti alla velocità massima del centrifuga da banco (es. 21.130 xg). Raccogliere il surnatante chiaro che rappresenta l&#39;estratto del tessuto. </li></ol></li><li> Supernatanti della linea cellulare <ol><li> Lasciate che le cellule di interesse raggiungono almeno il 70-80% di confluenza nel normale terreno di crescita. </li><li> Di solito, questi mezzi contengono componenti siero e possono esercitare effetti incontrollabili sulla crescita neuronale. Pertanto, dopo aver raggiunto la densità cellulare desiderato, lavare le cellule almeno 3x con la coltura cellulare grade PBS e metterli in mezzo privo di siero (SFM) per un massimo di 48 ore. Nota: Qui, ritengono che alcune cellule (come le cellule stellate pancreatiche) possono avere bisogno di siero nel loro terreni di crescita, al fine di mantenere il loro stato e la struttura normale. In tali casi, eseguire diluizioni seriali di siero nel mezzo della cella di interesse al fine di trovare il possibile contenuto siero minima necessaria per funzio cellula intattan. </li><li> Misurare la concentrazione proteica del tessuto omogenato o surnatanti cellulari tramite Bradford protein assay. Mentre questi valori variano a seconda del tipo di tessuto e di cellule, per gli estratti di tessuto pancreatico, ci si aspetterebbe un intervallo di concentrazione tra 5-12 mg / mL, e per supernatanti della linea cellulare tra 3-8 mg / mL. </li></ol></li></ol> 2. Aliquota Estratti e surnatanti cellulari A seconda della concentrazione da utilizzare nel saggio, la concentrazione finale dell&#39;estratto o surnatante nel mezzo neuronale dovrebbe essere 100 pg / ml 5,8. Nota: Per un saggio con i neuroni crescono in 500 microlitri di media in ciascun pozzetto di una piastra a 24 pozzetti, uno ha bisogno di 50 mg di proteina da ogni estratto o surnatante per pozzetto. In una tipica concentrazione estratto di circa 10 mg / mL, uno avrebbe bisogno 5 ml di estratto / surnatante per ciascun bene. In ogni Setting esibito come triplice copia, questo corrisponderebbe a 15 ml di estratto / surnatante. Per i diversi tipi di tessuti o cellule, eseguire diluizioni seriali dell&#39;estratto finale o la concentrazione surnatante e confrontare gli effetti neurotrofici osservati tra le diverse concentrazioni di estratto / surnatante. 3. Isolamento di neuroni Dopo la raccolta estratto / supernatante è finito, proseguire con isolamento di neuroni. <ol><li> Per neuroni DRG, raccogliere la cervicale lombare DRG di ratto appena nati tra il giorno postnatale (P) 2-12 dopo la decapitazione e la dissezione stereomicroscopio di DRG (Figura 1A). Al fine di avere i neuroni DRG sufficienti per una piastra a 24 pozzetti, raccogliere tutte cervicale per lombare DRG di un ratto neonato (pari a 52 DRG) per piastra. <ol><li> Tagliare la periferica (neurale) e le proiezioni centrali (radici) di DRG per mezzo di microscissors. Lasciando le proiezioni in luogo impedisce triturazione e aumenta tegli contaminazione rischio di cultura da parte dei fibroblasti. </li></ol></li><li> Per neuroni MP, tagliare via il mesentere dal piccolo intestino e manualmente e togliere accuratamente lo strato seromuscular del piccolo intestino (per un protocollo dettagliato sull&#39;isolamento MP, consultare Schäfer et al. 9, Figura 1B). Per MP, raccogliere il plesso di due ratti per 24 pozzetti. Nota: Cercate di essere i più dolci possibili al fine di evitare strappi nel livello seromuscular in quanto impediscono la sua separazione con successo dal piccolo intestino. </li><li> Raccogliere il DRG e lo strato seromuscular in terreno minimo essenziale ghiacciata (MEM) fornito con gentamicina (20 mg in mezzo 500ml) e metronidazolo (2,5 mg in 500 ml di mezzo). </li><li> Dopo la raccolta di DRG, incubare in soluzione salina bilanciata di Hank (HBSS) fornito con collagenasi di tipo II per 20-30 min. Per l&#39;isolamento MP, incubare in collagenasi tipo fra 1-3 ore, a seconda dell&#39;etàdell&#39;animale (Figura 1C). </li><li> Per MP, raccogliere i MP pezzi netti come sotto stereomicroscopio e trasferimento MEM ghiacciata. </li><li> Poi triturare il DRG e MP attraverso siringhe con diametro decrescente. Nota: triturazione eccessiva può distruggere i neuroni, ma al netto delle cellule gliali. </li><li> Una volta che il terreno contenente il DRG o MP è diventata torbida, centrifugare la sospensione a 93,9 xg per 5 min, eliminare il mezzo e risospendere in Neurobasal medio (integrato con 100 U / ml di penicillina, 100 mg / ml di streptomicina, L-glutamina 0,5 mm e 2% B-27). </li><li> Contare il numero totale di cellule (cioè neuroni e glia) mediante un emocitometro. Nota: Il numero di cellule necessarie dipende dal parametro di misura. Per la quantificazione della densità neurite, bisogna culture più dense e quindi un maggior numero di cellule che per la misura della crescita dei neuriti, dimensione perikaryonale la ramificazione modello di singoli neuroni. Per le misurazioni della densità dei neuriti, utilizzare ad esempio 10.000 cellule (neuroni + glia) e / o di 1.500 neuroni / e. Per la morfometria su singoli neuroni, breve (1 minuto a lungo) trypsination delle cellule e semina di cellule 2.500 / e o 400 neuroni / bene è raccomandato. La resa tipica di cellule ottenute da un ratto è di circa 300.000-500.000 cellule. </li><li> Seed le cellule su 13 vetrini mm che sono state rivestite la sera prima e l&#39;alto i pozzetti con Neurobasal medio (integrato con 100 U / ml di penicillina, 100 mg / ml di streptomicina, 0.5 mM L-glutammina e il 2% B-27) (Figura 1D). Nota: Utilizzare poli-D-lisina (40 mg / m 2) OR-ornitina e scivola copertura laminina rivestite (1 mg / ml ciascuna) rivestito. Cellule attribuiscono alla poli-D-lisina estremamente veloce, rendendo così adatto per esperimenti che richiedono molte cellule (cioè misurazioni di densità neurite). L&#39;attaccamento al laminina è in qualche generalequello più debole, ma laminina è un forte promotore di crescita dei neuriti. Pertanto, per misure su ramificazione neuronale e la lunghezza dei neuriti, preferire ornitina / laminina-coating. </li><li> Consentire alle cellule attribuiscono ai pozzetti durante la notte. Il giorno successivo, preparare il dispositivo estratto supplementato (ad una concentrazione finale estratto / supernatante di 100 pg / ml). </li><li> Aspirare il mezzo semina, ed eseguire, lavaggio molto delicato opzionale con PBS, e poi lentamente pipetta media estrarre / surnatante-integrato (Figura 1E). </li><li> Lasciate che le cellule crescono per 48 ore. Aspirare i media e fissare nel 4% paraformaldeide per immunoistochimica (Figura 1F). </li><li> Eseguire doppia immunofluorescenza utilizzando neurone-specifico (ad esempio beta-tubulina III) e glia-specifica (ad esempio gliale fibriallary proteina acida / GFAP) marcatori (Figura 1G). </li><li> Per morfometria, utilizzare un microscopio ottico invertito dotato di una fotocamera CCD in combinazione with software automatizzato che consente la misurazione della densità dei neuriti (vedi tabella). </li><li> La densità neurite delle culture neuronali viene misurata su 4-5 microfotografie rappresentative a 200x ingrandimenti da 4 diverse regioni di crescita più densa su ogni vetrino sovrapponendo 50 micron x 50 micron griglia e contare la densità delle fibre per metro quadrato misurato in fibre di intersezione. Crescita dei neuriti, il numero di sportelli per neurone dire, la lunghezza del ramo media e la dimensione perikaryonal possono essere misurati da selezionati in modo casuale 30 neuroni solitarie di ogni vetrino contrassegnando le neuriti e perikarya (Figura 1H). </li></ol>

<ol><li>Demir, I. E., Schafer, K. H., Tieftrunk, E., Friess, H., Ceyhan, G. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+plasticity+in+the+gastrointestinal+tract%3A+chronic+inflammation%2C+neurotrophic+signals%2C+and+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Neural plasticity in the gastrointestinal tract: chronic inflammation, neurotrophic signals, and hypersensitivity.</a> Acta Neuropathol. 125, 491-509 (2013).</li>
<li>Vasina, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+neuroplasticity+evoked+by+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Auton.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enteric neuroplasticity evoked by inflammation.</a> Auton. Neurosci. 126-127, 264-272 (2006).</li>
<li>Lomax, A. E., Fernandez, E., Sharkey, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+the+enteric+nervous+system+during+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">Plasticity of the enteric nervous system during intestinal inflammation.</a> Neurogastroenterol. Motil. 17, 4-15 (2005).</li>
<li>Demir, I. E., et al. Neural Invasion in Pancreatic Cancer: The Past, Present and Future. 2, 1513-1527 (2010).</li>
<li>Demir, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microenvironment+in+chronic+pancreatitis+and+pancreatic+cancer+induces+neuronal+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">The microenvironment in chronic pancreatitis and pancreatic cancer induces neuronal plasticity.</a> Neurogastroenterol. Motil. 22, 480-490 (2010).</li>
<li>Schafer, K. H., Mestres, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GDNF-induced+neurite+outgrowth+and+neuronal+survival+in+dissociated+myenteric+plexus+cultures+of+the+rat+small+intestine+decreases+postnatally%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The GDNF-induced neurite outgrowth and neuronal survival in dissociated myenteric plexus cultures of the rat small intestine decreases postnatally.</a> Exp. Brain Res. 125, 447-452 (1999).</li>
<li>Schafer, K. H., Van Ginneken, C., Copray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+and+neural+stem+cells+in+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Plasticity and neural stem cells in the enteric nervous system.</a> Anat. Rec. 292, 1940-1952 (2009).</li>
<li>Liebl, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+severity+of+neural+invasion+is+associated+with+shortened+survival+in+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The severity of neural invasion is associated with shortened survival in colon cancer.</a> Clin. Cancer Res. 19, 50-61 (2012).</li>
<li>Schäfer, K. H., Saffrey, M. J., Burnstock, G., Mestres-Ventura, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+the+isolation+of+myenteric+plexus+from+the+newborn+rat+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Brain+Res.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A new method for the isolation of myenteric plexus from the newborn rat gastrointestinal tract.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 1, 109-113 (1997).</li>
<li>Ceyhan, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+growth+factor+and+artemin+are+paracrine+mediators+of+pancreatic+neuropathy+in+pancreatic+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Nerve growth factor and artemin are paracrine mediators of pancreatic neuropathy in pancreatic adenocarcinoma.</a> Ann. Surg. 251, 923-931 (2010).</li>
<li>Demir, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+plasticity+in+chronic+pancreatitis+is+mediated+via+the+neurturin%2FGFRalpha2+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Neuronal plasticity in chronic pancreatitis is mediated via the neurturin/GFRalpha2 axis.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 303, 1017-1028 (2012).</li>
<li>Joseph, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia+are+multipotent+in+culture+but+primarily+form+glia+in+the+adult+rodent+gut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enteric glia are multipotent in culture but primarily form glia in the adult rodent gut.</a> J. Clin. Invest. 121, 3398-3411 (2011).</li>
</ol>

Gli autori non hanno interessi in gioco e senza informazioni finanziarie.

Il presente protocollo ha lo scopo di illustrare la metodologia alla base del pancreas test neuroplasticità in vitro che è stato sviluppato recentemente dal nostro gruppo per studiare i meccanismi di neuroplasticità in PCa e CP 5. Il protocollo prevede una procedura in tre giorni, che può essere facilmente applicato una volta l&#39;artista ha maturato un&#39;esperienza sufficiente per l&#39;isolamento e la cultura del DRG e MP neuroni. Inoltre, esso rappresenta un valido strumento per studiare la rea...

Alterazioni nei gastrointestinale (GI) morfologia del nervo e la densità hanno catturato l&#39;attenzione di gastroenterologi e patologi per molto tempo, ma la loro rilevanza per la fisiopatologia delle malattie gastrointestinali rimane sconosciuta 1-3. Infatti, alcuni disturbi gastrointestinali molto comuni come la gastrite, esofagite da reflusso, colite, diverticolite e appendicite sono associati ad un aumento della densità innervazione nelle aree di tessuto infiammato 1. Tuttavia, nessuna vera attenzione è stata finora versati ai meccanismi e significato della neuroplasticità nel tratto GI. Sei nervi GI morfologicamente alterati differiscono dalle normali nervi GI, cioè lo stato normale del sistema nervoso enterico, in termini della loro funzione? Quali sono le implicazioni di alterata contenuti neuropeptide / neurotrasmettitore nei nervi enterici di plastica? Fa neuroplasticità periferica comporta sempre la segnalazione alterata al sistema nervoso centrale? E dove sono le proiezioni centrali di Extri plasticaNSIC percorsi neurali GI? Una lunga serie di questioni fondamentali possono essere facilmente generati quando si guarda la scarsità delle nostre conoscenze sugli aspetti funzionali di GI neuroplasticità. Lo studio di GI neuroplasticità a livello funzionale richiede modelli sperimentali validi, riproducibili e ancora facilmente applicabili. In un&#39;epoca di crescente popolarità e l&#39;accettazione di modelli geneticamente condizionato mouse (GECoMM), come nelle impostazioni vivo portano il potenziale per chiarire gli aspetti sconosciuti di GI neuroplasticità in modo realistico 1. Tuttavia, la progettazione e la produzione di GECoMM resta costoso, alta intensità di lavoro e, soprattutto, in termini di tempo. Inoltre, essi richiedono a priori selezione del bersaglio da condizionale modulato nel topo geneticamente alterato (ad es transgenico sovraespressione del fattore di crescita nervoso / NGF in cellule epiteliali enterici). Quindi, per il design di un GECoMM di successo, i ricercatori hanno bisogno di alcuni indicatori (ad esempio, dati sperimentali precedenti) di un obiettivo utile, vale a dire che la molecola di interesse (qui NGF) può almeno aspettare di esercitare alcuni effetti biologicamente rilevanti sui nervi GI. Tali indicatori possono essere facilmente derivate da adeguata in modelli in vitro in cui sottotipi di cellule isolate dal complesso microambiente di un sistema in vivo possono essere selettivamente co-coltivate in maniera eterotipica 4-7. La modulazione di bersagli molecolari in un tale ambiente cultura eterotipica è in media tecnicamente meno ingombrante, più veloce, e può quindi aiutare nella prefiltraggio degli obiettivi validi per la verifica in studi in vivo. Recentemente, abbiamo presentato un test in vitro neuroplasticità in cui è stato progettato per simulare la maggiore densità neurale e ipertrofia delle ne intrapancreaticarves nel cancro del pancreas umano (PCA) e pancreatite cronica (CP) tessuti. Qui, i neuroni derivati ​​da neonato di ratto gangli spinali (DRG) o plesso mioenterico (MP) sono stati esposti a estratti di tessuto da PCa chirurgicamente asportato o CP tessuti esemplari e rispetto a quelle coltivate in normali pancreas umano (NP) estratti di tessuto 5. Invece di estratti di tessuto, si può anche utilizzare supernatanti della linea cellulare di studiare l&#39;impatto di tipi cellulari selezionati TG. Quando combinato con una misurazione morfometrica standardizzato, il saggio neuroplasticità presentata consente di valutare valido e riproducibile di plasticità neuronale in risposta a diversi microambienti pancreatiche. In particolare, esso consente la simulazione di 1) neuroplasticity morfologica, cioè i cambiamenti nella crescita dei neuriti, ramificazione e dimensione neuronale, e 2) neuroplasticity funzionale, cioè alterazioni nella eccitabilità dei neuroni periferici. Inoltre, non solo periferica ( </em&gt; Enterico), ma anche centrale (es. DRG o spinale secondo ordine) neuroni possono essere incluse nella presente saggio per valutare la loro reazione morfologica e funzionale a diversi contenuti di tessuto GI. Nel presente tutorial video, dimostriamo il protocollo tecnico per l&#39;esecuzione di questo saggio e discutere i suoi vantaggi e debolezze. Inoltre, attiriamo l&#39;attenzione sulla applicabilità del concetto di base di questo test allo studio della neuroplasticità in qualsiasi organo GI.

<table><tbody><tr><td>Bromidrato di poli-D-lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1149</td><td></td></tr><tr><td>Ornitina/laminina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2533/L4544</td><td></td></tr><tr><td>13 mm Vetrini coprioggetti</td><td>Merck</td><td></td><td>Per l'uso in piastre a 24 pozzetti</td></tr><tr><td>Dismembranator S</td><td>Sartorius</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-beta-III-tubulina</td><td>Millipore</td><td>MAB1637</td><td>concentrazione 1:200</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-GFAP</td><td>DAKO</td><td>M0761</td><td>Concentrazione 1:400</td></tr><tr><td>Tampone RIPA + inibitore</td><td></td><td></td> della proteasi <td>Qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Mezzo neurobasale</td><td>Gibco/Life Sciences</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>Integratore di B-27</td><td>Gibco/Life Sciences</td><td>17504044</td><td>La qualità del B-27 è nota per dipendere dal numero di lotto</td></tr><tr><td>Gentamicina/Metronidazolo</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>Minimo essenziale medium</td><td>Gibco/Life Sciences</td><td>31095-029</td><td></td></tr><tr><td>Hank' s Soluzione salina bilanciata (HBSS)</td><td>Gibco/Life Sciences</td><td>24020133 Migliora l'attività della collagenasi quando contiene Ca/Mg</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi di tipo II</td><td>Worthington Biochemical</td><td>CLS-2</td><td>Ottenere lotti con almeno 200 U/mg</td></tr><tr><td>di attività Tripsina-EDTA 0,25%</td><td>Gibco/Life Sciences</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldeide</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi fornitore</td></tr><tr><td>analizza software</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

simulazione pancreatica neuroplasticità:<em&gt; in vitro</em&gt; dual-neurone plasticità assay

Simulating Pancreatic Neuroplasticity: In Vitro Dual-neuron Plasticity Assay

Neuroplasticità è una caratteristica intrinseca del sistema e gastrointestinale (GI) innervazione nervoso enterico in condizioni patologiche. Tuttavia, il ruolo fisiopatologico delle neuroplasticità nei disturbi gastrointestinali rimane sconosciuto. Nuovi modelli sperimentali che consentono la simulazione e la modulazione di GI neuroplasticità possono consentire maggiore apprezzamento per il contributo della neuroplasticità in particolare le malattie gastrointestinali come il cancro del pancreas (PCA) e pancreatite cronica (CP). Qui vi presentiamo un protocollo per la simulazione della neuroplasticità del pancreas in condizioni in vitro utilizzando neonato gangli delle radici dorsali di ratto (DRG) e plesso mioenterico (MP) neuroni. Questo approccio dual-neurone permette non solo il controllo di entrambi neuroplasticità organo intrinseca ed estrinseca-, ma rappresenta anche un valido strumento per valutare la morfologia neuronale e gliale e di elettrofisiologia. Inoltre, consente la modulazione funzionale dei contenuti del microambiente forniti per studiare la loro IMPACt sulla neuroplasticità. Una volta stabilito, il presente saggio neuroplasticity porta il potenziale di essere applicabile allo studio della neuroplasticità in qualsiasi organo GI.

Neuroplasticità morfologica Nella fascia di età indicata di ratti neonati (P2-12) e le densità di semina, MP e DRG neuroni già costruiscono reti neuronali dense dopo 48 ore (Figura 2A). Confronto di densità neurite tra neuroni coltivati ​​in CaP, CP, e estratti NP rivela maggiore densità neuriti dei neuroni DRG PCA o estratti CP rispetto estratti NP (Figura 2A) 5. Abbiamo particolarmente preferiamo i neuroni MP per misure su singoli neuro...

Plasticità neuronale è una caratteristica del tratto gastrointestinale (GI) sempre più riconosciuta, ma non sufficientemente compreso. Qui, nell&#39;esempio di disturbi pancreatici umani, presentiamo un neuroplasticity saggio in vitro per lo studio della plasticità neuronale nel tratto GI a livello sia morfologica e funzionale.

Simulazione pancreatica neuroplasticità:<em&gt; In Vitro</em&gt; Dual-neurone Plasticità Assay

Neuroplasticity is an inherent feature of the enteric nervous system and gastrointestinal (GI) innervation under pathological conditions. However, the ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è studiare le alterazioni reattive dei neuroni periferici in risposta a diversi microambienti pancreatici. Questo viene ottenuto innanzitutto generando lisati di tessuto intero da pancreas umano normale e da tessuto pancreatico malato. In un secondo passaggio, le cellule dei gangli della radice dorsale (DRG) vengono isolate da ratti neonati e successivamente trattate con i lisati tissutali isolati.Successivamente, dopo un'incubazione di 48 ore, le cellule vengono fissate per una successiva colorazione a immunofluorescenza doppia. I risultati mostrano le differenze nel modello di ramificazione della densità delle neuriti e nella densità gliale dei neuroni coltivati in diversi estratti tissutali. Questo metodo può contribuire a facilitare studi nel campo della neurogastroenterologia, come il ruolo dei mediatori molecolari e delle alterazioni neuroplastiche in diverse malattie gastrointestinali.Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulle diverse proprietà neurotrofiche delle malattie pancreatiche, può essere applicato anche ad altri sistemi, come i tumori o gli stati infiammatori dell'intero tratto gastrointestinale. Abbiamo avu

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Un tridimensionale test clonogenica che permette pancreatico-come progenitori di differenziarsi in insulino-colonie che esprimono è descritto. Questo metodo si avvale di semi-solidi supporti contenenti fattori di metilcellulosa, Matrigel e di crescita, in cui progenitori singolo proliferare e...

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Un sistema per<em&gt; Ex vivo</emColtura&gt; del pancreas embrionale

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