Name: La Helsinki Rat microchirurgica Sidewall Aneurisma Modello (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 53 s
Description: Impara la creazione di aneurismi sidewall microchirurgici nel ratto mediante anastomosi end-to-side di un innesto aortico. Questo metodo standardizzato consente studi riproducibili su modelli sperimentali di aneurismi sacculari.

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Gli autori sono gli unici responsabili della progettazione e della conduzione dello studio presentato. Il Dr. Marbacher è stato sostenuto da una sovvenzione del Fondo Nazionale Svizzero per la Ricerca Scientifica (PBSKP3-123454). Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse. 
I contributi dell'autore allo studio e alla preparazione del manoscritto includono quanto segue. Ideazione e design: SM, JM, JF. Acquisizione dati: SM, EA, JF. Analisi e interpretazione dei dati: SM, JF, JM. Redazione dell'articolo: SM, JF, JM. Revisione critica dell'articolo: JH, MN. Analisi statistiche: SM, JF. Supervisione dello studio: JF, JH, MN.

NOTA: Maschio ratti Wistar (media di peso corporeo: 356 ± 44 g; 10-14 settimane di età) sono stati alloggiati in camera animali a 22-24 ° C e dodici ore di luce / buio ciclo con libero accesso a pellet dieta, acqua di rubinetto normale e ha anche ricevuto la cura umana, in conformità con le linee guida istituzionali. Gli esperimenti sono stati esaminati e approvati dal Comitato per il benessere degli animali presso l&#39;Università di Helsinki, Finlandia. NOTA: Nella seguente dimostrazione nostro metodo chirurgico è il seguente: Anestetizzare ratto mediante iniezione sottocutanea peso adattato di medetomidina cloridrato (0,5 mg / kg) e iniezione intraperitoneale di ketamina cloridrato (50 mg / kg). Test per la mancanza di un riflesso punta pizzico per confermare che il ratto sia completamente anestetizzato. Applicare una pomata occhio, agganciare il sito chirurgico, e pulire la pelle con un disinfettante adatto, per esempio clorexidina, sia in alcool o acqua. Lavarsi le mani, indossare indumenti protettivi, un coperchio testa e visomaschera e guanti chirurgici sterili. Avere un aiuto chirurgico assistente nel mantenere condizioni asettiche chirurgia e per documentare le caratteristiche chirurgiche (come elencato nella tabella 1). Monitorare la profondità dell&#39;anestesia ogni 15 minuti durante l&#39;intervento seguendo frequenza respiratoria, frequenza cardiaca, e la reazione alla stimolazione nociva (tep pinch test). L&#39;iniezione sottocutanea di buprenorfina (0,03 mg / kg) è stato dato per l&#39;analgesia postoperatoria e ripetuto, se necessario, ogni 12 ore. 1 Hardware, Materiali di consumo, e Posizionamento <ol><li> Tenere il piccolo animale sala operatoria tranquilla, asettica, e mantenere la temperatura ambiente a 23 +/- 3 ° C. Per eseguire l&#39;intervento chirurgico aneurisma sperimentale la seguente attrezzatura minima necessaria: <ol><li> Utilizzare un tavolo microscopio operatorio perfettamente equipaggiato con un ambito assistente e la fotocamera microscopio digitale. Utilizzare superficie non porosa operativo riutilizzabile e lavabile superficie strumento per proteggere il banco di laboratorio. </li><li&gt; Preparare materiali di consumo come disinfettanti cutanei, soluzione salina fisiologica, tamponi di garza più piccoli e più grandi e materiale di sutura tra cui 9-0 micro-suture, un non-assorbibile 5-0 e 3-0 sutura assorbibile. </li><li> Utilizzare i seguenti strumenti chirurgici standard: forbici chirurgiche, pinze tessuto, spalmatore di tessuti molli o auto-divaricatore, e due pinze chirurgiche Mosquito. </li><li> Utilizzare un set di base microchirurgico strumento che include: supporto microneedle curva, una curva e due microforceps dritti, e un microscissor dritti o curvi. </li><li> Mantenere gli strumenti di microchirurgia in un piatto di rene riempito con soluzione salina sterile per mantenere lo strumento non colloso e pulite durante l&#39;intervento chirurgico. Il piatto di rene è imbottita con materassino di gomma o un guanto chirurgico per evitare di danneggiare le punte dei micro-strumenti. Assicurarsi che tutte le forniture sono sterili e la procedura viene eseguita con tecnica asettica secondo le attuali raccomandazioni per la chirurgia sopravvivenza su animali di laboratorio <sup&gt; 8-10. </li><li> Inoltre, utilizzare una clip applicatore vascolare e tre pinze vascolari temporanei atraumatica. È importante che i morsetti utilizzati hanno un potere di chiusura bassa per evitare lesioni alla parete molto sottile dell&#39;aorta di ratto. Anche preparare un righello con barre di mezzo millimetro di scala, un piccolo pad di gomma colorata, e un ago corto smussato. </li><li> Mettere i ratti in posizione supina, immobilizzare sia anteriori e posteriori zampe con nastro adesivo chirurgico senza applicare tratto o compressione per la pelle, e piegare la schiena con un pennarello o una penna di spessore cauterizzazione ponendolo sotto la zona lombare della schiena. È importante ottenere quante lordosi della colonna vertebrale lombare possibile al fine di migliorare l&#39;esposizione retroperitoneale e accesso alla sottorenale che facilita anastomosi microchirurgica. Questo posizionamento è consigliato per la creazione di aorta addominale aneurisma ma non necessaria per la raccolta graft toracico. </li></ol></li></ol> 2. innesto raccolta <ol><li> Uanestesia generale nder, aprire la cavità toracica (start innesto tempo di ischemia). Applicare un pizzico punta nociva per confermare che il ratto non risponde prima di procedere con i seguenti passi. Tagliare attraverso la parete addominale midventral, identificare il diaframma appena sopra il fegato, e tagliare il tessuto connettivo nella parte inferiore del diaframma per consentire l&#39;accesso alla gabbia toracica. Con forbici grandi, lato smussato verso il basso, tagliano costole solo uno centimetro a destra ea sinistra della linea mediana gabbia toracica e aprire la cavità toracica. I polmoni sono mobilitati per il lato destro del cuore. Sacrifica i ratti da sovradosaggio con iniezione intracardiaca di ketamina tronco hydrochloride.Pulmonary, vena succlavia sinistra, sinistra cranica vena cava, e la vena azygos interferire con la raccolta dell&#39;aorta toracica prossimale. </li><li> Caudale per le vene prominenti c&#39;è un buon punto di ingresso per iniziare la dissezione dell&#39;aorta toracica discendente utilizzando micro-forbici e microforceps. </li><li> Tracciare l&#39;aorta toracica back dalla parete dorsale del torace verso l&#39;alto per l&#39;arco aortico delicatamente retrazione schietto e dissezione con la pinza chirurgica Mosquito. </li><li> Morsetto e poi tagliare le vene con le forbici. Mantenere i morsetti sulle vene e utilizzare come un divaricatore per esporre l&#39;arco aortico sottostante. </li><li> Posizionare un non assorbibile 6-0 legatura di seta appena sopra la prima arteria intercostale lasciando l&#39;aorta. </li><li> Tagliare l&#39;aorta discendente appena sotto l&#39;arteria succlavia sinistra e poi sotto la legatura. Trimming può essere realizzata in modo da ottenere una geometria aneurisma standardizzato perpendicolare, o se necessario, per ottenere un determinato angolo tra l&#39;asse del aneurisma e l&#39;aorta. Misurare l&#39;innesto nella sua larghezza e lunghezza. NOTA: Raccolta innesti possono sia essere immediatamente trapiantate in ratti riceventi o ulteriormente elaborati per ottenere decellularization della parete dell&#39;innesto. Innesti decellularized possono essere conservati a -4 gradi Celsius fino a re-impianto in un secondo momento (Figura 1). The decellularization della parete dell&#39;aneurisma ha dimostrato di predisporre l&#39;aneurisma per ingrandire 11. </li></ol> 3 Graft Decellularization <ol style="margin-left: 40px;"><li> Innesti donatori congelare in tampone fosfato a -4 ° C. </li><li> Il giorno successivo, scongelare gli innesti, sciacquare con acqua depurata e deionizzata a temperatura ambiente, e incubare per 10 ore a 37 ° C nel 0,1% sodio dodecil solfato. </li><li> Infine, lavare gli innesti solfato trattati con sodio dodecil tre volte con agitazione, ricongelare in tampone fosfato, e mantenerlo a -4 ° C fino al momento dell&#39;uso. </li></ol> 4. Aneurisma Creation <ol style="margin-left: 40px;"><li> Dissezione della Aorta addominale <ol><li> Dopo che l&#39;animale è stato anestetizzato, agganciare il pelo dal sito chirurgico e pulire la pelle con un disinfettante idoneo. Test per la mancanza di una risposta toe-pinch prima incisione cutanea. Avviare l&#39;incisione prossimale 1cm a genitali in posizione midventral (ora di inizio dell&#39;operazione). Separare con cura la pelle dai muscoli sottostanti. Fine dissezione 1-2 centimetri sotto lo sterno. </li><li> Cautela ma con decisione tirare i muscoli addominali sottostanti per evitare danni agli organi sottostanti. Estrarre il taglio longitudinale lungo la linea alba verso l&#39;alto per il processo xifoideo e terminare in direzione caudale a livello della vescica. </li><li> Esercitare una leggera pressione sulla vescica per svuotarla al fine di agevolare l&#39;accesso allo spazio retroperitoneale. </li><li> Spostare l&#39;intestino tenue e il cieco di primo piano a destra oa sinistra. Identificare l&#39;intestino crasso e cioè del colon discendente in basso a sinistra della cavità addominale. </li><li> Tagliare il legamento tra tenue e il colon discendente in direzione craniale per consentire più ampia esposizione della parete dorsale del corpo. Posizionare un divaricatore auto-mantenendo per contenere le viscere a parte. </li><li> La posizione ideale di end-to-side aneurisma anastomosi is trova al livello tra la renale e ileolombare vene. L&#39;aorta addominale si trova retroperitoneale incorporato nel tessuto adiposo. Durante la dissezione prestare particolare attenzione alle coppie di quasi trasparenti ureteri e vasi testicolari. </li><li> Se è necessaria ulteriore retrazione di intestino, utilizzare grandi garza swap. La lordosi della colonna lombare indotta durante il posizionamento mettendo una penna cauterizzazione o un oggetto simile sotto la parte posteriore inferiore del ratto, riduce significativamente la necessità di intestino retrazione. </li><li> La superficie ventrale della parete dorsale del corpo è coperto con una peritoneo parietale sottile. Una volta che questo viene aperto, visualizza l&#39;aorta appena sotto. Durante attenta dissezione acuta e smussato dell&#39;aorta addominale dalle grandi vene adiacenti cogliere solo l&#39;avventizia per evitare danni alla parete del vaso. </li><li> Raramente, piccole arterie lombari nascono come vaso segmentale dalla superficie dorsale dell&#39;aorta addominale e interferiscono con la preparazione. Legatura e taglio della nave è needed per evitare stillicidio retrograda durante aneurisma sutura. L&#39;utilizzo di curve micro-pinza può facilitare il posizionamento legatura in profondità. </li></ol></li><li> End-to-side Anastomosi <ol><li> Mettere un pad in gomma colorata sotto l&#39;aorta addominale e rivestire con un piccolo tampone di garza. Rimuovere tessuto connettivo lasso e avventizia a livello del sito di anastomosi previsto. </li><li> Bloccare l&#39;aorta addominale distale al anastomosi prima, poi prossimale (ora di inizio clampaggio aortico). Questo assicura un riempimento fermo della nave e facilita la successiva arteriotomia. </li><li> Eseguire il arteriotomia utilizzando sia micro-forbici diritte o curve. Un micro-pinza detiene un pezzo molto piccolo della parete del vaso di ritagliare una forma ellittica. </li><li> Lavare accuratamente l&#39;arteria con soluzione fisiologica in entrambe le direzioni utilizzando un ago a punta smussata. </li><li> Mettere i primi due punti di sutura di questo anastomosi end-to-side alla fine prossimale e distale del arteriotomia (ora di inizio anastomosi). Evitare di afferrare della parete dei vasi con le micro-pinza quando possibile. Assicurarsi che ogni sutura viene inserito attraverso tutti gli strati della parete del vaso. </li><li> Eseguire la sutura sia come suture continue o interrotte. Se si sceglie di sutura interrotta poi posizionare il retro nove o`clock sutura prima. Suture successive possono essere distanziate di partenza adiacente al primo sutura. Afferrare con attenzione l&#39;avventizia. Evitare qualsiasi spremitura / afferrare dell&#39;intima. </li><li> Quando la parete di fondo è finito, controllare la parte endoluminale della anastomosi per suture fuori luogo. Eseguire le stesse procedure nello stesso ordine dal lato anteriore. Assicurarsi che la prima di un totale di tre nodi per sutura è duro ma non troppo stretto. </li></ol></li><li> Emostasi e chiusura <ol><li> Dopo la fine di anastomosi lato è completata (tempo di anastomosi termino), sciacquare il sito con soluzione salina e rimuovere il morsetto distale prima per consentire il riflusso (fine aortica serraggio tempo e la fine del trapianto ischemia time). </li><li> Se l&#39;emorragia evidente si verifica da riflusso un punto in più può essere necessaria (tempo di emostasi cominciare). In caso di stillicidio minore, ottenere emostasi con una leggera pressione sul sito di sanguinamento con un piccolo pezzo di un tampone di garza. </li><li> Rimuovere il morsetto vascolare prossimale, sciacquare il sito anastomosi una volta di più, e tagliare le rimanenti estremità della legatura alla cupola aneurisma. </li><li> Confermare pervietà dell&#39;aneurisma mediante l&#39;osservazione di aumento di volume dell&#39;aneurisma durante il picco dell&#39;onda di polso arterioso. Valutare distale dell&#39;arteria addominale pervietà attraverso la diretta &quot;test di mungitura&quot;. </li><li> Rimuovere il foglio di plastica e il piccolo tampone di garza sotto. Il vortice di sangue pulsante all&#39;interno dell&#39;aneurisma creato è chiaramente visibile. </li><li> Coprire linee di sutura intorno alla anastomosi con piccoli pezzi di tessuto adiposo o Spongostan per emostasi supplementare se piccolo stillicidio è ancora presente (ora di fine della emostasi). </li><li> Rimuovere i tessuti molli spalmatore e tamponi di garza.Posizionare l&#39;intestino tenue, il cieco, e la massa grassa di nuovo nella loro posizione corretta. </li><li> Chiudere i muscoli addominali della linea mediana con 5-0, 4-0, o 3-0 suture riassorbibili o non riassorbibili seguiti da pelle chiusura della ferita con tecnica di sutura continua con 3-0 sutura riassorbibile polifilamento (tempo di funzionamento di fine). Nota: Nella nostra esperienza ratti tollerati suture riassorbibili pelle meglio di suture monofilamento non assorbibili. </li></ol></li></ol>

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Gli autori non hanno alcun interesse finanziario o commerciale in uno qualsiasi dei farmaci, materiali o attrezzature utilizzate.

I progressi nella nostra comprensione della complessa biologia di sacciforme dell&#39;arteria cerebrale aneurisma dipende analisi dei dati epidemiologici e clinici, integrati da studi di laboratorio su campioni di pazienti e lavori sperimentali in modelli animali 3,12,13. Piccoli animali come il topo sono intrinsecamente associati a minori costi di esperimenti e abitazioni, e la necessità di attrezzature specializzate ridotti. Un tempo medio di funzionamento totale di meno di 60 m...

La rottura di un aneurisma sacciforme dell&#39;arteria cerebrale provoca emorragia pericolosa per la vita che porta a ictus, danni neurologici permanenti, o la morte. La rottura può essere prevenuta o clipping microchirurgica o endovascolare dell&#39;aneurisma occlusione. Non è stato ancora istituito un trattamento medico per prevenire la crescita dell&#39;aneurisma e la rottura. Sono necessari modelli sperimentali per aneurismi sacciformi per studiare la biologia degli aneurismi arteriosi e per la sperimentazione di dispositivi terapeutici e le strategie. Per questi scopi, diversi modelli in diverse specie sono stati sviluppati e pubblicati 1. Modelli aneurisma più grandi in maiali, cani e conigli sono preferibilmente utilizzati per testare le innovazioni endovascolari in architettura complessa aneurisma 1,2. Modelli murini aneurisma, d&#39;altro canto, consentono test domande di ricerca di specie geneticamente modificate 3,4 e facilitare il chiarimento di aneurisma biologia a livello cellulare e molecolarelivello molto meglio di specie più grandi 1. Anche se endovascolare trans-carotideo e la distribuzione dispositivo trans-iliaca è limitato ai ratti più grandi (&gt; 400-500 g) e stent più piccolo di 2,0 mm e 1,5 mm di diametro di 5,6, stent possono anche essere collocati attraverso l&#39;inserimento diretto nel dell&#39;aorta addominale segmento di ospitare gli aneurismi sperimentali. Impieghi precedenti utilizzando il ratto microchirurgico addominale fianco aortico modello aneurisma dimostrato la sua fattibilità in dispositivi embolici test romanzo e il suo uso nello studio delle basi molecolari di aneurisma biologia 3,7. Molti dei modelli sperimentali aneurisma sacciforme attualmente pubblicati richiedono costose attrezzature, ambienti particolari (ad esempio sale operatorie sterili con capacità di fluoroscopia), la competenza radiologia interventistica, o l&#39;uso di specie costosi. Questi requisiti limitano l&#39;uso diffuso di questi modelli, e portano a l&#39;uso di modelli diversi in diversi laboratori, che mfiocchi confronto dei dati e meta-analisi di difficile, se non impossibile. Un modello sperimentale semplice, robusto ed economico è necessario come strumento standardizzato che può essere utilizzato in modo standardizzato in vari laboratori al fine di ottenere risultati comparabili da varie istituzioni. A questo scopo, abbiamo creato l&#39;aorta fianco arteriosa sacculare modello aneurisma ratto. Lo scopo di questo rapporto è quello di presentare passo-passo le istruzioni procedurali, le informazioni sulle attrezzature necessarie, e per discutere importanti caratteristiche anatomiche e chirurgiche per il successo creazione microchirurgico di aneurismi aortici addominali laterali nel ratto.

<table><tbody><tr><td>Medetomidina</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi generico</td></tr><tr><td>Ketamina</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi generico</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi generico</td></tr><tr><td>Soluzione salina</td><td></td><td></td><td></td>tamponata con fosfato</tr><tr><td>Sodio dodecil solfato (0,1%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-0 sutura riassorbibile</td><td>Ethicon Inc., USA</td><<td>a name = "RANGE! C7">VCP824G</a></td><td></td></tr><tr><td>5-0 sutura non assorbibile</td><td>Ethicon Inc., USA</td><td>8618G</td><td></td></tr><tr><td>6-0 sutura di seta non assorbibile</td><td>B. Braun, Germania</td><td>C0761060</td><td></td></tr><tr><td>9-0 micro sutura in nylon</td><td>B. Braun, Germania</td><td>G1118471</td><td></td></tr><tr><td>Spongostan</td><td>Ethicon Inc., USA</td><td>MS0002</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio operatorio</td><td>Leica , Germania</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera digitale per microscopio</td><td>Sony, Giappone</td><td>SSC-DC58AP</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici standard</td><td>B. Braun, Germania</td><td>Protocollo</td><td>Multiple See 1.4</td></tr><tr><td>Strumenti microchirurgici</td><td>B. Braun, Germania</td><td>Multiple</td><td>See protocol 1.5</td></tr><tr><td>Applicatore di clip vascolari</td><td>B. Braun, Germania</td><td>FT495T</td><td></td></tr><tr><td>Morsetti vascolari temporanei</td><td>B. Braun, Germania</td><td>FT250T</td><td></td></tr><tr><td>Graph Pad Prisma software statistico&nbsp;</td><td>GraphPad Software, San Diego, California, Stati Uniti</td><td></td><td>V 6.02 per Windows</td></tr></tbody></table>

la helsinki rat microchirurgica sidewall aneurisma modello

The Helsinki Rat Microsurgical Sidewall Aneurysm Model

Modelli sperimentali aneurisma sacciforme sono necessari per testare nuove opzioni di trattamento chirurgico ed endovascolare e dispositivi prima di essere introdotti nella pratica clinica. Inoltre, sono necessari modelli sperimentali per chiarire la complessa biologia aneurisma che porta alla rottura di aneurismi sacciformi. Diversi tipi di modelli sperimentali per aneurismi sacciformi sono stati stabiliti in specie diverse. Molti di loro, tuttavia, richiedono abilità speciali, attrezzature costose, o in ambienti speciali, che limita il loro uso diffuso. Un modello sperimentale semplice, robusto ed economico è necessario come strumento standardizzato che può essere utilizzato in modo standardizzato in varie istituzioni. Il modello aortico addominale fianco aneurisma ratto microchirurgica unisce la possibilità di studiare entrambe le strategie di trattamento endovascolare nuove e le basi molecolari di aneurisma biologia in un standardizzata e poco costosomodo. Innesti standardizzati per mezzo di forma, dimensione, e la geometria vengono raccolte da aorta toracica discendente di un topo donatore e poi trapiantato a un destinatario ratto singenici. Gli aneurismi sono suturati end-to-side con continui o interrotti 9-0 suture in nylon per l&#39;aorta addominale sottorenale. Presentiamo passo-passo le istruzioni procedurali, le informazioni sulle attrezzature necessarie, e discutiamo importanti dettagli anatomici e chirurgici per il successo creazione microchirurgico di un aneurisma aortico fianco nel ratto.

Una serie pilota composto da 14 ratti. Successivamente un totale di 84 animali sono stati operati in base al protocollo presentato per diversi progetti di ricerca tra marzo e settembre 2012. Altri 29 animali servivano come donatori per innesti sacculari arteriosi. I restanti esperimenti sono stati eseguiti utilizzando innesti pre-trattati raccolti e conservati da precedenti esperimenti utilizzando ratti dello stesso sesso, ceppo, peso ed età. Il peso corporeo, tempo complessivo di funzioname...

Gli aneurismi microchirurgici della parete laterale nei ratti sono creati dall'anastomosi end-to-side di un innesto aortico nell'aorta addominale. Presentiamo istruzioni dettagliate e discutiamo i dettagli anatomici e chirurgici per una creazione sperimentale di successo dell'aneurisma sacculare.

La Helsinki Rat microchirurgica Sidewall Aneurisma Modello

Experimental saccular aneurysm models are necessary for testing novel surgical and endovascular treatment options and devices before they are introduced ...

Modello di aneurisma laterale nel ratto secondo il metodo di Helsinki. Il seguente video fornisce descrizioni dettagliate delle caratteristiche più importanti del modello di aneurisma laterale microchirurgico nel ratto sviluppato presso il Dipartimento di Neurochirurgia dell'Ospedale Universitario di Helsinki, in Finlandia. Presentiamo istruzioni procedurali passo dopo passo, informazioni sull'attrezzatura necessaria e discutiamo i dettagli anatomici e chirurgici fondamentali per la corretta realizzazione microchirurgica di un aneurisma laterale nel ratto, inclusi strumenti e materiali di consumo.La stanza per la chirurgia sugli animali di piccola taglia deve essere mantenuta silenziosa, asettica e con la temperatura ambiente mantenuta a 23 più o meno tre gradi. Per eseguire l'intervento sperimentale sull'aneurisma è necessario il seguente equipaggiamento minimo. Un microscopio chirurgico da tavolo è ideale se dotato di un cannocchiale ausiliario e di una telecamera microscopica digitale.Si utilizza una superficie operativa riutilizzabile non porosa e una superficie strumentale igienizzabile per proteggere i materiali di consumo da banco come disinfettanti cutanei, linea cellulare fisiologica, di dimensioni minori e maggiori. Scambi d'oro e materiale per sutura, inclusi suture micro da nove zero. Vengono preparate suture non riassorbibili da cinque zero e suture assorbibili libere da zero.Sono necessari i seguenti strumenti chirurgici standard: forbici chirurgiche, pinze per tessuti, divaricatore per tessuti molli o retraore auto mantenente, e due pinze chirurgiche di tipo mosca. Il set base di strumenti microchirurgici comprende un portaaculeo microchirurgico curvo, una pinza microchirurgica curva e due pinze microchirurgiche dritte, nonché una forbice microchirurgica dritta o curva. Mantenere gli strumenti microchirurgici in una bacinella reniforme contenente linea cellulare sterile per mantenere gli strumenti antiaderenti e puliti.Durante l'intervento chirurgico. La bacinella chirurgica è foderata con un tappetino di gomma o con un guanto chirurgico per evitare danni alle punte degli strumenti microchirurgici. Inoltre, sono necessari un applicatore di clip vascolari e tre clamp vascolari temporanei atraumatici.È importante che le pinze utilizzate abbiano una bassa forza di chiusura per evitare lesioni alla parete molto sottile dell'aorta del ratto. Prepariamo inoltre un righello con tacche di mezzo millimetro, un piccolo tappetino di gomma colorato e un ago corto e smussato. Si anestetizza il ratto in base al peso mediante iniezione sottocutanea di meine cloridrato, 0,4 milligrammi per chilogrammo, e iniezione intraperitoneale di ketomine cloridrato, 60 milligrammi per chilogrammo. Si verifica l'assenza del riflesso alla doppia pizzicatura per confermare che il ratto sia completamente anestetizzato prima dell'incisione cutanea e dell'intervento. Si monitora il livello di anestesia ogni 15 minuti durante l'intervento chirurgico verificando la frequenza respiratoria, la frequenza cardiaca e la reazione a stimoli nocivi.Viene somministrata un'iniezione sottocutanea di buprenorfina 0,03 milligrammi per chilogrammo per l'analgesia postoperatoria e ripetuta se necessario. Ogni 12 ore prelievo del trapianto dall'aorta giurassica. Posizionare il ratto in posizione supina, immobilizzando sia gli arti anteriori che posteriori con nastro chirurgico senza applicare trazione o compressione sulla pelle.Applicare uno stimolo doloroso a doppia pinzatura per confermare che il ratto è completamente inerte prima di aprire la cavità toracica. Immediatamente dopo l'apertura della cavità toracica, il ratto viene sacrificato somministrando un sovradosaggio endocardiaco di cloridrato di ketamina, e i polmoni vengono spostati sul lato destro del cuore. Tronco polmonare, vena succlavia sinistra, vena cranica sinistra, vena CVA e vene ATUs ostacolano il prelievo dell'aorta toracica prossimale adiacente alle vene prominenti.Esiste un ottimo punto di ingresso per iniziare la dissezione dell'aorta toracica discendente utilizzando forbici e pinze microchirurgiche. Seguire l'aorta toracica partendo dalla parete dorsale del torace verso l'alto fino all'arco aortico, mediante una delicata retrazione e dissezione con la pinza chirurgica emostatica; i vasi vengono pinzati e quindi recisi con le forbici. Le pinze rimangono applicate sui monconi vascolari e vengono utilizzate come retractor per esporre l'arco aortico sottostante.Viene posizionata una legatura appena sopra la prima arteria intercostale che si dirama dall'aorta. L'aorta discendente viene quindi recisa appena al di sotto dell'arteria sottoclavia sinistra e successivamente al di sotto della legatura. È possibile effettuare un'angolazione per ottenere una geometria dell'aneurisma standardizzata e perpendicolare, oppure, se necessario, per ottenere un angolo specifico tra l'asse dell'aneurisma e l'aorta.Il graft viene misurato in larghezza e lunghezza. I graft prelevati possono essere immediatamente trapiantati in ratti riceventi oppure ulteriormente trattati per ottenere la decellularizzazione del graft. I graft decellularizzati possono essere conservati a meno quattro gradi Celsius fino al reimpianto.In una data successiva. È stato dimostrato che la decellularizzazione della parete dell'aneurisma predispone l'aneurisma ad allargarsi. Dopo aver anestetizzato l'animale, tagliare il pelo dalla zona chirurgica e pulire la pelle con un disinfettante adeguato, posizionare il ratto in posizione supina immobilizzando sia gli arti anteriori che posteriori con un nastro chirurgico senza applicare trazione o compressione sulla pelle, quindi flettere la schiena con un pennarello spesso o una penna rossa posizionandola sotto la regione lombare della schiena. È fondamentale ottenere la massima lordosi possibile della colonna lombare al fine di migliorare l'esposizione retroperitoneale e l'accesso all'aorta infrarenale, il che facilita l'anastomosi microchirurgica. Verificare l'assenza del riflesso del pizzicotto per confermare che il ratto sia completamente anestetizzato prima dell'incisione cutanea.Dopo un'incisione mediana, l'intestino tenue e il salmone prominente vengono spostati a destra o a sinistra. Il legamento compreso tra l'intestino tenue e il colon discendente viene reciso in direzione craniale. Per consentire una maggiore esposizione della parete corporea dorsale, viene posizionato un retrattore auto-rtenuto per tenere separati gli intestini.La posizione ideale dell'anastomosi dell'aneurisma dell'arteria aortica addominale si trova a livello compreso tra le vene renali e iliolumbari. L'aorta addominale giace retroperitonealmente, immersa nel tessuto adiposo durante la dissezione. Particolare attenzione deve essere prestata ai vasi ureterali e testicolari, che sono appaiati e quasi trasparenti.È necessario un ulteriore ritiro delle intestini. Possono essere utilizzati tamponi più grandi. La superficie ventrale della parete corporea dorsale è ricoperta da un sottile peritoneo parietale.Una volta aperto, l'aorta può essere visualizzata appena al di sotto durante un'attenta dissezione secca e ottusa dell'aorta addominale. Si deve afferrare esclusivamente l'advia per evitare danni alla parete vascolare. Di frequente, piccole arterie lombari originano come vasi segmentali dalla superficie dorsale dell'aorta addominale e possono ostacolare la preparazione.L'utilizzo di pinze microcurve può facilitare la legatura. È necessario posizionare correttamente la legatura in profondità e tagliare il vaso per evitare un'emorragia retrograda. Durante la sutura dell'aneurisma, si posiziona sotto l'aorta addominale un tappetino di gomma colorato, quindi si rimuove con una garza sterile il tessuto connettivo lasso e l'AIA al livello del sito di anastomosi pianificato.L'aorta addominale viene clampata prima in posizione distale rispetto all'anastomosi, quindi in posizione prossimale. Questo garantisce un riempimento solido del vaso e facilita l'otomia arteriosa successiva. L'otomia arteriosa viene eseguita utilizzando forbici microchirurgiche dritte o curve.Una pinzetta microforza tiene sollevato un frammento molto piccolo della parete vascolare per tagliare una forma ellittica. L'arteria viene lavata accuratamente in entrambe le direzioni con la linea cellulare mediante un ago a punta smussata. I primi due punti di sutura di questa anastomosi di estremità a laterale vengono posizionati all'estremità prossimale e distale dell'incisione arteriosa.A questo punto, la sutura viene eseguita con punti continui o separati. Se si opta per punti separati, si posiziona innanzitutto il punto posteriore alle nove. Si evita di afferrare la parete vascolare con la pinzetta microchirurgica.Ogni volta che possibile, assicurarsi che ciascun punto passi attraverso tutti gli strati della parete del vaso. I punti successivi possono essere distanziati a partire adiacenti al primo punto, rispettivamente sulle pareti del vaso. L'AIA viene afferrata con cautela ed è evitata qualsiasi compressione o presa dell'intima.Una volta completata la parete posteriore, si verifica la parte endoluminale dell'anastomosi. Per i punti errati, le stesse procedure vengono eseguite nello stesso ordine anche sul lato anteriore dell'anastomosi, in particolare il primo di un totale di tre nodi. La procedura deve essere ferma ma non troppo stretta.Al termine dell'endocitosi, il sito viene risciacquato con la linea cellulare e la pinza distale viene rimossa per prima per consentire il reflusso. Se si verifica un sanguinamento evidente dal reflusso, potrebbe essere necessario un punto di sutura aggiuntivo. In caso di lieve fuoriuscita di sangue, l'emostasi può essere ottenuta applicando una leggera pressione sulla zona sanguinante.Utilizzando un piccolo pezzo di innesto da fantasma. Successivamente, si rimuove la pinza vascolare prossimale. Il lato dell'anastomosi viene risciacquato ancora una volta e le estremità rimanenti della legatura al sacco aneurismatico vengono recise; la pervietà dell'arteria addominale distale viene valutata mediante il test diretto di spremitura.La pellicola di plastica e il tampone fantasma più piccolo sottostante vengono rimossi. Il sangue pulsante all'interno dell'aneurisma creato è chiaramente visibile. Le linee di sutura intorno all'anastomosi possono essere ricoperte con piccoli pezzi di tessuto adiposo o con pongo stand per un'emostasi aggiuntiva.Se è ancora presente un lieve sanguinamento, lo spargitore per tessuti molli e le garze vengono rimossi. In conclusione, il modello di aneurisma nel ratto di Helsinki è un metodo rapido, conveniente e riproducibile per creare aneurismi sperimentali standardizzati in base a dimensioni, forma e configurazione geometrica dell'aneurisma in relazione all'arteria madre.

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La Helsinki Rat microchirurgica Sidewall Aneurisma Modello

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