Name: Eterotopica ausiliario Ratto trapianto di fegato con flusso regolato Portal Vein arterialization in acuta insufficienza epatica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 19 s
Description: Scopri il trapianto epatico ausiliario eterotopico con arterializzazione della vena porta nel ratto per studiare la funzione e la morfologia del graft in insufficienza epatica acuta.

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Questo studio è stato finanziato dalla &quot;Deutsche Forschungsgemeinschaft&quot; (DFG). K. Schleimer è stato sostenuto dalla Lise Meitner Fellowship del Ministero della Scienza e della Ricerca del NRW. Vorremmo ringraziare la signora Maria-Giovanna Blümich per l&#39;eccellente assistenza editing. Dr. Maria Kokozidou è stato finanziato da Fresenius 2011_A61.

1. Gli animali sperimentali <ol><li> Ottenere l&#39;approvazione Comitato Etico Locale per tutti gli esperimenti che verranno eseguite, in conformità con le linee guida di protezione degli animali FELASA (K 40, 17/99). </li><li> Utilizzare i ratti Lewis maschi disponibili per l&#39;acquisto da qualsiasi allevatore commerciale (ad esempio, Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Germania). Qui, 224 animali (112 donatori, 112 destinatari) sono stati utilizzati per eseguire 112 trapianti. I destinatari sono stati sacrificati a 6 settimane dopo l&#39;intervento. Al momento dell&#39;operazione, gli animali dovrebbero pesare 250-350 g. </li><li> Tenere gli animali in ambienti climatizzati con libero accesso a cibo e acqua. </li></ol> 2 Anestesia e preparazione operativa <ol><li> Posizionare il ratto in una scatola di plexiglas collegato alla macchina per anestesia con un tasso di flusso di ossigeno di 1 L / min, e un vaporizzatore isofluorane con il 5% di gas anestetico per indurre l&#39;anestesia. Mantenere l&#39;anestesia al 1,5% isofluorane. </li><li> Mettere i topi inposizione supina su una piastra riscaldante. </li><li> Rimuovere il pelo del ventre con una crema depilazione. </li><li> Preparare un campo chirurgico sterile come segue: Utilizzare un disinfettante per pulire il banco. Per la disinfezione del sito di incisione uso Clorexidina prima, seconda alcool e, infine, una soluzione scrub (ad esempio, clorexidina e il 70% di alcool isopropilico). Indossare un camice chirurgico monouso e guanti chirurgici. </li><li> Utilizzare strumenti di microchirurgia sterili. </li><li> Utilizzare un microscopio funzionamento in 12-20 volte di ingrandimento. </li></ol> 3 Procedura chirurgica <ol><li> Funzionamento dei donatori Preparazione <ol><li> Eseguire una laparotomia mediana e resecare il lobo laterale sinistro e il lobo mediano del trapianto, come descritto da Higgins. 14 </li><li> Poi preparare il legamento epatoduodenale. Prima legare il dotto biliare per indurre congestione e dilatazione del piccolo dotto biliare. Poi legare e transetto la gastroduodenale vena e arteria. Successivamente, isolare il tronco celiaco e l&#39;arteria epatica comune e transetto l&#39;arteria gastrica sinistra e l&#39;arteria splenica. Incidere il dotto biliare congestionato, e di introdurre uno stent 20-G in esso. Il posizionamento dello stent deve garantire il drenaggio dell&#39;intero sistema biliare ilare. Transetto il dotto biliare distalmente allo stent. </li><li> Isolare il segmento infraepatica della vena cava proprio sopra la vena renale destra. Perfusione </li><li> Dopo legatura dell&#39;aorta sopra il tronco celiaco, bloccare la vena porta e incidere esso. Introdurre il catetere perfusione (14 G) nella vena porta, ed eseguire la perfusione con 30 ml di istidina-triptofano-chetoglutarato (HTK) -solution (12 cm H2O, 4 ° C). </li><li> Tagliare il diaframma e la vena cava sovraepatica per consentire al perfusato di fuoriuscire. </li><li> Accise il tronco celiaco con una patch aortica e sciacquare con soluzione istidina-triptofano-chetoglutarato. Espianto </li><li> Transetto la vena cava infraepatica proprio sopra la vena renale destra. </li><li> Quindi, collocare uno stent con un diametro di 0,3 mm nella vena porta e fissarlo con una legatura. Durante la seguente operazione, la vena porta viene arterializzato attraverso l&#39;arteria renale destra. Transetto la vena porta distalmente allo stent. </li><li> Dopo la legatura della vena cava sovraepatica, transetto insieme con un polsino di diaframma. </li><li> Espiantare l&#39;innesto e conservarla in istidina-triptofano-chetoglutarato (HTK) -solution a 4 ° C in un sacchetto di plastica sul ghiaccio. Suture Luogo d&#39;angolo (8-0 Ethilon) nella vena cava infraepatica. </li></ol></li><li> Funzionamento del destinatario <ol><li> Eseguire una laparotomia mediana e preparare la vena cava infraepatica. Quindi isolare l&#39;arteria renale destra e l&#39;uretere, legare l&#39;uretere e transetto esso. Bloccare l&#39;arteria renale destra alla sua origine, quindi legare la vena renale destra. Poi, dopo la recisione di entrambi rivasi nali, eseguire la nefrectomia. Successivamente, ridurre l&#39;arteria renale destra, sciacquare con soluzione salina eparina (soluzione salina di eparina 40 UI / ml). </li><li> Transetto della vena renale destra prossimale alla legatura dopo il bloccaggio prossimale e distale della vena cava infraepatica per creare un ovale lume della vena cava infraepatica. Sciacquare la vena cava con una soluzione salina eparina. Impianto del trapianto nella regione renale destra dell&#39;addome del destinatario. </li><li> Anastomose end-to-side vena cava infraepatica del donatore al recipient`s vena cava con un 8-0 Ethilon sutura continua. </li><li> Dopo il risciacquo con soluzione di eparina / salina, introdurre lo stent nella vena porta in arteria renale destra (Figura 3). Collegare la vena porta e l&#39;arteria renale con 2 punti (8-0 Ethilon). Fissare lo stent collegati dell&#39;arteria renale con una legatura (intrecciato di seta nera 7-0). </li><li> Per consentire la riperfusione, prima rimuovere la pinza arteriosa, allora entrambimorsetti venosi (Figura 4). </li><li> Preparare l&#39;aorta sottorenale, quindi inserire un prossimale e distale microclamp e incidere l&#39;aorta destra tra i due morsetti. Eseguire una anastomosi termino-laterale tra l&#39;aorta e il tronco celiaco del donatore, utilizzando una patch aortica, con un 10-0 Ethilon sutura continua. </li><li> Inserire il dotto biliare nel duodeno: Applicare una sutura a borsa nella parete duodenale, fare una piccola incisione nella parete duodenale proprio nel mezzo della a borsa. Introdurre il dotto biliare stent nel duodeno, e stringere la sutura a borsa. Infine, tenere premuto il duodeno e il dotto biliare strettamente insieme con due punti (Ethilon 8-0) (Figura 5). </li><li> Quindi eseguire una resezione subtotale del fegato nativo, prima descritto da Emond et al. per imitare insufficienza epatica acuta. 7 </li><li> Fissare la vena cava sovraepatica dell&#39;innesto, con un polsino di diaframma, alla parete addominale laterale del recipient con 4-0 Vicryl sutura. Risciacquare l&#39;addome con soluzione salina (Figura 6). </li><li> Per lo strato muscolare utilizzare una sutura continua 4-0 Vicryl e per la sutura cutanea una esecuzione 3-0 Vicryl. </li></ol></li></ol> 4 Recupero e gestione postoperatoria <ol><li> Lasciate che gli animali recuperare da anestesia sotto una lampada di riscaldamento a raggi infrarossi. </li><li> Iniettare Buprenorfina alla dose di 0,03-0,05 mg / kg di peso corporeo sc ogni 8-12 ore per 2 giorni. </li><li> Esaminare gli animali concernenti la condizione generale e segni di malattia o di infezioni. </li></ol> 5 Calcolo del peso iniziale Native Fegato Calcolare il peso iniziale fegato nativo nel seguente modo: sottrarre il peso dei lobi epatici asportati dal peso del fegato completa (2,66% del peso corporeo (questo valore con una deviazione standard di +/- 0,49% è stata determinata in esperimenti precedenti con n = 80 animali dello stesso ceppo ege)). 15

<ol><li>Boudjema, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+for+fulminant+and+subfulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation for fulminant and subfulminant hepatic failure.</a> Transplantation. 59, 218-223 (1995).</li>
<li>Boudjema, K., Jaeck, D., Siméoni, U., Bientz, J., Chenard, M. P., Brunot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+auxiliary+liver+transplantation+for+subacute+liver+failure+in+a+child%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Temporary auxiliary liver transplantation for subacute liver failure in a child.</a> The Lancet. 342, 778-779 (1993).</li>
<li>Chenard-Neu, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation%3A+Regeneration+of+the+native+liver+and+outcome+in+30+patients+with+fulminant+hepatic+failure+-+a+multicenter+European+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation: Regeneration of the native liver and outcome in 30 patients with fulminant hepatic failure - a multicenter European study.</a> Hepatology. 23, 1119-1127 (1996).</li>
<li>Gubernatis, G., Pichlmayr, R., Kemnitz, J., Gratz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver%E2%80%93transplantation+%28APOLT%29+for+fulminant+hepatic+failure%3A+first+successful+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver–transplantation (APOLT) for fulminant hepatic failure: first successful case report.</a> World J Surg. 15, 660-666 (1991).</li>
<li>Erhard, J., Lange, R., Giebler, R., Rauen, U., de Groot, H., Eigler, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterialization+of+the+portal+vein+in+orthotopic+and+auxiliary+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Arterialization of the portal vein in orthotopic and auxiliary liver transplantation.</a> Transplantation. 60, 877-879 (1995).</li>
<li>Erhard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+arterialization+of+the+portal+vein+for+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with arterialization of the portal vein for acute hepatic failure.</a> Transpl Int. 11, 266-271 (1998).</li>
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<li>Terpstra, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+grafting%3A+a+new+concept+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver grafting: a new concept in liver transplantation.</a> The Lancet. 342, 758(1993).</li>
<li>Terpstra, O. T., Reuvers, C. B., Schalm, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+heterotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary heterotopic liver transplantation.</a> Transplantation. 45, 1003-1007 (1988).</li>
<li>Schleimer, K., Lange, R., Rauen, U., Erhard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+acute+liver+failure+in+the+rat+-+an+illustrated+description+of+a+new+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in acute liver failure in the rat - an illustrated description of a new surgical approach.</a> Langenbecks Arch Surg. 384 (2), 204-208 (1999).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologic+microcirculation+of+the+heterotopically+transplanted+rat+liver+with+portal+vein+arterialization+depending+on+optimal+stent+diameter%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Physiologic microcirculation of the heterotopically transplanted rat liver with portal vein arterialization depending on optimal stent diameter.</a> Med Sci Monit. 28 (BR140-145), (2006).</li>
<li>Hong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+portal+arterialization+with+auxiliary+liver+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hiroshima+J.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Study of portal arterialization with auxiliary liver in rats.</a> Hiroshima J. Med. Sci. 40, 29-33 (1991).</li>
<li>Higgins, G. M., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+pathology+of+the+liver.+I--Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Path%22%5BJournal%5D)">Experimental pathology of the liver. I--Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch. Path. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+flow-regulated+portal+vein+arterialization+offers+a+successful+therapeutic+option+in+acute+hepatic+failure--investigations+in+heterotopic+auxiliary+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation.</a> Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).</li>
<li>Lee, S., Edgington, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Forum%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in the rat.</a> Surg. Forum. 17, 220-222 (1966).</li>
<li>Hess, F., Willemen, A., Jerusalem, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+the+rat%2C+influence+of+the+condition+of+the+recipient%27s+liver+on+the+fate+of+the+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in the rat, influence of the condition of the recipient's liver on the fate of the graft.</a> Eur. Surg. Res. 9, 270-279 (1977).</li>
<li>Aguirrezabalaga, J., Arnal, F., Marini, M., Centeno, A., Fernandez-Selles, C., Rey, I., Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+portal+arterialization+in+the+rat%3A+description+of+a+new+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with portal arterialization in the rat: description of a new model.</a> Microsurgery. 22, 21-26 (2002).</li>
<li>Palmes, D., Dietl, K. H., Drews, G., Holzen, J. P., Spiegel, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+treatment+of+acute+liver+failure+in+a+new+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver transplantation: treatment of acute liver failure in a new rat model.</a> Langenbecks Arch Surg. (386), 534-541 (2002).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+microcirculation+of+a+liver+graft+by+controlled+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved microcirculation of a liver graft by controlled portal vein arterialization.</a> J Surg Res. 116 (2), 202-210 (2004).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+hyperperfusion+causes+disturbance+of+microcirculation+and+increased+rate+of+hepatocellular+apoptosis%3A+investigations+in+heterotopic+rat+liver+transplantation+with+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Portal hyperperfusion causes disturbance of microcirculation and increased rate of hepatocellular apoptosis: investigations in heterotopic rat liver transplantation with portal vein arterialization.</a> Transplant Proc. 38 (3), 725-729 (2006).</li>
</ol>

Tutti gli autori hanno dichiarato senza interessi in competizione.

Il primo trapianto di fegato di ratto ausiliario eterotopico è stato descritto da Lee et al., 16 nel 1966, seguita da Hess. 17 La vena porta del graft è stato anastomizzata con la vena porta del destinatario. Durante questa procedura, il portale afflusso di sangue venoso al fegato nativo è compromessa. Nel 1991 Hong eseguito HALT con PVA attraverso l&#39;arteria iliaca del destinatario. 13 senza regolazione del flusso sanguigno massiccio portale e si...

Insufficienza epatica acuta pone un problema grave in medicina clinica che porta a un tasso di mortalità del 60-80%. 8 In caso di insufficienza epatica acuta, trapianto di fegato ausiliario è una terapia alternativa promettente per colmare la fase acuta. Il fegato nativo è lasciato per rigenerare e segue alla rigenerazione dei farmaci immunosoppressione possono essere sospesi. Come conseguenza l&#39;innesto diventerà atrofica. Tuttavia, la tecnica operatoria per il trapianto di fegato ausiliario è ancora discussa. 1-3 In questo contesto, Terpstra ha segnalato la mancanza di spazio per il trapianto, il sangue portale rubare fenomeno e il problema della congestione venosa e il drenaggio. 9-10 vena porta del donatore è stato anastomizzato end-to-side alla vena porta del destinatario. Ciò ha provocato una concorrenza portale flusso tra l&#39;innesto e il fegato nativo e trombosi della vena porta. La maggior parte di questi problemi tecnici possono essere evitati con l&#39;uso del metodo APOLT-(orthotopic impianto di segmenti ausiliari). 4 Tuttavia, questo metodo richiede ampie resezioni sia del fegato nativo e l&#39;innesto. 4 Nel 1998, Erhard e il suo team hanno sviluppato il trapianto eterotopico ausiliario di fegato (HALT) utilizzando arterialization vena porta (PVA) (Figura 1 ). L&#39;ilo e la vena porta del fegato nativo sono rispettati con l&#39;uso di questo metodo. Che non risparmia il destinatario da effetti collaterali indesiderati come la trombosi della vena porta e sangue portale rubare fenomeno, che potrebbe disturbare il recupero del fegato nativo. Inoltre, non estese resezioni epatiche del fegato nativo e l&#39;innesto sono necessari per questo metodo, con conseguente minor sanguinamento e più restante massa totale del parenchima epatico per colmare (trapianto) e rigenerazione (fegato nativo). Questa tecnica ha mostrato promettenti risultati clinici iniziali. 5-6 L&#39;obiettivo di questo lavoro sperimentale è stato lo sviluppo di una tecnica di HALT con arterialization vena porta inratto per la ricerca (Figura 2). Negli esperimenti preliminari non abbiamo preso in considerazione la regolazione del flusso sanguigno del portale arterializzato vena, che ha provocato la congestione del graft trapiantato dopo riperfusione e sanguinamento massiccio dalla capsula epatica. 11 Da allora il flusso di sangue nella vena porta arterializzato è regolata da uno stent con un diametro interno di 0,3 mm e una lunghezza di 8 mm. Esperimenti pilota hanno dimostrato che un diametro stent di 0,3 mm produce un flusso medio di sangue nella vena porta arterializzato che è all&#39;interno del range fisiologico superiore (1,7 +/- 0,4 ml / min / g di peso del fegato). 12 I nostri risultati senza regolazione del flusso sanguigno correlare con i risultati di Hong, che ha eseguito HALT con PVA attraverso l&#39;arteria iliaca del destinatario. 13 Nei suoi esperimenti senza regolazione del flusso sanguigno massiccio portale e si è verificato congestioni sinusoide. Lo scopo del nostro video è quello demonstrate passo passo questa Ne.w tecnica chirurgica sperimentale nel ratto. A lungo termine la tecnica proposta può essere utilizzata negli studi sulla rigenerazione del fegato e la concorrenza tra fegato e arterialization vena porta, iperperfusione vena porta e la regolazione del flusso sanguigno portale.

<table><tbody><tr><td>Seta intrecciata nera 7-0&nbsp;</td><td>Prodotti Ethicon</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Prodotti Ethicon</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Prodotti Ethicon</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8-0</td><td>Prodotti Ethicon</td><td>1714G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10-0</td><td>Prodotti Ethicon</td><td>7770G</td><td></td></tr><tr><td>Sicurezza Vasofix 14G</td><td>B Sicurezza Braun</td><td>2758853</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix 20G</td><td>B Braun</td><td>2758818</td><td></td></tr><tr><td>2 catetere in poliuretano francese (0,012"/0,3 mm ID x 0,025"/0,6 mm OD) x 24"/60 cm Catetere</td> Access <td>una divisione di Norfolk Medical, Inc., Illinois, USA</td><td>Soluzione CNC-2P</td><td></td></tr><tr><td>HTK, Custodiol</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH, Alsbach-H&auml; hnlein, Germania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluorano 5 %</td><td></td><td></td><td>Any genericon</td></tr><tr><td>Eparina</td><td></td><td></td><td>Any genericon</td></tr><tr><td>0,9% soluzione</td><td></td><td></td> salina <td>Any genericon Any</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Any genericon</td></tr></tbody></table>

eterotopica ausiliario ratto trapianto di fegato con flusso regolato portal vein arterialization in acuta insufficienza epatica

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

Nel trapianto di fegato ausiliario insufficienza epatica acuta è un approccio alternativo interessante. L&#39;obiettivo è quello di fornire un supporto temporaneo fino alla mancanza fegato nativo ha rigenerato. 1-3 Il APOLT-metodo, l&#39;impianto ortotopico di segments- ausiliario evita la maggior parte dei problemi tecnici. Tuttavia, questo metodo richiede ampie resezioni sia del fegato nativo e l&#39;innesto. 4 Nel 1998, Erhard ha sviluppato il trapianto eterotopico ausiliario di fegato (HALT) utilizzando arterialization vena porta (PVA) (Figura 1). Questa tecnica ha mostrato promettenti risultati clinici iniziali. 5-6 Abbiamo sviluppato un HALT-tecnica con PVA-flusso regolato nel ratto per esaminare l&#39;influenza di PVA-flusso regolato sulla morfologia e funzione (Figura 2) trapianto. Un trapianto di fegato ridotto al 30% della sua dimensione originale, è stato heterotopically impiantato nella regione renale destra del destinatario dopo espianto del rene destro.60; La vena cava infra-epatica dell&#39;innesto è stata anastomizzata con la vena cava infraepatica del destinatario. La arterialization della vena porta del donatore è stata effettuata attraverso l&#39;arteria renale destra del destinatario con la tecnica dello stent. La regolazione del flusso sanguigno della vena porta arterializzato è stato ottenuto con l&#39;uso di uno stent con un diametro interno di 0,3 mm. Il tronco celiaco dell&#39;innesto era end-to-side anastomizzato con aorta del destinatario e il dotto biliare è stato impiantato nel duodeno. Una resezione subtotale del fegato nativo è stata eseguita per indurre insufficienza epatica acuta. 7 In questo modo sono stati eseguiti 112 trapianti. Il tasso di sopravvivenza perioperatoria è stata del 90% e il tasso di sopravvivenza di 6 settimane è stata dell&#39;80%. Sei settimane dopo l&#39;intervento, il fegato nativo rigenerato, mostrando un aumento di peso da 2,3 ± 0,8 g di 9,8 ± 1 g. In questo momento, il peso del graft è diminuito da 3,3 ± 0,8 g di 2,3 ± 0,8 g. </p&gt; Siamo stati in grado di ottenere risultati promettenti a lungo termine in termini di morfologia e funzione del trapianto. HALT-PVA con flusso regolato colma affidabile insufficienza epatica acuta fino a quando il fegato nativo rigenera.

La durata media del trapianto era di circa 150 min. Il tempo di ischemia fredda era 64 +/- 7 minuti, il tempo di ischemia calda era a meno di 25 min. Il tasso di sopravvivenza perioperatoria è stata del 90% e il tasso di sopravvivenza di 6 settimane è stata dell&#39;80%. La perdita del 20% è dovuto a peritonite a causa della dislocazione dello stent e la perdita biliare (quattro animali) durante la prima settimana postoperatoria e causa di polmonite, ascesso intra-addominale e ileo (sette an...

Trapianto di fegato ausiliario fornisce un supporto temporaneo in insufficienza epatica acuta, fino a quando la rigenerazione del fegato fallire. Il trapianto eterotopico ausiliario di fegato (HALT) con arterialization vena porta (PVA) rende del fegato è sufficiente. Abbiamo sviluppato una tecnica analoga nel ratto, di esaminare l&#39;influenza del arterialization vena porta sulla morfologia e la funzione del trapianto.

Eterotopica ausiliario Ratto trapianto di fegato con flusso regolato Portal Vein arterialization in acuta insufficienza epatica

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

Il fallimento epatico acuto rappresenta un problema grave in medicina clinica, con un tasso di mortalità del 60-80% nel fallimento epatico acuto. Il trapianto epatico ausiliario è una terapia alternativa promettente. Dopo la rigenerazione del fegato nativo, l'immunosoppressione può essere interrotta e l'innesto epatico può essere asportato o lasciato atrofizzare.Tuttavia, la tecnica operatoria per il trapianto epatico ausiliario è controversa. Il metodo APOL, che prevede l'impianto ortotopico di segmenti ausiliari, evita la maggior parte dei problemi tecnici che potrebbero insorgere. Tuttavia, questo metodo richiede estese resezioni sia del fegato nativo sia del graft.Nel 1998, Erhart e il suo team hanno avviato il trapianto epatico ausiliario eterotopico, chiamato HALT. Utilizzando una vena porta arterializzata, denominata PVA, questa tecnica ha mostrato risultati clinici iniziali promettenti. Abbiamo sviluppato una tecnica HALT con arterializzazione regolata del flusso della vena porta nel ratto, a scopi di ricerca. Questo video illustra in dettaglio questa nuova tecnica sperimentale. Sono stati operati 224 ratti maschi syngenici Louis, pesanti tra 250 e 350 grammi.Le operazioni sul donatore e sul riceventore sono state eseguite sotto anestesia inalatoria. L'anestesia generale degli animali è stata indotta con fluorina in una scatola in plexiglass collegata alla macchina per anestesia, con un flusso di ossigeno regolato a un litro al minuto. Il vaporizzatore aveva una concentrazione di fluorina del 5%.L'anestesia è stata mantenuta al 1,5%. È stata ottenuta l'approvazione del comitato etico locale per tutti gli esperimenti, che sono stati condotti in conformità con le linee guida per la protezione degli animali. Durante l'operazione successiva, la vena porta è arteriolizzata tramite l'arteria renale destra.Il flusso sanguigno nella vena porta arterializzata è regolato da uno stent con un diametro interno di 0,3 millimetri e una lunghezza di otto millimetri. Esperimenti pilota avevano mostrato che un diametro dello stent di 0,3 millimetri determina un flusso sanguigno medio nella vena porta arterializzata che rientra nel limite superiore del range fisiologico.La microcircolazione epatica viene visualizzata mediante imaging OPS, una tecnica di spettroscopia di riflessione che consente l'osservazione in tempo reale della microcircolazione epatica in vivo. Senza l'utilizzo di agenti di contrasto e sotto immersione in soluzione fisiologica, la sonda viene posizionata delicatamente sulla superficie del lobo epatico destro. È fondamentale non comprimere il parenchima epatico.L'operazione sul donatore viene dimostrata per prima cosa dopo laparotomia mediana. Il lobo laterale sinistro e il lobo mediano dell'innesto vengono resecati come descritto da Higgins. Qui si osserva la preparazione del legamento epatoduodenale.Il dotto biliare viene legato per primo al fine di indurre congestione e dilatazione del dotto biliare minore. La vena gastroduodenale e l'arteria vengono legate e sezionate. Successivamente, il tronco CIC, l'arteria epatica comune, l'arteria gastrica sinistra e l'arteria splenica vengono isolati.L'arteria gastrica sinistra e l'arteria splenica vengono sezionate. Qui si osserva il tronco CIC e qui l'arteria epatica comune. Il dotto biliare congestionato viene inciso ed un stent di calibro 20 viene introdotto al suo interno.Il posizionamento dello stent deve garantire il drenaggio dell'intero sistema di dotti biliari del lobo. Il dotto biliare viene sezionato in posizione distale rispetto allo stent. Il segmento infraepatico della vena cava viene isolato appena al di sopra della vena renale destra.Qui si osservano i tessuti dopo la preparazione, a seguito della legatura dell'aorta al di sopra del tronco celiaco. La vena porta viene clampata ed incisa. Viene ora introdotto il catetere per la perfusione, che viene eseguita con 30 millilitri di soluzione di istidina-tiptofano-glutato.Il diaframma e la vena cava epatica superiore vengono recisi per permettere al sangue di defluire. Il tronco CIC insieme a una toppa aortica viene escisso e risciacquato con soluzione di chetoglutarato di istidina e triptofano. La vena cava epatica inferiore viene sezionata appena al di sopra della vena renale destra.Quindi si posiziona un stent con un diametro di 0,3 millimetri nella vena porta e lo si fissa con il legaccio. La vena porta viene sezionata a valle dello stent. Qui si vedono il dotto biliare, la vena porta, il tronco celiaco e la vena cava infrarenale.Dopo la legatura della vena cava sopraepatica, questa viene sezionata insieme a un lembo di diaframma. Il graft viene espiantato e conservato in soluzione di chetoglutarato di istidina e triptofano a quattro gradi Celsius in un sacchetto di plastica su ghiaccio. Vengono posizionati punti di sutura nella vena cava sottoepatica. Viene quindi illustrata l'operazione sul ricevente.Dopo laparotomia e preparazione, si isola innanzitutto la vena cava infrarenale e l'arteria renale destra. Successivamente, l'uretere viene legato e reciso. Dopo aver clampato l'arteria renale destra alla sua origine, si procede alla legatura della vena renale destra.Successivamente alla sezione di entrambi i vasi renali, si esegue la nefrectomia. In seguito, l'arteria renale destra viene accorciata e risciacquata con soluzione salina eparinizzata, dopo il clampaggio prossimale e distale della vena cava infrarenale. La vena renale destra viene sezionata in posizione prossimale alla legatura.In questo modo, viene creato un lume ovale nella vena cava infraepatica. L'innesto viene posizionato al di sotto del fegato nativo. La vena cava infraepatica del donatore viene anastomizzata estremità-laterale alla vena cava del ricevente mediante una sutura continua in etilene 8/0.Dopo il risciacquo con soluzione salina eparinizzata, lo stent nella vena porta viene introdotto nell'arteria renale destra. La vena porta e l'arteria renale vengono connesse con due punti di sutura. L'utilizzo di uno stent con un diametro interno di 0,3 millimetri e una lunghezza di otto millimetri permette un'anastomosi artero-venosa con portata standardizzata e regolazione delle velocità di afflusso.Lo stent di collegamento viene fissato nell'arteria renale con una legatura per consentire la riperfusione. La prima cosa da rimuovere è la pinza arteriosa, seguita poi da entrambe le pinze venose. A questo punto si osserva la microcircolazione al momento della riperfusione, che inizia dai vasi interlobulari, prosegue lungo i senoidi e arriva alla vena centrale del lobulo epatico.Qui si osserva ora l'innesto riprofuso, la vena porta arterializzata e il dotto biliare. L'aorta infrarenale viene preparata, quindi clampata ed incisa. Viene eseguita un'anastomosi termino-laterale tra l'aorta e il tronco celiaco mediante una patch aortica, utilizzando una sutura continua in etilene 10-0.Dopo aver applicato una sutura a punto continuo, viene effettuata una piccola incisione nella parete duodenale. Il dotto biliare stentato viene quindi introdotto nel duodeno e la sutura a punto continuo viene serrata. Infine, il duodeno e il dotto biliare vengono fissati saldamente l'uno all'altro con due punti di sutura.Qui si osserva l'innesto riprofuso e il fegato nativo che era stato sottoposto a resezione subtotale per simulare un'insufficienza epatica acuta. Gli animali sono stati trattati postoperatoriamente con buprenorfina per via sottocutanea ogni otto-dodici ore per due giorni.Il tasso di sopravvivenza perioperatorio è stato del 90% e il tasso di sopravvivenza a sei settimane è stato dell'80%. Durante la prima settimana postoperatoria, quattro ratti sono morti a causa di peritonite causata da uno spostamento dello stent e da una fuoriuscita biliare. Inoltre, sette ratti sono morti a causa di polmonite, ascesso intraaddominale o ileo. Gli animali sopravvissuti erano in ottime condizioni generali.Six settimane dopo l'intervento, i parametri di sintesi epatica erano entro i limiti normali. Qui si osservano gli scienziati a sei settimane dal trapianto eterotopico di fegato ausiliario nel ratto con arterizzazione della vena porta. Six settimane dopo l'intervento, il fegato nativo si è rigenerato mostrando un aumento di peso da 2,3 ± 0,8 grammi a 9,8 ± 1 grammo.In questo momento, il GRAT era atrofico e il peso del fegato era diminuito da 3,3 più o meno 0,8 grammi a 2,3 più o meno 0,8 grammi. Il peso totale di entrambi i fegati rientrava nel rapporto fisiologico tra peso del fegato e peso corporeo, come evidenziato dalla colorazione istopatologica con ematossilina-eosina a sei settimane dall'arresto. Erano osservabili epatociti regolari, senza edema né degenerazione grassa.Tutti i grafici hanno mostrato una lieve proliferazione della bile, dei dotti e della colangite dovuta alla formazione di fango biliare. Solo in due grafici è stato possibile osservare una necrosi epatocellulare di basso grado a livello interstiziale delle unità tubulari contigue (CTUs). L'utilizzo di uno stent con un diametro interno di 0,3 millimetri e una lunghezza di otto millimetri determina una portata media del flusso sanguigno portale dopo la ripristino della circolazione nella vena porta arterializzata, che rientra nella fascia fisiologica superiore.Il drenaggio biliare è il tallone d'Achille del trapianto epatico. Nel trapianto epatico del ratto, i riceventi spesso muoiono nei primi giorni postoperatori a causa di fuoriuscita biliare e peritonite. Eseguiamo l'ostomia colica mediante l'utilizzo di uno stent, una sutura per stringa e due punti aggiuntivi che la fissano prevenendo fuoriuscite e disconnessioni.Con questa tecnica, le complicanze biliari sono state ridotte al 4%. In questo studio attuale, è stata eseguita una resezione subtotale del fegato nativo. Utilizziamo questo metodo, descritto per la prima volta da Amond, per indurre insufficienza epatica acuta. A differenza dell'uso di agenti epatotossici, questo metodo è standardizzato e non presenta effetti collaterali su altri sistemi organici o sul trapianto.A differenza del trapianto ortotopico di fegato, non esiste una fase epatica terminale. Durante il trapianto eterotopico di fegato, l'Anas può essere eseguita senza alcuna pressione temporale. Inoltre, nella posizione eterotopica, non vi è interferenza da parte del diaframma in movimento.Inoltre, la vena porta del ricevente non viene clampata, evitando così la congestione venosa dell'intestino tenue, della milza, del pancreas e dello stomaco. Con questa tecnica, siamo riusciti a ottenere risultati promettenti a lungo termine in termini di sopravvivenza dell'innesto, morfologia e funzione, nel trapianto eterotopico ausiliario di fegato in ratto con flusso regolato a livello della vena porta. La tecnica della vena portale arterializzata è un approccio innovativo che presenta pochi ostacoli ed è facile da apprendere.Questa tecnica è adatta per studiare l'effetto dell'iperperfusione portale e arteriosa epatica e della regolazione del flusso ematico sulla funzione e la morfologia della microcircolazione epatica. Questo modello permette futuri studi sulla rigenerazione epatica in condizioni di competizione interepatica.

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Vi presentiamo uno facile da stabilire revisione della classica due-bracciale tecnica di trapianto di fegato nel ratto.

Trapianto di fegato in ratti

Trapianto di fegato nei ratti è un modello sperimentale indispensabile per la ricerca biomedica. Qui vi presentiamo le nostre procedure chirurgiche per il trapianto ortotopico di fegato di ratto con la ricostruzione arteriosa epatica con un trapianto parziale del 50%.

Procedure chirurgiche per un modello di Rat parziale trapianto di fegato con la ricostruzione arteriosa epatica

La ricerca sperimentale sugli animali svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo della pratica clinica dei trapianti. Il modello di trapianto ortotopico di fegato suino (OLTx) assomiglia molto alle condizioni umane ed è spesso utilizzato nella ricerca clinicamente orientata. Il seguente protocollo contiene tutte le informazioni per un modello OLTx suino affidabile che utilizza uno shunt attivo porto-cavale-giugulare.

Tecnica di Suini appalti Fegato e trapianto ortotopico con un attivo Porto-Caval Shunt

Descriviamo una nuova tecnica per il trapianto addominale eterotopico cuore-polmone (HAHLT) nei ratti. La configurazione del trapianto si traduce in una circolazione dell'innesto parzialmente caricata, consentendo una valutazione funzionale diretta. Questo modello può essere impiegato per studi acuti o cronici sulla funzione e sullo stato immunologico del trapianto trapiantato.

Rat eterotopico addominale Cuore / Trapianti Single-polmone in una configurazione del volume-caricato

Qui, un protocollo che coinvolge il trapianto di fegato parziale ri-arterialized ratto è presentato. In particolare, 70% fegato è stato resecato in vivo utilizzando una tecnica aggiornata di hepatectomy orientato alla nave. L'arteria epatica è stato ricostruito in maniera fine--lato. La tecnica del polsino è stata modificata per accorciare i tempi di anastomosi della vena cava infrahepatic.

Ri-Arterialized trapianto parziale di fegato del ratto con un in vivo vaso-Oriented 70% Hepatectomy

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Murini eterotopica cuore Tecnica Trapianto

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