Un metodo di precipitazione modificata per isolare urinaria Esosomi

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di progettare un metodo modificato di precipitazione degli esosomi che offra un'alternativa rapida, scalabile ed efficace per l'isolamento degli esosomi dalle urine. Ciò si ottiene rimuovendo prima le grandi cellule morte e i detriti cellulari dal campione di urina mediante centrifugazione e la fessura contenente gli esosomi urinari viene trasferita in una nuova provetta. Nella seconda fase, il pellet viene disciolto in una soluzione di isolamento contenente DTT per rimuovere la proteina di caduta del cavallo TAM.

Quindi, dopo un'ulteriore centrifugazione, il surnatante privo di TP viene incubato con il reagente TC exo rapido durante la notte per far precipitare gli esosomi il giorno successivo. I campioni trattati con reagente exo quick TC vengono centrifugati un'ultima volta per ottenere il pellet di esosoma. In definitiva, è possibile eseguire processi a valle come il Western blot e la QPCR in tempo reale sugli esosomi per identificare i biomarcatori di interesse.