Analisi della traduzione innesco durante condizioni di stress da polisoma Profiling

L'obiettivo generale di questa procedura è misurare gli effetti delle condizioni di stress sulla traduzione, l'inizio delle cellule e dei tessuti dei mammiferi mediante la profilazione dei polisomi. Ciò si ottiene trattando prima le cellule tumorali dei mammiferi con un farmaco antitumorale e poi preparando estratti cellulari. Il secondo passo è fare il saccarosio, i gradienti.

Successivamente, gli estratti cellulari vengono caricati sul saccarosio, sui gradienti e ultra centrifugati per separare le frazioni ribosomiali. Infine, viene eseguita l'analisi western blot utilizzando anticorpi specifici per valutare l'associazione delle proteine testate con il polisoma. Il vantaggio principale di questa tecnica, rispetto a un metodo esistente come la marcatura metabolica, è che ci permette di valutare l'effetto delle condizioni di stress sulla fase di inizio della traduzione.