Name: Trace paura condizionata in topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-20T18:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Scopri il condizionamento della paura tracciata nei topi per valutare l'apprendimento e la memoria dipendenti dall'ippocampo. Questo metodo misura il comportamento di immobilità in risposta a stimoli uditivi associati a shock.

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Questo lavoro è supportato da una concessione Research Council Baylor University e da un assegno di ricerca della Fondazione Epilessia.

I topi utilizzati nel seguente esperimento sono stati generati e ospitati presso la Baylor University a una temperatura ambiente di 22 ° C, con una luce 14 ore e 10 ore scuro (20:00-06:00 h) ciclo diurno. I topi sono stati dati ad libitum l&#39;accesso al cibo e all&#39;acqua. Tutte le procedure per i topi erano in conformità con il National Institutes of Linee guida per la salute per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio e il protocollo animale è stato approvato dal Baylor University cura degli animali e del Comitato Usa. Panoramica Il compito paura traccia condizionata, basato su procedure descritte da Wiltgen e colleghi 9. 1. Preparazione delle attrezzature Il timore camera di un&#39;apparecchiatura di condizionamento (26 centimetri x 22 cm x 18 cm) costituito da due lati che sono acrilico, due lati che sono metallo ed estremità reticolati che viene utilizzato per erogare la scarica piede lieve. La camera di prova è la casad in un suono da camera attenuato. La camera è anche stretto luce per evitare che la luce esterna da influenzare il software di rilevamento del movimento. <ol><li> Calibrare i livelli di shock, livelli di luce, e livelli di intensità del suono per la camera di prova. Misurare il livello della camera di prova sfondo. Il rumore di fondo in questa camera è di 65 dB. Utilizzare un fonometro per misurare questo livello. Il contatore deve essere impostato a 70 dB, impostato su C, e al rilevamento impostazione lento. <ol><li> Calibrare il livello di shock a 0,5 mA. Utilizzare un dispositivo di calibrazione esterno per calibrare correttamente il livello di shock (vedi Materiali Tavolo). La misura interna del generatore scossa non è preciso. Il generatore di shock amministra uno shock criptato che non può essere misurata con precisione da un amperometro standard. </li><li> Collocare un cavo su una delle sbarre di griglia e posizionare l&#39;altro cavo 3 o 4 bar sopra. Utilizzare il generatore di shock per somministrare lo shock. Regolare il livello di shock fino a quando il livello corretto è raggiunto. Fate questo per EAch temere camera di condizionamento. </li><li> Chiudere la porta alla camera quando si misura il livello di luminosità della camera. Calibrare livello la luce a circa 1,0. Questo è un numero specifico per il software FreezeFrame utilizzato in questo esperimento. Un esposimetro esterno leggerà questo come 2 lux. L&#39;intensità luminosa può essere regolata spostando la posizione della luce casa o regolando il condensatore della lente. Assicurarsi di stringere le viti di regolazione per la lente dopo la regolazione. </li><li> Calibrare il livello del suono di decibel a 85 dB. Utilizzare un misuratore di decibel esterno dentro la gabbia di test per calibrare il livello di decibel (vedi Materiali Tavolo). Il suono ha presentato sarà un tono di 2.700 Hz. Nota: Se si utilizzano topi di età superiore ai 6 mesi di età, può essere meglio usare rumore bianco dal momento che i topi più anziani possono avere deficit dell&#39;udito. </li></ol></li><li> Dopo che l&#39;apparecchio è pronto prendere i soggetti in una stanza un&#39;azienda distinta. Nota: non ospitare il mouse nella stessa stanza come sala prove. </li><li> Label the coda dei topi che saranno testati in ordine delle prove. E &#39;meglio ridurre le eccessive manipolazioni prima del test. In alternativa, le code possono essere etichettati il ​​giorno prima dell&#39;esperimento per ridurre lo stress da maneggiamento. Dopo i topi sono stati etichettati permettono loro di acclimatarsi alla camera per 30 min. Avere gabbie in più pulite per alloggiare i topi dopo il test è stato completato. </li></ol> 2. Traccia condizionata Day 1 <ol><li> Rimuovere ogni mouse dalla gabbia e metterli in gabbie individuali per il trasporto alla paura camera di condizionamento. Utilizzare biancheria pulita per ogni gabbia. Mettere una nota adesiva sulla gabbia di trasferimento per mantenere l&#39;ordine dei topi testare il corretto. Nota: se i topi sono alloggiati singolarmente quindi possono essere trasportati nella loro gabbia casa. </li><li> Posizionare il mouse nella camera di prova e chiudere la porta. Avviare il programma software. </li><li> Il giorno di formazione, consentono ai topi di esplorare la camera per 3 min. Il software presenta poi un secondo tono (85 dB, 2.700 Hz) t 20o l&#39;animale. Dopo un periodo di traccia 20 sec una leggera scossa (2 sec, 0,5 mA) viene somministrato all&#39;animale. </li><li> Registrare la reazione del soggetto per confermare che hanno ricevuto i stimoli avversi visualizzando il video. Un intervallo inter-trial 200 sec separa le 5 prove di condizionamento. Ogni prova è costituito da un tono 20 secondi seguita da un ritardo di 20 sec poi uno shock. </li><li> Al termine del test consentire agli animali di rimanere nella camera di prova per 1 min prima di rimuoverla dalla gabbia test. </li><li> Posizionare l&#39;animale torna nella gabbia trasferimento e tornare alla sua gabbia casa. Se ci sono i topi aggiuntivi nella loro gabbia casa poi ospitare singolarmente il mouse fino a quando tutti i test completo topi. Ciò consentirà di ridurre lo stress all&#39;altra topi che non sono stati testati. Una soluzione alternativa potrebbe essere quella di alloggiare singolarmente tutti i topi una settimana prima del test per ridurre l&#39;influenza di rimuovere in continuo topi da una gabbia. </li><li> Pulire la camera di prova con il 30% di isopropanolo dopo each animale è testato. </li><li> Ripetere i passaggi 2,2-2,7 per tutti i mouse nella coorte di test. </li><li> Rientro tutti i topi nella loro stanza colonia dopo l&#39;ultimo mouse nella coorte è stato testato. </li></ol> 3. Trace paura condizionata Day 2: Prove di memoria Trace <ol><li> Test sulla memoria Trace avverrà il giorno 2. In questo protocollo ci sono 3 presentazioni di tono. Posizionare il mouse in un nuovo contesto per la prova traccia condizionata. </li><li> Preparare il software per eseguire un programma con un periodo di riferimento 2 min seguita da tre presentazioni del 20 tono sec. C&#39;è sa 220 sec ITI tra ogni presentazione di tono. </li><li> Per il nuovo condizione di contesto, posizionare inserti acriliche chiare sul pavimento della camera a modificare la forma, la consistenza e il colore della camera di condizionamento. </li><li> Cambiare l&#39;odore nella camera posizionando l&#39;estratto di vaniglia in una barca pesare sotto l&#39;inserto pavimento. </li><li> Pulire la camera con il 70% di etanolo invece del 30% di isopropanolo. Nota: Questo aiuteràper creare un contesto romanzo. </li><li> Portare i topi nella stanza detenzione e relabel loro code per la prova, se necessario. </li><li> Preparare nuove gabbie di trasferimento contesto sostituendo le lenzuola con carta straccia. Nota: Ciò contribuirà a creare un ambito romanzo. </li><li> Posizionare il mouse nella camera di prova quindi avviare il programma. Pulire la camera con il 70% di etanolo dopo che il test è stato completato. </li><li> Riportare i topi per loro gabbia casa dopo la traccia di condizionamento è completata. Rientro tutti i topi nella loro stanza colonia quando tutti i topi sono stati testati. </li></ol> 4. Trace paura condizionata Giorno 3: Prove di memoria contestuale <ol><li> Il terzo giorno di condizionamento contestuale è condotta. Preparare il software per eseguire un programma per registrare il comportamento di congelamento per 8 min. </li><li> Pulire la camera con il 30% di isopropanolo prima delle prove e dopo aver testato ogni mouse. Il contesto deve essere identica a quella del giorno 1. Le gabbie di trasferimento devono essere le stesse in 1 giorno. </li><li&gt; Portare i topi nella stanza detenzione ed etichettare le loro code per il test. </li><li> Collocare ogni mouse nella camera di prova quindi avviare il programma. Pulire la camera con il 30% di isopropanolo al termine del test. </li><li> Rientro tutti i topi nella loro stanza colonia una volta completato. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ci sono stati diversi studi che hanno chiarito i circuiti neurali che sottende traccia paura condizionata. Trace condizionamento alla paura si ritiene di coinvolgere il CA1 dell&#39;ippocampo 12-14. Vi sono anche prove che la corteccia prefrontale mediale (mPFC) gioca un ruolo importante nella traccia occhiolino condizionata 15 e il mPFC è stato trovato per essere coinvolti in traccia paura condizionata. Uno studio ha trovato che i neuroni mPFC forniscono attività sostenuta durante il periodo di an...

In condizionamento alla paura uno stimolo neutro (NS) è accoppiato con uno stimolo incondizionato aversivo (US). Il NS è normalmente un tono e diventa uno stimolo condizionato (CS), attraverso abbinamenti ripetuti con gli Stati Uniti. Il CS può quindi provocare una risposta condizionata (CR), come il congelamento, in assenza del aversive US. Una paura protocollo condizionata comunemente usato è il ritardo condizionata. In questo protocollo l&#39;insorgenza della NS e Stati Uniti è contiguo o con qualche sovrapposizione nella presentazione dello stimolo. Anche se il ritardo condizionamento alla paura è uno dei tipi più comunemente usati di temporale condizionata associativa, ci sono molti altri tipi di condizionamento associativo modalità temporali: il condizionamento simultanea, di condizionamento all&#39;indietro, e la traccia di condizionamento 1. Nella traccia di paura condizionata c&#39;è un intervallo libero da stimolo tra NS e gli Stati Uniti di alcuni secondi con un conseguente periodo di &quot;traccia&quot;. Diversi studi hanno riportato deficits in traccia paura condizionata quando le lesioni neurotossiche sono prodotte nelle strutture che l&#39;input nei ippocampo 2-5 o quando gli agenti farmacologici sono usati per bloccare la funzione del recettore nell&#39;ippocampo. Lesione ai risultati ippocampo in deficit nella traccia di condizionamento e condizionamento contestuale, ma non compromette il ritardo condizionamento alla paura 8. Ci sono molti vantaggi di utilizzare trace fear conditioning. Il protocollo condizionata paura può essere realizzato in un periodo di test di tre giorni e permette memoria ippocampo-dipendente che non è spazialmente dipendente. Tracciare paura condizionata può essere usata come test complementare al labirinto ad acqua di Morris, prova romanzo riconoscimento di oggetti, o altri test del labirinto a indagare memoria ippocampo-dipendente.

<table><tbody><tr><td>FreezeFrame</td><td>Coulbourn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30% Isopropanolo</td><td></td><td></td><td>Acquista il 90% di isopropanolo e diluiscilo fino al 30%</td></tr><tr><td>70% di etanolo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amperometro</td><td>Med-Associates</td><td>ENV-420</td><td>Compatibile con Windows XP, Vista e 7 (solo a 32 bit)</td></tr><tr><td>Fonometro</td><td></td> digitale <td>33-2055</td><td></td></tr><tr><td>Estratto di vaniglia</td><td>McCormick Estratto di vaniglia</td><td></td><td></td>puro</tr><tr><td>Post-it</td><td>Post-it</td><td></td><td>3 in x 3 in</td></tr></tbody></table>

trace paura condizionata in topi

Trace Fear Conditioning in Mice

In questo esperimento presentiamo una tecnica per misurare l&#39;apprendimento e la memoria. Nel protocollo di condizionamento trace paura presentato qui ci sono cinque abbinamenti tra uno stimolo neutro e uno stimolo incondizionato. C&#39;è un periodo di traccia di 20 secondi che separa ogni prova condizionata. Sul seguente congelamento giorno viene misurata durante la presentazione dello stimolo condizionato (CS) e il periodo di analisi. Il terzo giorno è prevista una prova 8 min per misurare memoria contestuale. I risultati sono rappresentativi di topi che sono stati presentati con lo stimolo incondizionato avversivo (shock) rispetto ai topi che hanno ricevuto le presentazioni di tono, senza lo stimolo incondizionato. Trace condizionamento alla paura è stato utilizzato con successo per rilevare i deficit e miglioramenti di apprendimento e memoria sottili nei topi che non si trovano con altri metodi di condizionamento alla paura. Questo tipo di paura condizionata è ritenuta essere dipendente connessioni tra la corteccia prefrontale mediale e l&#39;ippocampo. Una polemica attuale è se questo metodo si crede di essere amigdala-indipendente. Pertanto, è necessario un altro test di condizionamento paura per esaminare apprendimento e memoria effetti amigdala-dipendenti, ad esempio attraverso il ritardo condizionamento alla paura.

Per i risultati rappresentativi presentiamo i dati di controllo C57BL/6J topi adulti che hanno ricevuto gli abbinamenti stimolo neutro con lo stimolo incondizionato (condizione di shock) rispetto ai topi che hanno ricevuto lo stimolo neutro, ma non hanno ricevuto lo stimolo incondizionato (nessuna condizione di shock). È importante eseguire questa condizione quando prima configurazione di questa prova comportamentale per determinare se il protocollo è stato eseguito correttamente. I dati del...

Nel seguente esperimento si descrive un protocollo per la traccia di paura condizionata nei topi. Questo tipo di memoria associativa comprende un periodo di traccia che separa lo stimolo neutro e lo stimolo incondizionato.

Trace paura condizionata in topi

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è valutare l'apprendimento e la memoria dipendenti dall'ippocampo nei topi attraverso l'utilizzo del condizionamento con sfera a traccia. Questo viene ottenuto addestrando innanzitutto l'animale ad associare un tono uditivo a uno stimolo avversivo. Il giorno successivo, l'animale viene posizionato in un contesto nuovo e il comportamento di congelamento viene registrato in risposta al tono.Nel terzo giorno, l'animale viene riportato nel contesto originale e viene registrato il comportamento di congelamento. I risultati mostrano che i topi addestrati con l'accoppiamento tra tono e scossa presentano un comportamento di congelamento maggiore rispetto a quelli che non hanno ricevuto la scossa. Questo metodo può essere utilizzato per ottenere informazioni sull'apprendimento e sulla memoria dipendenti dall'ippocampo nei topi ed è particolarmente utile quando impiegato nello studio di animali transgenici e knockout.La seguente procedura viene eseguita in una camera di condizionamento del timore collocata all'interno di una camera più grande insonorizzata. Con la porta della camera chiusa, posizionare le luci in modo da raggiungere il livello desiderato di illuminazione; se posizionate correttamente, la spia del livello di illuminazione dovrebbe essere spenta. Utilizzare un fonometro per verificare un livello costante di rumore di fondo all'interno di ciascuna camera.Successivamente, calibrare il tono utilizzato durante l'addestramento. Utilizzare un dispositivo di calibrazione esterno per regolare il livello di shock. Posizionare un elettrodo su una barra e un altro tre o quattro barre più in là.Utilizzare il generatore di scosse per somministrare lo stimolo e calibrare fino al raggiungimento del livello corretto. Ripetere questo passaggio per ogni camera di condizionamento del timore. Una volta preparato l'apparato, trasferire i soggetti in una stanza di attesa separata dalla stanza di prova per ridurre al minimo il maneggio eccessivo.Prima del test, etichettare le code almeno 30 minuti prima dell'esecuzione del test o il giorno precedente. Quando si è pronti per iniziare, trasferire il topo da sottoporre al test in una gabbia pulita e contrassegnata per il trasporto alla camera di condizionamento del timore. Posizionare il topo nella camera, chiudere la porta e avviare il programma software.Nel primo giorno di addestramento, ai topi viene consentito di esplorare la camera per tre minuti. Il software presenta quindi un tono di 22°, seguito da un intervallo di traccia di 22° che termina con una lieve scossa ai piedi. Osservare il soggetto per confermare che abbia ricevuto lo stimolo avversivo.Un intervallo inter-trial di 202° separa cinque prove di condizionamento. Dopo le prove, lasciare l'animale nella camera di test per un minuto prima di rimuoverlo, quindi riposizionare l'animale nella gabbia di trasferimento e riportarlo nella stanza di mantenimento. Se ci sono ulteriori topi da sottoporre al test individualmente nella loro gabbia di provenienza, alloggiare il topo fino a quando tutti i topi non hanno completato il test.Pulire la camera di prova con isopropanolo al 30% in previsione del prossimo animale. Ripetere questi passaggi fino a quando tutti i topi sono stati addestrati. Riportare tutti i topi nella loro stanza di allevamento.Dopo aver testato l'ultimo topo del gruppo il giorno seguente, si procede al test degli animali per la memoria del timore associata a traccia. In questo giorno, sostituire la lettiera delle gabbie di trasferimento con carta straccia per modificare il loro contesto.Il contesto della camera viene modificato anche in altro modo. Posizionare un foglio di schiuma sotto un inserto in acrilico trasparente sul pavimento per alterarne la texture e l'aspetto. Posizionare un divisore in acrilico all'interno dell'area di prova.Modificare l'odore posizionando dell'estratto di vaniglia in una barchetta di siero sotto il pavimento. In questo giorno, pulire la camera con etanolo al 70% invece di isopropanolo al 30% tra un topo e l'altro. Quando pronto, posizionare il topo nella camera di prova e avviare il programma.La sessione inizia con un periodo di base della durata di due minuti, seguito da tre presentazioni di un tono di 22°. È presente un intervallo inter-trial di 222° tra ciascuna presentazione del tono. Al termine della sessione, riportare i topi nella loro gabbia di provenienza e continuare finché tutti gli animali non sono stati sottoposti a test, in preparazione per il test del giorno successivo.Ripristinare lo stesso contesto utilizzato nel primo giorno. Pulire la camera con isopropanolo al 30%. Il condizionamento contestuale viene effettuato il terzo giorno.Utilizzando le stesse gabbie di trasferimento del primo giorno, prelevare il topo sottoposto a test dalla stanza di mantenimento. Posizionare il topo nella camera di prova e quindi avviare il programma per il test della memoria contestuale. Eseguire un programma per registrare il comportamento di congelamento per otto minuti.Dopo questo periodo, riportare il topo nella sua gabbia di mantenimento e proseguire i test come mostrato in precedenza; i risultati rappresentativi mostrano un aumento del comportamento di congelamento negli animali che hanno ricevuto l'accoppiamento tra tono e shock nel corso della sessione di addestramento. In un contesto nuovo, i topi che hanno ricevuto lo stimolo avversivo di shock hanno mostrato un maggiore congelamento rispetto ai topi che non hanno ricevuto lo shock durante il tratto di tono basale e l'intervallo inter-trial. Quando riportati al contesto originale, gli animali che hanno ricevuto lo stimolo avversivo di shock hanno mostrato un comportamento di congelamento costantemente più elevato durante l'arco di otto minuti.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare il condizionamento fear conditioning per comprendere l'apprendimento e la memoria dipendenti dall'ippocampo nei topi.

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Questo articolo presenta un protocollo di prova paura condizionata contestuale e cued utilizzando un sistema di video analisi per valutare paura apprendimento e memoria nei topi.

Contestuali e Cued paura condizionata test utilizzando un sistema di video Analizzare in topi

Questo protocollo descrive un metodo di accensione chimica con pentylenetetrazole e fornisce un modello murino di epilessia. Questo protocollo è utilizzabile anche per indagare vulnerabilità per induzione di sequestro e patogenesi dopo crisi epilettiche nei topi.

Modello di topo indotta da pentylenetetrazole accensione

Qui descriviamo la metodologia dettagliata richiesta per condurre esperimenti di apprendimento (SEFL) paura lo stress-aumentata, un modello preclinico di disturbo da stress post-traumatico, in topi e ratti. Il modello utilizza aspetti della paura pavloviano condizionata e congelamento come indice di maggiore paura nei roditori.

Paura lo stress-Enhanced Learning, un robusto modello del roditore del disturbo da Stress post-traumatico

Descriviamo un protocollo esteso di condizionamento della paura che produce sovrallenamento e incubazione della paura nei ratti. Questo protocollo prevede una singola sessione di allenamento con 25 accoppiamenti tono-shock (cioè sovrallenamento) e un confronto delle risposte di congelamento condizionate durante i test di contesto e cue 48 h (a breve termine) e 6 settimane (a lungo termine) dopo l'allenamento.

L'incubazione della paura utilizzando un protocollo esteso di condizionamento della paura per i ratti

Le risposte comportamentali difensive dipendono dall'intensità della minaccia, dalla vicinanza e dal contesto di esposizione. Sulla base di questi fattori, abbiamo sviluppato un paradigma di condizionamento classico che suscita chiare transizioni tra congelamento condizionato e comportamento di volo all'interno dei singoli soggetti. Questo modello è fondamentale per comprendere le patologie coinvolte in ansia, panico e disturbi da stress post-traumatico.

Un nuovo paradigma pavloviano di condizionamento della paura per studiare il congelamento e il comportamento di volo

Per studiare i comportamenti di volo in un contesto di paura, introduciamo un protocollo di condizionamento della paura modificato. Questo protocollo assicura che i topi mostrino costantemente comportamenti di volo durante la presentazione del segnale nel condizionamento della paura.

Condizionamento della paura modificato per indurre comportamenti di volo nei topi

Il paradigma della paura osservativa valuta il congelamento vicario nei roditori come modello di empatia affettiva. Questa procedura comporta l'esposizione di roditori osservatori a dimostratori conspecifici che ricevono scosse avversive del piede per suscitare risposte empatiche di congelamento. Utilizzando saggi osservativi della paura, i ricercatori possono studiare i meccanismi neurali alla base dell'empatia affettiva.

La paura osservativa come modello di empatia affettiva nei topi

Interrompere il riconsolidamento è un approccio promettente per smorzare l'espressione comportamentale della memoria della paura nei pazienti con disturbi d'ansia o disturbo da stress post-traumatico. In una serie di studi sul condizionamento della paura umana abbiamo dimostrato che l'interruzione del riconsolidamento da parte del propranololo noradrenergico β-bloccante è molto efficace nel cancellare la risposta condizionata alla paura.

L&#39;interruzione Ricompattamento della Paura memoria in esseri umani da un noradrenergico β-Blocker

Gli ormoni gonadici come gli estrogeni modulano la formazione della memoria in una serie di paradigmi sperimentali, tra cui la memoria di estinzione della paura. Questo protocollo descrive una serie di metodi per studiare l'influenza degli ormoni gonadici in particolare durante l'estinzione nelle femmine in ciclo naturale, tra cui il monitoraggio del ciclo estrale e la somministrazione di estrogeni esogeni.

Protocollo per lo studio Extinction of Fear Condizionata in Naturalmente bicicletta ratti di sesso femminile

Questo articolo descrive un nuovo protocollo per la misurazione quantitativa della motivazione sociale nei topi utilizzando il condizionamento operante per una ricompensa sociale. Il protocollo è utile per la misurazione della motivazione sociale in modelli murini di autismo e altri disturbi del comportamento sociale.

Quantificare motivazione sociale nei topi mediante condizionamento operante

Scopri il condizionamento della paura tracciata nei topi per valutare l'apprendimento e la memoria dipendenti dall'ippocampo. Questo metodo misura il comportamento di immobilità in risposta a stimoli uditivi associati a shock.

Trace paura condizionata in topi

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