Trace paura condizionata in topi

L'obiettivo generale del seguente esperimento è valutare l'apprendimento e la memoria dipendenti dall'ippocampo nei topi attraverso l'uso del condizionamento della sfera di tracce. Ciò si ottiene addestrando prima l'animale ad associare un tono uditivo a uno stimolo avversivo. Il giorno successivo, l'animale viene inserito in un nuovo contesto e il comportamento di congelamento viene registrato in reazione al tono.

Il terzo giorno, l'animale viene riportato al contesto originale e viene registrato il comportamento di congelamento. I risultati mostrano che i topi addestrati con l'accoppiamento del tono di shock mostrano un comportamento di congelamento maggiore rispetto a quelli che non ricevono lo shock. Questo metodo può essere utilizzato per fornire informazioni sull'apprendimento e la memoria dipendenti dall'ippocampo e sui topi, ed è particolarmente utile se utilizzato nello studio di animali transgenici e knockout.

La seguente procedura viene eseguita in una camera di condizionamento della paura alloggiata all'interno di una camera di attenuazione del suono più grande. Con la porta della camera chiusa, le luci devono raggiungere il livello di illuminazione desiderato, se posizionate correttamente, la spia del livello di luce deve essere spenta. Utilizzare un fonometro per confermare un livello costante di rumore di fondo all'interno di ciascuna camera.

Quindi, calibrare il tono utilizzato durante l'allenamento. Utilizzare un dispositivo di calibrazione esterno per calibrare il livello di shock. Posiziona un cavo su una barra e un altro tre o quattro barre.

Utilizzare il generatore di shock per somministrare lo shock e calibrare fino a raggiungere il livello corretto. Ripeti questo passaggio per ogni camera di condizionamento della paura. Una volta preparata l'apparecchiatura, trasferire i soggetti in una sala di attesa separata dalla sala di prova per ridurre l'eccessiva manipolazione.

Prima del test, etichettare le code almeno 30 minuti prima del test o il giorno prima. Quando è pronto per iniziare, trasferisci il mouse di prova in una gabbia pulita ed etichettata per il trasporto nella camera di condizionamento della paura. Posiziona il mouse nella camera, chiudi la porta e avvia il programma software.

Il primo giorno di addestramento, i topi possono esplorare la camera per tre minuti. Il software presenta quindi un 22° tono, seguito da un intervallo di 22° traccia che termina con un lieve shock al piede. Osserva il soggetto per confermare che ha ricevuto gli stimoli avversivi.

Un 202° intervallo tra le prove separa cinque prove di condizionamento. Dopo le prove, lasciare che l'animale rimanga nella camera di prova per un minuto prima di rimuoverlo, riposizionare l'animale nella gabbia di trasferimento e tornare nella sala di attesa. Se ci sono altri topi da testare individualmente nella loro gabbia domestica, ospita il topo fino a quando tutti i topi non hanno completato il test.

Pulire la camera di prova con isopropanolo al 30% in preparazione per l'animale successivo. Ripeti questi passaggi fino a quando tutti i topi non sono stati addestrati. Rimetti tutti i topi nella loro stanza della colonia.

Dopo che l'ultimo topo della coorte è stato testato il giorno successivo, gli animali vengono testati. Per tracciare la paura, la memoria. In questo giorno, sostituisci la lettiera delle gabbie di trasferimento con carta sminuzzata per cambiarne il contesto.

Anche il contesto della camera è cambiato. Posiziona un foglio di schiuma sotto un inserto acrilico trasparente sul pavimento per modificarne la consistenza e l'aspetto. Posizionare un divisorio in acrilico all'interno dell'area di test.

Cambia l'odore mettendo l'estratto di vaniglia in una barchetta di siero di latte sotto il pavimento. Inserire in questo giorno, pulire la camera con il 70% di etanolo invece del 30% di isopropanolo tra ogni topo. Quando è pronto, posiziona il mouse nella camera di prova e avvia il programma.

La sessione inizia con un periodo di base di due minuti seguito da tre presentazioni di 22 toni. C'è un intervallo di prova 222 tra ogni presentazione del tono. Al termine della sessione, riporta i topi nella gabbia di casa e continua fino a quando tutti gli animali non sono stati testati in preparazione per il test del giorno successivo.

Ripristina lo stesso contesto utilizzato nel primo giorno. Pulire la camera con il 30% di isopropanolo. Il condizionamento contestuale viene condotto il terzo giorno.

Utilizzando le stesse gabbie di trasferimento del primo giorno, recupera il mouse di prova dalla sala di attesa. Posizionare il mouse nella camera di test e quindi avviare il programma per testare la memoria contestuale. Esegui un programma per registrare il comportamento di blocco per otto minuti.

Trascorso questo tempo, riportare il topo nella gabbia di casa e continuare il test Come mostrato in precedenza, i risultati rappresentativi mostrano un aumento del comportamento di congelamento negli animali che ricevono l'accoppiamento del tono di shock nel corso della sessione di addestramento. In un nuovo contesto, i topi che hanno ricevuto lo stimolo di shock avversivo hanno avuto un congelamento maggiore rispetto ai topi che non hanno ricevuto lo shock durante il tracciato del tono di base e l'intervallo tra le prove. Quando sono tornati al contesto originale, gli animali che hanno ricevuto lo stimolo di shock avversivo hanno mostrato un comportamento di congelamento costantemente più elevato nel periodo di otto minuti.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare il condizionamento della paura delle tracce per comprendere l'apprendimento dipendente dall'ippocampo e la memoria e i topi.