Capsulare Sierotipizzazione di Streptococcus pneumoniae Utilizzo della reazione Quellung

L'obiettivo generale di questa procedura è eseguire la stereotipizzazione capsulare dello streptococcus pneumoniae o dello pneumococco utilizzando la reazione di sedazione. Ciò si ottiene inoculando prima il brodo di infusione del cuore con una coltura pura di pneumococchi fresca durante la notte. Nella seconda fase, una goccia di inoculo viene trasferita su un vetrino da microscopio.

Successivamente, il siero antis viene aggiunto in uguale volume sul vetrino. Nella fase finale, entrambe le gocce vengono mescolate e un vetrino coprioggetti viene posizionato sopra la sospensione. In definitiva, la sospensione può essere osservata sotto contrasto di fase per osservare la reazione polmonare positiva o negativa.

Questo metodo dimostra il metodo gold standard della syp pneumococcica. Il metodo è semplice, facile da eseguire e facile da interpretare. La dimostrazione visiva di questo metodo è importante in quanto gli individui che non conoscono questa tecnica possono avere difficoltà a riconoscere quale sia la densità cellulare adatta per eseguire il test di scrupolo.

Iniziare utilizzando un ansa sterile monouso da un microlitro per ottenere una piccola passata di una coltura pura fresca durante la notte di pneumococchi coltivati su una piastra di agar di sangue di cavallo solida e non selettiva Inoculare gli pneumococchi in 100 microlitri di brodo per infusione di cuore. La sospensione dovrebbe apparire visibilmente torbida e agitare delicatamente il tubo per emulsionare la soluzione cellulare. Utilizzare un nuovo anello da un microlitro per trasferire una goccia di inoculo su un microscopio di vetro.

Scorrere quindi, posizionare un piccolo vetrino coprioggetti circolare sulla sospensione e controllare la densità della sospensione sotto contrasto di fase a volte con un ingrandimento di 400. Se l'inoculo è troppo pesante, diluire la sospensione cellulare con altro brodo e mescolare delicatamente di nuovo le cellule se l'inoculo è troppo leggero. Ad esempio, se sono visibili meno di 50 cellule, aggiungere altri batteri alla sospensione cellulare e mescolare di nuovo delicatamente.

Con esperienza. La densità della sospensione cellulare può essere giudicata agitando e tenendo la sospensione verso la luce dove dovrebbe apparire visibilmente torbida. Se vista al microscopio, la soluzione cellulare dovrebbe essere più o meno densa.

Una volta raggiunta la diluizione ottimale delle cellule batteriche, trasferire circa un microlitro di inoculo sul microscopio di vetro. Scorri avanti. Utilizzando un nuovo anello, aggiungere un volume uguale di temperatura ambiente.

Antisiero sul vetrino e per mescolare bene entrambe le gocce. Con l'anello, posizionare immediatamente un piccolo vetrino coprioggetti sulla sospensione, facendo attenzione a non toccare la goccia con la pinza. Quindi vedere la sospensione sotto contrasto di fase come appena dimostrato.

Una reazione polmonare negativa si osserva quando si osserva un rigonfiamento minimo o nullo delle cellule pneumococciche. Simile al controllo negativo, una sospensione di cellule pneumococciche senza antisieri aggiunti. Una reazione polmonare positiva si verifica quando un anticorpo specifico di tipo si lega alla capsula dello pneumococco, portando a una variazione del suo indice di rifrazione.

Se osservati sotto contrasto di fase, i batteri appaiono gonfi e più visibili. Non dimenticare che quando fai questa procedura stai effettivamente lavorando con microrganismi vivi. Per questo motivo, è necessario prestare attenzione a seguire le buone pratiche di laboratorio, indossare indumenti protettivi, l'attrezzatura di laboratorio appropriata e smaltire tutte le attrezzature e i reagenti alla fine del processo in modo sicuro.

Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in circa 10 minuti se eseguita correttamente. Dopo aver visualizzato questa procedura, dovresti avere una buona idea di come sierotipizzare lo pneumococco usando la reazione polmonare qua. Questa tecnica è importante per comprendere l'epidemiologia pneumococcica, sia nel trasporto nasofaringeo che in una malattia invasiva.