Capsulare Sierotipizzazione di

L'obiettivo generale di questa procedura è eseguire lo stereotipaggio capsulare di Streptococcus pneumoniae o del pneumococco mediante la reazione di Quellung. Questo viene effettuato inoculando innanzitutto del brodo di infusione cardiaca con una coltura pura fresca, ottenuta da coltivazione notturna, di pneumococchi. Nel secondo passaggio, una goccia di inocolo viene trasferita su un vetrino da microscopio.

Successivamente, un'uguale quantità di siero antis viene aggiunta sulla lamella. Nell'ultimo passaggio, entrambe le gocce vengono mescolate e un'ampolla viene posizionata sopra la sospensione. Infine, la sospensione può essere osservata al microscopio a contrasto di fase per valutare la reazione positiva o negativa di quell polmonare.

Questo metodo illustra il metodo standard di riferimento per lo syp pneumococcico. Il metodo è semplice, facile da eseguire e facile da interpretare. La dimostrazione visiva di questo metodo è importante poiché le persone nuove rispetto a questa tecnica potrebbero avere difficoltà a riconoscere quale densità cellulare è adatta per eseguire il test del qualm.

Iniziare utilizzando un’ansa monouso sterile da un microlitro per prelevare una piccola porzione di una coltura pura fresca di pneumococchi, cresciuta su una piastra di agar sangue equino solido e non selettivo, e inoculare i pneumococchi in 100 microlitri di brodo di infusione cardiaca. La sospensione dovrebbe apparire appena torbida e va agitata delicatamente per emulsionare la soluzione cellulare. Utilizzare un’ansa nuova da un microlitro per trasferire una goccia dell’inoculo su un vetrino da microscopio.

Passare al successivo, posizionare una piccola coprioggetto circolare sulla sospensione e verificare la densità della sospensione in contrasto di fase a 400 ingrandimenti. Se l'inoculo è troppo denso, diluire la sospensione cellulare con altro brodo e mescolare nuovamente delicatamente le cellule; se l'inoculo è troppo scarso, ad esempio se sono visibili meno di 50 cellule, aggiungere ulteriori batteri alla sospensione cellulare e mescolare nuovamente con delicatezza.

In base all'esperienza. La densità della sospensione cellulare può essere valutata agitando e tenendo la sospensione alla luce, dove dovrebbe apparire appena torbida. Quando osservata al microscopio, la soluzione cellulare dovrebbe avere circa questa densità.

Dopo aver raggiunto la diluizione ottimale delle cellule batteriche, trasferire circa un microlitro dell'inoculo sul vetrino da microscopio. Successivamente, utilizzando un nuovo ansa, aggiungere un volume uguale a temperatura ambiente.

Antiserum sul vetrino e mescolare bene entrambe le gocce. Con l'ansa, posizionare immediatamente un piccolo coprioggetto sulla sospensione, avendo cura di non toccare la goccia con la pinzetta. Quindi osservare la sospensione in contrasto di fase come appena dimostrato.

Una reazione negativa di quell polmonare viene osservata quando si verifica una lieve o nulla tumefazione delle cellule pneumococciche. Simile al controllo negativo, si tratta di una sospensione di cellule pneumococciche a cui non è stato aggiunto alcun antisiero. Una reazione positiva di quell polmonare si verifica quando l'anticorpo specifico per il sierotipo si lega alla capsula del pneumococco, provocando un cambiamento del suo indice di rifrazione.

Quando osservati al contrasto di fase, i batteri appaiono gonfi e più visibili. Non dimenticare che, durante questa procedura, si lavora effettivamente con microorganismi vivi. Per questo motivo, è necessario prestare attenzione a seguire buone pratiche di laboratorio, indossare abbigliamento protettivo, utilizzare l'equipaggiamento da laboratorio appropriato e smaltire in modo sicuro tutto l'equipaggiamento e i reagenti al termine del processo.

Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in circa 10 minuti se effettuata correttamente. Dopo aver visionato questa procedura, si dovrebbe avere una chiara comprensione di come sierotipizzare lo pneumococco utilizzando la reazione di Quellung. Questa tecnica è importante per comprendere l'epidemiologia dello pneumococco, sia nel trasporto nasofaringeo che nelle malattie invasive.