Diagnostic Ultrasound Imaging di funzione mouse Diaframma

Diagnostica ecografica ha dimostrato di essere efficace nella diagnosi delle diverse malattie respiratorie in soggetti umani e animali. Dimostriamo un protocollo ecografia completa utilizzata da laboratorio del Dr. Zuo per analizzare la cinetica del diaframma in particolare in modelli murini. Questa è anche una tecnica di ricerca non invasiva che può fornire informazioni quantitative sulla funzione dei muscoli respiratori mouse.

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare come valutare accuratamente la contrattilità del diaframma in un modello murino. Utilizzando l'ecografia, i primi passi sono anestetizzare il topo e rimuovere i peli addominali. I passaggi successivi consistono nell'applicare il gel per ultrasuoni e risolvere l'immagine del diaframma utilizzando le sonde a ultrasuoni.

In definitiva, i risultati possono mostrare l'escursione del diaframma e la frequenza respiratoria attraverso l'utilizzo dei calibri elettronici del software. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come la miografia invasiva, è che non è invasiva e riduce il numero di animali sacrificati. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla diagnosi e alla potenziale terapia della disfunzione dei muscoli respiratori.

Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulla contrattilità del diaframma in un modello murino, potrebbe essere applicato anche ad altri sistemi come i modelli clinici per valutare la progressione della malattia e l'efficacia della terapia. Allestire un tavolo operatorio pulito con un tampone isotermico riscaldato avvolto in un asciugamano chirurgico. Il cuscinetto riscaldato deve essere utilizzato per stabilizzare la temperatura interna dell'animale, riducendo al contempo il potenziale stress per l'animale.

Il topo deve essere posto nella camera di induzione dell'anestesia con una portata di ossigeno impostata a 1,5 litri al minuto e con il 3,5% di fluoro vaporizzato La sedazione di solito si stabilisce entro due minuti e si nota con la perdita della funzione motoria volontaria. Quindi mantenere lo stato anestetizzato mediante l'erogazione di gas nel cono del naso. Dopo aver anestetizzato l'animale, applicare una piccola quantità di unguento oftalmico direttamente sulle cornee per ridurre la secchezza oculare durante l'anestesia.

Il mouse non dovrebbe mai mostrare il riflesso di ritiro del pedale. Le mucose dovrebbero sempre avere un colore rosa e l'animale dovrebbe respirare costantemente. Trattenere ciascuna gamba del topo anestetizzato sul tavolo operatorio riscaldato con un adesivo rimovibile, come il nastro chirurgico.

Utilizzando un rasoio elettrico, rimuovere la maggior parte dei peli sulla superficie ventrale del corpo tra l'addome e a metà della cavità toracica. Quindi applicare la crema depilatoria per rimuovere i peli rimanenti. Dopo due o tre minuti, rimuovere la crema con una garza umida.

Inoltre, rimuovere i peli in eccesso con acqua e garza. Quindi, pulisci la regione rasata con quattro scrub di alcol al 70% o un antisettico equivalente per accendere il dispositivo a ultrasuoni. Un trasduttore micro convesso o lineare phased array è ideale grazie a queste sonde, all'ingombro ridotto e all'eccellente risoluzione assiale.

Regolare la frequenza degli ultrasuoni su un intervallo compreso tra 6,5 e 12 megahertz. Ora imposta la modalità della macchina, la luminosità e le modalità di movimento insieme, fornendo la migliore immagine della contrazione del diaframma. Successivamente, applicare una piccola quantità di gel per ultrasuoni sulla parte superiore dell'addome e massaggiare il gel verso la cavità toracica.

Posizionare il trasduttore a ultrasuoni sul gel e inclinarlo verso l'alto verso il cuore. Regolare la sonda per ottimizzare la risoluzione dell'immagine. Questo è impegnativo, ma diventerà più facile con la pratica.

È molto importante ricordarsi di monitorare la respirazione dell'animale durante l'anestesia, proprio per assicurarsi che i risultati dell'esame non siano compromessi. Premere il pulsante di congelamento per salvare temporaneamente le immagini del diaframma e visualizzare le contrazioni selezionate. Salvare la registrazione come loop cilindrico, che consente misurazioni successive dell'escursione diaframmatica e della frequenza respiratoria.

Dopo l'imaging, il topo dovrebbe riprendersi completamente dall'anestesia entro 30 minuti. Non lasciare l'animale incustodito fino a quando non ha riacquistato sufficiente coscienza per mantenere la posizione sdraiata sternale. Per analizzare i dati in modalità M, misurare la profondità e la velocità di movimento del diaframma dal rilassamento alla contrazione utilizzando i calibri elettronici che fanno parte del software ad ultrasuoni.

In alternativa, in modalità B, convertire il file del loop CINA in un file MP four e determinare la frequenza respiratoria contando il numero di contrazioni diaframmatiche durante il periodo di registrazione, i calibri elettronici possono essere utilizzati anche in modalità B per determinare la profondità del movimento del diaframma. È stato registrato il diaframma di un topo, lo spostamento verticale massimo e la distanza è stata quindi calcolata come descritto dal protocollo utilizzando calibri elettronici. Tali misurazioni sono state effettuate su tre diversi topi.

Per illustrare, è dopo aver convertito il file del ciclo CIL in un file MP quattro. La frequenza respiratoria è stata determinata contando il numero di contrazioni diaframmatiche durante un periodo di registrazione di sei secondi. Questa analisi è stata eseguita utilizzando la modalità B.

In alternativa, la modalità M forniva un'immagine visualizzata del movimento verticale del diaframma e della frequenza respiratoria. Ci sono alcuni potenziali artefatti di imaging che possono verificarsi durante l'esecuzione di ecografie diagnostiche, come il riverbero. Un altro artefatto che si può incontrare è la presenza di racconti di comete Una volta padroneggiata, questa tecnica può richiedere dai 20 ai 30 minuti se eseguita correttamente.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare accuratamente una contrattilità del diaframma nel modello murino utilizzando una tecnica di imaging diagnostico a ultrasuoni.