Name: Analisi delle reazioni RNA di trasformazione che utilizzano cellulari Sistemi gratis: 3 Fine Decolleté di pre-mRNA Substrati In vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Scopri l'analisi del taglio 3' dell'mRNA in vitro utilizzando estratti nucleari attivi per trascrizione e substrati RNA radiomarcati. Questo metodo permette di studiare i meccanismi di maturazione dell'RNA.

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SV è grata per il sostegno finanziario dal NIH K22AI077353 e la Fondazione Landenberger. KR ringrazia finanziamenti del NIH (5SC1GM083754).

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<li>Keller, W., Bienroth, S., Lang, K. M., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+and+polyadenylation+factor+CPF+specifically+interacts+with+the+pre-mRNA+3%27+processing+signal+AAUAAA%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Cleavage and polyadenylation factor CPF specifically interacts with the pre-mRNA 3' processing signal AAUAAA.</a> EMBO J. 10, 4241-4249 (1991).</li>
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<li>Takagaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multisubunit+factor%2C+CstF%2C+is+required+for+polyadenylation+of+mammalian+pre-mRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A multisubunit factor, CstF, is required for polyadenylation of mammalian pre-mRNAs.</a> Genes Dev. 4, 2112-2120 (1990).</li>
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<li>Vries, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pre-mRNA+cleavage+factor+II%28m%29+contains+homologs+of+yeast+proteins+and+bridges+two+other+cleavage+factors%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Human pre-mRNA cleavage factor II(m) contains homologs of yeast proteins and bridges two other cleavage factors.</a> EMBO J. 19, 5895-5904 (2000).</li>
<li>Gilmartin, G. M., Nevins, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ordered+pathway+of+assembly+of+components+required+for+polyadenylation+site+recognition+and+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">An ordered pathway of assembly of components required for polyadenylation site recognition and processing.</a> Genes Dev. 3, 2180-2190 (1989).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il pre-mRNA 3 &#39;di reazione in vitro scissione, effettuate negli estratti nucleari di cellule HeLa o con fattori di scissione frazionati da questi estratti, ha permesso l&#39;identificazione dei fattori scissione core e loro principali complessi 16-21. Molte altre proteine ​​associate a questi fattori sono stati recentemente identificati 22, e la reazione in vitro possono continuare a far luce su come queste proteine ​​contribuiscono alla reazione. Forse perché la reazione ...

La biosintesi della maggior parte degli RNA maturi messaggio eucarioti (mRNA) richiede diverse modificazioni post-trascrizionali, quali capping, splicing e di poliadenilazione. Queste modifiche sono generalmente accoppiati per garantire la corretta elaborazione 1 e fortemente aumentare la stabilità del mRNA. Il 3 &#39;formazione dell&#39;estremità di mammiferi pre-mRNA è generato da taglio endonucleolitico dell&#39;RNA nascente seguita da aggiunta di residui adenilato al 5&#39; spaccati prodotto da poli (A) polimerasi (PAP) 2-4. Nei mammiferi, clivaggio viene realizzato un complesso proteico multicomponente, di circa 800 kDa, che assembla su specifiche sequenze pre-RNA. Il poli (A) sequenza segnale, una sequenza altamente conservata AAUAAA hexanucleotide canonica, dirige il sito di scissione a circa 10-30 nt a valle. Questo sito è specificamente riconosciuto il fattore di clivaggio e poliadenilazione specificità (CPSF) e il 73 kD subunitàCSPF contiene l&#39;attività endonucleasi. Il fattore di stimolazione clivaggio (CstF) lega una più degenerato GU-o U sequenza ricca elemento a valle del poli (A) sito. Necessari anche per la scissione è il fattore di scissione mammiferi I (CFIm), e il fattore di scissione mammiferi II (CFII). CFIm lega specifici UGUA (N) siti in elementi di sequenza a monte (impieghi) che sono stati definiti per un certo numero di geni sembrano essere coinvolti in importanti processi fisiologici 5-8. In vitro, reazioni di trasformazione RNA sono comunemente analizzati mediante l&#39;utilizzo di substrati di RNA radiomarcati 9-12. Questi possono essere sintetizzati mediante trascrizione deflusso dal batteriofago promotore T7 o SP6. Quando si studia un sito di poliadenilazione che non è stato caratterizzato prima, è necessario utilizzare il DNA genomico anziché cDNA per generare il substrato RNA, come importanti sequenze a valle potrebbero non essere presenti in cDNA. Substrati di design per includere almeno 150 nt upstream e 50 nt a valle del sito di clivaggio / fine sul mRNA maturo. Il prodotto di scissione migra più velocemente del substrato; Tuttavia, poiché altri frammenti possono essere generate per azione non specifico nucleasi, la specificità della reazione deve essere verificata da sua dipendenza corrette sequenze segnale trasformazione. Pertanto, i substrati di RNA con una mutazione puntiforme nella sequenza AAUAAA (es AAGAAA) servono come controllo negativo per la reazione di scissione. Dato che una piccola quantità di RNA radiomarcato viene utilizzato per le reazioni di clivaggio, RNasi presenti in grande abbondanza nella maggior estratti nucleari può essere problematico, e limitare la scelta del materiale di partenza per la preparazione dell&#39;estratto. Cellule HeLa tendono a contenere bassi livelli di RNasi endogeni, e quindi eseguire bene in questi saggi. Il taglio endonucleolitico dei substrati di RNA in vivo e in vitro è immediatamente seguito da poli (A) Inoltre, gios l&#39;intermedio spaccati non è presente in quantità rilevabili. Pertanto, per studiare sia una sequenza o proteine ​​coinvolte in una reazione di scissione di RNA specifico, gli esperimenti sono fatti in condizioni che impediscono poliadenilazione verifichi. Non vi è alcuna dipendenza della scissione sulla poliadenilazione, o viceversa, così si può smettere di poliadenilazione senza danneggiare la reazione di scissione. Così, ATP viene sostituito con un analogo catena che chiude che manca il gruppo ossidrile 3 &#39;in modo che solo un singolo nucleotide può essere incorporato nel sito poly (A) e appena RNA spaccati può essere rilevato. Data la complessità e alto grado di particolarità di questo tipo di saggio, si descrive un protocollo dettagliato video da studiare taglio endonucleolitico dal clivaggio / Poly (A) macchine di precursori di mRNA in vitro. Si descrive come preparare estratti nucleari competenti, generare substrati di RNA radioattivi, eseguire la reazione di scissione, e analizzare e interpretare il risultatoprodotti ing. Figura 1 mostra un esempio di RNA substrato codificanti per l&#39;estremità 3 &#39;di HIV-1 pre-mRNA da utilizzare per un saggio di scissione. L&#39;estremità 3 &#39;del genoma di RNA di HIV è composto di molte importanti sequenze regolatrici, come il poli (A) sito, una regione ricca G+ U, e l&#39;elemento USE, che sono tutti necessari per la maturazione efficiente dei trascritti di mRNA virali 13 . In questo esempio ci aspettiamo il substrato RNA ingresso per essere 338 nt e sulla scollatura 237 nt. Se poliadenilazione è stato permesso di accadere, uno striscio di prodotti sarebbe stata osservata tra 237 e 437 nt.

<table><tbody><tr><td>Pallone Celstir da 1 L</td><td>Wheaton</td><td>356884</td><td>Diverse dimensioni disponibili</td></tr><tr><td>Agitatore a bassa velocità a 4 posizioni</td><td>VWR</td><td>12621-076</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga a secchiello oscillante</td><td>Coltro</td><td></td> Beckman <td>Allegra x-15R con rotore SX4500</td></tr><tr><td>Ultracentrifuga</td><td>Coltro</td><td></td><td>Beckman Optima L-100 XP Ultra con rotore SW41</td></tr><tr><td>Centrifuga da tavolo 5417R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Incubatore Thermomixer Refrigerato</td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>250 ml provette coniche</td><td>Corning</td><td>430776</td><td></td></tr><tr><td>50 ml provette coniche</td><td>BD</td><td>Falcon 352098</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga ultratrasparenti</td><td>Beckman Coulter</td><td>344059</td><td></td></tr><tr><td>JOKLIK modificato MEM</td><td>Lonza</td><td>04-719Q</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Atlas</td><td>F-0500-A</td><td>L-glut</td></tr><tr><td>:pen:strep</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>400-110</td><td></td></tr><tr><td>1 M Tris-HCl pH 8.0</td><td>Mediatech</td><td>46-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio</td><td>Fisher</td><td>BP214-500</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>MP Biomedicals</td><td>194844</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>Alexis Biomedicals</td><td>280-001-G-010</td><td></td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>Fisher</td><td>BP229-4</td><td></td></tr><tr><td>5 M soluzione di cloruro di sodio</td><td>Mediatech</td><td>46-032-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 0,5 M soluzione</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7889-100ml</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher</td><td>BP120-500</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>Thermo Scientific</td><td>36978</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di ammonio</td><td>Fisher</td><td>A702-500</td><td></td></tr><tr><td>Compresse da cocktail complete per inibitori della proteasi senza EDTA</td><td>Roche</td><td>04 693 132 001</td><td></td></tr><tr><td>Slide-A-Lyzer Kit di cassette per dialisi</td><td>Thermo Scientific</td><td>66372</td><td>MWCO 7.000 0,5 ml-3 ml</td></tr><tr><td>15 ml Set di macinatori per tessuti Dounce</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9938-1SET</td><td>Diverse dimensioni disponibili</td></tr><tr><td>Espandi kit PCR ad alta fedeltà</td><td>Roche</td><td>11 732 650 001</td><td></td></tr><tr><td>10 mM dNTP Mix</td><td>Invitrogen</td><td>Y02256</td><td>10 mM per nucleotide</td></tr><tr><td>Kit MaxiScript SP6/T7</td><td>Ambion</td><td>AM1322</td><td></td></tr><tr><td>m7G(5')ppp(5') G RNA cap</td><td>New England Biolabs</td><td>S1404S</td><td></td></tr><tr><td>Century Marker Template Plus</td><td>Ambion</td><td>AM7782</td><td></td></tr><tr><td>Easytides UTP [&alpha;-32P] 250 &mu; Ci</td><td>Perkin Elmer</td><td>BLU507H250UC</td><td></td></tr><tr><td>Gel tampone di carico II</td><td>Ambion</td><td>8546G</td><td></td></tr><tr><td>DEPC acqua trattata</td><td>Ambion</td><td>AM9906</td><td></td></tr><tr><td>10x TAE</td><td>Fisher</td><td>BP13354</td><td></td></tr><tr><td>10x TBE</td><td>Ameresco Life Sciences</td><td>0658-4L</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Fisher</td><td>BP399-20</td><td></td></tr><tr><td>Urea</td><td>Fisher</td><td>BP169-212</td><td></td></tr><tr><td>Persolfato di ammonio</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0700</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Fisher</td><td>BP150-20</td><td></td></tr><tr><td>Acetato di ammonio</td><td>Fisher</td><td>A637-500</td><td></td></tr><tr><td>40% 19:1 acrilammide:bis-acrilammide</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0144</td><td></td></tr><tr><td>Glicogeno</td><td>Roche</td><td>10 901 393 001</td><td></td></tr><tr><td>100% etanolo assoluto 200 proof</td><td>Acros</td><td>61509-0040</td><td></td></tr><tr><td>Fenolo acido: cloroformio</td><td>Ambion</td><td>9720</td><td>Per RNA</td></tr><tr><td>Fluido di scintilazione</td><td>Fisher</td><td>SX18-4</td><td></td></tr><tr><td>Inibitore della RNASI</td><td>Promega</td><td>N261B</td><td></td></tr><tr><td>Alcool polivinilico- PVA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8136-250G</td><td></td></tr><tr><td>Creatina fosfato</td><td>Calbiochem</td><td>2380</td><td></td></tr><tr><td>100 mM dATP</td><td>Fisher</td><td>BP2560-4</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Acros</td><td>23042-5000</td><td></td></tr><tr><td>Proteinasi K</td><td>Fisher</td><td>BP1700-100</td><td></td></tr><tr><td>Unità di sequenziamento regolabile</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z351881-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Clip per raccoglitori</td><td>Deposito ufficio</td><td>838-056</td><td></td></tr><tr><td>Lastre di vetro 20 cm x 42 cm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z352543</td><td>1 SET</td></tr><tr><td>Piastre di vetro 20 cm x 22 cm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z35252-7</td><td>1 SET</td></tr><tr><td>Piastre di raffreddamento in alluminio 20 cm x 42 cm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z352667</td><td>1 EA</td></tr><tr><td>Distanziatori 0,4 mm x 22 cm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z35230-6</td><td>1 SET</td></tr><tr><td>Distanziatori 0,4 mm x 42 cm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z352314-1</td><td>1 SET</td></tr><tr><td>Pettine a 8 pozzetti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z35195-4</td><td>1 EA</td></tr><tr><td>Pettine a 16 pozzetti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z351962</td><td>1</td></tr><tr><td>EA Pettine a 32 pozzetti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z351970</td><td>1 EA</td></tr><tr><td>Gel repel coating</td><td>C.B.S. Scientific</td><td>SGR-0401</td><td>o SGR-0101 per flacone singolo</td></tr><tr><td>Punte di caricamento del gel</td><td>Rainin</td><td>GT-10-4</td><td>0.1-10 &mu; l</td></tr><tr><td>Sequenziamento PowerPac HV</td><td>Bio-Rad</td><td>PowerPac HV</td><td>5.000 V/500 mA/400 W</td></tr><tr><td>Essiccatore per gel Modello 583</td><td>Bio-Rad</td><td>Modello 583</td><td></td></tr><tr><td>Pompa a vuoto Hydrotech per essiccatore di gel</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glogos II Marcatori fosforescenti</td><td>Agilent</td><td>420201</td><td></td></tr><tr><td>Film 8 x 10</td><td>Midsci</td><td>BX810</td><td></td></tr><tr><td>Film 14 x 17</td><td>Phenix</td><td>F-BX1417</td><td></td></tr><tr><td>Cassetta per autoradiografia</td><td>Fisher</td><td>FBCA 1417</td><td>8 x 10 dimensioni disponibili</td></tr></tbody></table>

analisi delle reazioni rna di trasformazione che utilizzano cellulari sistemi gratis: 3 &#39;fine decolleté di pre-mrna substrati<em&gt; in vitro</em

Analysis of RNA Processing Reactions Using Cell Free Systems: 3' End Cleavage of Pre-mRNA Substrates in vitro

L&#39;estremità 3 &#39;degli mRNA di mammifero non è formata da improvvisa di trascrizione di RNA polimerasi II (RNPII). Invece, RNPII sintetizza mRNA precursore oltre la fine degli RNA maturi, e un processo attivo di attività endonucleasica è richiesto in un luogo specifico. Clivaggio del precursore dell&#39;RNA avviene normalmente 10-30 nt a valle del sito poliA consenso (AAUAAA) dopo i dinucleotidi CA. Proteine ​​del complesso clivaggio, un complesso proteico multifattoriale di circa 800 kDa, realizzare questa attività nucleasi specifica. Sequenze di RNA specifici a monte ea valle del sito poliA controllano il reclutamento del complesso scissione. Subito dopo la scissione, pre-mRNA sono poliadenilato dalla polimerasi poliA (PAP) per la produzione di maturare messaggi RNA stabili. Lavorazione di estremità 3 &#39;di un trascritto di RNA può essere studiata utilizzando estratti nucleari cellulari con specifici substrati di RNA radioattivi. In somma, una lunga 32 &lt;/ Sup&gt; P-marcato uncleaved precursore RNA viene incubata con estratti nucleari in vitro, e clivaggio viene valutata mediante gel elettroforesi e autoradiografia. Quando si verifica la corretta scissione, un corto 5 &#39;spaccati prodotto viene rilevato e quantificato. Qui, descriviamo il saggio di clivaggio in dettaglio utilizzando, ad esempio, l&#39;elaborazione 3 &#39;estremità di HIV-1 mRNA.

Risultati rappresentativi di un saggio di scissione del RNA poly (A) siti di HIV-1 (Figura 2). Possiamo osservare il substrato RNA uncleaved, che è la banda più lenta migrazione nella parte superiore del gel. Il prodotto spaccati specifico è la banda più breve frammento più intensa che corre più veloce nel gel alla dimensione prevista, ed è specificamente assente dal saggio di clivaggio della (A) controllo mutpoly che contiene una mutazione puntiforme nella sequenza poly (mutPolyA) RNA substrato. Posson...

RNA polimerasi II sintetizza un RNA precursore che si estende oltre l&#39;estremità 3 &#39;del mRNA maturo. La fine del RNA maturo viene generato cotranscriptionally, in un sito dettata da sequenze di RNA, tramite l&#39;attività di endonucleasi del complesso scissione. Qui, dettaglio il metodo per studiare le reazioni di dissociazione in vitro.

Analisi delle reazioni RNA di trasformazione che utilizzano cellulari Sistemi gratis: 3 &#39;Fine Decolleté di pre-mRNA Substrati<em&gt; In vitro</em

The 3&#8217; end of mammalian mRNAs is not formed by abrupt termination of transcription by RNA polymerase II (RNPII). Instead, RNPII synthesizes ...

L'obiettivo generale di questa procedura è esaminare con successo il taglio di mRNA a livello del sito 3'. Questo viene ottenuto innanzitutto preparando un estratto nucleare trascrizionalmente attivo da cellule coltivate in sospensione. Il secondo passaggio della procedura consiste nella preparazione di substrati di RNA marcati radioattivamente mediante trascrizione in vitro.Il terzo passaggio consiste nella purificazione su gel dei substrati di RNA marcati. L'ultimo passaggio prevede l'assemblaggio della reazione di scissione, che include l'estratto nucleare e il substrato di RNA marcato. Alla fine, i risultati possono mostrare l'mRNA tre prime, i substrati non scissi e il prodotto di scissione mediante elettroforesi su gel verticale radioattiva.La dimostrazione visiva di questo metodo è importante, poiché, nonostante venga eseguito sin dagli anni '80, non è facile da realizzare a causa delle numerose fasi specifiche del procedimento che risultano complesse. Avere le cellule lavate, pellettate e pronte per la lisi. Per iniziare questo protocollo, aggiungere al pellet cellulare un buffer contenente DTT fresco.Aggiungere cinque volumi del CPV stimato e utilizzare una pipetta per dis

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In questo articolo viene descritto un metodo semplice per la raccolta di singole cellule di ratto colture primarie neuronali e analisi del trascrittoma con conseguente amplificazione ARNA. Questo approccio è generalizzabile a qualsiasi tipo di cellula.

L&#39;analisi del trascrittoma di singole cellule

CRISPR / Cas sistemi mediata immunità adattativa in Batteri e Archaea. Molte proteine ​​Cas si propongono di agire come agiscono sul endoribonucleases crRNA precursori di varia lunghezza. Qui si illustrano tre diversi approcci per la generazione pre-crRNA substrati per l'analisi biochimica di attività endonucleasi Cas.

Generazione Substrato per endonucleasi di CRISPR / Cas Sistemi

Descriviamo qui un metodo di estensione del primer basato sulla fluorescenza per determinare i punti di partenza trascrizionali dai trascritti batterici e dall'elaborazione dell'RNA in vivo utilizzando un sequenziatore automatico su gel.

Fluorescenza base tecnica Primer Extension determinare trascrizionali punti di partenza e siti di taglio di RNasi In Vivo

Questo protocollo descrive un metodo per la mappatura pre-mRNA 3' fine elaborazione siti.

3' fine sequenziamento preparazione libreria con A-seq2

I due diversi 3' amplificazione veloce delle estremità del cDNA (3' gara) protocolli descritto qui fanno uso di due diversi DNA polimerasi per mappare sequenze che includono un segmento dell'open reading frame (ORF), il codone di arresto e l'intero regione 3' UTR di una trascrizione usando RNA ottenute da linee cellulari tumorali differenti.

Adattamento 3' amplificazione veloce di CDNA finisce per mappare le trascrizioni in cancro

Complessi RNA/proteici purificati mediante botin-streptavidina strategia sono eluiti per soluzione in condizioni denaturanti in forma inadatta per ulteriore purificazione e analisi funzionale. Qui, descriviamo una modifica di questa strategia che utilizza un linker foto-spaccabili in RNA e un delicato passaggio di UV-eluizione, producendo complessi RNA/proteine native e completamente funzionale.

Single-step purificazione di complessi macromolecolari usando RNA attaccato alla biotina e un Linker foto-spaccabili

Qui, descriviamo l'assemblaggio di complessi di allungamento della polimerasi RNA II (Pol II) che richiedono solo brevi oligonucleotidi di DNA sintetico e RNA e Pol II purificati. Questi complessi sono utili per studiare i meccanismi alla base dell'elaborazione co-trascrizione delle trascrizioni associate al complesso di allungamento di Pol II.

Complessi di allungamento dell'RNA artificiale Polymerase II per eventi di elaborazione dell'RNA co-trascrizione

Qui presentiamo un protocollo per la scissione dell'RNA dipendente da DNAzyme. Ciò consente un'analisi rapida e dipendente dal sito dell'RNA 2'-O-metilazione. Questo approccio può essere utilizzato per la valutazione preliminare o importante dell'attività dello snoRNA.

Analisi dipendente da DNAzyme del rRNA 2'-O-Metilazione

Presentiamo un protocollo per misurare la dinamica da micro a millisecondo su 13C/15RNA N-labeled e unlabel con spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR) a dispersione di rilassamento 1H R1ρ.  Il focus di questo protocollo risiede nella preparazione di campioni ad alta purezza e nella configurazione di esperimenti NMR.

Aspetti pratici della preparazione del campione e della configurazione di 1H R1ρ Esperimenti di dispersione di rilassamento dell'RNA

La struttura secondaria dell'RNA è stata osservata principalmente in RNA maturo con metodi di sondaggio strutturale. Il sequenziamento co-transcriptional Structure Tracking (CoSTseq) unifica il funzionamento nucleare, che è stato utilizzato per studiare la posizione della polimerasi sull'RNA nascente, con il sondaggio strutturale. CoSTseq consente così l'osservazione della struttura secondaria dell'RNA nell'RNA sotto trascrizione attiva.

Analisi comparativa della struttura dell'RNA di trascrizioni nascenti e mature in Saccharomyces cerevisiae

Scopri l'analisi del taglio 3' dell'mRNA in vitro utilizzando estratti nucleari attivi per trascrizione e substrati RNA radiomarcati. Questo metodo permette di studiare i meccanismi di maturazione dell'RNA.

Analisi delle reazioni RNA di trasformazione che utilizzano cellulari Sistemi gratis: 3 Fine Decolleté di pre-mRNA Substrati In vitro (Video) | JoVE Journal

Analisi delle reazioni RNA di trasformazione che utilizzano cellulari Sistemi gratis: 3 'Fine Decolleté di pre-mRNA Substrati

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