Name: Endoteliali Tubo cellulare saggio Formazione per la In Vitro Studio di Angiogenesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Impara il saggio di formazione tubulare con cellule endoteliali per studiare l'angiogenesi in vitro. Questo metodo rapido e quantificabile permette di visualizzare e analizzare le reti tubolari entro poche ore.

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Questa ricerca è stata sostenuta in parte dal programma di ricerca intramurale del National Cancer Institute presso il National Institutes of Health, e NCI concedere UA5CA152907.

1 Raccolta di mezzi condizionati per testare Angiogenic Potenziale <ol><li> Crescere cellule primarie o immortalizzate da testare per il potenziale angiogenico o anti-angiogenica nei media siero nativi o basse e raccogliere i media condizionata. <ol><li> In alternativa, l&#39;uso condizionato mezzi immediatamente, o aliquotato e conservato a -80 ° C per diversi mesi. Utilizzare nonconditioned supporti siero nativo o partire da un controllo negativo, e usare i media non condizionata completa crescita (10% FBS, o la concentrazione del caso) come controllo positivo. In alternativa, per testare potenziali stimolatori dell&#39;angiogenesi, somministrare carbone mezzi spogliato mancano fattori di crescita con concentrazioni note di specifiche proteine ​​di interesse e di confrontare i fattori di crescita media liberi da soli. </li></ol></li></ol> 2 Preparazione di cellule endoteliali prima del dosaggio <ol><li> Due giorni prima del dosaggio, il passaggio 3B-11 celle in un nuovo fiasco T-75. Passaggio numero di cellule è importante. Questo test funziona meglio quando le cellule sono tra il secondo e il sesto passaggi. Il test non funziona bene se si usano cellule endoteliali prima del secondo o dopo il decimo passaggio. </li><li> Crescere le cellule per 24 ore in DMEM supplementato con 10% FBS, 2 mM L-glutammina, 1 mM di piruvato di sodio, 100 U / ml di penicillina e 100 mg / ml di streptomicina. </li><li> Un giorno prima del test, il siero di fame 3B-11 celle come segue: <ol><li> Aspirare il terreno dalle cellule 3B-11. </li><li> Aggiungi mezzi siero ridotto di DMEM integrato con 0,2% FBS, 2 mM L-glutammina, piruvato di sodio 1mM, 100 U / ml di penicillina, e 100 mg / ml di streptomicina. </li><li> Crescere le cellule per altre 24 ore. </li></ol></li></ol> 3 Preparazione dei reagenti Prima di Assay NOTA: le concentrazioni di BME sono altamente variabile dipendente su lotto. BME non funziona bene se la concentrazione è inferiore a 10 mg / ml, pertanto il costruttore BME deve essere contattato prima dell&#39;acquisto per garantireacquisizione di un lotto adeguatamente concentrato. <ol><li> Sbrinamento ridotto fattore di crescita BME in frigorifero. BME solidifica quando caldo, quindi deve essere mantenuto freddo prima dell&#39;uso. BME può essere conservato in frigorifero per un paio di settimane, o aliquotato e congelato a -80 ° C. </li><li> Un fattore di crescita ridotta BME è preferibile rispetto tradizionale BME. La mancanza di fattori angiogenici nel BME sarà più facile osservare l&#39;effetto che i fattori dai media condizionati hanno sulla formazione del tubo. </li><li> Scongelare supporti da testare. </li></ol> 4 Preparazione di cellule endoteliali immediatamente prima del saggio <ol><li> Lavare 3B-11 cellule in DPBS. <ol><li> Se la visualizzazione con fluorescenza o confocale microscopia è desiderato, prima di lavare 3B-11 celle, aggiungere calceina AM alle cellule endoteliali nei media ad una concentrazione finale di 2 mg / ml. Inserire cellule marcate calceina al buio a 37 ° C e 5% di CO 2 prima dell&#39;inizio del test. Sciogliere magazzino calceinaAM in DMSO e una volta calceina è diluito nei media concentrazione finale di DMSO non deve superare lo 0,1%. Dopo 30-45 min lavaggio calceina AM dalle cellule (punto 4.1) e continuare con l&#39;esperimento segue. </li></ol></li><li> Trypsinize cellule con l&#39;aggiunta di 1 ml di tripsina-EDTA per T-75 pallone. </li><li> Dopo tripsinizzazione è completa, neutralizzare tripsina da risospendere le cellule in un volume finale di 10 ml di DMEM, 10% FBS, 2 mM L-glutammina, piruvato di sodio 1 mM, 100 U / ml di penicillina, e 100 mg / ml di streptomicina. </li><li> Celle filtranti attraverso 100 micron filtro cella per rimuovere grumi. </li><li> Contare le cellule e risospendere le cellule ad una concentrazione finale di 7,5 x 10 6 cellule / ml di DMEM, 10% FBS, 2 mM L-glutammina, 1 mM di piruvato di sodio, 100 U / ml di penicillina e 100 mg / ml di streptomicina. </li></ol> 5 Tubo saggio Formazione <ol><li> Mettere 24 pozzetti e 1 ml punte in frigorifero o su ghiaccio per 20-30 minuti prima di caricare la piastra in modo che la BME non PREMaturely solidificarsi. </li><li> Dispensare 250 ml di fattore di crescita ridotto BME in ciascun pozzetto di una piastra da 24 pozzetti. Evitare di creare bolle non premendo la pipetta e arrivare al capolinea, mentre l&#39;erogazione. Fare attenzione che sufficiente BME rimane al centro del pozzo quando le forme menisco; se la matrice è troppo sottile, le cellule si formano solo un monostrato. </li><li> Incubare la piastra a 24 pozzetti a 37 ° C e 5% di CO 2 per 30 min a solidificare BME. </li><li> Una volta BME ha fissato, mescolare circa 300 ml di mezzi condizionati con 10 ml di risospese 3B-11 cellule (circa 75.000 celle). <ol><li> Regolare il volume dei media condizionati e il numero di cellule piastrate a seconda del tipo di cellule endoteliali utilizzato, e testare le diluizioni seriali dei media condizionati per dimostrare l&#39;attività. Se le cellule confrontando coltivate in condizioni diverse, normalizzare il volume mezzi condizionati al numero di celle che sono stati utilizzati per condizionare i media. </li></ol></li><li> Tubi will cominciano a formarsi entro 2-4 ore. A seconda della concentrazione di fattore angiogenico nei media condizionata, formazione del tubo picco potrebbe verificarsi tra 3 e 12 ore e la tempistica del test dovrà essere ottimizzato. Se si lavora con le cellule endoteliali primarie invece di cellule immortalizzate, formazione del tubo iniziale può essere ritardato di diverse ore. <ol><li> Tubi spesso iniziano a deteriorarsi entro 18 hr e cellule endoteliali saranno sottoposti apoptosi. </li></ol></li><li> Al momento della formazione del tubo di picco, i media accuratamente aspirato dal pozzo per evitare di interrompere la rete tubo sul BME. <ol><li> Lavare ogni pozzetto con 1 ml DPBS, quindi aspirarla. <ol><li> Per la visualizzazione immediata, aggiungere 1 ml DPBS freschi a ciascuna rete bene e l&#39;immagine del tubo utilizzando un microscopio invertito collegato a una macchina fotografica digitale, o fluorescenza / microscopio confocale se le cellule sono state colorate con calceina AM come in 4.1.1. </li><li> Per fissare il tubo di rete per la visualizzazione successiva, e aggiungere 4% paraformaldeide per ogniaspirato pozzetto ed incubare per 15 minuti a temperatura ambiente. <ol><li> Rimuovere paraformaldeide, lavare due volte con DPBS, quindi aggiungere 1 ml DPBS fresche per ogni bene. </li><li> Microscopicamente immagine prima della fissazione come alcuni tubi possono rompersi durante questa procedura. </li></ol></li></ol></li></ol></li></ol> 6 Quantificazione del tubo Network <ol><li> Quantificare la rete metropolitana in diversi modi a seconda delle preferenze del ricercatore, e diversi programmi di computer hanno capacità di misurare i seguenti parametri: numero di tubi; numero di cicli / maglie; numero di siti di filiale / nodi; lunghezza dei tubi. </li><li> Utilizzare il programma di computer rappresentativa come J Immagine con il plugin Angiogenesi Analyzer 16 per la quantificazione delle reti di tubi. </li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+life%2C+disease+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in life, disease and medicine.</a> Nature. 438, 932-936 (1038).</li>
<li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+and+clinical+applications+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis.</a> Nature. 473, 298-307 (2011).</li>
<li>Potente, M., Gerhardt, H., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+and+therapeutic+aspects+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Basic and therapeutic aspects of angiogenesis.</a> Cell. 146, 873-887 (2011).</li>
<li>Coultas, L., Chawengsaksophak, K., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+and+VEGF+in+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells and VEGF in vascular development.</a> Nature. 438, 937-945 (2005).</li>
<li>Bouis, D., Kusumanto, Y., Meijer, C., Mulder, N. H., Hospers, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+pro-+and+anti-angiogenic+factors+as+targets+of+clinical+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+research+%3A+the+official+journal+of+the+Italian+Pharmacological+Society%22%5BJournal%5D)">A review on pro- and anti-angiogenic factors as targets of clinical intervention.</a> Pharmacological research : the official journal of the Italian Pharmacological Society. 53, 89-103 (2006).</li>
<li>Ausprunk, D. H., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+and+proliferation+of+endothelial+cells+in+preformed+and+newly+formed+blood+vessels+during+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+research%22%5BJournal%5D)">Migration and proliferation of endothelial cells in preformed and newly formed blood vessels during tumor angiogenesis.</a> Microvascular research. 14, 53-65 (1977).</li>
<li>Chung, A. S., Lee, J., Ferrara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+tumour+vasculature%3A+insights+from+physiological+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Targeting the tumour vasculature: insights from physiological angiogenesis.</a> Nature reviews. Cancer. 10, 505-514 (2010).</li>
<li>Chung, A. S., Ferrara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+and+pathological+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+cell+and+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Developmental and pathological angiogenesis.</a> Annual review of cell and developmental biology. 27, 563-584 (2011).</li>
<li>Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor angiogenesis.</a> The New England journal of medicine. 358, 2039-2049 (2008).</li>
<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+angiogenesis%3A+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor angiogenesis: therapeutic implications.</a> The New England journal of medicine. 285, 1182-1186 (1056).</li>
<li>Kubota, Y., Kleinman, H. K., Martin, G. R., Lawley, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+laminin+and+basement+membrane+in+the+morphological+differentiation+of+human+endothelial+cells+into+capillary-like+structures%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Role of laminin and basement membrane in the morphological differentiation of human endothelial cells into capillary-like structures.</a> The Journal of cell biology. 107, 1589-1598 (1988).</li>
<li>Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Benton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endothelial+cell+tube+formation+assay+on+basement+membrane+turns+20%3A+state+of+the+science+and+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The endothelial cell tube formation assay on basement membrane turns 20: state of the science and the art.</a> Angiogenesis. 12, 267-274 (2009).</li>
<li>Arnaoutova, I., Kleinman, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+angiogenesis%3A+endothelial+cell+tube+formation+on+gelled+basement+membrane+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">In vitro angiogenesis: endothelial cell tube formation on gelled basement membrane extract.</a> Nature protocols. 5, 628-635 (2010).</li>
<li>Walter-Yohrling, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+endothelial+cell+lines+as+models+of+tumor+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+cancer+research+%3A+an+official+journal+of+the+American+Association+for+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Murine endothelial cell lines as models of tumor endothelial cells.</a> Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 10, 2179-2189 (2004).</li>
<li>Connell, K. A., Edidin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+lymphoid+endothelial+cell+line+immortalized+by+simian+virus+40+binds+lymphocytes+and+retains+functional+characteristics+of+normal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">A mouse lymphoid endothelial cell line immortalized by simian virus 40 binds lymphocytes and retains functional characteristics of normal endothelial cells.</a> Journal of immunology. , Baltimore, Md. 144-521 (1950).</li>
<li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ImageJ+contribution%3A+Angiogenesis+Analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22ImageJ+News%22%5BJournal%5D)">ImageJ contribution: Angiogenesis Analyzer.</a> ImageJ News. , (2012).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

L&#39;angiogenesi è coinvolta nei processi sia fisiologici e patologici. Studiare i meccanismi coinvolti nell&#39;angiogenesi richiede l&#39;uso di saggi che ricapitolano le principali fasi di angiogenesi. Il tubo cellule saggio di formazione endoteliali offre diversi vantaggi rispetto ad altri saggi. E &#39;facile set-up, è relativamente poco costoso, produce tubuli in poche ore, ed è quantificabile. Inoltre, esso può essere completato in 24 o 96 pozzetti piastre, e quindi può essere utilizzato per lo screening ad alta...

L&#39;angiogenesi, lo sviluppo di nuovi vasi sanguigni da vasi preesistenti, è di vitale importanza per una varietà di processi tra cui la crescita di organi, lo sviluppo embrionale, e la guarigione delle ferite 1-3. Recentemente ha sviluppato i vasi sanguigni, rivestiti da cellule endoteliali, l&#39;apporto di ossigeno e sostanze nutritive ai tessuti, promuovere la sorveglianza immunitaria da parte delle cellule ematopoietiche e rimuovere i prodotti di scarto 2,4. L&#39;angiogenesi è di fondamentale importanza durante lo sviluppo embrionale e fetale. Tuttavia, questo processo rimane latente negli adulti eccetto durante i periodi di guarigione delle ferite, la crescita scheletrica, la gravidanza o durante il ciclo mestruale 1-3. Negli ultimi due decenni, i meccanismi molecolari fondamentali che regolano l&#39;angiogenesi hanno cominciato ad emergere. L&#39;angiogenesi è un evento strettamente regolamentato, equilibrato per segnali pro e anti-angiogenici, tra cui integrine, chemochine, angiopoietine, agenti di rilevamento ossigeno, molecole giunzionali e inibitori endogeni 5. Una volta proangsegnali iogenic come la base il fattore di crescita dei fibroblasti (bFGF), fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF), fattore di crescita derivato piastrine (PDGF), e il fattore di crescita epidermico (EGF) attivano cellule endoteliali dei recettori delle cellule endoteliali rilasciano proteasi a degradare la membrana basale. Le cellule endoteliali poi proliferano e migrano, formando germogli a una velocità di alcuni millimetri al giorno 6,7. L&#39;angiogenesi è associata a varie condizioni patologiche, tra cui il cancro, la psoriasi, la retinopatia diabetica, artrite, asma, malattie autoimmuni, malattie infettive, e l&#39;aterosclerosi 8-10. Data l&#39;importanza dell&#39;angiogenesi in varie malattie, la comprensione dei geni e vie che regolano questo processo è fondamentale per la progettazione di terapie migliori. Il saggio di formazione del tubo è un metodo rapido e quantitativo per la determinazione geni o meccanismi coinvolti nell&#39;angiogenesi. In primo luogo descritto nel 1988,i principi alla base di questa analisi sono che le cellule endoteliali mantengono la capacità di dividersi e migrare rapidamente in risposta ai segnali angiogenici 11-13. Inoltre, le cellule endoteliali vengono indotte a differenziarsi e formare strutture tubo-come quando coltivate su una matrice di estratto di membrana basale (BME). Questi tubi contengono un lume circondato da cellule endoteliali collegate tra loro attraverso complessi giunzionali. Formazione del tubo avviene rapidamente con la maggior parte dei tubi che formano in questo test entro 2-6 ore a seconda della quantità e del tipo di stimoli angiogenici. Diversi tipi di cellule endoteliali possono essere usati per questo dosaggio compreso sia cellule primarie e linee cellulari immortalizzate 14,15. La linea cellulare utilizzata per questo articolo è stata del mouse 3B-11, ma la stessa metodologia può essere applicata con le altre linee di cellule endoteliali, come SVEC4-10 (topo) o cellule endoteliali primarie come le cellule umane (HUVEC). A seconda di quale linea cellulare è usato e se ce endotelialeLLS sono trasformati o non trasformati, l&#39;ottimizzazione dovrà essere effettuata per identificare il momento ideale necessaria per la corretta formazione del tubo.

<table><tbody><tr><td>Costar Piastra trattata con coltura tissutale a 24 pozzetti</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>BD Matrigel matrice della membrana basale, fattore di crescita ridotto</td><td>BD Biosciences</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Gibco 0,05% tripsina-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Gibco L-glutammina 200 mM (100x)</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Gibco pen strep</td><td>Life Tecnologie</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DPBS (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Atlas Biologicals</td><td>F-0500-A</td><td></td></tr><tr><td>Calcein AM</td><td>Life Technologies</td><td>C3100MP</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ATCC</td><td>4-X</td><td></td></tr></tbody></table>

endoteliali tubo cellulare saggio formazione per la<em&gt; in vitro</em&gt; studio di angiogenesi

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

L&#39;angiogenesi è un processo fondamentale per lo sviluppo del tessuto normale e la guarigione della ferita, ma è anche associato con una varietà di condizioni patologiche. Usando questo protocollo, l&#39;angiogenesi può essere misurata in vitro in un veloce, modo quantificabile. Cellule endoteliali primarie o immortalati sono mescolati con i media condizionati e placcato su matrice membrana basale. Le cellule endoteliali formano strutture simili a capillari in risposta ai segnali angiogenici trovati in mezzi condizionati. La formazione del tubo avviene rapidamente con le cellule endoteliali cominciando ad allinearsi entro 1 ora e tubuli-lume contenente cominciando ad apparire in 2 ore. I tubi possono essere visualizzati con un contrasto di fase invertito microscopio, o le cellule possono essere trattate con calceina AM prima del test e tubi visualizzati tramite fluorescenza o confocale. Il numero di siti di filiale / nodi, loop / mesh, o il numero o la lunghezza dei tubi formati può essere facilmente quantificato in una misura di in vitro angiogenesi. In sintesi, questo test può essere utilizzato per identificare i geni e vie che sono coinvolti nella promozione o inibizione dell&#39;angiogenesi in modo rapido, riproducibile, e quantitativa.

Mouse 3B-11 cellule endoteliali sono state seminate su solidificato fattore di crescita ridotta BME - in questo saggio, il prodotto Matrigel è stato utilizzato - e seguito nel tempo. Come mostrato in Figura 1, fattori angiogenici secreti da entrambi cheratinociti o fibroblasti di topo sono capaci di indurre la formazione del tubo nel tempo. Le cellule endoteliali migrano e cominciano a formare piccoli rami in 1-2 ore di placcatura. Formazione massima è stato raggiunto 4-6 ore utilizzando mezzi condizion...

Il saggio di formazione del tubo è un metodo veloce e quantificabili per misurare l&#39;angiogenesi in vitro. Le cellule endoteliali sono combinati con i media condizionati e piastrate su estratto di membrana basale. Formazione del tubo avviene entro ore e tubuli appena formati facilmente quantificabile.

Endoteliali Tubo cellulare saggio Formazione per la<em&gt; In Vitro</em&gt; Studio di Angiogenesi

Angiogenesis is a vital process for normal tissue development and wound healing, but is also associated with a variety of pathological conditions. Using ...

L'obiettivo generale di questa procedura è determinare i geni o le vie coinvolte nell'angiogenesi attraverso l'utilizzo di un metodo in vitro rapido e quantitativo. Ciò viene ottenuto innanzitutto sottoponendo le cellule endoteliali primarie o immortalizzate a digiuno sierico il giorno precedente il saggio. Il secondo passaggio consiste nell'incubare le cellule endoteliali con calcine per 30 minuti, seguito da un lavaggio delle cellule con PBS.Successivamente, le cellule endoteliali vengono trattate con tripsina, filtrate per rimuovere gli aggregati e contate. L'ultimo passaggio consiste nell'unire le cellule endoteliali a un mezzo condizionato contenente possibili fattori angiogenici e distribuirle sopra un estratto di membrana basale solidificato. Infine, si utilizza microscopia ottica o fluorescente per visualizzare le reti tubulari, che possono quindi essere quantificate mediante programmi informatici specifici.Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ad altri metodi per il saggio dell'angiogenesi è che è semplice da allestire, relativamente economica, produce tubuli entro poche ore ed è quantificabile, dimostrando tale tecnica. È Erica Bullwinkle, una studentessa lau

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Questo video dimostra il protocollo di un test in vitro angiogenesi che ricapitola diverse fasi di angiogenesi. Time-lapse immagini di germinazione, formazione lumen, ramificazione e anastomosi - caratteristiche fondamentali di angiogenesi - sono mostrati.

Ottimizzato fibrina Gel Bead Assay per lo studio della angiogenesi

Un test formazione del tubo viene usato per valutare l'attività vascolare delle cellule tumorali.

Un Matrigel-Based Formazione Assay tubo per valutare l&#39;attività vascolare delle cellule tumorali

La retina murina neonatale fornisce un modello fisiologico ben caratterizzato dell'angiogenesi, che permette indagini sui ruoli dei geni o farmaci diversi che modulano l'angiogenesi in...

Tutta Monte immunofluorescenza del mouse Retina neonatale per Indagare Angiogenesi<em&gt; In vivo</em

Questo manoscritto descrive un saggio di formazione di tubi per quantificare gli effetti di un dato composto o condizione sull'angiogenesi utilizzando la formazione di tubi di cellule endoteliali in un ambiente controllato.

Strategico cellule endoteliali tubo saggio Formazione: Confronto tra matrice extracellulare e fattore di crescita ridotto matrice extracellulare

Vi presentiamo un protocollo per studiare le interazioni umane endoteliali-periciti in mouse utilizzando una variazione del saggio spina angiogenesi gel matrice.

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Qui, valutiamo gli effetti dell'estratto d'acqua dei tombolens di Ruta sulla formazione della rete navale utilizzando un saggio di formazione del tubo su una matrice sotterranea gelata.

HuVEC Analisi della formazione di tubi per valutare l'impatto dei prodotti naturali sull'angiogenesi

Lo scopo di questo metodo è quello di ottenere matrici 3D derivate dal fibroblasto come scaffold naturale per i successivi saggi cellulari. I fibroblasti vengono semiizzati in una piastra di coltura pretrattata e stimolati con acido ascorbico per la generazione di matrici. Le matrici vengono decellularizzate e bloccate alle cellule rilevanti di coltura (ad esempio, cellule endoteliali).

Sistema a matrice 3D derivato da fibroblasti applicabile al saggio di formazione di tubi endoteliali

Presentato qui è un protocollo per l'analisi dell'ibridazione dell'RNA in situ intera nel test di zebra fish e tube formation nelle cellule endoteliali derivate dalle cellule staminali derivate dal paziente per studiare il ruolo dell'endoglin nella formazione vascolare.

Ibridazione dell'intero Monte In Situ negli embrioni di pesce zebra e nella formazione dei tubi, analisi dei prodotti iPSC-EC per studiare il ruolo dell'endoglin nello sviluppo vascolare

Questo test utilizza cellule staminali embrionali di topo differenziate in corpi embrioidi coltivati in gel di collagene 3D per analizzare i processi biologici che controllano l'angiogenesi germinativa in vitro. La tecnica può essere applicata per testare farmaci, modellare malattie e per studiare geni specifici nel contesto di delezioni embrionalmente letali.

In vitro Saggio tridimensionale di germinazione dell'angiogenesi utilizzando cellule staminali embrionali di topo per la modellazione di malattie vascolari e test farmacologici

Il presente protocollo consente il recupero di strutture tubolari formate nel classico saggio di angiogenesi in vitro di formazione di tubi in cui le cellule, come le cellule del trofoblasto, si organizzano in strutture capillari su uno strato di matrice di membrana basale extracellulare. Le strutture recuperate vengono utilizzate per l'isolamento di RNA e proteine per varie analisi biochimiche.

Recupero delle cellule del trofoblasto dall'angiogenesi - Saggio di formazione di provette per l'analisi dell'espressione del marcatore di differenziazione

Impara il saggio di formazione tubulare con cellule endoteliali per studiare l'angiogenesi in vitro. Questo metodo rapido e quantificabile permette di visualizzare e analizzare le reti tubolari entro poche ore.

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