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La lignina down-regulation dei Zea mays Via dsRNAi e Klason lignina analisi
La lignina down-regulation dei Zea mays Via dsRNAi e Klason lignina analisi
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JoVE Journal Bioengineering
Lignin Down-regulation of Zea mays via dsRNAi and Klason Lignin Analysis

La lignina down-regulation dei Zea mays Via dsRNAi e Klason lignina analisi

Full Text
13,925 Views
14:43 min
July 23, 2014

DOI: 10.3791/51340-v

Sang-Hyuck Park1, Rebecca Garlock Ong2, Chuansheng Mei3, Mariam Sticklen4

1The School of Plant Sciences,University of Arizona, 2Department of Chemical Engineering and Materials Science, DOE Great Lakes Bioenergy Research Center,Michigan State University, 3The Institute for Sustainable and Renewable Resources,The Institute for Advanced Learning and Research, 4Department of Plant, Soil and Microbial Sciences,Michigan State University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Un doppio filamento di RNA interference (dsRNAi) tecnica viene impiegata per down-regolare il coenzima mais cinnamoil A reduttasi (ZmCCR1) gene a basso contenuto di lignina pianta. La lignina down-regulation dalla parete cellulare viene visualizzato mediante analisi al microscopio e quantificato con il metodo Klason. Cambiamenti di composizione in emicellulosa e cellulosa cristallina vengono analizzati.

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di ridurre la regolazione del contenuto di lignina nel labirinto tramite RNAi per facilitare la produzione di biomassa digeribile per la produzione di bioetanolo e di misurare il contenuto di lignina utilizzando il protocollo di misurazione della lignina Clayson. Ciò si ottiene costruendo prima il labirinto CCR un plasmide RNAi per sottoregolare la biosintesi della lignina gene syn oil COA reduttasi. Successivamente, mais alto due calli embrionali vengono trasformati con il costrutto ZM CCR uno RNAi Utilizzando il bombardamento di particelle e vengono generate linee transgeniche omozigoti.

Successivamente si osservano le modificazioni fenotipiche mediante un saggio istologico e la microscopia elettronica a scansione eseguita sulla prima, seconda e terza generazione del labirinto transgenico. Infine, la lignina insolubile in acido o clasone proveniente dalle linee del labirinto transgenico viene misurata e confrontata con il contenuto di lignina nelle piante del labirinto non transgeniche. Alla fine si ottengono risultati che mostrano una riduzione del 10% della lignina nelle piante di labirinto transgenico CCR rispetto alle piante di tipo selvatico utilizzando il bombardamento di particelle e come determinato dalla misurazione della lignina di Clayson La dimostrazione visiva finale di questo metodo è fondamentale perché alcuni dei passaggi sono difficili da imparare e questi passaggi difficili da imparare includono la preparazione del mais Embry, Cali in condizioni sterili rivestimento di serbatoi su particelle con DNA plasmidico e bombardamento di particelle del Cali, Dr.Hossein Aladin, e Dr.Gli Brew Han e studente universitario.

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Bioingegneria Issue 89 Zea mays Cinnamoil-CoA reduttasi (CCR) dsRNAi misura lignina Klason cella di analisi parete di carboidrati gas-cromatografia (GC)

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