Name: Il corneale MICROPOCKET Assay: Un modello di angiogenesi nel Eye mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-16T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Scopri l'assay della micropocket corneale per studiare l'angiogenesi nel topo. Questo metodo chirurgico permette di quantificare la crescita vascolare in vivo con microscopio a lampada a fessura.

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Ringraziamo Kristin Johnson per il lavoro grafico.

Tutti i protocolli che coinvolgono gli animali sono presentati ed approvati dalla Care and Use Committee Animal Istituzionale presso il Children Hospital di Boston e sono condotte in conformità con le raccomandazioni della Associazione per la valutazione e l&#39;accreditamento del Laboratorio di Animal Care (AAALAC). Assicurarsi di utilizzare la strumentazione sterile e techniqure asettica durante l&#39;esecuzione della procedura. 1 Preparazione di Pellet <ol><li> Pesare 10 mg di sucralfato e 60 mg di hydron con la spatola unbent sterile. Mettere in provette da microcentrifuga separati. </li><li> Posizionare un 1 centimetro quadrato di maglia in un piatto sterile 10 cm. Inverti così maglia poggia sul coperchio superficiale. Mettere da parte. </li><li> Aggiungere 500 ml di etanolo al hydron e vortex per almeno 10 min. </li><li> Aggiungere la quantità appropriata di fattore di crescita (standard: 20 mg per bFGF, 50 mg di VEGF) per il sucralfato e vortice brevemente. Fattore di crescita Conservare in un-80 ° C congelatore ad una concentrazione di 1 mg / ml. Volumi di liquidi aggiunti dovrebbero essere un minimo di 20 microlitri per assicurare il sucralfato è completamente inumidito, ma non dovrebbe superare i 50 ml. Maggiore il volume rende l&#39;evaporazione del liquido nel passaggio successivo difficile. </li><li> Mettere il composto sucralfato nell&#39;evaporatore centrifuga inserita bassa finchè il composto è completamente asciutta, normalmente 30-50 min a seconda del volume di liquido utilizzato. <ol><li> Controllare la miscela per umidità residua con l&#39;estremità rastremata di una spatola sterile. La miscela deve sentirsi &quot;croccante&quot;. </li></ol></li><li> Utilizzare l&#39;estremità rastremata della spatola per rompere la miscela sucralfato all&#39;interno del tubo. </li><li> Aggiungere 10 ml di hydron al sucralfato. <ol><li> A causa della natura viscosa di Hydron, tagliare l&#39;estremità da una punta di pipetta 200 microlitri e quindi disegnare e rilasciare i 10 ml prima di pipettare di nuovo e aggiungere al sucralfato. </li></ol></li><li> Utilizzare rapidamente battibecco piegatoUla per mescolare il hydron e sucralfato e togliere dal tubo. <ol><li> Raccogliere il composto lungo il lato inferiore della punta della spatola piegata e poi ruotare il tubo mentre si disegna la spatola lungo la parete del tubo. La miscela si asciuga rapidamente in modo che questo passo deve essere fatto in modo efficiente. </li></ol></li><li> Stendere il composto su la maglia preparata con pinze per tenerlo in posizione. La miscela deve essere uno strato uniforme e riempire nei fori della mesh. </li><li> Immergere la spatola piegata nella hydron provetta contenente e usarlo cappotto entrambi i lati della maglia. </li><li> Posizionare la maglia rivestito appoggiata sul fianco contro bordo del piatto e permettere l&#39;essiccazione a temperatura ambiente per 30-45 min. </li><li> Mettere le maglie di -20 ° C congelatore o procedere immediatamente alla fase successiva. Tenere maglia all&#39;interno piatto. </li><li> Porre la capsula 35 millimetri all&#39;interno della capsula di Petri grande, coperchio. Utilizzare la coppia di pinze per tirare attentamente le fibre della maglia a parte sopra il piatto da 35 mm. Pellets Stray cun essere raccolti dal piatto più grande alla fine. <ol><li> Controllare pellet per uniformità nel campo di applicazione. Il processo produce circa 250 pellet così la dose standard per pastiglia per bFGF e VEGF è di 80 ng e 200 ng rispettivamente. </li></ol></li><li> Conservare pellets in piastra da 35 mm a -20 ° C freezer per un massimo di 3 mesi. </li></ol> 2. impianto chirurgico di Pellet <ol><li> Impostare una zona chirurgica sotto microscopio operatorio. </li><li> Anestetizzare il mouse con avertin (400-500 mg / kg, intraperitoneale) e posizionare il mouse sotto il microscopio in modo occhio è visibile. Eseguire pizzico punta a garantire sufficiente livello di anestesia. </li><li> Anestetizzare l&#39;occhio del mouse mettendo 1 goccia di soluzione proparacaina cima bulbo oculare. Attendere 20-30 secondi e tamponare con un tampone di garza. </li><li> Proptose l&#39;occhio mouse con il # 1 offuscato gioiellerie pinza essendo certo di lasciare la pelle tra le pinze e gli occhi. E &#39;importante per giudicare la pressione applicata correttamente.60; Tenendo l&#39;occhio troppo saldamente farà a diventare rossa e irritata, mentre anche perdere una presa permetterà all&#39;occhio di muoversi durante la chirurgia. </li><li> Utilizzare la 30 ° microknife a fare un&#39;incisione nella cornea ca. 1 mm dal limbus. L&#39;incisione deve essere di 1-2 mm di lunghezza. Incisione dovrebbe essere profondo abbastanza per penetrare oltre lo strato epiteliale in midstroma ma non così profondo alla rottura l&#39;occhio. </li><li> Utilizzare il coltello von Graef per fare una tasca perpendicolare alla incisione. <ol><li> Far scorrere il coltello sotto lo strato corneo al sito di incisione e lavorare delicatamente coltello e spostarlo lungo l&#39;incisione per allargare lo spazio, formando così la tasca. Aiuta a spostare il mouse così da poter lavorare con la curvatura dell&#39;occhio. Fare attenzione a non spingere verso il basso con la punta per evitare la rottura all&#39;occhio. </li></ol></li><li> Bagnare pinza del # 5 del gioielliere con proparacaina e prendere una pallina da fuori di piatto. Mettere una pallina sull&#39;occhio. </li&gt; <li> Inumidire il coltello von Graef con proparacaina e trasferire alcuni di liquido sul pellet per renderla gommosa e flessibile. Rimuovere l&#39;umidità in eccesso con un tampone di garza o un batuffolo di cotone. </li><li> Inserire il pellet nella tasca con il coltello von Graef a spingere dentro sotto lo strato di cornea. Una volta che tutto il pellet è all&#39;interno, eseguire la parte piatta di von Graef coltello sul sito per controllare che il pellet è sicuro. </li><li> Cappotto l&#39;occhio con tripla pomata antibiotica. </li><li> Capovolgere il mouse e ripetere chirurgia nell&#39;occhio opposto. </li></ol> 3 Quantificazione di neovascolarizzazione corneale. Lasciare gli animali a sviluppare le navi per un periodo di tempo. Il giorno di vascello classificazione dipende dal fattore di crescita utilizzato. BFGF Grade il giorno 5 e il VEGF più debole il giorno 6 Il giorno di impianto è il giorno 0. <ol><li> Anestetizzare il mouse con avertin (400-500 mg / kg, intraperitoneale). </li><li> Usate il microscopio lampada a fessura per grading. Un oculare ha un reticolo, linee all&#39;interno dell&#39;oculare usato come un aiuto di misura per quantificare la lunghezza nave e distanza intorno circonferenza dell&#39;occhio che le navi hanno germogliato. <ol><li> Tenere il mouse davanti a portata, posizionare il mouse in modo occhio è visto in oculare con pellet direttamente avanti. Stabilizzare la testa tra il pollice e l&#39;indice così la pelle è stretta sul viso e degli occhi è leggermente proptosed. </li></ol></li><li> Inserire l&#39;asse y del reticolo lungo il vaso limbare direttamente sotto pellet. Misurare la lunghezza delle navi ramificazione verso l&#39;alto verso pellet. Annotare questa misura in decimi di millimetro e designa lunghezza della nave (VL) (Figura 1A). </li><li> Girare il mouse o il reticolo in modo che la distanza intorno all&#39;occhio che queste navi hanno germogliato diventa chiaro. E &#39;più facile pensare l&#39;occhio come un orologio con intervalli di 1 a 12 Designa quest&#39;ora numero orologio (CH) (Figura 1B). Può essere un numero intero o frazioni di 0,25 (ad esempio, 2, 2.25, 2.5 o 2.75). Nota: CH è soggettiva. Ad esempio, alcuni possono misurare la distanza intorno all&#39;occhio per includere tutte le navi germogliati dal limbus, mentre altri possono smettere di misurare nel punto in cui la lunghezza della nave è la metà massimale. Il fattore importante è essere coerenti con il modo si sceglie di grado. </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1.jpg" /> Figura 1 Quantificazione della neovascolarizzazione corneale. (A) 80 ng bFGF pellet impiantato nel topo C57BL / 6J mostrando lampada a fessura reticolo orientato a misurare la lunghezza della nave. VL = 0,9 mm. (B) stesso occhio mostrando lampada a fessura reticolo ruotato per misurare ora d&#39;orologio. CH = 3.25. Zona della nave calcolata = 1.84 mm 2. Queste immagini sono state digitalmente migliorato per consentire l&#39;aggiunta di schema reticolo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita.</a> <ol start="5"><li> Calcolare l&#39;area vaso (VA) utilizzando la seguente formula, che si basa sulla superficie di un ovale (nota, è utile tenere questo in mente quando classificazione.) VA espresso in millimetri quadrati. La formula è la seguente: Lunghezza Vessel x Orologio ora x 0,2 π = area Vessel </li></ol>

<ol><li>Gospodarowicz, D., Moran, J., Braun, D., Birdwell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+growth+of+bovine+vascular+endothelial+cells%3A+fibroblast+growth+factor+as+a+survival+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Clonal growth of bovine vascular endothelial cells: fibroblast growth factor as a survival agent.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 73, 4120-4124 (1976).</li>
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<li>Chang, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dose-dependent+response+of+FGF-2+for+lymphangiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dose-dependent response of FGF-2 for lymphangiogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (32), 11658-11663 (2004).</li>
<li>Udagawa, T., Birsner, A. E., Wood, M., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+suppression+of+angiogenesis+following+radiation+exposure+is+independent+of+hematopoietic+reconstitution%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Chronic suppression of angiogenesis following radiation exposure is independent of hematopoietic reconstitution.</a> Cancer Res. 67 (5), 2040-2045 (2007).</li>
<li>Turner, P. V., Albassam, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+rats+to+corneal+lesions+after+injectable+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Comp%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of rats to corneal lesions after injectable anesthesia.</a> Med Comp. 55 (2), 175-182 (2005).</li>
<li>Calderone, L., Grimes, P., Shalev, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+reversible+cataract+induced+by+xylazine+and+by+ketamine-xylazine+anesthesia+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Acute reversible cataract induced by xylazine and by ketamine-xylazine anesthesia in rats and mice.</a> Exp. Eye Res. 42, 331-337 (1986).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ci sono diversi passaggi critici in esecuzione di un test corneale successo. Il primo è fare pellet uniformi in grado di essere impiantati e stimolando i vasi. Le parti più importanti di preparazione pellet sono 1) con fattore di crescita senza vettore; 2) garantire una buona miscela di fattore di crescita con il sucralfato e hydron e 3) spostando la miscela finale rapidamente ma con cura dal tubo eppendorf alla maglia in cui sono espressi i pellet. Si consiglia di pellet &quot;virtuali&quot; essere fatte senza fattore ...

Il processo di angiogenesi, la formazione di nuovi vasi sanguigni formano quelle preesistenti, è molto complesso ed è regolato da diversi fattori endogeni che controllano le diverse fasi di germinazione nave e morfogenesi. L&#39;angiogenesi è attivato a causa di un cambiamento di equilibrio tra fattori pro e anti-angiogenici, un equilibrio che mantiene normalmente la vascolarizzazione in stato di quiescenza. Angiogenesi negli adulti si verifica in determinate condizioni fisiologiche, come durante il ciclo ovarico femminile o nei processi di riparazione come la guarigione delle ferite e la rigenerazione dei tessuti. Tuttavia, è anche una caratteristica di molte patologie tra cui tumori, malattie autoimmuni e malattie infiammatorie. Il coinvolgimento di angiogenesi in queste condizioni fisiologiche e patologiche rende un tema importante per la ricerca e un bersaglio attraente per la terapia. A causa della complessità di angiogenesi e il coinvolgimento di vari ceLLS e fattori nel processo, comprese le cellule endoteliali, periciti, cellule circolanti e cellule stromali, in vitro modelli restano limitate e non possono ricapitolare il microambiente unico in vivo. Il principale test in vitro di angiogenesi sono in gran parte concentrati sull&#39;osservazione effetti diretti sulle cellule endoteliali e misurare alcuni passi nel processo angiogenetico in condizioni controllate. Questi test includono la quantificazione della proliferazione delle cellule endoteliali 1, 2 migrazione, formazione rete 3, la formazione del tubo 4 e germinazione da sferoidi 5. Ex vivo i modelli, a differenza di quelli in vitro, sono più complessi e integrare più tipi di cellule dei tessuti, un esempio è il test dell&#39;anello aortico 6. Tuttavia, come altri sistemi, non può catturare il contributo delle cellule circolanti e lo stroma naturale delle cellule endoteliali come esiste in vivo. Tentatividi studiare l&#39;angiogenesi in condizioni di flusso per imitare l&#39;impostazione in vivo vengono eseguite con sistemi microfluidici 7, tuttavia anche questi test, anche se molto migliorata, sono ancora in grado di spiegare tutti i comparti esistenti in vivo. A causa delle limitazioni del ex vivo in modelli angiogenesi in vitro e in vivo modelli rimangono le scelte più affidabili per Studi angiogenesi. Esempi di questi modelli includono l&#39;impianto di camere trasparenti, &quot;finestre&quot;, che consentono la visualizzazione di crescita dei vasi sanguigni sotto il microscopio 8, impianti sottocutanei iniettabili come matrigel e vaso formazione nei tessuti normali come mouse orecchio e la membrana corioallantoidea pollo (CAM ). Tuttavia, uno dei modelli di angiogenesi più accettabili e quantitativi in vivo è il test MICROPOCKET neovascolarizzazione corneale qui descritta, che sfrutta la natura avascolarecornea come &quot;schermo&quot; per visualizzare e valutare la nuova crescita angiogenico 9. Qui si descrive il test MICROPOCKET corneale come sviluppato nei topi. Inizialmente il modello è stato utilizzato per misurare non specifici stimoli angiogenici in cornee di coniglio. Ciò è stato fatto introducendo pezzi tumorali nell&#39;umore acqueo della camera anteriore dell&#39;occhio di coniglio e misurato neoplastica neovascolarizzazione 11. Tuttavia, il test è stato successivamente evoluto per studiare gli effetti di specifici fattori di crescita 10 per specificare e standardizzare l&#39;effetto angiogenico meglio. Al fine di rilasciare il fattore di crescita nell&#39;occhio, pellet lento rilascio contenenti quantità note di fattori di crescita angiogenici sono stati usati al posto dei tessuti. La disponibilità di proteine ​​purificate ricombinanti angiogenici come il bFGF e VEGF attivato il loro uso come obiettivi specifici di modulaters angiogenesi 12. Inizialmente, il test è statoin gran parte utilizzato nei conigli, che sono più facili da lavorare con causa delle loro dimensioni, ma in seguito il modello è stato tradotto in topi; un modello animale più piccolo e meno costoso. Il passaggio da coniglio topi fornito un importante vantaggio di poter utilizzare animali geneticamente manipolati, creando così una nuova area di ricerca sulle componenti genetiche che influenzano l&#39;angiogenesi 13. Oltre all&#39;utilizzo più accettabile di dosaggio cornea nello studio angiogenesi, altri processi biologici possono anche indagati mediante saggi modificati. Ad esempio, gli studi di linfoangiogenesi sono stati resi possibili attraverso l&#39;impianto di pellet a basso dosaggio bFGF che hanno permesso la visualizzazione dei vasi linfatici attraverso marcatori molecolari specifici 14. Inoltre, questo test ha fornito un mezzo per valutare gli effetti delle radiazioni sulla angiogenesi 15. In somma, la corneale test MICROPOCKET angiogenesi è una quantitativa, rappresentanteroducible, la valutazione flessibile di angiogenesi in vivo. Uno dei principali vantaggi di questo test è che la misurazione delle navi di fondo è inutile perché i vasi crescono su un tessuto avascolare naturalmente. Descriviamo qui il protocollo di questo saggio nei dettagli e discutere diversi scenari che possono verificarsi. Il test consiste di 3 segmenti discreti. Qui descriveremo la preparazione di crescita pellet fattore-inclusive, il successivo impianto chirurgico e, infine, il metodo utilizzato per quantificare la crescita neovascolare risultante.

<table><tbody><tr><td>Sezione 1: Preparazione</td><td></td><td></td><td></td>del pellet</tr><tr><td>Sucralfato</td><td>Sigma</td><td>#S0652</td><td></td></tr><tr><td>Hydron (alias Poly(2-Hema))</td><td>Sigma</td><td>#P3932-10G</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Pharmco Products Inc</td><td>#111000200CSGL</td><td></td></tr><tr><td>Fattori di crescita:</td><td></td><td></td> <td>Deve essere privo di vettore (nessuna albumina sierica bovina (BSA))</td></tr><tr><td>&nbsp; Fattore di crescita dei fibroblasti (FGF)</td><td>PeproTech</td><td>#AF-100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Fattore di crescita dell'endotelio vascolare (VEGF)</td><td>R D Systems</td><td>#293-VE-050/CF</td><td></td></tr><tr><td>Piatto da 35 mm</td><td>Becton-Dickson</td><td>#353001</td><td>Utilizzato per lo stoccaggio di pellet Piastra di</td></tr><tr><td>Petri da 10 cm</td><td>VWR</td><td>#25384-342</td><td>Utilizzato come superficie di lavoro per la preparazione di pellet</td></tr><tr><td>Mesh</td><td>Sefar America</td><td>#03--300/51</td><td>300 um di nylon nitex, tagliato in pezzi quadrati di cm e sterilizzato in spatole in autoclave</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>#21-401-10</td><td>Utilizzare l'estremità affusolata di uno per rompere la miscela di pellet. Piegare l'estremità affusolata dell'altro per aiutare a rimuovere la miscela dalla provetta della microcentrifuga.</td></tr><tr><td>Provette per microcentrifuga</td><td>Fisher Scientific</td><td>#05-408-146</td><td>Uno per l'idrone, uno per il sucralfato</td></tr><tr><td>Pinze per gioiellieri, #5</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2315E</td><td>Necessità di 2 per separare la rete</td></tr><tr><td>Evaporatore centrifugo</td><td>ThermoSavant</td><td>DNA110 SpeedVac</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sezione 2: Impianto chirurgico di pellet</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio operatorio</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,5% Avertin</td><td></td><td></td><td>Anestetico generale</td></tr><tr><td>Proparacaina cloridrato soluzione oftalmica 0,5%</td><td>Falcon</td><td>NDC# 6131401601</td><td>Eye</td></tr><tr><td>Anestetico Triplo antibiotico Unguento oftalmico</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC#</td><td>2420878055 Contiene neomicina, polimixina e bacitracina</td></tr><tr><td>Microcoltello oftalmico, 5 mm</td><td>Surgistar</td><td>#924501</td> Coltello von Graef <td>con angolo di 30 gradi</td></tr><tr><td></td><td>Ambler Surgical</td><td>#3401E</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per gioiellieri, #1</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2301E</td><td>Deve essere smussato con pietra per affilare per puntellare le</td></tr><tr><td>pinze per gioiellieri dell'occhio, #5</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2305E</td><td>Per raccogliere i pallini e metterli sull'occhio</td></tr><tr><td>Piccole forbici curve</td><td>Ambler Surgical</td><td>#5636E</td><td>Per tagliare i baffi</td></tr><tr><td>Garza</td><td></td><td></td><td>Per tamponare l'occhio dopo la proparacaina</td></tr><tr><td>Sezione 3: Classificazione della neovascolarizzazione</td><td></td><td></td><td></td>corneale</tr><tr><td>2,5% Avertin</td><td></td><td></td><td>Anestetico generale</td></tr><tr><td>Lampada a fessura</td><td>Nikon</td><td>FS-2</td><td>Necessita di un oculare con reticolo per facilitare la misurazione</td></tr></tbody></table>

il corneale micropocket assay: un modello di angiogenesi nel eye mouse

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

Il mouse corneale MICROPOCKET test è un test robusto e quantitativa in vivo per valutare l&#39;angiogenesi. Utilizzando pellet a lento rilascio standardizzate, contenenti fattori di crescita specifici che innescano la crescita dei vasi sanguigni in tutta la cornea naturalmente avascolare, angiogenesi può essere misurato e quantificato. In questo test la risposta angiogenica è generato nel corso di diversi giorni, a seconda del tipo e della dose di fattore di crescita utilizzato. L&#39;induzione di neovascolarizzazione è comunemente attivata tramite fattore fondamentale di crescita dei fibroblasti (bFGF) o fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF). Combinando questi fattori di crescita con sucralfato e hydron (poly-HEMA (poli (metacrilato di 2-idrossietil))) e colare il composto in pellet, possono essere impiantati chirurgicamente nell&#39;occhio topo. Questi pellet uniformi lentamente rilasciano i fattori di crescita nell&#39;arco di cinque o sei giorni (bFGF o VEGF, rispettivamente) consentendo risposta angiogenica sufficiente richiesta per zona nave quantification utilizzando una lampada a fessura. Questo test può essere utilizzato per diverse applicazioni, tra cui la valutazione dei farmaci modulatori angiogenici o trattamenti così come il confronto tra diversi background genetici che influenzano l&#39;angiogenesi. Un investigatore esperto dopo aver praticato questo test può impiantare una pallina in meno di 5 minuti per occhio.

Risultati tipici per bFGF e VEGF pellet nelle normali basse angiogenici C57BL / 6J sono mostrati in Figura 2A e B, rispettivamente. Figura 2E mostra la distribuzione normale di zona della nave (VA) nel C57BL / ceppo 6J con diverse dosi di questi crescita fattori. 80 ng pellet bFGF normalmente producono un VA di circa 2,0 mm 2, se i valori in un intervallo di 1,8-2,4 mm 2 sono accettabili. 200 ng pellet VEGF in genere causano una risposta di circa 0...

Il protocollo descrive il dosaggio micropocket corneale come sviluppato nei topi.

Il corneale MICROPOCKET Assay: Un modello di angiogenesi nel Eye mouse

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

L'obiettivo generale di questa procedura è stimolare la crescita dei vasi sanguigni nella cornea del topo. Questo risultato si ottiene innanzitutto preparando pellet contenenti fattore di crescita. Il secondo passaggio consiste nell'eseguire l'impianto chirurgico di un pellet nella cornea.I topi vengono quindi lasciati per cinque o sei giorni, a seconda del fattore di crescita, per consentire lo sviluppo dei vasi. L'ultimo passaggio consiste nella quantificazione dell'area vascolare, utilizzando un microscopio a fessura per misurare la lunghezza media dei vasi e la distanza lungo la circonferenza dell'occhio percorsa dai vasi. In definitiva, il saggio del microscasso corneale è utilizzato come metodo riproducibile e affidabile per lo studio dell'angiogenesi in vivo.Generalmente, le persone nuove rispetto a questo metodo incontreranno difficoltà a causa della natura tecnicamente delicata della procedura. I ricercatori dovrebbero prevedere un'ampia pratica preliminare prima delle prove sperimentali, al fine di garantire coerenza sia nelle tecniche chirurgiche sia in quelle di valutazione. Iniziare la preparazione del pellet pesando 10 milligrammi di suc fate e 60 milligrammi di hydro

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La cornea è unico in quanto manca di tessuti vascolari. Tuttavia, una robusta crescita dei vasi sanguigni e la sopravvivenza può essere indotta nella cornea da potenti fattori angiogenici. Pertanto, la cornea in grado di fornire con noi uno strumento prezioso per gli studi angiogenico. Questo protocollo illustra come eseguire il modello murino di test cornea tasca e come valutare l'angiogenesi indotta da fattori angiogenici utilizzando questo modello.

Un modello murino del saggio Cornea Pocket Study Angiogenesi

Normale adulto tessuto vascolarizzato mammiferi che manca l'angiogenesi fisiologica e che non è stata esposta a un intervento chirurgico viene utilizzato per studiare: (i) l'avvio e lo sviluppo di angiogenesi in seguito alla somministrazione intraperitoneale di agenti di test, e (ii) la modifica di angiogenesi dopo somministrazione sistemica di selezionati agenti di test.

Rat mesentere angiogenesi Assay

Questo video dimostra lo sviluppo di un modello ex vivo di germinazione coroideale per studiare l'angiogenesi microvascolare oculare. Il test prevede la coltura di espianti di occhio di topo contenenti il tessuto coroideo attaccato alla sclera e all'epitelio pigmentato retinico in condizioni specifiche che promuovono la germinazione microvascolare coroideale.

Saggio di germinazione delle coroidi per studiare la proliferazione microvascolare oculare ex vivo

La retina murina neonatale fornisce un modello fisiologico ben caratterizzato dell'angiogenesi, che permette indagini sui ruoli dei geni o farmaci diversi che modulano l'angiogenesi in...

Tutta Monte immunofluorescenza del mouse Retina neonatale per Indagare Angiogenesi<em&gt; In vivo</em

Neovascolarizzazione (NV) della cornea può complicare molteplici patologie visive. Utilizzando un modello di lesione alcali-un'ustione controllata, un livello quantificabile di NV corneale può essere prodotta per lo studio meccanicistico di NV corneale e valutazione di potenziali terapie per i disordini neovascolare.

Un Injury Modello alcali-burn di neovascolarizzazione corneale nel mouse

Qui, presentiamo il protocollo di neovascolarizzazione coroideale indotta da laser (CNV) di topo, un modello sperimentale che ricrea i segni distintivi vascolari della degenerazione maculare neovascolare legata all'età (AMD). Una volta padroneggiato, può indurre in modo affidabile ed efficace la CNV come sistema modello per testare varie misure sperimentali.

Un modello di topo per Laser-indotta della coroide neovascolarizzazione

Qui, presentiamo l'utilità di longitudinale in vivo imaging nel follow-up dei cambiamenti morfologici del neovascularization coroidico laser-indotta in topi.

In Vivo Imaging multimodale e l'analisi di Mouse indotta da Laser modello di Neovascularization coroidico

Qui, presentiamo un protocollo per staccare le cellule endoteliali corneali (CEC) dalla membrana di Descemet (DM) utilizzando un laser neodymium:YAG (Nd:YAG) come modello di malattia ex vivo per la cherata toropatia (BK).

Sviluppo di un modello sperimentale non invasivo e assistito dal laser della perdita di cellule endoteliali corneale

Questo protocollo presenta il saggio di germinazione coroide, un modello ex vivo di proliferazione microvascolare. Questo saggio può essere utilizzato per valutare le vie coinvolte nei micro vasi cororoidali proliferano e valutare i trattamenti farmacologici utilizzando tipi selvatici e tessuti di topo geneticamente modificati.

Un test di germinazione coroide ex vivo di angiogenesi microvascolare oculare

Questo protocollo si concentra sulla neovascolarizzazione corneale indotta da ustioni alcaline nei topi. Il metodo genera un modello di malattia corneale riproducibile e controllabile per studiare l'angiogenesi patologica e i meccanismi molecolari associati e per testare nuovi agenti farmacologici per prevenire la neovascolarizzazione corneale.

Un modello murino per la neovascolarizzazione corneale mediante ustione alcalina

Questo studio presenta il saggio bidimensionale (2D) di migrazione della ferita da graffio e il saggio tridimensionale (3D) di germinazione degli sferoidi, insieme ai rispettivi metodi di analisi a valle, tra cui l'estrazione dell'RNA e l'immunocitochimica, come saggi adatti per studiare l'angiogenesi in vitro.

Indagine sull'angiogenesi a livello funzionale e molecolare sfruttando il saggio di migrazione della ferita da graffio e il saggio di germinazione sferoidale

Scopri l'assay della micropocket corneale per studiare l'angiogenesi nel topo. Questo metodo chirurgico permette di quantificare la crescita vascolare in vivo con microscopio a lampada a fessura.

Il corneale MICROPOCKET Assay: Un modello di angiogenesi nel Eye mouse

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