Name: Ricostituzione della β-catenina degradazione nel Xenopus Estrai Egg (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-17T20:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Impara a ricostituire la degradazione della β-catenina usando estratti di uovo di Xenopus. Questo metodo biochimico senza cellule permette di analizzare la regolazione delle proteine e identificare modulatori molecolari.

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Ringraziamo Laurie Lee per la lettura critica del manoscritto. TWC è supportato da un American Heart Association Predoctoral Fellowship (12PRE6590007). MRB è sostenuto da una borsa di formazione del National Cancer Institute (T32 CA119925). SSH è supportato dal National Institutes of Health (R01DK078640). EL è supportato dal National Institutes of Health (R01GM081635 e R01GM103926).

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<li>Lohka, M. J., Masui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+in+vitro+of+sperm+pronuclei+and+mitotic+chromosomes+induced+by+amphibian+ooplasmic+components%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Formation in vitro of sperm pronuclei and mitotic chromosomes induced by amphibian ooplasmic components.</a> Science. 220, 719-721 (1983).</li>
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<li>Thorne, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biochemical+screen+for+identification+of+small-molecule+regulators+of+the+Wnt+pathway+using+Xenopus+egg+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">A biochemical screen for identification of small-molecule regulators of the Wnt pathway using Xenopus egg extracts.</a> Journal of Biomolecular Screening. 16, 995-1006 (2011).</li>
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<li>Seeling, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+beta-catenin+signaling+by+the+B56+subunit+of+protein+phosphatase+2A%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Regulation of beta-catenin signaling by the B56 subunit of protein phosphatase 2A.</a> Science. 283, 2089-2091 (1999).</li>
<li>Guger, K. A., Gumbiner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+has+Wnt-like+activity+and+mimics+the+Nieuwkoop+signaling+center+in+Xenopus+dorsal-ventral+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin has Wnt-like activity and mimics the Nieuwkoop signaling center in Xenopus dorsal-ventral patterning.</a> Dev Biol. 172, 115-125 (1995).</li>
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<li>Rubinfeld, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+GSK3%CE%B2+to+the+APC-%CE%B2-Catenin+Complex+and+Regulation+of+Complex+Assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Binding of GSK3β to the APC-β-Catenin Complex and Regulation of Complex Assembly.</a> Science. 272, 1023-1026 (1996).</li>
<li>Salic, A., King, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+small+molecule+inhibitors+of+the+ubiquitin-proteasome+pathway+in+Xenopus+egg+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Identifying small molecule inhibitors of the ubiquitin-proteasome pathway in Xenopus egg extracts.</a> Methods in Enzymology. 399, 567-585 (2005).</li>
<li>Trinkle-Mulcahy, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+specific+protein+interaction+partners+using+quantitative+mass+spectrometry+and+bead+proteomes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Identifying specific protein interaction partners using quantitative mass spectrometry and bead proteomes.</a> J Cell Biol. 183, 223-239 (2008).</li>
<li>Tan, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signalling+pathway+parameters+for+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Wnt signalling pathway parameters for mammalian cells.</a> PLoS One. 7, (2012).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

Estratto uovo di Xenopus è un sistema biochimico robusto per indagare fatturato β-catenina. La concentrazione di β-catenina in estratto uovo di Xenopus è ~ 25 Nm 2. In condizioni ottimali, l&#39;estratto uovo è in grado di degradare β-catenina ad una velocità di 50-100 nM / hr e metà-massimale a 200 nM 24. Ci sono diversi passaggi critici per il successo ricostituzione del degrado β-catenina con estratto di uova di Xenopus. Questi includono 1) generare Xenopus es...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/51425">Reconstitution Of &#946;-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract</a>. At the time of publication there were some instances where an incorrect volume notation was used. These instances were corrected from:
2.1.2. Add extract to 1/10 the volume of pelleted antibody or affinity beads (e.g., 20 ml pelleted beads to 200 ml extract). In order to minimize dilution of the extract, withdraw as much liquid from the beads as possible before addition of the extract using gel loading tips with long, tapered tips.
2.2.5. Aliquot the appropriate volumes for degradation assay into pre-chilled microfuge tubes on ice. For radiolabeled &#946;-catenin degradation assays, withdraw 2-5 ml extract for each time point.
3.2.3. At the designated time point, remove 1-5 ml of the sample and mix immediately with SDS sample buffer (5x volume) to stop the reaction. To make sure the degradation reaction is completely terminated, flick tube several times and vortex vigorously.
3.2.4. Perform SDS-PAGE/autoradiography. Run 1 ml equivalents (~50 mg of protein) of the extract for each time point/lane. Degradation of &#946;-catenin in Xenopus egg extract should be evidenced by the time-dependent decrease in intensity of the radiolabeled &#946;-catenin band Figure 2. Quantify results using ImageJ, ImageQuant, or other preferred imaging software if necessary.
4.2.2. Add in vitro-translated &#946;-catenin-luciferase fusion (from 4.1) into prepared Xenopus reaction mix (from 2.2) on ice and mix well as in 3.2.1. NOTE: The activity of the &#946;-catenin luciferase that is added to the extract is typically between 20 - 50,000 relative luminescence units (RLU)/ml of extract (based on measurements obtained from 4.1.2). Starting signal should be approximately 100,000 RLU (2-5 ml of the in vitro-translated &#946;-catenin-luciferase fusion).
to:
2.1.2. Add extract to 1/10 the volume of pelleted antibody or affinity beads (e.g., 20 &#181;l pelleted beads to 200 &#181;l extract). In order to minimize dilution of the extract, withdraw as much liquid from the beads as possible before addition of the extract using gel loading tips with long, tapered tips.
2.2.5. Aliquot the appropriate volumes for degradation assay into pre-chilled microfuge tubes on ice. For radiolabeled &#946;-catenin degradation assays, withdraw 2-5 &#181;l extract for each time point.
3.2.3. At the designated time point, remove 1-5 &#181;l of the sample and mix immediately with SDS sample buffer (5x volume) to stop the reaction. To make sure the degradation reaction is completely terminated, flick tube several times and vortex vigorously.
3.2.4. Perform SDS-PAGE/autoradiography. Run 1 &#181;l equivalents (~50 mg of protein) of the extract for each time point/lane. Degradation of &#946;-catenin in Xenopus egg extract should be evidenced by the time-dependent decrease in intensity of the radiolabeled &#946;-catenin band Figure 2. Quantify results using ImageJ, ImageQuant, or other preferred imaging software if necessary.
4.2.2. Add in vitro-translated &#946;-catenin-luciferase fusion (from 4.1) into prepared Xenopus reaction mix (from 2.2) on ice and mix well as in 3.2.1. NOTE: The activity of the &#946;-catenin luciferase that is added to the extract is typically between 20 - 50,000 relative luminescence units (RLU)/&#181;l of extract (based on measurements obtained from 4.1.2). Starting signal should be approximately 100,000 RLU (2-5 &#181;l of the in vitro-translated &#946;-catenin-luciferase fusion).

Erratum: Reconstitution Of &#946;-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

Estratto uovo Xenopus laevis è stato ampiamente utilizzato per studiare molti cellulari processi biologici, tra cui la dinamica del citoscheletro, l&#39;assemblaggio e l&#39;importazione nucleare, l&#39;apoptosi, il metabolismo ubiquitina, progressione del ciclo cellulare, trasduzione del segnale, e proteine ​​fatturato 1-17. Il sistema estratto uovo Xenopus è riconducibile alla analisi biochimica di una legione di processi cellulari perché estratto uovo rappresenta sostanzialmente citoplasma non diluito che contiene tutti i componenti essenziali citoplasmatici necessari per eseguire questi processi e consentire indagine. Grandi quantità di estratto di uova possono essere preparati in una sola volta per le manipolazioni biochimiche che richiedono grandi quantità di materiale (ad esempio, purificazione di proteine ​​o high-throughput screening) 18-20. Un altro vantaggio è che la concentrazione di proteine ​​specifiche in estratto uovo Xenopus può essere regolata con precisione mediante aggiunta di proteine ​​e / o immunodeplezione di endog ricombinanteproteine ​​enous in contrasto trasfezione di DNA plasmidico in cui l&#39;espressione della proteina di interesse è difficile da controllare. Inoltre, la mancanza di proteine ​​ricombinanti disponibili può essere superato con l&#39;aggiunta di trascritti codificanti la proteina di interesse, sfruttando elevata capacità estratto uovo Xenopus preparata per tradurre mRNA esogenamente aggiunti. La regolazione della degradazione delle proteine ​​è fondamentale per il controllo di molte vie cellulari ed elabora 21. Estratto uovo di Xenopus è stato ampiamente utilizzato per studiare la degradazione delle proteine ​​in quanto il sistema permette diversi modi per monitorare il turnover proteico, senza influenze confondenti di trascrizione e traduzione. La via di segnalazione Wnt è una via di segnalazione altamente conservato che svolge un ruolo critico nello sviluppo e nella malattia. Il fatturato di β-catenina, il principale effettore della via di Wnt, è altamente regolamentato, e un aumento steady-state level di β-catenina è critica per l&#39;attivazione di Wnt geni bersaglio. L&#39;importanza di degradazione β-catenina è evidenziata dal fatto che mutazioni nella via di Wnt che inibiscono la degradazione β-catenina trovare in ~ 90% di tutti i casi sporadici di tumore colorettale 22. β-catenina degradazione di componenti della via di Wnt può essere fedelmente riassunta in estratto uovo Xenopus per studiare il meccanismo del fatturato nonché per identificare nuovi modulatori piccole molecola della sua degradazione 2, 19, 20, 23-29. Metodi per la preparazione di estratto uovo Xenopus per studiare il ciclo cellulare sono stati descritti in precedenti pubblicazioni JoVE 30-32. Il protocollo attuale descrive una modifica di questi metodi ed è ottimizzato per la degradazione di [35 S]-radiomarcato β-catenina e luciferasi-tag β-catenina inEstratto uovo di Xenopus. Il test di degradazione radioattivo permette la visualizzazione diretta dei livelli di proteine ​​tramite autoradiografia. [35 S] metionina è incorporata nella proteina di interesse utilizzando una reazione di traduzione in vitro che possono poi essere aggiunto direttamente ad una reazione di degradazione. Inoltre, la proteina radiomarcato dosaggio fatturato non richiede un anticorpo contro la proteina di interesse o un epitopo, che può influenzare la stabilità della proteina. Poiché anche piccoli cambiamenti nei livelli di proteine, che si riflette in variazioni dell&#39;intensità della banda di proteina radiomarcato, sono facilmente visualizzati mediante autoradiografia, la [35 S]-radiomarcato saggio degradazione rappresenta un metodo molto utile per la visualizzazione di proteine ​​fatturato 2. Fusione di β-catenina a luciferasi di lucciola (di seguito denominato semplicemente &quot;luciferasi&quot;) consente di misure quantitative precise e facili dei livelli di proteine, al fine diper determinare le proprietà cinetiche di β-catenina fatturato 19, 20. Uno dei principali vantaggi del saggio luciferasi è che fornisce un sistema quantitativo forte che è facilmente calcificato. Il protocollo che segue fornisce metodi semplici per saggiare la degradazione β-catenina e un metodo affidabile, efficiente ed efficace per high-throughput screening nuovi modulatori β-catenina.

<table><tbody><tr><td>Gonadotropina sierica cavalla gravida (PMSG)</td><td>ProSpec</td><td>hor-272-A</td><td>Ricostituito con acqua distillata prima dell'uso.</td></tr><tr><td>Gonadotropina corionica umana</td><td>Sigma</td><td>CG10-10VL</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Fisher</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Research Products International</td><td>S23020-5000.0</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio</td><td>Fisher</td><td>BP214-500</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Acros Organics</td><td>AC42352-5000</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher</td><td>BP310-1</td><td></td></tr><tr><td>Cisteina</td><td>Acros Organics</td><td>AC17360-1000</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>Sigma</td><td>L2884-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Aprotinina</td><td>Sigma</td><td>A1153-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin</td><td>Sigma</td><td>P4265-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Citocalasina B</td><td>Sigma</td><td>C8273-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 3 ml: Luer Lock tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>ago da 27 G</td><td>Becton Dickinson 305109</td><td></td><td></td></tr><tr><td>micropiastra in polistirene bianco solido a 96 pozzetti, a fondo tondo</td><td>Corning</td><td>3605</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di dosaggio della luciferasi Steady-Glo</td><td>Promega</td><td>E2520</td><td>Conservare a lungo termine a -80 &deg; C, può essere conservato fino a 1 mese a -20 gradi C</td></tr><tr><td>TNT Sp6 sistema di lisato di reticolociti accoppiato</td><td>Promega</td><td>L4600</td><td></td></tr><tr><td>TNT Sp6 sistema di espressione proteica del germe di grano ad alto rendimento</td><td>Promega</td><td>L3260</td><td>Resa generalmente superiore rispetto al lisato di reticolociti&nbsp;</td></tr><tr><td>Miscela di marcatura proteica EasyTag Express [S35]</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEG772007MC</td><td></td></tr><tr><td>Creatina fosfato</td><td>Sigma</td><td>27920-5G</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>Sigma</td><td>A2383-5G</td><td></td></tr><tr><td>Creatina fosfochinasi</td><td>Sigma</td><td>C3755-35KU</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil solfossido (DMSO)</td><td>Sistema</td> di dosaggio della luciferasi Dual-Glo Sigma <td>D8418-50ML</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Promega</td><td>E2920</td><td>Stesse condizioni di conservazione delle provette da centrifuga Steady-Glo</td></tr><tr><td>50 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>0556214D</td><td></td></tr><tr><td>Rotore ad angolo fisso Sorvall SS-34</td><td>Thermo Scientific</td><td>28020</td><td></td></tr><tr><td>115 V 50/60 Hz Minicentrifuga</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-090-128</td><td></td></tr><tr><td>mMessaggio mMachine Sp6 kit</td><td>Ambion</td><td>AM1340</td><td></td></tr><tr><td>Anti-lucciola luciferasi anticorpo</td><td>Abcam</td><td>ab16466</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-GSK3</td><td>BD Trasduzione Laboratori</td><td>610201</td><td></td></tr><tr><td>FLUOStar Optima</td><td>BMG Labtech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sorvall RC-6 Plus centrifuga</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>16 &deg; C Incubatrice</td><td>Percival Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ricostituzione della β-catenina degradazione nel<em&gt; xenopus</em&gt; estrai egg

Reconstitution Of &#946;-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

Xenopus laevis estratto uovo è un ben caratterizzato, robusto sistema per studiare la biochimica di diversi processi cellulari. Estratto uovo Xenopus è stato usato per studiare il ricambio proteico in molti contesti cellulari, tra cui il ciclo cellulare e trasduzione del segnale percorsi 1-3. Qui, è descritto un metodo per isolare estratto uovo Xenopus che è stato ottimizzato per promuovere la degradazione della componente pathway Wnt critico, β-catenina. Due diversi metodi sono descritti per valutare β-catenina degradazione delle proteine ​​in estratti di uova di Xenopus. Un metodo è visivamente informativo ([35 S] radiomarcato proteine), mentre l&#39;altro è più facilmente scalato per saggi high-throughput (lucciola proteine ​​di fusione luciferasi-tagged). Le tecniche descritte possono essere utilizzate per, ma non sono limitati a, valutare β-catenina turnover proteico e identificare i componenti molecolari che contribuiscono al fatturato. Inoltre, la poslità di purificare grandi volumi di omogenea estratto uovo Xenopus combinata con la lettura quantitativa e facile di proteine ​​luciferasi-tag permette questo sistema di essere facilmente adattato per screening ad alto rendimento per modulatori di degradazione β-catenina.

Uno schema di degradazione β-catenina in estratto uovo Xenopus è mostrato in Figura 2A. 35 S-marcato β-catenina è stata incubata in estratto uovo Xenopus, aliquote (1 ml estratto equivalente) sono stati rimossi al momento opportuno, ed i campioni sono stati sottoposti a SDS-PAGE seguita da autoradiografia. β-catenina degradazione di componenti della via di Wnt è mediata dal sistema ubiquitina-proteasoma 2, e il degrado di [35 S]-radiomarcato β-catenina ...

Un metodo è descritto per l&#39;analisi degradazione delle proteine ​​usando radioattivo e proteine ​​luciferasi-fusione in estratto uovo Xenopus e il suo adattamento per lo screening high-throughput per piccoli modulatori molecola di degradazione delle proteine.

Ricostituzione della β-catenina degradazione nel<em&gt; Xenopus</em&gt; Estrai Egg

Xenopus laevis egg extract is a well-characterized, robust system for studying the biochemistry of diverse cellular processes. Xenopus egg extract has ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è utilizzare il sistema biochimico privo di cellule a base di estratto di uovo di Xenopus per analizzare il turnover della beta-catenina. Questo viene ottenuto innanzitutto aggiungendo e/o esaurendo effettori sospettati nell'estratto di uovo Xip attivato, al fine di identificare modulatori del turnover della beta-catenina; come secondo passaggio, viene aggiunta nell'estratto di uovo XUS una beta-catenina esogena, trascritta e tradotta in vitro, marcata radioattivamente con S 35 o fusionata con luciferasi, che viene degradata attivamente in condizioni native. Successivamente, si raccolgono punti temporali al fine di valutare le variazioni nei livelli proteici della beta-catenina nel tempo.Si ottengono risultati che indicano se una particolare modulazione dell'estratto di uovo di xenopus aumenta o diminuisce i tassi di beta catenina e degradazione, in base all'autoradiografia e/o al rilevamento della luminescenza. Il vantaggio di questa tecnica rispetto ad altri metodi esistenti, come gli esperimenti di tipo pulse-chase o cycl heide chase in cellule in coltura, è che l'estratto di uovo di xenopus fornisce un sistema biochimico acellulare

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Greggio e frazionato estratti di uova di Xenopus può essere utilizzato per fornire ingredienti per la ricostituzione di processi cellulari per l'analisi morfologiche e biochimiche. Lisi uovo e centrifugazione differenziale vengono utilizzati per preparare l'estratto grezzo che a sua volta in utilizzato per preparare estratti frazionato e preparati membrana luce.

Preparazione e frazionamento di Xenopus laevis Egg Estratti

Assemblaggio membrana nucleare è un passo essenziale nel ciclo di divisione cellulare, questo processo può essere replicato in provetta, combinando cromatina spermatica Xenopus, citosol, e le frazioni di membrana di luce. Nuclei completi sono formati, tra cui le membrane nucleari con i complessi pori, e questi nuclei ricostituiti sono in grado di normali processi nucleari.

In Assemblea in vitro Nucleari Utilizzando frazionato Estratti Egg Xenopus

Questo protocollo video illustra un metodo per la generazione di...

Produzione di transgenici Xenopus laevis Integrazione mediata da enzima di restrizione e trapianto nucleare

Xenopus uovo estratto è un sistema modello utile per studiare il punto di controllo danno al DNA. Questo protocollo è per la preparazione di estratti di uova di Xenopus e danno del DNA reagenti inducenti checkpoint. Queste tecniche sono adattabili ad una varietà di approcci di danneggiamento del DNA nello studio del DNA segnalazione checkpoint danni.

Studio del danno al DNA con Checkpoint<em&gt; Xenopus</em&gt; Uovo Estratti

Produzione di<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Uovo Estratti per identificare RNA associata ai microtubuli

Il controllo della sintesi proteica avviene principalmente nella fase di inizio della traduzione, le cui carenze sono legate a diversi disturbi. Per comprendere meglio la loro eziologia, abbiamo descritto qui un protocollo che utilizza ovociti di Xenopus laevis per valutare la traduzione del trascritto di mos in presenza di un mutante del fattore di inizio della traduzione eIF4G1.

Xenopus laevis come un modello per individuare Traduzione Impairment

I meccanismi molecolari della decondensazione della cromatina mitotica altamente compattata sono mal definiti. Presentiamo un test cell-free basato su cluster di cromatina mitotica isolati da cellule HeLa ed estratto di uova di Xenopus laevis che ricostituisce fedelmente il processo di decondensazione in vitro.

Un Free Cell Assay per studiare cromatina decondensazione alla fine del mitosi

I meccanismi di ridimensionamento cellulare e intracellulare rimangono sfuggenti. L'uso di estratti di embrioni di Xenopus è diventato sempre più comune per chiarire i meccanismi di regolazione delle dimensioni degli organelli. Questo metodo descrive la preparazione dell'estratto embrionale e un nuovo saggio di scala nucleare attraverso il quale è possibile identificare i meccanismi di regolazione delle dimensioni nucleari.

Un test cellulare gratuitamente utilizzando<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; Embryo Estrae per studiare i meccanismi del regolamento Size nucleare

Le proteine ​​contengono spesso più domini che possono esercitare diverse funzioni cellulari. Gene knock-out (KO) non considerano questa diversità funzionale. Qui riportiamo un cambio cassette ricombinazione mediata (RMCE) approccio basato lo struttura-funzione in cellule staminali embrionali KO che consente la dissezione molecolare dei vari domini funzionali o varianti di una proteina.

Studi struttura-funzione nel topo cellule staminali embrionali Uso ricombinasi mediata Cassette Scambio

Presentiamo un metodo per la generazione di in vitro autosostenuto mitotica oscillazioni a livello di singola cellula incapsulando gli estratti di uovo di Xenopus laevis in microemulsioni di acqua in olio.

La ricostituzione delle oscillazioni del ciclo cellulare in microemulsioni di uovo senza cellula Xenopus estrae

Descriviamo un metodo per la preparazione e l'imaging dal vivo di estratti citoplasmatici non diluiti da uova di Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparazione dell'estratto di uova e metodi di imaging dal vivo per la visualizzazione dell'organizzazione citoplasmatica dinamica

Impara a ricostituire la degradazione della β-catenina usando estratti di uovo di Xenopus. Questo metodo biochimico senza cellule permette di analizzare la regolazione delle proteine e identificare modulatori molecolari.

Ricostituzione della β-catenina degradazione nel

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