Name: Modellazione di Carcinoma renale metastatico spontanea (MRCC) in topi dopo nefrectomia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Scopri come generare un modello di carcinoma renale metastatico spontaneo in topi mediante impianto ortotopico di cellule tumorali, nefrectomia e valutazione del carico metastatico. Questo protocollo standardizzato consente di studiare la progressione della malattia e testare nuove terapie sperimentali in modo riproducibile.

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Siamo grati al laboratorio del Dr. Robert S. Kerbel (Università di Toronto, Sunnybrook Research Institute, Toronto, Canada) per l&#39;assistenza tecnica e la competenza nello sviluppo di questa procedura. Vorremmo anche ringraziare il Dott. Sandra Sexton e il Roswell Park Cancer Institute Dipartimento di Laboratorio risorse animali. Questo lavoro è stato sostenuto da un premio da Roswell Park Alliance Foundation (a JMLE).

1. Ortotopico Rene Tumore impianto <ol><li> Cell Culture <ol><li> Prima di impianto ortotopico, crescere le cellule del mouse Renca LUC come un monostrato al 75% di confluenza. </li><li> Seguendo tripsinizzazione e risospensione in 5% FBS contenente supporti, centrifugare le cellule a 1.000 rpm, 4 ° C per 5 minuti, ripetendo 3 volte per lavare in PBS. Poi sospendere nuovamente le cellule in mezzi privi di siero ad una concentrazione di 5 x 10 4 Renca LUC / 5 dei media privo di siero microlitri. Nota: A seconda della variante o linea cellulare utilizzata, le cellule possono essere risospese in un rapporto 1:1 di matrigel e mezzi di comunicazione liberi siero di rallentare la crescita delle cellule del mouse altamente aggressivo e la diffusione dopo l&#39;impianto. </li></ol></li><li> Chirurgia e cellule impianto Nota: Tutti gli studi su animali ivi descritte, compresa la manutenzione e la determinazione degli endpoint sperimentali, sono state eseguite secondo un Institutional Animal Care ed uso commissione (IACUC) protocol approvato dal Roswell Park Cancer Institute. <ol><li> Anestetizzare un topo Balb / C con isoflurano (2-3%). Pinch piede e controllare la reflex per garantire anestesia sufficiente. Applicare vet unguento per gli occhi per evitare l&#39;essiccazione. Posizionare il mouse in decubito laterale destro e la barba sinistra tra anteriori e posteriori degli arti. Applicare alcol e iodio lungo dorsale zona lombare per preparare asetticamente zona di incisione. </li><li> Utilizzare forbici chirurgiche di avviare una incisione cutanea 1 cm di una direzione longitudinale fra l&#39;ultima costola e l&#39;anca. Allentare tessuto connettivo sotto la pelle con una dissezione forbice smussa. Utilizzare forbici chirurgiche per fare una incisione 0,5 centimetri in una direzione longitudinale nella parete addominale. Utilizzare pinze curve per spingere delicatamente intorno ferita aperta - questo esteriorizzare il rene e consentire delicata immobilizzazione di organo prima dell&#39;iniezione. </li><li> Caricare la siringa Hamilton con 5 microlitri della miscela di cellule preparato. Per impiantazione sub-capsularitazione, due metodi di impianto possono essere impiegati: <ol><li> Superficiale: Parallelamente al rene, inserto ago orientato longitudinalmente sotto la capsula renale (ma soprattutto il parenchima) con il bordo smussato up. Una volta che l&#39;ago è a posto, iniettare tutte le cellule fino a piccole forme bolle bianche. Rimuovere lentamente l&#39;ago dalla capsula e asciugare subito sopra iniezione con una punta di cotone applicatore sterile per assorbire eventuali perdite e prevenire la diffusione delle cellule. </li><li> Interno: Con bordo smussato e partendo dal lato opposto rene al sito dell&#39;impianto definitivo, inserire l&#39;ago attraverso l&#39;interno del rene fino dell&#39;ago è visibile (ma non pungere) lo spazio sub-capsulare. Iniettare tutte le celle fino a forme bolla bianca e sito di iniezione tampone per evitare eventuali perdite. </li></ol></li><li> Dolcemente tornare rene alla cavità corporea. Chiudere la parete del corpo addominale utilizzando assorbibile 5-0 Vicryl sutura. Una volta completata, tirare lo strato di pelle insieme e mettere 2-3 wound clip. Assicurarsi clip sono fermi e distribuiti uniformemente per garantire l&#39;assenza di esposizione ferita. Prima del recupero somministrare 500 ml di NaCl allo 0,9% e 100 ml di buprenorfina (0,01 mg / ml) per via sottocutanea utilizzando un ago G 25. Ordinariamente monitorare clip di posizionamento e stabilità, e togliere dopo 10 giorni. </li></ol></li></ol> 2. Nefrectomia / Primary rimozione del tumore <ol><li> Seguire il protocollo identico per anestesia del mouse, immobilizzazione, incisione, e l&#39;esposizione del rene come descritto nelle sezioni 1.2.1 e 1.2.2 (di cui sopra). </li><li> Utilizzare una seconda coppia di pinze per isolare il rene rimuovendo delicatamente il tessuto grasso collegamento dall&#39;estremità caudale e la ghiandola surrenale dall&#39;estremità craniale del rene. Mentre afferrare delicatamente il rene, utilizzare assorbibile 5-0 Vicryl sutura per fare un doppio nodo intorno al uretere, dell&#39;arteria renale, e la vena. Lentamente sicuro e poi tagliare sopra il nodo per rimuovere il rene. Se uno qualsiasi segno di subito perdita di sangue, o vi è il rischio di hold insufficientedi sutura sul dell&#39;uretere, arteria e vena, quindi utilizzare cauterizer invece di forbici per tagliare sopra nodo. </li><li> Una volta rene è stato rimosso, controllate attentamente per qualsiasi sanguinamento dal arteria legato e utilizzare cauterizer se necessario. Chiudere la parete del corpo addominale utilizzando 5-0 Vicryl. Estrarre lo strato di pelle insieme e mettere 2-3 clip ferita seguenti precauzioni come descritto in 1.2.4. Seguire da vicino animali al giorno dopo un intervento chirurgico per segni di sofferenza, sanguinamento o mobilità limitata. Seguire le linee guida istituzionali per animali in tutta sicurezza. </li></ol> 3. Monitoraggio metastatico progressione e localizzazione a Endpoint <ol><li> Metastatica quantificazione malattia: monitoraggio Bioluminescent <ol><li> Vedere la metodologia precedentemente descritta in JOVE per il monitoraggio metastasi utilizzando cellule transfettate con luciferasi e quantificati con il sistema di imaging Xenogen IVIS 11,12. </li></ol></li><li> Guida visiva necroscopia di valutazione comparativa di distribuzione metastaticozione <ol><li> Sacrificare gli animali secondo le linee guida istituzionali che utilizzano punti finali compresi segni di sofferenza, respiro affannoso, perdita di peso, ecc Nota: attento monitoraggio degli animali è fondamentale in quanto spontanea progressione metastatica può essere molto variabile e rapido. </li><li> Utilizzare forbici chirurgiche di avviare un&#39;incisione sopra l&#39;uretra che continua la cavità toracica per mandibola inferiore. Usare le forbici blunt-ended per separare la pelle dal muscolo della parete addominale. </li><li> Avviare incisioni lungo braccia e gambe. Pelle a buccia di distanza. Esaminare attentamente la fascia di pelle e la parete addominale per i noduli, quindi i linfonodi superficiali: inguinali, brachiale, ascellari e cervicali superficiali. </li><li> Fare un&#39;incisione nella parete addominale e tagliare lungo i lati laterali sinistro e destro fino al diaframma. Con un taglio orizzontale rimuovere la porzione anteriore della parete addominale a nudo le viscere. </li><li> Esaminare l&#39;aspetto indisturbata dei visceri fo grossolanamente tumori notevoli. Da notare anche il contenuto dello stomaco e dell&#39;intestino; se sono vuote, il mouse potrebbe non essere stato in grado di mangiare. Se il contenuto è scuro, puo indicare prove gambale emorragia / gastrointestinale inferiore. </li><li> Visivamente punteggio per ciascun organo presenza o assenza del tumore, assegnando un punteggio totale per ogni gruppo topo (4 animali per gruppo viene utilizzato come esempio in Figura 1D-i). Note: 1) l&#39;allargamento dei linfonodi non vuol necessariamente dire che si tratta di una crescita tumorale; se è notevolmente di dimensioni, molto costante e un colore biancastro, è probabile un nodulo metastatico. 2) lattiginoso eccessiva o liquido torbido nell&#39;addome indica ascite. Ascite possono includere accumuli solidi sugli organi addominali, in particolare tra i lobi del fegato e lo stomaco. 3) per organi come i polmoni, noduli multipli possono essere presenti e contati per il confronto tra i singoli animali (cfr. 13, per esempio). </li><li> Identificare i tumori lordi o anomalie dei singoli organi addominali: fegato, milza, reni e pancreas, rimuovendo con cura e lavaggio con PBS da uno spruzzatore. </li><li> Dopo aver rimosso gli organi addominali, ispezionare linfonodi addominali, compreso il lombare, sacrale, renale e linfonodi mesenterici. </li><li> Valutare diaframma per l&#39;evidenza di diffusione metastatica. Nota: spread estesa sul diaframma può causare a perdere la sua contrattilità, portando a affannoso o la perdita della respirazione. </li><li> Rimuovere il diaframma e fare due incisioni laterali nella cavità toracica, rimozione della porzione frontale per esporre i polmoni e il cuore. </li><li> Rimuovere polmoni e cuore delicatamente sollevando l&#39;esofago e tagliando la trachea sopra il cuore. Valutare i tessuti per noduli. Spremere il cuore. La mancanza di consistenza elastica può indicare tumore presente. </li><li> Usare le forbici chirurgiche per tagliare linearmente attraverso il cranio. Rimuovere delicatamente piccoli pezzi di cranio fino al tegli intero cervello è esposto. Cercare in tutto il cervello per i noduli visibili o anomalie macchie. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li>
<li>Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endostatin+neoadjuvant+gene+therapy+extends+survival+in+an+orthotopic+metastatic+mouse+model+of+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma.</a> Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).</li>
<li>Amagai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+of+interleukin-2+and+sorafenib+improves+survival+benefits+and+prevents+spontaneous+pulmonary+metastasis+in+murine+renal+cell+carcinoma+models%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn.+J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models.</a> Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).</li>
<li>Steeg, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Drug+Development+Must+Consider+the+Impact+on+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).</li>
<li>Guerin, E., Man, S., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+postsurgical+advanced+metastatic+breast+cancer+more+accurately+replicates+the+clinical+efficacy+of+antiangiogenic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs.</a> Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).</li>
<li>Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+therapeutic+response+of+residual+metastatic+disease+is+distinct+from+its+primary+tumor+of+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin.</a> Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).</li>
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<li>Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+selection+of+human+renal+cell+carcinoma+cells+with+high+metastatic+potential+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice.</a> Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).</li>
<li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+in+essential+for+the+selection%2C+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).</li>
<li>Saiki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+invasive+and+metastatic+phenotype+in+human+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).</li>
<li>Mohanty, S., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+metastasis+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental metastasis assay.</a> J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).</li>
<li>Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+serous+ovarian+cancer+in+immunocompetent+mice+for+in+vivo+tumor+imaging+and+monitoring+of+tumor+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li>
<li>Ebos, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+metastasis+after+short-term+treatment+with+a+potent+inhibitor+of+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis.</a> Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).</li>
<li>Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+cell+carcinoma%3A+translational+aspects+of+metabolism+and+therapeutic+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences.</a> Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Lo scopo di questo protocollo è quello di valutare metastasi spontanea clinicamente rilevante utilizzando un modello di topo tumore singenici per descrivere le tecniche di impianto / resezione. Attualmente, la maggior parte degli studi preclinici che valutano nuove terapie sperimentali non comprendono lo studio della malattia metastatica e solo pochi ricapitola le fasi di crescita del tumore primario, la resezione chirurgica, e l&#39;eventuale spontanea diffusione metastatica. Ad oggi, modelli murini geneticamente (GEMM...

La principale causa di mortalità nei pazienti con carcinoma a cellule renali (RCC) è la malattia metastatica sistemico che si verifica in genere dopo la rimozione chirurgica di un tumore primario crescente nel rene. Tuttavia, ben pochi modelli tumorali preclinici che valutano terapeutica sperimentale nei topi includono la malattia metastatica, e ancora meno fedelmente ricapitolano le fasi cliniche della crescita localizzata, la chirurgia, e spontaneo iniziazione micro-metastasi e la progressione 1-3. Questo divario nei test è diventato sempre più importante nella valutazione di nuove terapie come a volte sorprendenti effetti anti-tumorali visto in modelli animali non sono sempre tradotti in un successo simile trattamento di pazienti 4. Tali differenze nei risultati possono derivare da efficacies differenziali di droga tra i modelli tumorali localizzate ectopiche o ortotopici primarie e in fase avanzata di malattia metastatica 5-7. Nel caso del RCC, solo pochi studi hanno impiegato istituito unprotocolli Nimal che includono la malattia ricorrente spontanea che imita i pazienti che in genere hanno avuto reni tumore interamente o parzialmente rimosse 2,3. Le ragioni di questa carenza nei test modello murino variano. In primo luogo, vi è il costo elevato degli animali e variabilità intrinseca di selezione delle cellule tumorali e potenziale metastatico. Ad esempio, linee di cellule renali umane tendono a metastatizzare raramente, e devono essere selezionati su più cicli di impianto primario orthotopic e la selezione metastatico derivare varianti che costantemente diffondono e formano lesioni lontane (vedi descrizione di come un essere umano linea di cellule di derivazione 8-10) . Al contrario, le cellule di topo in modelli immunocompetenti tendono a comportarsi in modo aggressivo, e il numero di cellule bassi devono essere iniettati con matrigel per ridurre la diffusione sistemica immediato 3. In secondo luogo, le difficoltà tecniche nello svolgimento corretto impianto, la resezione chirurgica (nefrectomia), e il monitoraggio (e quantificare) metastati spontaneala crescita c può essere difficile e più variabili critiche bisogno considerazione quando si impiegano questa tecnica (vedi la discussione per i dettagli). Lo scopo di questo protocollo è quello di descrivere i passi essenziali (così come potenziali insidie) di impianto ortotopico, la resezione (nefrectomia), e il monitoraggio della malattia spontanea carcinoma renale metastatico e per offrire una linea guida per standardizzata (e più diffusa) utilizzare tra i laboratori scientifici che valutano l&#39;efficacia di terapie sperimentali.

<table><tbody><tr><td>DMEM-glucosio alto con Pyr. E L-Glutammina</td><td>Corning</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>0,25% Tripsina EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CL</td><td></td></tr><tr><td>1x DPBS senza Calcio & Magnesio</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354234</td><td>deve essere tenuto sul ghiaccio</td></tr><tr><td>Unguento oftalmico lubrificante per lacrime artificiali</td><td>Akorn Animal Health</td><td>17478-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Tagliabordi tascabile per animali domestici</td><td>Braintree scientific</td><td>CLP9931B</td><td></td></tr><tr><td>Tampone imbevuto di alcol</td><td>VWR</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>Tampone per soluzione Betadine</td><td>VWR</td><td>67618-152-01</td><td></td></tr><tr><td>MICRO DISSEZIONE sissors dritto, smussato - lame da 25 mm - 4,5"&nbsp;</td><td>Southpointe chirurgica</td><td>RS-5982</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per iris, seghettate, curve, lunghe 10 cm</td><td>Kent scientific</td><td>INS15915</td><td>bisogno di due di queste</td></tr><tr><td>10 &micro; l Siringa Hamilton</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>30 G, 45 gradi, ago RN</td><td>Hamilton</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>Appicatore sterile con punta in cotone</td><td>VWR</td><td>10805-144</td><td></td></tr><tr><td>Kit cauterico ad alta temperatura</td><td>Kent scientific</td><td>INS500392</td><td></td></tr><tr><td>5-0 rivestito Vicryl, ago da taglio convenzionale</td><td>Ethicon</td><td>J834</td><td></td></tr><tr><td>Reflex clip per clip da 7 mm</td><td>Kent scientific</td><td>INS500343</td><td></td></tr><tr><td>Clip per reflex, 7 mm, non sterili</td><td>Kent scientific</td><td>INS500344</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per la rimozione, lunga 12 cm</td><td>Kent scientific</td><td>INS500347</td><td></td></tr><tr><td>0,9% Cloruro di sodio</td><td>Baxter Healthcare</td><td>2B1322</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,01 mg/ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>25 G 5/8" ago</td><td>VWR</td><td>BD305122</td><td></td></tr><tr><td>1 ml siringa senza ago</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>D-luciferina</td><td>oro Bio tecnologia</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

modellazione di carcinoma renale metastatico spontanea (mrcc) in topi dopo nefrectomia

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Una delle sfide chiave per una migliore sperimentazione di nuove terapie sperimentali in carcinoma a cellule renali (RCC) è lo sviluppo di modelli che ricapitolano fedelmente la progressione della malattia metastatica-precoce e tardiva fase. Modelli di tumore impianto tipici utilizzano ectopica o ortotopico impianto tumore primario, ma pochi comprendono la malattia metastatica spontanea sistemica che imita la clinica. Questo protocollo descrive i passaggi chiave per sviluppare la progressione della malattia RCC mette in scena simile ai pazienti. In primo luogo, esso utilizza un mouse linea cellulare tumorale altamente metastatico in un modello singenici visualizzare ortotopico impianto delle cellule tumorali. I metodi includono l&#39;impianto superficiale e interna nello spazio sub-capsulare con celle combinate con Matrigel per evitare perdite e la diffusione precoce. Accanto descrive le procedure per escissione del tumore-cuscinetto rene (nefrectomia), con la critica cure pre-e post-chirurgica del mouse. Infine, si delinea i passi necessari per monitorare e valutaremicro-e macro-progressione della malattia metastatica, tra cui l&#39;imaging bioluminescente e fornisce una guida dettagliata necroscopia visiva di segnare distribuzione malattia sistemica. L&#39;obiettivo di questa descrizione protocollo è facilitare l&#39;uso diffuso di clinicamente rilevanti modelli RCC metastatico a migliorare il valore predittivo di futuri test terapeutico.

La figura 1A mostra uno schema che illustra le procedure descritte in questa sintesi protocollo. Diversi fattori importanti devono essere considerati per ogni passaggio. Ad esempio, nel passo 1 mostra due metodi per sub-capsulare impianto del tumore cellule nel rene. Le cellule tumorali possono essere impiantati nello spazio sub-capsulare con un piccolo bianco-bolla confermando il posizionamento localizzata di cellule con perdite evitate grazie attenta rimozione dell&#39;ago e tampone eccesso fuoriuscit...

Modelli di spontanea carcinoma renale (RCC) progressione della malattia metastatica possono essere usate per valutare i trattamenti in un ambiente clinicamente rilevante. Questo protocollo dimostra procedure diverse per l&#39;impianto ortotopico di cellule tumorali del rene, la corretta nefrectomia, e, infine, delinea una guida necroscopico per il punteggio visiva e bioluminescente di carico metastatico e localizzazione.

Modellazione di Carcinoma renale metastatico spontanea (MRCC) in topi dopo nefrectomia

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

L'obiettivo generale di questa procedura è generare un carcinoma renale a metastasi spontanee clinicamente rilevante. Questo risultato si ottiene innanzitutto preparando le cellule reka Luke per l'impianto. Il secondo passaggio consiste nell'eseguire un'impianto ortotopico di cellule tumorali nel rene.Successivamente, dopo la crescita del tumore, il tumore primario viene asportato mediante nefrectomia. L'ultimo passaggio consiste nel monitorare la progressione della metastasi spontanea dopo la nefrectomia e valutare la distribuzione della malattia in diverse sedi. In definitiva, questo protocollo consente il monitoraggio della malattia da carcinoma renale metastatico spontaneo e fornisce una linea guida per standardizzare la valutazione dell'efficacia di terapie sperimentali.Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come l'impianto ectopico di cellule tumorali, spesso superficiale o sottocutaneo, è che riproduce il carcinoma a cellule renali (RCC) così come si presenta nei pazienti, inclusa la capacità delle cellule tumorali di diffondersi al resto dell'organismo. Le implicazioni di questa tecnica riguardano il trattamento del carcinoma a cellule renal

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Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello: l'iniezione di una sospensione di cellule tumorali nella parete del cieco o il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Questo modello è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.

Topo Modello ortotopico di cancro colorettale

Questo video descrive il protocollo per stabilire un modello murino di metastasi spontanee di xenotrapianti derivati da pazienti con cancro del colon-retto o PDX. Questi modelli di xenotrapianto imitano parzialmente le caratteristiche dei carcinomi umani e comprendono gli aspetti critici delle neoplasie maligne umane, tra cui l'invasione e le metastasi.

Modelli murini di metastasi spontanee: una piattaforma per studiare il potenziale metastatico delle cellule di cancro colorettale iniettate ortotopicamente

In questo video, sviluppiamo un modello murino ortotopico di carcinoma a cellule renali. Questo modello produce tumori primari riproducibili nel rene iniettato e tumori metastatici nel polmone, consentendo la valutazione della progressione della malattia e del trattamento.

Generazione di un modello di carcinoma a cellule renali: un protocollo per sviluppare un modello murino RCC ortotopico mediante impianto intrarenale di cellule tumorali

Questo modello ortotopico di carcinoma della prostata umana consente per la quantificazione della dimensione del tumore, cellule tumorali circolanti, e la formazione di metastasi distinto al polmone. Come le cellule devono sfuggire l'organo primario, immettere il flusso sanguigno, e impiantare in un sito secondario, questo modello riassume efficacemente lo scenario in esseri umani.

Un ortotopico Modello murino di Human Prostate Cancer Metastasi

Un modello di tumore primario del cancro al seno ortotopica e la rimozione chirurgica del tumore primario di estendere la vita del mouse per generare metastasi spontanee sono descritti. La crescita del tumore e la progressione sono monitorati e quantificati mediante imaging di fluorescenza luciferasi.

Un modello murino ortotopico di spontanea Breast Cancer metastasi

Il cancro alla prostata è la seconda causa più comune di decessi correlati al cancro negli Stati Uniti. Un modello di cancro ortotopico fornisce un approccio utile per comprendere la biologia del cancro alla prostata e per valutare l'efficacia dei regimi terapeutici. Questo protocollo descrive in dettaglio i passaggi necessari per stabilire un modello murino di cancro alla prostata ortotopico.

Pre-clinica ortotopico Modello murino di Human cancro alla prostata

Attuazione di un modello ortotopico di carcinoma renale nei topi immunocompetenti offre al ricercatore un sistema clinicamente rilevante definito dalla presenza di un tumore e metastasi polmonari primarie renali nello stesso animale. Questo sistema può essere utilizzato per testare preclinica una varietà di trattamenti in vivo.

Un Cell Carcinoma Singenico modello murino di renale metastatico per quantitativo e longitudinale Valutazione della preclinici Terapie

Vi presentiamo un modello murino ortotopico di cancro del seno e mastectomia radicale modello con tecnologia di bioluminescenza per quantificare il carico del tumore per simulare la progressione del cancro al seno umano.

Generazione di un modello di cancro al seno metastatico murino ortotopico ed eseguendo murino mastectomia radicale

Questo protocollo descrive la generazione di modelli di xenotrapianto ortotopico derivati dal paziente infondendo inmodo vesicalmente cellule carcinoma a cellule urotemaliali o cellule di cancro colorettale intra-rettale in diabete/grave non obesi immunodeficienza (NOD/SCID) per la crescita primaria del tumore e metastasi spontanee sotto l'influenza delle cellule stromali del linfonodo, che imitano la progressione delle malattie metastatiche umane.

Modelli di Xenotrapianto ortotopico derivati dal paziente per carcinoma a cellule uroteliali umane e crescita del tumore del tumore colorettale e metastasi spontanea

Descriviamo in dettaglio un modello tumorale del cancro colorettale clinicamente rilevante (CRLM) e l'influenza della reperfusione di ischemia epatica (I/R) nella crescita tumorale e nella metastasi. Questo modello può aiutare a comprendere meglio i meccanismi alla base della promozione metastatica del fegato indotta da un intervento chirurgico.

Modello Murine dei tumori metastatici del fegato nell'impostazione della lesione alla riperfusione dell'ischemia

Il carcinoma a cellule renali a cellule chiare metastatiche è una malattia senza un modello animale completo per un'indagine preclinica approfondita. Questo protocollo illustra due nuovi modelli animali per la malattia: il modello di topo ortotopicamente impiantato e il modello a membrana corioallantoica del pollo, che dimostrano entrambe metastasi polmonari simili a casi clinici.

Confrontando il modello di carcinoma a cellule renali a celle chiare metastatico stabilito nel rene del topo e sulla membrana coroallantoica del pollo

Scopri come generare un modello di carcinoma renale metastatico spontaneo in topi mediante impianto ortotopico di cellule tumorali, nefrectomia e valutazione del carico metastatico. Questo protocollo standardizzato consente di studiare la progressione della malattia e testare nuove terapie sperimentali in modo riproducibile.

Modellazione di Carcinoma renale metastatico spontanea (MRCC) in topi dopo nefrectomia

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