Name: Capire in anticipo Organogenesis Utilizzando una semplificata In Situ Protocollo di ibridazione in Xenopus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 50 s
Description: Impara l'ibridazione in situ in toto in Xenopus laevis per visualizzare l'espressione genica durante lo sviluppo embrionale. Questo protocollo semplificato consente di localizzare l'RNA con reazioni colorimetriche precise.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori desiderano ringraziare il CIHR per il sostegno alla borsa di studio di Steve Deimling e il Dipartimento di Pediatria, Università dell'Ontario Occidentale per il supporto di Steve Deimling, Rami Halabi e Stephanie Grover. Questo lavoro è stato supportato dal R2654A11 di sovvenzione NSERC e da un supplemento NSERC Discovery Accelerator

<ol><li>Ninomiya, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherin-dependent+differential+cell+adhesion+in+Xenopus+causes+cell+sorting+in+vitro+but+not+in+the+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Cadherin-dependent differential cell adhesion in Xenopus causes cell sorting in vitro but not in the embryo.</a> J Cell Sci. 125, 1877-1883 (2012).</li>
<li>Movassagh, M., Philpott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+differentiation+in+Xenopus+requires+the+cyclin-dependent+kinase+inhibitor%2C+p27Xic1%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac differentiation in Xenopus requires the cyclin-dependent kinase inhibitor, p27Xic1.</a> Cardiovasc Res. 79, 436-447 (2008).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+alphaA-+and+betaB1-crystallin+during+normal+development+and+regeneration%2C+and+proteomic+analysis+for+the+regenerating+lens+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">The expression of alphaA- and betaB1-crystallin during normal development and regeneration, and proteomic analysis for the regenerating lens in Xenopus laevis.</a> Mol Vis. 17, 768-778 (2011).</li>
<li>Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization%3A+an+improved+whole-mount+method+for+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization: an improved whole-mount method for Xenopus embryos.</a> Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).</li>
<li>Kirilenko, P., Weierud, F. K., Zorn, A. M., Woodland, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+Xenopus+primordial+germ+cell+migration+depends+on+the+germplasm+mRNA+encoding+the+PDZ+domain+protein+Grip2%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">The efficiency of Xenopus primordial germ cell migration depends on the germplasm mRNA encoding the PDZ domain protein Grip2.</a> Differentiation. 76, 392-403 (2008).</li>
<li>Deimling, S. J., Drysdale, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf+is+required+to+regulate+anterior-posterior+patterning+in+the+Xenopus+lateral+plate+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Fgf is required to regulate anterior-posterior patterning in the Xenopus lateral plate mesoderm.</a> Mech Dev. , (2011).</li>
<li>Fletcher, R. B., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+FGF+signaling+in+the+establishment+and+maintenance+of+mesodermal+gene+expression+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">The role of FGF signaling in the establishment and maintenance of mesodermal gene expression in Xenopus.</a> Dev Dyn. 237, 1243-1254 (2008).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSive%2C+HL+%22Early+development+of+Xenopus+laevis+%3A+a+laboratory+manual%22">Early development of Xenopus laevis : a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2000).</li>
<li>Park, E. C., Hayata, T., Cho, K. W., Han, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+cDNA+microarray+identification+of+genes+with+endodermal+organ+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Xenopus cDNA microarray identification of genes with endodermal organ expression.</a> Dev Dyn. 236, 1633-1649 (2007).</li>
<li>Horb, M. E., Slack, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoderm+specification+and+differentiation+in+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Endoderm specification and differentiation in Xenopus embryos.</a> Dev Biol. 236, 330-343 (2001).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNieuwkoop%2C+PD+%22Normal+table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29+%3A+a+systematical+and+chronological+survey+of+the+development+from+the+fertilized+egg+till+the+end+of+metamorphosis%22">Normal table of Xenopus laevis (Daudin) : a systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis</a>. , Garland Pub. (1994).</li>
<li>Gebhardt, D. O., Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Lithium+on+the+Competence+of+the+Ectoderm+in+Ambystoma+Mexicanum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">The Influence of Lithium on the Competence of the Ectoderm in Ambystoma Mexicanum.</a> J Embryol Exp Morphol. 12, 317-331 (1964).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+formation+in+artificially+activated+ectoderm+%28Rana+pipiens+and+Ambystoma+punctatum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Pattern formation in artificially activated ectoderm (Rana pipiens and Ambystoma punctatum).</a> Dev Biol. 6, 255-279 (1963).</li>
<li>Sato, S. M., Sargent, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+approach+to+dorsoanterior+development+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular approach to dorsoanterior development in Xenopus laevis.</a> Dev Biol. 137, 135-141 (1990).</li>
<li>Smith, S. J., Kotecha, S., Towers, N., Latinkic, B. V., Mohun, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XPOX2-peroxidase+expression+and+the+XLURP-1+promoter+reveal+the+site+of+embryonic+myeloid+cell+development+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">XPOX2-peroxidase expression and the XLURP-1 promoter reveal the site of embryonic myeloid cell development in Xenopus.</a> Mech Dev. 117, 173-186 (2002).</li>
<li>Drysdale, T. A., Tonissen, K. F., Patterson, K. D., Crawford, M. J., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+troponin+I+is+a+heart-specific+marker+in+the+Xenopus+embryo%3A+expression+during+abnormal+heart+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cardiac troponin I is a heart-specific marker in the Xenopus embryo: expression during abnormal heart morphogenesis.</a> Dev Biol. 165, 432-441 (1994).</li>
<li>Carroll, T., Wallingford, J., Seufert, D., Vize, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+pronephric+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of pronephric development.</a> Curr Top Dev Biol. 44, 67-100 (1999).</li>
<li>Tonissen, K. F., Drysdale, T. A., Lints, T. J., Harvey, R. P., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XNkx-2.5%2C+a+Xenopus+gene+related+to+Nkx-2.5+and+tinman%3A+evidence+for+a+conserved+role+in+cardiac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">XNkx-2.5, a Xenopus gene related to Nkx-2.5 and tinman: evidence for a conserved role in cardiac development.</a> Dev Biol. 162, 325-328 (1994).</li>
<li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53, 163-176 (2002).</li>
<li>Hurtado, R., Mikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+sensitivity+and+stability+in+two-color+in+situ+hybridization+by+means+of+a+novel+chromagenic+substrate+combination%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Enhanced sensitivity and stability in two-color in situ hybridization by means of a novel chromagenic substrate combination.</a> Dev Dyn. 235, 2811-2816 (2006).</li>
</ol>

Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti da rivelare.

La possibilità di utilizzare l&#39;ibridazione in situ per visualizzare il pattern di espressione di geni specifici rimane il metodo più comunemente utilizzato per identificare organi specifici o tipi cellulari nell&#39;embrione Xenopus. Questo è causa di numerosi vantaggi offerti da questa tecnica. L&#39;espressione di un gene in grado di identificare le strutture specifiche ben prima di qualsiasi segno istologico di differenziazione, come nel caso di espressione Nkx2.5 nei progenitori cardia...

Il modello di espressione di un gene specifico è un'informazione importante nel determinare il ruolo potenziale di quel gene nello sviluppo di un organo o di un tipo di cellula specifico. In poche parole, se non viene espresso al momento e nel luogo giusto, è improbabile che svolga un ruolo chiave. In Xenopus, come nella maggior parte degli embrioni precoci, il test più comunemente usato per rilevare l'espressione di un gene è l'ibridazione in situ a montaggio intero utilizzando sonde di RNA antisenso marcate. L'uso della colorazione degli anticorpi per valutare l'espressione di un gene in Xenopus sta diventando sempre più comune man mano che i ricercatori scoprono anticorpi, di solito sollevati contro le proteine dei mammiferi, che reagiscono in modo incrociato all'omologo di Xenopus o generano i propri 1-3. Tuttavia, la stragrande maggioranza degli studi sull'organogenesi di Xenopus utilizza ancora sonde di RNA antisenso. Quando vengono utilizzati gli anticorpi, ogni singolo anticorpo richiede spesso l'ottimizzazione per la concentrazione di anticorpi primari o i protocolli di fissazione. Al contrario, il protocollo per le ibridazioni in situ è essenzialmente invariante per diverse sonde. Il concetto di base è relativamente semplice ed è stato ben consolidato un eccellente protocollo standard 4. Il nostro protocollo è una versione semplificata del protocollo originale 4 che fornisce ancora un'eccellente rilevazione dei modelli di espressione genica nell'embrione precoce. Gli embrioni vengono fissati e quindi preparati per l'ibridazione modificando le soluzioni e le temperature in modo tale da consentire un legame ad alta stringenza della sonda di RNA antisenso marcata al suo mRNA bersaglio. La sonda non legata viene lavata via e gli embrioni vengono quindi preparati per il legame di un anticorpo contro l'etichetta sulle sonde di RNA. L'anticorpo in eccesso viene quindi lavato via e viene utilizzata una reazione enzimatica del colore per localizzare il punto in cui la sonda di RNA è legata nell'embrione. Ora ci sono un certo numero di linee transgeniche di Xenopus che guidano l'espressione di proteine fluorescenti in tessuti specifici e queste sono disponibili presso i centri di stoccaggio Xenopus come il National Xenopus Resource a Woods Hole. Sebbene sia molto utile per molti esperimenti che richiedono l'esame dell'organogenesi negli embrioni viventi, questa opzione richiede un alloggiamento separato per le linee transgeniche. 
L'ibridazione in situ può delineare chiaramente dove si formeranno organi o tipi di cellule specifici nell'embrione precoce (Figura 1). La tecnica è notevolmente sensibile dato che è possibile rilevare l'espressione genica in un piccolo numero di cellule in un singolo embrione 5. Tuttavia, l'ibridazione in situ utilizzando l'intensità della colorazione colorimetrica non è considerata quantificabile perché la reazione cromatica non è lineare. Nonostante la difficoltà nel quantificare l'intensità della colorazione, i cambiamenti nell'espressione sono spesso abbastanza evidenti; in particolare quando l'ibridazione in situ mostra aumenti o diminuzioni quantificabili nella dimensione dei domini di espressione 6,7. 
I chiari vantaggi dell'ibridazione in situ a montatura intera la rendono un saggio critico nello studio dello sviluppo precoce. Tuttavia, è un processo che richiede molto tempo e molti passaggi nell'arco di diversi giorni. Questo protocollo è una versione semplificata del protocollo standard che elimina diversi passaggi senza ridurre la qualità del risultato in situ. La semplificazione elimina anche le fonti di variabilità, facilitando la risoluzione dei problemi se un'ibridazione in situ non è ottimale. In particolare, abbiamo eliminato l'uso di trattamenti con proteinasi K e RNAsi dell'embrione, due passaggi che possono dipendere dalla qualità del reagente e possono anche ridurre l'intensità del segnale se esagerati. Il protocollo offre anche un certo grado di risparmio sui costi grazie all'eliminazione dell'uso di diversi reagenti. Infine, questo protocollo fornisce anche alcune semplici linee guida per una migliore acquisizione delle immagini dei risultati dell'ibridazione in situ. Sebbene questo protocollo sia ottimizzato per il lavoro negli embrioni di Xenopus, è probabile che almeno alcune delle semplificazioni saranno applicabili al lavoro di ibridazione in situ in altri sistemi embrionali.

<table><tbody><tr><td>Labguake Agitatori per provette</td><td>VWR</td><td>17-08-2011</td><td></td></tr><tr><td>VWR Fiale</td><td>VWR</td><td>VWR 10-07-2012</td><td></td></tr><tr><td>L-Cisteina</td><td>BioShop</td><td>CYS342.500</td><td></td></tr><tr><td>Set di trifosfato ribonucleosidico, 100mM</td><td>Roche</td><td>11277057001</td><td></td></tr><tr><td>Digoxigenina-11-UTP</td><td>Roche</td><td>11209256910</td><td></td></tr><tr><td>Inibitore della Rnasi (Rnase OUT)</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>T7 RNA polimerasi</td><td>fermentas</td><td>EPO111</td><td></td></tr><tr><td>T3 RNA polimerasi</td><td>fermentas</td><td>EPO101</td><td></td></tr><tr><td>SP6 RNA polimerasi</td><td>fermentas</td><td>EPO131</td><td></td></tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>18047-019</td><td></td></tr><tr><td>Siero di pecora</td><td>&nbsp; Wisent</td><td>31150</td><td></td></tr><tr><td>Reagente bloccante</td><td>Roche</td><td>11096176001</td><td></td></tr><tr><td>BM viola Substrato Ap</td><td>Roche</td><td>11442094001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Digoxigenina-Ap Frammenti di Feb</td><td>Roche</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>Metanolo</td><td>VWR</td><td>CAMX0485-7</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>BioShop</td><td>SOD002.10</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>EM&nbsp;</td><td>7910</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BioShop</td><td>EDT001.500</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioShop</td><td>TRS003.5</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>EM&nbsp;</td><td>9480</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>Mops</td><td>BioShop</td><td>MOP001.250</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E-3889-25G</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>BioShop</td><td>PAR070.500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Formamide</td><td>&nbsp; VWR &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>CAFX0420-4&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNA</td><td>Roche</td><td>10109223001</td><td></td></tr><tr><td>acido maleico</td><td>&nbsp; VWR &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>CAMX0100-3</td><td></td></tr><tr><td>citrato tri-sodio</td><td>BioShop</td><td>CIT001</td><td></td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno (soluzione al 30%)</td><td>EM&nbsp;</td><td>HX0635-2</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001.100</td><td></td></tr><tr><td>PVP-40</td><td>ICN</td><td>195451</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0300-10</td><td></td></tr><tr><td>Alcool benzilico</td><td>Sigma</td><td>B-1042</td><td></td></tr><tr><td>Benzoato benzilico</td><td>Sigma</td><td>B-6630</td><td></td></tr><tr><td>Agarosio ultrapuro&nbsp;</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>16500-500</td><td></td></tr></tbody></table>

capire in anticipo organogenesis utilizzando una semplificata<em&gt; in situ</em&gt; protocollo di ibridazione in<em&gt; xenopus</em

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

L'organogenesi è lo studio di come gli organi vengono specificati e quindi acquisiscono la loro forma e funzioni specifiche durante lo sviluppo. L'embrione di Xenopuslaevis è molto utile per lo studio dell'organogenesi perché le sue grandi dimensioni lo rendono molto adatto per identificare gli organi nelle prime fasi dell'organogenesi. Al momento, il metodo principale utilizzato per identificare un organo specifico o primordio è l'ibridazione in situ a montatura intera con sonde di RNA antisenso marcate specifiche per un gene che è espresso nell'organo di interesse. Inoltre, è relativamente facile manipolare i geni o le vie di segnalazione in Xenopus e l'ibridazione in situ consente di analizzare i cambiamenti nella presenza o nella morfologia di un organo bersaglio. L'ibridazione in situ dell'intera montatura è un protocollo di più giorni con molti passaggi coinvolti. Qui forniamo un protocollo semplificato con un numero ridotto di passaggi e reagenti utilizzati che funziona bene per i test di routine. I robot di ibridazione in situ hanno notevolmente facilitato il processo e descriviamo in dettaglio come e quando utilizziamo tale tecnologia nel processo. Una volta completata l'ibridazione in situ, catturare l'immagine migliore del risultato può essere frustrante. Forniamo consulenza su come ottimizzare l'imaging dei risultati dell'ibridazione in situ. Sebbene il protocollo descriva la valutazione dell'organogenesi in Xenopus laevis, lo stesso protocollo di base può quasi certamente essere adattato a Xenopus tropicalis e ad altri sistemi modello.

L&#39;uso di sonde specifiche del tessuto può fornire informazioni eccellente per quanto riguarda lo stato di sviluppo per organi specifici. Nei seguenti esempi, la fase dell&#39;embrione si basa sulla tabella di gestione temporanea Nieuwkoop e Faber 11. Se uno usa geni forma sonde espressi dopo la differenziazione, troponina I cardiaca in fase di 28-30, per esempio (Figura 1C), la presenza o la dimensione di un organo differenziata può essere valutata in ogni differenziazione fase d...

L'embrione di Xenopus laevis continua ad essere eccezionalmente utile nello studio dello sviluppo precoce grazie alle sue grandi dimensioni e alla facilità di manipolazione. Viene fornito un protocollo semplificato per l'ibridazione in situ dell'intera montatura che può essere utilizzato nell'identificazione di organi specifici in questo sistema modello.

Capire in anticipo Organogenesis Utilizzando una semplificata<em&gt; In Situ</em&gt; Protocollo di ibridazione in<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è mostrare in quale sede viene espressa una particolare gene all'interno di un embrione integro. Questo risultato si ottiene fissando l'RNA da localizzare in loco all'interno dell'embrione come secondo passaggio. Una sonda a RNA antisenso specifica per il gene di interesse viene ibridata all'RNA bersaglio all'interno dell'embrione.Questo sonda contiene un epitopo, solitamente digoxigenina, che può essere successivamente rilevato. Successivamente, un anticorpo coniugato alla fosfatasi alcalina viene ibridato all'epitopo presente sulla sonda di RNA, seguito dall'uso di un colorante cromogenico. Per visualizzare la localizzazione dell'RNA all'interno dell'embrione, si ottengono risultati che mostrano con precisione dove il gene di interesse è espresso, in base alla reazione cromogenica e alla conoscenza dell'anatomia dell'embrione.Il vantaggio principale del nostro protocollo istituzionale rispetto ai protocolli esistenti è che è più rapido e utilizza meno reagenti, senza alcuna perdita evidente di qualità. Questo metodo può rispondere a domande fondamentali in embriologia, come ad esempio come i tessuti vengono specificati e organizzati.

understanding-early-organogenesis-using-simplified-situ-hybridization

Research

Ricerca

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Questo video dimostra a 2 colori montare tutto ibridazione in situ, un metodo con cui il modello di espressione spaziale e temporale dei 2 geni differenti possono essere visualizzati in embrioni di pollo giovani. Questo metodo è stato originariamente introdotto da David Wilkinson, Domingos Henrique, Phil Ingham e David Ish-Horowicz.

Doppia Monte intero ibridazione in situ di embrioni di pollo primi

Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.

Live-cell imaging e analisi quantitativa della embrionali in cellule epiteliali Xenopus laevis</em

Xenopus ectoderma embrionale è diventato un modello attraente per gli studi di polarità cellulare. Un saggio è descritta, in cui la distribuzione subcellulare delle proteine ​​fluorescenti è valutata in cellule ectoderma. Questo protocollo aiuterà a trattare questioni relative al controllo spaziale della segnalazione.

Traslocazione polarizzato di proteine ​​fluorescenti in Xenopus</emEctoderma> in risposta alla segnalazione Wnt

Il pesce zebra, un piccolo pesce tropicale, è diventata un modello importante per studiare la funzione del gene durante lo sviluppo dei vertebrati e la malattia. L'espressione temporale e spaziale dei geni bersaglio può essere...

Alta Risoluzione intero monte<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione in embrioni di zebrafish per studiare l&#39;espressione genica e la funzione

Una tecnica per il trapianto "Extreme anteriore dominio" dei tessuti del viso tra Xenopus laevis embrioni è stato sviluppato. Tessuto può essere spostato da un gene espressione sfondo in un'altra, permettendo lo studio delle esigenze locali di sviluppo craniofacciale e di segnalazione interazioni tra regioni facciali.

Trapianti viso a<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embrioni

Il fringuello zebra (Taeniopygiaguttata) è un prezioso organismo modello; tuttavia, le prime fasi dello sviluppo del fringuello zebra non sono state studiate in modo approfondito. Il protocollo descrive come sezionare gli embrioni precoci per applicazioni molecolari e di sviluppo.

Dissezione e analisi valle di Zebra Finch embrioni nelle fasi iniziali dello sviluppo

Negli embrioni di Xenopus, le cellule del tetto del blastocele sono pluripotenti e possono essere programmate per generare vari tessuti. Qui, descriviamo i protocolli per utilizzare gli espianti di tetti di blastocele di anfibi come sistema di analisi per studiare le caratteristiche chiave in vivo e in vitro dello sviluppo neurale precoce.

Cellule staminali simil-<em&gt; Xenopus</em&gt; Embrionali espianti di studiare Caratteristiche precoce dello sviluppo neurale<em&gt; In Vitro</em&gt; E<em&gt; In Vivo</em

Questo articolo presenta un metodo conveniente e rapido per la visualizzazione di diverse popolazioni cellulari neuronali nel sistema nervoso centrale di embrioni di Xenopus mediante immunofluorescenza su sezioni.

La valutazione primaria neurogenesi in<em&gt; Xenopus</em&gt; Embrioni Utilizzando Immunocolorazione

Descriviamo un semplice protocollo per sviluppare organoidi epiteliali mucociliari da cellule ectodermi profonde isolate dagli embrioni xenopus laevis. I progenitori multipotenti rigenerano i precursori delle cellule del calice epiteliale e permettono il tracciamento vivo dell'iniziazione e della progressione delle transizioni cellulari sulla superficie degli organoidi.

Organoidi epiteliali mucociliari di cellule embrionali xenopus: generazione, coltura e imaging dal vivo ad alta risoluzione

Forniamo metodi dettagliati per etichettare metabolicamente e purificare i trascriverti nascenti per l'analisi del trascrittoma negli embrioni precoci di Xenopus utilizzando la 5-etinil-uridina (5-EU).

Marcatura metabolica del trascricroma nascente in Xenopus Embriogenesi precoce

Descriviamo un metodo di costrizione fisica per produrre mini embrioni da embrioni a 1 cellula di Xenopus laevis .

Manipolazione fisica per generare embrioni mini di Xenopus

Impara l'ibridazione in situ in toto in Xenopus laevis per visualizzare l'espressione genica durante lo sviluppo embrionale. Questo protocollo semplificato consente di localizzare l'RNA con reazioni colorimetriche precise.

Capire in anticipo Organogenesis Utilizzando una semplificata

Esplora altri video