L'uso di fluorescenti target matrici per la valutazione delle cellule T risposte In vivo

L'obiettivo generale di questa procedura è generare un array di un massimo di 252 cellule bersaglio fluorescenti marcate in modo distinto per saggi immunitari utilizzando la citometria a flusso multiparametrica. Ciò si ottiene marcando prima i linfociti bersaglio con combinazioni e intensità uniche di coloranti vitali come CFSE e CTV. Il passo successivo consiste nel polverare ogni distinta popolazione di linfociti bersaglio con epitopi peptidici leganti MHC di classe uno e MHC di classe due.

Questo è seguito da un lavaggio estensivo delle cellule per mantenere la specificità degli epitopi e quindi dal raggruppamento delle cellule e dall'iniezione in un animale. I passaggi finali consistono nel raccogliere le cellule dell'array di tag fluorescenti da tessuti specifici, etichettarle e valutare le risposte specifiche del peptide MHC. In definitiva, i risultati della citometria a flusso possono mostrare risposte CTL misurando la morte delle cellule bersaglio e possono mostrare quattro risposte T helper positive al CD misurando l'upregolazione dei marcatori di attivazione del bersaglio delle cellule B. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai saggi CTL convenzionali in vivo è che consente una misurazione simultanea di oltre 250 cellule bersaglio in un animale, dimostrando che la procedura sarà Ben Quire, un ricercatore nel mio laboratorio.