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A Method of Permeabilization of Drosophila Embryos for Assays of Small Molecule Activity

Un metodo di Permeabilization di Drosophila Gli embrioni per saggi di piccole molecole di attività

Full Text
13,041 Views
10:04 min
July 13, 2014

DOI: 10.3791/51634-v

Matthew D. Rand1

1Department of Environmental Medicine,University of Rochester School of Dentistry and Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Introduzione di piccole molecole, allo sviluppo di Drosophila embrione offre un grande potenziale per la caratterizzazione dell'attività biologica di nuovi composti, farmaci e tossine, nonché per sondare percorsi di sviluppo fondamentali. I metodi qui descritti delineano misure che superano le barriere naturali di questo approccio, ampliando l'utilità del modello di embrione di Drosophila.

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di preparare embrioni vitali di drosophila con un guscio d'uovo permeabile per testare la bioattività di farmaci o tossine introdotte a piccole molecole. Ciò si ottiene trattando prima gli embrioni in fase di sviluppo con candeggina diluita per rimuovere gli strati esterni del guscio d'uovo corionico. Il secondo passo consiste nel permeare gli embrioni con un solvente che esaurisce il sottile strato ceroso di guscio d'uovo che blocca i soluti di piccole molecole.

Il terzo passo consiste nel trattare gli embrioni con un farmaco o una tossina e un colorante per misurare contemporaneamente la permeabilità del guscio d'uovo e introdurre un composto di interesse. Dopo un ulteriore sviluppo, gli embrioni possono essere sottoposti a imaging diretto o elaborati per l'immunoistochimica. In definitiva, i risultati possono mostrare l'attività di un farmaco o di una tossina sullo sviluppo dei tessuti, come determinato dalla microscopia a fluorescenza con reagenti immunologici o legami vitali.

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