Name: Un metodo Chiarimento Nuovo per visualizzare biliare degenerazione Durante fegato Metamorfosi in mare Lamprey ( Petromyzon marinus) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-06T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Scopri il metodo CLARITY modificato per visualizzare la degenerazione biliare durante la metamorfosi epatica della lampetra marina Petromyzon marinus. Questa tecnica aiuta a studiare l'atrofia biliare umana.

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Gli autori riconoscono il contributo della stazione Hammond Bay biologica, Great Lakes Science Center, US Geological Survey. Ringraziamo anche il Dott. Melinda frame presso il Centro di Microscopia Avanzata presso la Michigan State University per il suo supporto tecnico nella scansione laser microscopia confocale. Questo studio è sostenuto da finanziamenti della Commissione Grandi Laghi per la pesca a YWCD e WML.

1. Preparazione Solution <ol><li> Rendere 1 L 10x 0.1 M salina tampone fosfato (PBS, pH 7,4): Pesare 26,2 g di fosfato di sodio (monobasico), 115 g di fosfato di sodio (bibasico), e 87,66 g NaCl. Sciogliere in circa 800 ml di acqua distillata H 2 O, regolare il pH, e portare al volume di 1 litro con acqua distillata H 2 O. <ol><li> Rendere 1 L 0.1 M tampone fosfato salino (pH 7.4): Prendete 100 ml 10x PBS e aggiungere 900 ml di acqua distillata H 2 O. </li><li> Rendere 1 L 0.1 M tampone fosfato salino (pH 7.4) con 0.1% Triton X-100: Prendete 100 ml 10x PBS, aggiungere 1 ml di Triton X-100, e portare al volume di 1 litro con acqua distillata H 2 O. </li></ol></li><li> Rendere 1 L 10x 0.1M tampone fosfato (PB, pH 7,4): Pesare 26,2 g di fosfato di sodio (monobasico) e 115 g di fosfato di sodio (bibasico). Sciogliere in circa 800 ml di acqua distillata H 2 O, regolare il pH, e portare al volume di 1 litro con acqua distillata H 2 O. <ol><li> Rendere 1 L 0.1 M tampone fosfato (pH 7.4): Prendete 100 ml 10x PB,e aggiungere 900 ml di acqua distillata H 2 O. </li><li> Rendere 1 L 0.1 M tampone fosfato (pH 7.4) con 0.1% Triton X-100: Prendete 100 ml 10x PB, aggiungere 1 ml di Triton X-100, e portare al volume di 1 litro con acqua distillata H 2 O. </li></ol></li><li> Preparare la soluzione di 400 ml di idrogel monomero (4% acrilammide, 0,25% bis-acrilammide, 4% paraformaldeide, 0,0075% persolfato di ammonio, 0,0005% saponina in 0.1 M PBS): Pesare 0,3 g di persolfato di ammonio e 0,2 g saponina. Aggiungere 210 ml di H 2 O distillata, 40 ml 40% di acrilammide, 10 ml 2% bis-acrilammide, 40 ml 10x PBS (pH 7.4), 100 ml 16% paraformaldeide, e mescolare bene. </li><li> Preparare la soluzione di compensazione 4 L (4% SDS in acido borico 0.2 M): Pesare 49,464 g di acido borico e 160 g SDS. Sciogliere in circa 3,5 L H 2 O distillata, aggiustare il pH a 8.5 con NaOH, e portare il volume fino a 4 L. </li><li> Rendere 1 L soluzione di glicerolo 80%: Misurare 800 ml di glicerolo, aggiungere 200 ml di acqua distillata H 2 O, e mescolare bene. </li></ol> 2. Preparazione Tissue <ol><li> Preparare la soluzione di monomero idrogel e un&#39;aliquota di 10 ml per ogni provetta da centrifuga 15 ml. </li><li> Sezionare tutto il tessuto e fissare l&#39;idrogel per 2 giorni a 4 ° C. Assicurarsi che la soluzione idrogel è almeno 10 volte il volume del tessuto. </li><li> Portare il tessuto fissato idrogel (nella provetta da centrifuga 15 ml) ad una cappa aspirante. </li><li> Polimerizzare il tessuto fissato idrogel con l&#39;aggiunta di 5 ml TEMED, mescolare bene e lasciar riposare nella cappa a temperatura ambiente per 2-3 ore. </li><li> Rimuovere accuratamente il gel in eccesso. Nota: gel Extra ostacolerà il processo di compensazione e la penetrazione degli anticorpi durante la colorazione. </li><li> Incubare il tessuto fissato in 10 ml di soluzione di compensazione in un agitatore incubatore a 70 rpm e 50 ° C per diversi giorni finché il tessuto diventa trasparente. Cambiare soluzione compensazione almeno una volta al giorno e rimuovere il gel in eccesso dal tessuto quando si cambia la soluzione di compensazione. </li><li> Risciacquare il tessuto in 10 ml di 0,1 M PB con 0.1% Triton X-100 a 70 rpm e 37 ° C durante la notte. Ripetere questo passaggio 3 volte e rimuovere il gel in eccesso dal tessuto quando si cambia la soluzione tampone. </li><li> Incubare il tessuto chiarito nella soluzione di anticorpo primario in PB con 0.1% Triton X-100 a 70 rpm e 37 ° C per 2 giorni. Nota: soluzione di anticorpo primario sufficiente a sommergere tutto il tessuto. </li><li> Risciacquare il tessuto in 10 ml PB con 0.1% Triton X-100 a 70 rpm e 37 ° C durante la notte. Ripetere questo passaggio 3 volte e rimuovere il gel in eccesso dal tessuto quando si cambia la soluzione tampone. </li><li> Effettuare le seguenti operazioni in una stanza buia o sotto la luce fioca. Coprire i campioni con un foglio per evitare foto sbiancamento. </li><li> Incubare il tessuto chiarito con la soluzione di anticorpo secondario fluorescente in PB con 0.1% Triton X-100 e il siero di blocco a 70 rpm e 37 ° C per 1 giorni. </li><li> Risciacquare il tessuto in 10 ml PB con 0.1% Triton X-100 a 70 rpm e 37 ° C durante la notte. Ripetere questa operazione 3 volte e rimuovere il gel in eccesso fROM il tessuto quando si cambia la soluzione tampone. </li><li> Risciacquare il tessuto in 10 ml di PBS a 70 rpm e 37 ° C durante la notte. Ripetere questo passaggio 3 volte e rimuovere il gel in eccesso dal tessuto quando si cambia la soluzione tampone. </li><li> Incubare il tessuto chiarito in 80% glicerolo a 70 rpm e 37 ° C durante la notte. </li><li> Conservare il tessuto tinto fluorescente a 4 ° C prima di microscopia confocale. </li></ol>

<ol><li>Applegate, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+the+sea+lamprey+%28Petromyzon+marinus%29+in+Michigan%5BTitle%5D)+AND+%22US+Fish+and+Wildlife+Service+Special+Science+Report+on+Fishery+Service%22%5BJournal%5D)">Natural history of the sea lamprey (Petromyzon marinus) in Michigan.</a> US Fish and Wildlife Service Special Science Report on Fishery Service. (55), (1950).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questo protocollo è modificato da un nuovo metodo chiamato &quot;chiarezza&quot; 12, che reticola tessuto intatto con poliacrilammide per formare un idrogel nanoporoso, e poi strappa via la membrana plasmatica del tessuto per ottenere la trasparenza ottica e permeabilità macromolecolare. &quot;CHIAREZZA&quot; permette l&#39;imaging intatto tessuto di lungo raggio di proiezione e il cablaggio del circuito locale nel sistema nervoso. Questo nuovo metodo può essere usato per visualizzare l&#39;intero sistema bil...

Lampreda di mare si sviluppano attraverso tre distinte fasi di vita di 1,2. Larvale lampreda di mare (L) trascorrono più tempo in tane come filtratori bentonici. Dopo aver attraversato sette stadi metamorfici di drammatici cambiamenti nella morfologia e riorganizzazione in organi interni 3 esterni, il novellame risultanti (JV) entrano in una fase parassitaria nel corso della quale si nutrono di sangue e fluidi tissutali di pesce ospitante, l&#39;aumento della massa corporea più di 100 volte . Dopo la 1.0 to 1,5 anni di alimentazione sul pesce ospite in mare o grandi laghi, adulti cessano alimentazione durante la primavera e migrano nei fiumi per deporre le uova e poi muoiono 1,2. Durante la metamorfosi, il fegato lampreda di mare perde la cistifellea e l&#39;intero albero biliare, un fenotipo mutante evolutivo che imita la malattia neonato umano atresia delle vie biliari. Infant atresia biliare è una rara malattia del fegato pediatrico a gravi complicazioni mediche 4,5,6,7, 8,9,10, ma la patogenesi ed eziologia di atresia biliare sono in gran parte sconosciuti 4. I pazienti con atresia biliare muoiono entro due anni dopo la nascita se non viene eseguito l&#39;intervento chirurgico (procedura Kasai) 5. Successivamente, questi pazienti richiedono una gestione clinica e spesso trapianto di fegato 6. Molte teorie di atresia biliare eziopatogenesi sono stati proposti, come l&#39;infezione virale, malformazione congenita, malattia autoimmune, e insulto tossico. Tuttavia, il contributo di ciascuno allo sviluppo di atresia biliare rimane inconcludente 7,8,9,10. A differenza dei bambini che soffrono patologico atresia delle vie biliari, lampreda di mare che formano oggetto evolutivamente programmato atresia delle vie biliari senza una necroinfiammazione, fibrosi o cirrosi 10. Gli animali possono soffrire colestasi transitorio durante questo processo 10, ma adattarsi a questa condizione dello sviluppovia de novo sintesi e secrezione di sali biliari nell&#39;intestino dopo sviluppo atresia biliare, oltre ai meccanismi noti come la riduzione della sintesi di sali biliari nel fegato 11. Questo processo di sviluppo in lampreda di mare offre l&#39;opportunità unica nota di esaminare la progressione di atresia biliare. Un metodo di nuova concezione denominato &quot;CHIAREZZA&quot; permette di imaging ad alta risoluzione in complessi sistemi nervosi dei mammiferi trasformando tessuto intatto in un idrogel nanoporosa otticamente trasparente 12. Utilizzando mare fegato lampreda e un protocollo CLARITY modificato, imaging intatto tessuto della degenerazione biliare può essere documentata in tutta metamorfosi fegato.

<table><tbody><tr><td>40% acrilammide&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0140</td><td></td></tr><tr><td>2% bis-acrilammide&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0142</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0800</td><td></td></tr><tr><td>persolfato di ammonio&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A3678-25G</td><td></td></tr><tr><td>acido borico</td><td>Sigma</td><td>B7901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>saponina&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>sodio dodecil solfato&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>L337-500G</td><td></td></tr><tr><td>fosfato di sodio (monobasico)</td><td>Sigma</td><td>04269-1KG</td><td></td></tr><tr><td>fosfato di sodio (bibasico)</td><td>Sigma</td><td>S5136-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>glicerolo&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G9012-500ML</td><td></td></tr><tr><td>16% paraformaldeide&nbsp;</td><td>Microscopia elettronica Sciences</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>pellet NaOH&nbsp;</td><td>EMD</td><td>SX0590-3</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga da 15 ml</td> Strumenti di dissezione <td>di qualsiasi marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Qualsiasi marca</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

un metodo chiarimento nuovo per visualizzare biliare degenerazione durante fegato metamorfosi in mare lamprey ( petromyzon marinus)

A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey (Petromyzon marinus)

Atresia biliare è una rara malattia dell&#39;infanzia, con una stima di 1 a 15.000 frequenza nel sud-est degli Stati Uniti, ma più comune nei paesi dell&#39;Asia orientale, con una frequenza riportata di 1 su 5.000 in Taiwan. Anche se si sa molto circa la gestione di atresia biliare, la sua patogenesi è ancora sfuggente. La lampreda di mare (Petromyzon marinus) offre un&#39;opportunità unica per esaminare il meccanismo e la progressione della degenerazione biliare. Lampreda di mare sviluppare attraverso tre fasi della vita distinte: larve, parassiti, e adulti. Durante la transizione da larve di parassiti giovanile, lampreda di mare subiscono metamorfosi con la riorganizzazione drammatica e rimodellamento in morfologia esterna e gli organi interni. Nel fegato, l&#39;intero sistema biliare è perso, compresa la cistifellea e l&#39;albero biliare. Un metodo di nuova concezione denominato &quot;CHIAREZZA&quot; è stata modificata per chiarire l&#39;intero fegato e il bivio con l&#39;intestino in metamorfico lampreda di mare. Ilprocesso di degenerazione biliare è stato visualizzato e discernimento durante la lampreda di mare metamorfosi mediante scansione laser microscopia confocale. Questo metodo fornisce un potente strumento per studiare atresia biliare in un modello animale unico.

Diversi importanti eventi evolutivi si verificano nel sistema epatobiliare durante la lampreda di mare metamorfosi. Il dotto biliare e la cistifellea apoptosi e degenerata (Figura 1). Combinando il metodo chiarimento modificato e colorazione con fegato marker delle cellule citocheratina 19 (CK19, presente in entrambi i colangiociti ed epatociti prima e dopo la metamorfosi 13) e anti-apoptotica Bcl2 marcatore utilizzando la microscopia confocale, l&#39;intero sistema biliare è stato catturato ...

Lampreda di mare perde la cistifellea e vie biliari durante la metamorfosi, un processo simile a atresia biliare umano. Un nuovo metodo di fissazione e chiarificazione (CLARITY) è stato modificato per visualizzare l&#39;intero albero biliare mediante scansione laser microscopia confocale. Questo metodo fornisce un potente strumento per studiare la degenerazione biliare.

Un metodo Chiarimento Nuovo per visualizzare biliare degenerazione Durante fegato Metamorfosi in mare Lamprey ( Petromyzon marinus)

Biliary atresia is a rare disease of infancy, with an estimated 1 in 15,000 frequency in the southeast United States, but more common in East Asian ...

L'obiettivo generale di questa procedura è chiarificare l'intero fegato e la giunzione con l'intestino per analisi globali, strutturali e cellulari della degenerazione biliare in C lamprey in metamorfosi. Questo viene ottenuto fissando innanzitutto i tessuti in una soluzione monomerica di idrogel.Successivamente, l'idrogel viene polimerizzato con i tessuti fissati. Quindi, la membrana plasmatica del tessuto fissato viene rimossa e il tessuto diventa trasparente. Infine, viene eseguita una colorazione immunofluorescente e, in ultima analisi, viene utilizzata la microscopia a scansione laser confocale per mostrare i cambiamenti strutturali e cellulari globali durante la degenerazione biliare nella lampreda metamorfica c Lampry.Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo biomedico, come ad esempio i connettomi nel sistema nervoso centrale e, nel nostro caso, la degenerazione biliare durante la metamorfosi allo stadio di punto sierologico. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia o alla diagnosi dell'atresia biliare umana, poiché questa rara malattia congenita nei neonati condivide caratteristiche simili con la degenerazione dell'ary durante la metamorfosi allo stadio di punto sierologico. Abbiamo avuto per la prima volta l'idea di questo metodo quando abbiamo trovato un articolo su Nature e abbiamo presentato il video online durante la riunione del laboratorio, che illustrerà la procedura; la dimostrazione sarà effettuata da Ann Scott, una studentessa laureata del nostro laboratorio, dopo aver preparato la soluzione salina tamponata al fosfato e il tampone fosfato, o pb, secondo il protocollo descritto nel testo.In una cappa, preparare 400 millilitri di idrogel mescolando acqua distillata, acrilamide al 40%, bis-acrilamide al 2%, PBS 10X, paraformaldeide al 16%, saponina e persolfato di ammonio. Preparare un litro di soluzione di chiarificazione composta da SDS al 4% e acido borico 0,2 molare, e preparare 500 millilitri di glicerolo all'80% nella cappa. Aliquotare 10 millilitri di soluzione monomerica di idrogel in provette centrifuga da 15 millilitri.Dissezionare il campione di tessuto e posizionare il tessuto in ogni provetta contenente fissativo idrogel a quattro gradi Celsius per due giorni. Dopo l'incubazione sotto cappa, polimerizzare il tessuto fissato aggiungendo cinque microlitri di temid. Quindi mescolare accuratamente e lasciare incubare i campioni a temperatura ambiente per due o tre ore.Dopo l'incubazione, rimuovere accuratamente il gel in eccesso per chiarificare i campioni di tessuto. Posizionare ciascun campione in 15 millilitri di soluzione chiarente e incubare a 50 gradi Celsius e 70 giri al minuto per diversi giorni, fino a quando non diventano trasparenti. Cambiare la soluzione chiarente almeno una volta al giorno e rimuovere qualsiasi gel in eccesso.Trasferire i campioni in 15 millilitri di PB 0,1 M con 0,1% di Triton X-100 a 37 gradi Celsius e 70 giri al minuto per tutta la notte. Ripetere l'incubazione altre due volte con tampone fresco. Ora che il tessuto è stato chiarificato e privato di qualsiasi gel in eccesso, immergere i campioni nell'anticorpo primario in PB con Triton X-100 e incubare a 37 gradi Celsius e 70 giri al minuto per due giorni. Dopo l'incubazione, utilizzare 15 millilitri di PB con 0,1% di Triton X-100 per lavare i campioni di tessuto a 37 gradi Celsius e 70 giri al minuto per tutta la notte.Ripetere il lavaggio per tre volte; dopo aver rimosso l'ultimo tampone di lavaggio, aggiungere la soluzione di anticorpo secondario fluorescente in PB con 0,1% Trix 100 e siero bloccante e incubare al buio a 37 gradi Celsius e 70 giri al minuto per un giorno. Dopo aver lavato i campioni tre volte in 10 millilitri di PB con Tritton X 100 a 37 gradi Celsius e 70 giri al minuto durante la notte, eseguire tre lavaggi notturni in PBS. Infine, incubare il tessuto chiarificato in glicerolo al 80% coperto con stagnola durante la notte.L'acquisizione di immagini mediante microscopia confocale viene quindi eseguita al buio o in luce fioca, anche se in questo video le luci sono accese per fini di visualizzazione. Diversi eventi di sviluppo importanti si verificano nel sistema biliare epatico durante la metamorfosi della lampreda, ad esempio, come mostrato qui, il dotto biliare e la cistifellea subiscono apoptosi e degenerano. Dopo aver utilizzato il metodo di chiarificazione modificato e aver effettuato la colorazione con il marcatore delle cellule epatiche citocheratina 19 e con il marcatore antiapoptotico BCL2, è stata impiegata la microscopia confocale a scansione laser per eseguire sezioni ottiche attraverso il fegato integro.La colorazione ha rivelato che il processo degenerativo si verifica negli stadi metamorfici dal due al quattro. I pannelli superiori provengono dall'estremità anteriore e quelli inferiori dall'estremità posteriore. Qui viene mostrato l'albero biliare e qui si osservano cellule apoptotiche scure dall'aspetto dendritico e i canalicoli circostanti e i dotti epatici nel fegato.Questa figura rappresenta immagini tridimensionali ricostruite a partire da serie Z confocali di tre fegati, prelevati in stadi metamorfici compresi tra il secondo e il terzo, marcati con anticorpi diretti contro la citocheratina 19 e BCL2; l'albero biliare e le cellule apoptotiche scure dall'aspetto dendritico, insieme ai canalicoli circostanti e ai dotti biliari, sono indicati rispettivamente da frecce bianche e nere. Qui è mostrata una sezione ottica confocale dei dotti biliari di un campione in stadi metamorfici compresi tra il secondo e il terzo, con goccioline biliari nel lume. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come chiarificare l'intero tessuto per ulteriori analisi di imaging.Non dimenticare che lavorare con paraform, aldeidi e soluzioni di poliacrilamide può essere estremamente pericoloso, e precauzioni come indossare guanti e utilizzare la cappa chimica devono sempre essere adottate durante l'esecuzione di questa procedura.

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Per aiutare a valutare i meccanismi molecolari alla base della rigenerazione epatica guidata dalle vie biliari del pesce zebra, abbiamo stabilito un modello di danno epatico in cui gli epatociti che esprimono nitroreduttasi vengono geneticamente ablati dopo il trattamento con metronidazolo.  In questo protocollo, descriviamo come manipolare, monitorare e analizzare abilmente l'ablazione degli epatociti e la rigenerazione epatica indotta dalle vie biliari.

Ablazione specifiche Hepatocyte in Zebrafish allo Studio biliare-driven Liver Regeneration

Lo scheletro branchiale, compresi i rastrelli branchiali, i denti faringei e le ossa branchiali, funge da sito primario di trasformazione alimentare nella maggior parte dei pesci. Qui descriviamo un protocollo per sezionare e montare in piano questo scheletro interno in spinarelli a tre spine. Questo metodo è applicabile anche a una varietà di altre specie ittiche.

Dissezione e Flat-montaggio del Threespine Stickleback branchiale scheletro

I pesci zebra stanno emergendo come un valido modello di elaborazione dei lipidi alimentari e di malattie metaboliche. Vengono descritti i protocolli di mangimi larvali ricchi di lipidi, l'imaging dal vivo di analoghi lipidici fluorescenti dietetici e la quantificazione dell'assunzione di cibo. Queste tecniche possono essere applicate a una varietà di tecniche di screening, imaging e indagine basata su ipotesi.

Alto contenuto di grassi alimentazione paradigma per larvale Zebrafish: Alimentazione, l&#39;imaging dal vivo, e la quantificazione del cibo

Qui, presentiamo un protocollo per isolare e caratterizzare la struttura, la potenza olfattiva e la risposta comportamentale dei composti di feromone presunto di lamprede di mare.

L'identificazione di feromoni Petromyzon marinus mediante frazionamento analisi biologica-Guida

Qui, presentiamo una serie standardizzata dei protocolli per osservare il solco superiore oculare, una struttura recentemente identificato, evolutivamente conservata nell'occhio dei vertebrati. Utilizzando larve di zebrafish, dimostriamo le tecniche necessarie per identificare i fattori che contribuiscono alla formazione e alla chiusura del solco superiore oculare.

Visualizzazione del solco superiore oculare durante l'embriogenesi Danio rerio

Vi presentiamo un metodo piuttosto semplice e sensibile per la quantificazione accurata della densità del condotto biliare nel fegato del topo. Questo metodo può aiutare a determinare gli effetti dei modificatori genetici e ambientali e l'efficacia delle potenziali terapie nei modelli murini delle malattie biliari.

Determinazione della densità del dotto biliare nel fegato del topo

Qui dimostriamo un metodo per quantificare le dimensioni del fegato nel pesce zebra larvale, fornendo un modo per valutare gli effetti delle manipolazioni genetiche e farmacologiche sulla crescita e lo sviluppo del fegato.

Quantificare le dimensioni del fegato nel pesce zebra Larval utilizzando la microscopia Brightfield

La rigenerazione del muscolo scheletrico è guidata dalle cellule staminali muscolari residenti nei tessuti, che sono compromesse in molte malattie muscolari come la distrofia muscolare, e questo si traduce nell'incapacità del muscolo di rigenerarsi. Qui, descriviamo un protocollo che consente l'esame della rigenerazione muscolare in modelli di zebrafish di malattia muscolare.

Esame della rigenerazione muscolare nei modelli zebrafish di malattia muscolare

Questo protocollo descrive la procedura per rimuovere il lobo ventrale del fegato nel pesce zebra adulto per consentire lo studio della rigenerazione epatica.

Epatotectomia parziale nel pesce zebra adulto

Questo protocollo descrive la raccolta e la visualizzazione delle squame elasmoidi del pesce zebra durante la rigenerazione in vivo . Inoltre, viene presentata la coltura ex vivo di queste scaglie fino a 7 giorni dopo la raccolta.

Rigenerazione delle squame di zebrafish in toto e cultura delle squame ex vivo

Scopri il metodo CLARITY modificato per visualizzare la degenerazione biliare durante la metamorfosi epatica della lampetra marina Petromyzon marinus. Questa tecnica aiuta a studiare l'atrofia biliare umana.

Un metodo Chiarimento Nuovo per visualizzare biliare degenerazione Durante fegato Metamorfosi in mare Lamprey ( Petromyzon marinus) (Video) | JoVE Journal

Un metodo Chiarimento Nuovo per visualizzare biliare degenerazione Durante fegato Metamorfosi in mare Lamprey ( Petromyzon marinus)

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