Name: Un test funzionale per Gap giunzionale esame; Elettroporazione di cellule aderenti su indio-Tin Oxide (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Scopri l'elettroporazione di cellule aderenti su ossido di indio-stagno per studiare la comunicazione giunzionale intercellulare. Questo metodo permette di analizzare le gap junctions in biologia cellulare.

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Ringraziamo Lowell Cochran per l'assistenza esperta in videografia. L'assistenza finanziaria del Canadian Institutes of Health Research (CIHR), della Canadian Breast Cancer Foundation (CBCF, Ontario Chapter), del Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC), della Canadian Breast Cancer Research Alliance, dell'Ontario Centers of Excellence, del Breast Cancer Action Kingston e del Clare Nelson bequest fund attraverso sovvenzioni a LR è ringraziata. SG è stato il destinatario di una borsa di studio NSERC. MG è stato supportato da una borsa di studio post-dottorato del Breast Cancer Program dell'esercito degli Stati Uniti, del Ministero della Ricerca e dell'Innovazione della Provincia dell'Ontario e del Comitato consultivo di ricerca della Queen's University.

1 placcatura le cellule del elettroporazione Chambers <ol><li> In una cappa a flusso laminare, trypsinize le celle utilizzando una tecnica sterile, come al solito. NOTA: E &#39;molto importante eliminare mediante centrifugazione tutte le tracce di tripsina, perché possono ostacolare la diffusione delle cellule sul vetro, quindi la formazione di adherens e giunzioni. </li><li> Pipettare 1 ml di sospensione cellulare nelle camere di elettroporazione sterili forniti con il elettroporatore in situ (Figura 1), e posto a 37 ° C, CO 2 incubatore. NOTA: l&#39;adesione delle cellule può essere migliorata placcatura su fibronectina, collagene, poli-lisina o di cellule e tessuti adesivo (vedi Materiali Tabella). </li><li> Quando le cellule hanno formato uno strato confluente sono pronti per l&#39;esame GJIC. </li></ol> 2 elettroporazione Procedura Elettroporazione per l&#39;esame GJIC può essere condotta al di fuori di una cappa a flusso laminare,dal momento che richiede solo pochi minuti. Se sono necessari tempi di incubazione più lunghi per un esperimento specifico, allora può essere condotta interamente in una cappa a flusso laminare. In tutti i casi, le sezioni dove si coltivano le cellule devono essere sterili. <ol><li> Preparare una / ml soluzione gialla Lucifero 5 mg: sciogliere 10 mg di polvere LY (fornito con il elettroporatore) in 2 ml di terreno di coltura privo di calcio. Per esperimenti che richiedono tempi di incubazione più lunghi, filtro-sterilizzare la soluzione e conservare a 4 ° C. </li><li> Aspirare il terreno di crescita e lavare le cellule con terreno privo di calcio, facendo attenzione a non graffiare il monostrato o asciugare le cellule. Se le cellule sono asciugati solito hanno nuclei più scuri e raccogliere LY, senza elettroporazione. L&#39;effetto è più pronunciato nel mezzo della slitta che è più esposto a correnti d&#39;aria (Figura 4F). </li><li> Con una pipetta Eppendorf, pipetta la soluzione colorante per le cellule (400 microlitri per tutta la camera), sul bordo della camera, being attenzione a non toccare lo strato di cellule. </li><li> Posizionare la camera nel supporto fornito con il elettroporatore e applicare un impulso della forza appropriata (vedi discussione). </li><li> Aspirare accuratamente alcuni della soluzione LY. Può essere riutilizzato una seconda volta per esperimenti meno importanti. </li><li> Aggiungi DMEM privo di calcio contenente siero dializzato del 10%. </li><li> Incubare le cellule per 3-5 minuti in incubatrice per consentire il trasferimento colorante attraverso giunzioni gap. NOTA: L&#39;inclusione di siero dializzato, a questo punto aiuta chiusura dei pori. </li><li> Lavare il colorante costituite in società con DMEM senza calcio per l&#39;osservazione di cellule vive. In alternativa, le cellule possono essere fissate in questa fase, attraverso l&#39;aggiunta di 4% di formaldeide al pozzo, poi lavate con PBS (soluzione salina tamponata con fosfato). In tutti i casi il lavaggio deve rimuovere tutta sfondo. NOTA: In esperimenti preliminari per determinare le condizioni ottimali, se la tensione è troppo bassa, allora è possibile lasciare che le cellule recuperare nel incubator per alcuni minuti e l&#39;elettroporazione stesso vetrino una seconda volta, per risparmiare nel costo di diapositive. </li></ol> 3 Esame microscopico <ol><li> Osservare le cellule sotto illuminazione a fluorescenza, utilizzando un microscopio invertito equipaggiato con il filtro appropriato per il colorante utilizzato. Per Lucifero giallo, eccitazione è 423nm, 555nm emissione, filtro WBV per un microscopio Nikon IX70. </li><li> Eliminare effetti menisco mettendo un vetro di copertura antiscivolo sulla parte superiore della plastica e, dopo il riempimento al top con il liquido, per esaminare la morfologia delle cellule in contrasto di fase. Per le foto migliori, il pozzo può essere staccato dalla diapositiva, e il coprioggetto posto sul telaio. Per cellule fissate, il pozzo può essere riempito con glicerolo per l&#39;osservazione microscopica, mentre per le cellule vive deve essere riempito con terreno di crescita. Attenzione: Il lavaggio e la fotografia è più facile se le cellule vengono fissate con formaldeide a seguito del trasferimento del colorante (precedente punto 2.7). Se le cellule sonot fissato, la fluorescenza viene eliminata dalle cellule entro circa 60 minuti a seconda del tipo di cellula, la tensione e la quantità di LY introdotto mentre nelle cellule fissate fluorescenza viene mantenuta per diverse ore. Tuttavia, fluorescenza svanisce o si dissolve dopo O / N incubazione, anche in cellule fissate. Per questo motivo, illustrazioni, devono essere prese subito dopo l&#39;elettroporazione (Figura 2). </li></ol> 4. quantificazione di comunicazione intercellulare <ol><li> Fotografa le cellule con un obiettivo 20x in fluorescenza e contrasto di fase (Figura 3). </li><li> Identificare e contrassegnare con una stella le cellule elettroporate al confine con la zona non elettroporate (figura 2, freccia, bordo elettroporazione). </li><li> Identificare e segnare con un punto le cellule fluorescenti sul lato non-elettroporate, in cui il colorante è trasferito attraverso giunzioni gap (Figure 3A e 3B). </li><li> Dividere il numero totale dicellule fluorescenti sulla zona non elettroporate per il numero di cellule elettroporate lungo il bordo (Figure 3A e 3B). NOTA: Il trasferimento di almeno 200 cellule elettroporate di frontiera contigue viene calcolato per ogni esperimento. Il numero ottenuto è il valore GJIC. </li></ol>

<ol><li>Raptis, L., et al. Electroporation of Adherent Cells in Situ for the Study of Signal Transduction and Gap Junctional Communication. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRaptis%2C+L+%22Electroporation+protocols%22">Electroporation protocols</a>. , The Humana Press Inc. edited by S Li 167-183 (2008).</li>
<li>Giorgetti-Peraldi, S., Ottinger, E., Wolf, G., Ye, B., Burke, T. R., Shoelson, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+effects+of+phosphotyrosine-binding+domain+inhibitors+on+insulin+receptor+signalling+and+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular effects of phosphotyrosine-binding domain inhibitors on insulin receptor signalling and trafficking.</a> Mol Cell Biol. 17, 1180-1188 (1997).</li>
<li>Boccaccio, C., Ando, M., Tamagnone, L., Bardelli, A., Michielli, P., Battistini, C., Comoglio, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+epithelial+tubules+by+growth+factor+HGF+depends+on+the+STAT+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Induction of epithelial tubules by growth factor HGF depends on the STAT pathway.</a> Nature. 391, 285-288 (1998).</li>
<li>Bardelli, A., Longati, P., Gramaglia, D., Basilico, C., Tamagnone, L., Giordano, S., Ballinari, D., Michieli, P., Comoglio, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uncoupling+signal+transducers+from+oncogenic+MET+mutants+abrogates+cell+transformation+and+inhibits+invasive+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Uncoupling signal transducers from oncogenic MET mutants abrogates cell transformation and inhibits invasive growth.</a> Proc Nat Acad Sci USA. 95, 14379-14383 (1998).</li>
<li>Gambarotta, G., Boccaccio, C., Giordano, S., Ando, M., Stella, M. C., Comoglio, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ets+up-regulates+met+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Ets up-regulates met transcription.</a> Oncogene. 13, 1911-1917 (1996).</li>
<li>Arulanandam, R., Vultur, A., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfection+techniques+affecting+Stat3+activity+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Transfection techniques affecting Stat3 activity levels.</a> Anal Biochem. 338 (1), 83-89 (2005).</li>
<li>Boussiotis, V. A., Freeman, G. J., Berezovskaya, A., Barber, D. L., Nadler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+human+T+cell+anergy%3A+blocking+of+IL-2+gene+transcription+by+activated+Rap1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Maintenance of human T cell anergy: blocking of IL-2 gene transcription by activated Rap1.</a> Science. 278 (5335), 124-128 (1997).</li>
<li>Brownell, H. L., Firth, K. L., Kawauchi, K., Delovitch, T. L., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+the+study+of+Ras+activation%3B+electroporation+of+%5Balpha-32%5DGTP%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel technique for the study of Ras activation; electroporation of [alpha-32]GTP.</a> DNA Cell Biol. 16, 103-110 (1997).</li>
<li>Tomai, E., Vultur, A., Balboa, V., Hsu, T., Brownell, H. L., Firth, K. L., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+electroporation+of+radioactive+compounds+into+adherent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ electroporation of radioactive compounds into adherent cells.</a> DNA Cell Biol. 22, 339-346 (2003).</li>
<li>Raptis, L., Vultur, A., Tomai, E., Brownell, H. L., Firth, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+electroporation+of+radioactive+nucleotides%3A+assessment+of+Ras+activity+and+32P-labelling+of+cellular+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+A+Laboratory+Handbook%2C+Celis%2C+Ed%22%5BJournal%5D)">In situ electroporation of radioactive nucleotides: assessment of Ras activity and 32P-labelling of cellular proteins.</a> Cell Biology A Laboratory Handbook, Celis, Ed. 43, 329-339 (2006).</li>
<li>Nakashima, N., Rose, D., Xiao, S., Egawa, K., Martin, S., Haruta, T., Saltiel, A. R., Olefsky, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functional+role+of+crk+II+in+actin+cytoskeleton+organization+and+mitogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The functional role of crk II in actin cytoskeleton organization and mitogenesis.</a> J Biol Chem. 274, 3001-3008 (1999).</li>
<li>Raptis, L., Firth, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+of+adherent+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Electroporation of adherent cells in situ.</a> DNA Cell Biol. 9, 615-621 (1990).</li>
<li>Marais, R., Spooner, R. A., Stribbling, S. M., Light, Y., Martin, J., Springer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+surface+tethered+enzyme+improves+efficiency+in+gene-directed+enzyme+prodrug+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A cell surface tethered enzyme improves efficiency in gene-directed enzyme prodrug therapy.</a> Nat Biotechnol. 15, 1373-1377 (1997).</li>
<li>Nielsen, M. S., Nygaard, A. L., Sorgen, P. L., Verma, V., Delmar, M., Holstein-Rathlou, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Compr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gap junctions.</a> Compr Physiol. 2 (3), 1981-2035 (2012).</li>
<li>Geletu, M., Trotman-Grant, A., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mind+the+gap%3B+regulation+of+gap+junctional%2C+intercellular+communication+by+the+SRC+oncogene+product+and+its+effectors%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mind the gap; regulation of gap junctional, intercellular communication by the SRC oncogene product and its effectors.</a> Anticancer Res. 32 (10), 4245-4250 (2012).</li>
<li>Vinken, M., Vanhaecke, T., Papeleu, P., Snykers, S., Henkens, T., Rogiers, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexins+and+their+channels+in+cell+growth+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Signal%22%5BJournal%5D)">Connexins and their channels in cell growth and cell death.</a> Cell Signal. 18 (5), 592-600 (2006).</li>
<li>Fouly, M. H., Trosko, J. E., Chang, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrape-loading+and+dye+transfer%3A+A+rapid+and+simple+technique+to+study+gap+junctional+intercellular+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Scrape-loading and dye transfer: A rapid and simple technique to study gap junctional intercellular communication.</a> Exp Cell Res. 168, 430-442 (1987).</li>
<li>Raptis, L., Brownell, H. L., Firth, K. L., MacKenzie, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+the+study+of+intercellular%2C+junctional+communication%3B+electroporation+of+adherent+cells+on+a+partly+conductive+slide%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+%26+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel technique for the study of intercellular, junctional communication; electroporation of adherent cells on a partly conductive slide.</a> DNA & Cell Biol. 13, 963-975 (1994).</li>
<li>Anagnostopoulou, A., Cao, J., Vultur, A., Firth, K. L., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+gap+junctional%2C+intercellular+communication+by+in+situ+electroporation+on+two+co-planar+indium-tin+oxide+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Examination of gap junctional, intercellular communication by in situ electroporation on two co-planar indium-tin oxide electrodes.</a> Mol Oncol. 1, 226-231 (2007).</li>
<li>Tomai, E., Brownell, H. L., Tufescu, T., Reid, K., Raptis, S., Campling, B. G., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+assay+for+intercellular%2C+junctional+communication+in+cultured+human+lung+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">A functional assay for intercellular, junctional communication in cultured human lung carcinoma cells.</a> Lab Invest. 78, 639-640 (1998).</li>
<li>Tomai, E., Brownell, H. L., Tufescu, T., Reid, K., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctional+communication+in+lung+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+Cancer%22%5BJournal%5D)">Gap junctional communication in lung carcinoma cells.</a> Lung Cancer. 23, 223-231 (1999).</li>
<li>Geletu, M., Chaize, C., Arulanandam, R., Vultur, A., Kowolik, C., Anagnostopoulou, A., Jove, R., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stat3+activity+is+required+for+gap+junctional+permeability+in+normal+epithelial+cells+and+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Stat3 activity is required for gap junctional permeability in normal epithelial cells and fibroblasts.</a> DNA Cell Biol. 28, 319-327 (2009).</li>
<li>Geletu, M., Arulanandam, R., Greer, S., Trotman-Grant, A., Tomai, E., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stat3+is+a+positive+regulator+of+gap+junctional+intercellular+communication+in+cultured%2C+human+lung+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Stat3 is a positive regulator of gap junctional intercellular communication in cultured, human lung carcinoma cells.</a> BMC Cancer. 12, 605(2012).</li>
<li>Brownell, H. L., Narsimhan, R., Corbley, M. J., Mann, V. M., Whitfield, J. F., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ras+is+involved+in+gap+junction+closure+in+mouse+fibroblasts+or+preadipocytes+but+not+in+differentiated+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+%26+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Ras is involved in gap junction closure in mouse fibroblasts or preadipocytes but not in differentiated adipocytes.</a> DNA & Cell Biol. 15, 443-451 (1996).</li>
<li>Weber, P. A., Chang, H. C., Spaeth, K. E., Nitsche, J. M., Nicholson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+permeability+of+gap+junction+channels+to+probes+of+different+size+is+dependent+on+connexin+composition+and+permeant-pore+affinities%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">The permeability of gap junction channels to probes of different size is dependent on connexin composition and permeant-pore affinities.</a> Biophys J. 87 (2), 958-973 (2004).</li>
<li>Graham, F. L., vander Eb, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+the+assay+of+infectivity+of+human+Adenovirus+5+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">A new technique for the assay of infectivity of human Adenovirus 5 DNA.</a> Virology. 52, 456-467 (1973).</li>
<li>Arulanandam, R., Vultur, A., Cao, J., Carefoot, E., Truesdell, P., Elliott, B., Larue, L., Feracci, H., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherin-cadherin+engagement+promotes+survival+via+Rac%2FCdc42+and+Stat3%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res+7%22%5BJournal%5D)">Cadherin-cadherin engagement promotes survival via Rac/Cdc42 and Stat3.</a> Mol Cancer Res 7. , 1310-1327 (2009).</li>
<li>Williams, E. J., Dunican, D. J., Green, P. J., Howell, F. V., Derossi, D., Walsh, F. S., Doherty, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+inhibition+of+growth+factor-stimulated+mitogenesis+by+a+cell-permeable+Grb2-binding+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Selective inhibition of growth factor-stimulated mitogenesis by a cell-permeable Grb2-binding peptide.</a> J. Biol. Chem. 272, 22349-22354 (1997).</li>
<li>Raptis, L., Brownell, H. L., Vultur, A. M., Ross, G., Tremblay, E., Elliott, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+inhibition+of+Growth+Factor-stimulated+ERK1%2F2+activation+in+intact+cells+by+electroporation+of+a+Grb2-SH2+binding+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Specific inhibition of Growth Factor-stimulated ERK1/2 activation in intact cells by electroporation of a Grb2-SH2 binding peptide.</a> Cell Growth Differ. 11, 293-303 (2000).</li>
<li>Meda, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+the+molecular+permeability+of+connexin+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Assaying the molecular permeability of connexin channels.</a> Methods Mol Biol. 154, 201-224 (2001).</li>
<li>Hofgaard, J. P., Mollerup, S., Holstein-Rathlou, N. H., Nielsen, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+gap+junctional+intercellular+communication+based+on+digital+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantification of gap junctional intercellular communication based on digital image analysis.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (2), R243-R247 (2009).</li>
<li>Raptis, L., Lamfrom, H., Benjamin, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cellular+phenotype+and+expression+of+polyomavirus+middle+T+antigen+in+rat+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cellular phenotype and expression of polyomavirus middle T antigen in rat fibroblasts.</a> Mol Cell Biol. 5, 2476-2486 (1985).</li>
<li>Raptis, L., Marcellus, R. C., Whitfield, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+membrane-associated+protein+kinase+C+activity+correlates+to+tumorigenicity+but+not+anchorage-independence+in+a+clone+of+mouse+NIH+3T3+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">High membrane-associated protein kinase C activity correlates to tumorigenicity but not anchorage-independence in a clone of mouse NIH 3T3 cells.</a> Exp Cell Res. 207, 152-154 (1993).</li>
<li>Vultur, A., Cao, J., Arulanandam, R., Turkson, J., Jove, R., Greer, P., Craig, A., Elliott, B. E., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+to+cell+adhesion+modulates+Stat3+activity+in+normal+and+breast+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Cell to cell adhesion modulates Stat3 activity in normal and breast carcinoma cells.</a> Oncogene. 23, 2600-2616 (2004).</li>
<li>Vultur, A., Arulanandam, R., Turkson, J., Niu, G., Jove, R., Raptis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stat3+is+required+for+full+neoplastic+transformation+by+the+Simian+Virus+40+Large+Tumor+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Stat3 is required for full neoplastic transformation by the Simian Virus 40 Large Tumor antigen.</a> Mol Biol Cell. 16, 3832-3846 (2005).</li>
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L'autore corrispondente è l'inventore di un brevetto detenuto dalla Queen's University, che è stato concesso in licenza a Cell Projects Inc. L'azienda o l'Università non hanno avuto alcuna influenza sul contenuto dell'articolo.

Passaggi critici nel protocollo Materiale elettroporate La purezza del materiale da elettroporate è molto importante. Se le cellule sono molto piatto, devono essere utilizzate concentrazioni più elevate di poi il colorante inseguimento (fino a 20 mg / ml per LY) e in tali casi, la purezza è ancora più importante che nelle cellule con una forma più sferica 1. Oltre LY una grande varietà di altri coloranti o molecole nonpermeant sono stati impiegati, come ad es...

L&#39;applicazione di corrente elettrica a una cella provoca la formazione di pori nella membrana cellulare, da un processo chiamato elettroporazione. I pori permettono il passaggio di una varietà di molecole nonpermeant attraverso la membrana. Il campo elettrico può essere controllata con precisione, in modo che i pori formati sono molto piccole e richiudersi rapidamente, con il minimo disturbo per la fisiologia cellulare. È interessante notare, cellule aderenti possono essere coltivate su un vetrino rivestito con ossido di indio-stagno conduttivo e trasparente (ITO) e elettroporate in situ, che si trova sulla superficie dove crescono, senza essere distaccato per essere elettroporate in sospensione. Le cellule possono crescere molto bene su questa superficie, e come sono collegati ed estese, osservazione microscopica dettagliata è possibile. Usando questa tecnica, piccole molecole nonpermeant possono essere introdotti istantaneamente e in sostanza il 100% delle cellule, che rende questa tecnica particolarmente adatto per studi sull&#39;attivazione di components di un percorso seguito stimolazione ligando di un recettore (recensito in 1). L&#39;elettroporazione è stata utilizzata principalmente per l&#39;introduzione di DNA (chiamato anche electrotransfection). Tuttavia, elettroporazione in situ può essere utile per l&#39;introduzione di una grande varietà di molecole, come peptidi 2-4, oligonucleotidi antisenso, come RNA, oligonucleotidi a doppio filamento di DNA esca per inibire fattore di trascrizione vincolante, o siRNA 3,5, 6, 7-10 nucleotidi radioattivi, proteine ​​11 12 o pro-farmaci 13. A seguito di elettroporazione, le cellule possono essere lisate per analisi biochimiche o fissate e colorate con anticorpi. Il rivestimento conduttivo ITO è molto sottile, 800-1,000Å, in modo che la crescita cellulare non è disturbato dalla differenza di altezza delle due superfici, come le cellule crescono lungo il bordo del rivestimento conduttivo. Questo offre il vantaggio che non electropciente cellule possono essere coltivate fianco a fianco con quelli elettroporate, per servire come controlli. Lo stesso approccio può essere utilizzato per l&#39;esame di spazi di giunzione, la comunicazione intercellulare (GJIC), come descritto nel video. Giunzioni sono canali che collegano gli interni di celle adiacenti 14. Gap giunzionale, comunicazione intercellulare svolge un ruolo importante nella formazione del tumore e metastasi, mentre oncogeni quali Src sopprimono GJIC 15,16. Per esaminare GJIC un colorante fluorescente, come Lucifero giallo (LY) è spesso introdotto in cellule in coltura tramite microiniezione o raschiare carico 17 e la diffusione del colorante nelle cellule vicine all &#39;osservazione microscopica sotto illuminazione a fluorescenza. Queste tecniche però invariabilmente causano danni alle cellule. Descriviamo ora una tecnica in cui le cellule sono coltivate su un vetrino che è parzialmente ricoperto di ITO 18. Un impulso elettrico è stato applicato in presenza di LY (o altri coloranti) cautilizzando la sua penetrazione nelle cellule in crescita da parte conduttiva della diapositiva, mentre la migrazione colorante per le adiacenti, cellule non elettroporate è stata osservata al microscopio con illuminazione a fluorescenza. Per evitare di cellule sensibili inquietanti che possono tendere a staccarsi dalla monostrato, un&#39;assemblea è stato progettato che non richiedono un elettrodo per essere posizionato sulla parte superiore delle cellule di applicare la corrente elettrica 19. Questo approccio offre la possibilità di quantificare GJIC in un gran numero di cellule, senza alcun disturbo rilevabile al metabolismo cellulare, come indicato dall&#39;assenza di un effetto sulla durata della fase G1 seguente siero stimolazione 12, aumento dei livelli di FOS protooncogene proteine ​​(Raptis, inedito) o due chinasi associate a stress cellulare, il maiale p38 o JNK / SAPK chinasi 1. Questo approccio ha reso possibile l&#39;esame del legame tra i livelli di espressione dell&#39;oncogene, trasformazione e GJIC 18, nonché l&#39;effetto di Src e Stat3 su GJIC in una varietà di tipi cellulari, comprese le cellule in coltura fresco da campioni di tumore del polmone 20-23. Inoltre, in elettroporazione situ con la configurazione descritta, che manca di un elettrodo superiore è stato impiegato con successo per la manifestazione di chiusura del gap junction sulla differenziazione adipocytic, anche se l&#39;attaccamento cellulare al substrato è ridotto in quella fase 19,24.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Cellgro http://www.cellgro.com/</td> <td>50-013-PB</td><td></td></tr><tr><td>DMEM senza iclone di calcio</td><td>(Thermo scientific: http://www.thermoscientific.com)</td><td>SH30319-01</td><td></td></tr><tr><td>Siero di vitello donatore&nbsp;</td><td>PAA: http://www.paa.com/</td> <td>Cat.# B15-008</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino PAA</td><td>: http://www.paa.com/</td> <td>Cat.# A15-751</td><td></td></tr><tr><td>Apparecchio di elettroporazione</td><td>Cell Projects Ltd Regno Unito: http://www.cellprojects.com/</td> <td>ACE-100</td><td></td></tr><tr><td>Chambers</td><td>Cell Projects Ltd Regno Unito</td><td>ACE-04-CC</td><td>4 pozzetti</td></tr><tr><td>Chambers</td><td>Cell Projects Ltd Regno Unito</td><td>ACE-08-CC</td><td>8 pozzetti</td></tr><tr><td>Lucifer Yellow</td><td>Cell Projects Ltd Regno Unito</td><td>ACE-25-LY</td><td>Elevata purezza</td></tr><tr><td>CelTak</td><td>BD Biosciences</td><td>354240</td><td>Adesivo cellulare e tissutale</td></tr><tr><td>Fibronectina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>Collagene</td><td>BD Biosciences</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>Poli-lisina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr></tbody></table>

un test funzionale per gap giunzionale esame; elettroporazione di cellule aderenti su indio-tin oxide

A Functional Assay for Gap Junctional Examination; Electroporation of Adherent Cells on Indium-Tin Oxide

In questa tecnica, le cellule vengono coltivate su un vetrino parzialmente rivestito con ossido di indio-stagno (ITO), un materiale trasparente ed elettricamente conduttivo. Una varietà di molecole, come peptidi o oligonucleotidi, può essere introdotta essenzialmente nel 100% delle cellule in modo non traumatico. Qui, descriviamo come può essere utilizzato per studiare la comunicazione giunzionale intercellulare. Il giallo lucifero penetra nelle cellule quando un impulso elettrico, applicato alla superficie conduttiva su cui stanno crescendo, provoca la formazione di pori attraverso la membrana cellulare. Questa è l'elettroporazione. Le cellule che crescono sulla superficie di vetro non conduttiva immediatamente adiacente alla regione elettroporata non assorbono il giallo di Lucifero per elettroporazione, ma acquisiscono il colorante fluorescente quando viene passato a loro attraverso giunzioni gap che le collegano alle celle elettroporate. I risultati del trasferimento del colorante da una cellula all'altra possono essere osservati al microscopio sotto l'illuminazione a fluorescenza. Questa tecnica consente di quantificare con precisione la comunicazione giunzionale gap. Inoltre, può essere utilizzato per l'introduzione di peptidi o altre molecole non permiche e il trasferimento di piccoli peptidi elettroporati attraverso giunzioni gap per inibire il segnale nelle celle adiacenti non elettroporate è una potente dimostrazione dell'inibizione del segnale.

La figura 2 mostra fegato di ratto cellule epiteliali T51B 22, elettroporate con LY e fotografati sotto fluorescenza (pannello A e B), o contrasto di fase (C) illuminazione, seguito fissaggio e lavaggio. Nel pannello A, il bordo dell&#39;area elettroporate è indicato in rosso. Il gradiente di fluorescenza a destra della linea rossa indica il trasferimento attraverso giunzioni gap. Nella Figura 3A e 3B, viene mostrata la quantificazione di comunicazione gap gi...

Questa presentazione dimostra un metodo in cui l'elettroporazione di cellule aderenti e coltivate viene utilizzata per lo studio della comunicazione intercellulare e giunzionale, mentre le cellule crescono su un vetrino rivestito con ossido di indio-stagno conduttivo e trasparente.

Un test funzionale per Gap giunzionale esame; Elettroporazione di cellule aderenti su indio-Tin Oxide

In this technique, cells are cultured on a glass slide that is partly coated with indium-tin oxide (ITO), a transparent, electrically conductive material. ...

L'elettroporazione è una tecnica in cui una corrente elettrica viene applicata a cellule vive per aprire temporaneamente dei pori sulla membrana cellulare. Attraverso questi pori, coloranti e altre molecole che normalmente non attraversano la membrana cellulare possono entrare nella cellula; i pori si richiudono rapidamente, senza causare danni alla cellula. Spiegheremo come è possibile sottoporre a elettroporazione cellule aderenti mentre crescono su un vetrino parzialmente rivestito con un materiale conduttivo e trasparente.Il materiale è ossido di indio e stagno, e quando conduce corrente elettrica, apre pori che permettono a un colorante di entrare nella cellula. È quindi possibile verificare se le cellule possiedono giunzioni comunicanti oppure no, e quantificarne il numero. Le giunzioni comunicanti sono canali piccoli che collegano gli interni di cellule adiacenti e permettono il passaggio di molecole piccole. Da tempo si riconosce che la comunicazione mediata da giunzioni comunicanti svolge numerose funzioni importanti nella cellula, inclusa la trasformazione neoplastica e la metastasi.Benvenuti in questa presentazione sui progetti cellulari su come eseguire l'elettroporazione di cellule aderenti utilizzando l'Insitu. Questa immagine mostra ciò che saremo in grado di fare: il colorante fluorescente di colore giallo è stato introdotto in cellule in crescita su un vetro trasparente e conduttivo. Fino a questa linea, la linea è più facile da vedere in contrasto di fase.Ecco qui. Si può osservare che il colorante si è diffuso attraverso le giunzioni comunicanti dalle cellule a sinistra, che sono state caricate con il colorante mediante elettroporazione, alle cellule a destra. Il risultato è un gradiente di fluorescenza; le cellule sono tryps.Dopo l'inizializzazione, trasferire in un tubo da centrifuga. È molto importante che le cellule siano ben distribuite poiché crescono nella camera. Per questo motivo, è preferibile centrifugare le cellule per rimuovere eventuali tracce di tripsina.Il mezzo con tracce di tripsina viene aspirato, le cellule sono risospese in circa un millilitro di mezzo di crescita e quindi seminate nella camera. Con una pipetta che contiene la sospensione cellulare, rimuovere il coperchio dalla camera e aggiungere le cellule goccia a goccia nella camera per facilitarne il trasporto. La camera viene quindi posizionata in una piastra di Petri da sei centimetri.La camera viene rimessa nell'incubatrice affinché le cellule possano crescere. Le cellule seminate si espanderanno correttamente e cresceranno fino a toccarsi e formare giunzioni comunicanti. Quando le cellule sono pronte per l'elettroporazione, impostare il generatore di impulsi in situ alle condizioni desiderate.Consultare il manuale per la descrizione del semplice processo di configurazione. Quando la tensione sull'insitu è impostata, la spia rossa sul tastierino si accenderà. Prendere le due bottiglie riscaldate di DMEM senza calcio dal bagno termostatato: una contiene DMEM senza calcio ma con siero dializzato, l'altra contiene DMEM.Senza calcio, tenere pronte le pipette caricate in modo più allentato con giallo nel pipettatore. Invece del sospiro, togliere le cellule dall'incubatore. Rimuovere il mezzo capovolgendolo nel becher di lavaggio inizialmente.Quindi applicare delicatamente sul tessuto un lavaggio con DMEM senza calcio, senza cercare di rimuovere completamente tutto il DMEM poiché le cellule potrebbero seccarsi. Aggiungere con attenzione il Lucifer yellow sulla barriera, evitando di disturbare le cellule ma abbastanza rapidamente da impedire che si secchino. Utilizzare 200 microlitri per ciascuna metà della camera.Mettere il coperchio sulla camera per l'analisi in situ, quindi caricarla nello slider. Assicurarsi che le linguette terminali della camera si inseriscano negli appositi alloggiamenti dello slider spingendo quest'ultimo. Inserire la camera nel supporto.Premere il pulsante di impulso sul tastierino del generatore di impulsi. Il LED sul generatore di impulsi e sul supporto della camera lampeggerà di rosso durante il processo di elettroporazione, quindi lampeggerà di verde per indicare che il ciclo di inizializzazione è completato. Riportare lo scorrimento sotto il supporto della camera ed estrarre la camera.Aspirare la maggior parte del Lucifer yellow per riutilizzarlo, avendo cura di non disidratare le cellule. Aggiungere DMEM senza calcio. Con siero dializzato, il siero favorisce la chiusura dei pori; la camera viene quindi rimessa nell'incubatore per permettere il trasferimento del Lucifer yellow attraverso le giunzioni comunicanti.Il tempo deve essere costante da un esperimento all'altro. Lo standard è di tre minuti. Versare il mezzo nel becher degli scarti.Aggiungere la soluzione fissativa al 4% di formaldeide con una pipetta o una pipetta Pasteur. Attendere a temperatura ambiente per almeno due minuti. Versare via la formaldeide e risciacquare alcune volte con PBS. Le cellule sono fissate al vetro, quindi c'è un rischio minimo che si stacchino durante il lavaggio.Per poter osservare le cellule in contrasto di fase, è importante posizionare un coprivetrino sopra la camera. Riempire la camera con PBS formando un menisco convesso. Evitando bolle d'aria, posizionare il coprivetrino.Non preoccuparsi se il PBS trabocca. Assorbire semplicemente l'eccesso di PBS con carta da filtro. È necessario un microscopio fluorescente invertito, preferibilmente dotato di contrasto di fase e di un blocco filtro per la Lucifer yellow. In contrasto di fase, cercare il bordo della zona elettroporata.Verranno visualizzate due linee sotto le cellule in fluorescenza. Su metà del vetrino le cellule emetteranno una fluorescenza intensa. La linea più vicina alle cellule luminose corrisponde al margine della zona elettroporata.Ogni fluorescenza aggiuntiva è dovuta al trasferimento di Lucifer yellow attraverso i giunzioni comunicanti. Ad esempio, questa immagine di cellule epiteliali mostra cellule che sono state elettroporate sul lato sinistro dell'immagine, trasferendo il Lucifer yellow alle cellule vicine non elettroporate, creando un gradiente di cellule luminose che si estende dal bordo del rivestimento conduttivo verso destra. Questa immagine mostra lo stesso campo di cellule in contrasto di fase.Si noti che la linea X è visibile molto chiaramente. Una misura quantitativa del trasferimento giunzionale può essere effettuata manualmente analizzando le immagini in fluorescenza e in contrasto di fase delle cellule elettroporate. Le stelle lungo il bordo dell'area conduttiva sono considerate cellule donatrici.Sono stati sottoposti ad elettroporazione e hanno assunto il tratto giallo. Trasferiscono il tratto giallo alle cellule vicine sulla destra, che a loro volta lo trasmettono. In quantità ancora più ridotte ulteriormente.Il rapporto tra punti e stelle, 41 a otto in questo caso, può produrre un numero utile per confrontare l'entità del trasferimento giunzionale in questa situazione. 5,1 è l'indice delle giunzioni comunicanti. Un'alternativa al conteggio manuale delle cellule consiste nell'utilizzare un software di analisi delle immagini per misurare le quantità relative di fluorescenza lungo il lato non elettrizzato del confine cellulare elettroporato.Queste cellule non possiedono giunzioni comunicanti. Qui si trova il margine destro dell'area elettroporata. Si noti l'assenza di un gradiente di fluorescenza, che indica la mancanza di giunzioni comunicanti in contrasto di fase.È possibile vedere chiaramente tutte le cellule. Si noti che anche la linea X è chiaramente visibile. In questo esempio.Tutte le cellule nella camera sono state stimolate con il fattore di crescita epidermico EGF e, 10 minuti dopo, fissate e analizzate per il phospho arc. Si noti che le cellule colorate a destra non sono state elettroporate, mentre le cellule a sinistra fino a questa linea sono state elettroporate. Le cellule non elettroporate mostrano una colorazione bruna con un anticorpo anti-phospho irk e immunoperossidasi.Le cellule elettroporate non mostrano alcuna colorazione poiché il peptide fosforilato elettroporato ha bloccato il dominio SSH due di grab due e inibito la fosforilazione di EGF da parte di irk. Si noti la regione di tre o quattro lunghezze cellulari a destra della linea in cui le cellule non sono state ancora elettroporate ma non mostrano comunque colorazione. Queste sono cellule che hanno acquisito il peptide bloccante dalle loro vicine elettroporate attraverso le giunzioni comunicanti.Questa è la dimostrazione più convincente possibile che l'inibizione del segnale deve essere attribuita al peptide e non può essere un artefatto dell'elettroporazione. Poiché queste cellule non sono state sottoposte a elettroporazione, si tratta dello stesso campo mostrato in contrasto di fase. Si noti l'assenza di qualsiasi cambiamento nella morfologia dopo l'elettroporazione.In alcuni pazienti, la comunicazione tramite giunzioni a gap può essere quantificata con precisione in una vasta gamma di cellule coltivate. L'introduzione di peptidi per interrompere specifici percorsi di segnalazione rappresenta un approccio potente per valutare l'importanza in cellule vive di interazioni proteina-proteina precedentemente identificate mediante proteine purificate. Questo può essere il primo passo fondamentale nello sviluppo di farmaci a base peptidica.

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Elettroporazione basata su substrato poroso con monitoraggio dell'impedenza elettrica transepiteliale

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Un test funzionale per Gap giunzionale esame; Elettroporazione di cellule aderenti su indio-Tin Oxide

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