Name: Un laterizzazione Odore Learning Modello in ratti neonati per dissezione Formazione Neural circuiti Sostenere la memoria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-18T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 42 s
Description: Impara un modello lateralizzato di apprendimento olfattivo nei ratti neonati utilizzando l'occlusione acuta di una narice. Questo metodo permette di studiare i meccanismi neurali della memoria con controlli intra-animali.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Questo lavoro è stato supportato da una sovvenzione operativa CIHR (MOP-102624) a Q. Y. Ringraziamo la dott.ssa Carolyn Harley per le utili discussioni durante lo studio, il dott. Qinlong Hou, Amin Shakhawat e Andrea Darby-King per il supporto tecnico.

Sono utilizzati Sprague Dawley di ratto (Charles River) cuccioli di entrambi i sessi. Cucciolate sono abbattuti a 12 su PD1 (nascita essendo PD0). Le dighe sono mantenuti su una 12 ore di luce / buio ciclo con ad libitum l'accesso al cibo e all'acqua. Procedure sperimentali sono stati approvati dal Comitato Istituzionale Animal Care del Memorial University. 1 Nose Plug costruzione NOTA:. Questa procedura è stato adattato e modificato da Cummings et al (1997) 35. <ol><li> Aquire polietilene-20 tubo e filo di sutura di seta 3-0. </li><li> Tagliare un piccolo pezzo di polietilene-20 tubo di circa 0,8 mm. </li><li> Discussione sutura di seta attraverso la tubazione disposta in modo tale che vi sia filo su entrambi i lati della sezione del tubo. </li><li> Su una estremità del filo esterno del tappo, un nodo nel filo. </li><li> Estrarre la sezione della tubazione giù sopra il nodo nel thread. Il nodo dovrebbe presentare all'interno del tubo.</li><li> Tagliare le due estremità del filo in modo tale che ~ 2 mm filo sporge da un'estremità del tubo (vedere Figura 1A). </li></ol> 2 Naris occlusione prima di Formazione <ol><li> Rimuovere pup dalla diga e mettere in un piatto coperto custodito con biancheria da letto regolari. </li><li> Utilizzare un'applicazione punta di cotone per tamponare una gelatina anestetico locale, 2% Xylocaine, sulle narice da occluso. </li><li> Lasciare il cucciolo di riposare nel piatto per ~ 3 min. </li><li> Tenere il cucciolo delicatamente ma saldamente in mano non dominante. </li><li> Usando la mano dominante, prendere un tappo il naso e tamponare la stessa pappa anestetico locale intorno alla punta da cui il filo non sporga. Questo agirà sia come anestetico per eventuali dolori lievi associati con l'inserimento spina e agirà come un lubrificante all'interno della narice. NOTA: L'effetto di Xylocaine inizia entro un paio di minuti e dura 20-30 minuti. Pups in generale mostrano una buona tolleranza per l'inserimento spina dopo l'applicazione gelatina Xylocaine (minimum lottare e vocalizzazione). </li><li> Inserire delicatamente la spina naso tenendo saldamente il cucciolo e ruotando lentamente la spina con spinte molto dolci fino a quando la spina sia completamente inserita e solo il thread 2 millimetri sporge dalla narice (vedi Figura 1B). Non ci dovrebbero essere sanguinamento da entrambi narice durante questo processo. Sono esclusi e restituiti dighe Pups con sanguinamento durante l'inserimento spina naso </li><li> Consentire agli animali di riposare in questo piatto per 5 minuti in modo da abituare alla spina. </li><li> Rimuovere il cucciolo dal piatto assuefazione e iniziare il paradigma di condizionamento 24. </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig1highres.jpg" width="500"> Figura 1 Costruzione di un tappo naso. A) Schema che mostra le fasi di fare una spina naso. Un filo è tirato attraverso il tubo di polietilene; un nodo è fatto e PULportato al centro del tubo per bloccarlo; due estremità sono tagliate con un residuo di 2 mm su un'estremità del tubo. B) Vista frontale e laterale di un ratto con una spina naso in una narice. 3. Profumato Bedding Preparazione <ol><li> Indossando guanti nuovi e in una cappa aspirante per evitare la contaminazione odori, inserire 500 ml di biancheria da letto di trucioli di legno in un sacchetto di plastica. </li><li> Utilizzare una siringa per elaborare 0,3 ml di estratto di menta piperita, e spruzzare questo sopra la biancheria nel sacchetto di plastica. </li><li> Legare la borsa chiusa, agitare vigorosamente il sacchetto, e lasciare la biancheria da letto per riposare in borsa per 5 min. </li><li> Posizionare la biancheria profumata in modo chiaro, poco profondo, scatola acrilica di formazione (20 x 20 x 5 cm 3, Figura 2A) scoperto in una cappa aspirante per 5 minuti prima dell'uso. Una volta che la biancheria da letto viene preparato, scartare questi guanti, e non permettere questi guanti vengano a contatto con gli animali. </li><li> Posizionare la biancheria profumata in una scatola di plastica trasparente identici, e enAssicurarsi che non entri in contatto con la biancheria profumata o guanti utilizzati. </li></ol> 4. Odore condizionata Paradigm (Vedi immagine in figura 2A) Pups subiscono una singola sessione di condizionamento, il PD 6, o sessioni di prove multiple (una seduta al giorno, PD 3-6). <ol><li> Posizionare il cucciolo abituato a biancheria da letto profumato. Per il controllo degli odori solo (O / S -) cuccioli, lasciare questi cuccioli sulla biancheria da letto per 10 minuti, quindi passare al punto 4.5. Per la corsa sperimentale odore + (O / S +) cuccioli, continuano i seguenti passaggi in questa sezione. </li><li> Stroke il cucciolo per 30 secondi con un piccolo pennello. Usa movimenti circolari rapidi principalmente intorno alla regione posteriore del cucciolo. </li><li> Lasciare il cucciolo a riposare per 30 sec. </li><li> Ripetere i punti 4.2 e 4.3 per un totale di 10 min (cioè 10 coppie di carezze + odore). </li><li> Rimuovere pup dalla casella di condizionamento, rimuovere il tappo il naso e tornare il cucciolo alla diga. </li></ol> &lt;p class = "jove_title"&gt; 5. Lateralizzato Preferenza Odore Testing (Vedi immagine in figura 2B) Test avviene in vari momenti (ad esempio, 24 o 48 ore) a seguito della sessione di allenamento finale. Il test viene effettuato in una camera di acciaio inossidabile test (30 x 20 x 18 cm 3), che è posto sulla parte superiore di due scatole di formazione (training casella è descritto in 3.4), separate da una zona neutra 2 cm. Una scatola di formazione contiene biancheria da letto di menta profumata, mentre l'altra scatola contiene pulita, biancheria da letto inodore. Il pavimento della camera di prova è una griglia metallica, che viene poi ricoperto da un foglio rimovibile di rete plastica (Figura 2B). <ol><li> Preparare una menta piperita e una biancheria profumata ai sensi dell'articolo 3, e porre ogni casella sotto lati opposti della camera di prova, 2 cm l'uno dall'altro. Inserire la rete plastica sul pavimento metallo-griglia della camera di prova. </li><li> Rimuovere il cucciolo dalla diga e mettere una piccola quantità di grasso inodore ferma al silicone sulle nariceche è occluso durante l'allenamento. Re-applicare il grasso durante la prima procedura di test come necessario. NOTA: naris occlusione casuale durante l'allenamento e le prove possono essere considerate per evitare distorsioni. </li><li> Posizionare pup in zona neutra della camera di prova. </li><li> Lasciare il cucciolo di esplorare la camera per 1 minuto, registrando per quanto tempo il cucciolo ha speso sopra i due lati della camera (cioè più di menta piperita o di letti neutro profumato). </li><li> Lasciare il cucciolo a riposare per 1 minuto in una camera di contenimento di plastica coperto. </li><li> Ripetere i punti 5.2 e 5.3 per un totale di 10 min (cioè 5 prove di laboratorio, separati da 5 studi di riposo) commutazione l'orientamento iniziale del cucciolo nella camera per controllare per le preferenze di direzione. </li><li> Subito dopo il test, rimuovere il grasso dalla narice. </li><li> Inserire una noseplug polietilene nella narice opposta di cui al punto 2 e consentire agli animali di riposare per 10 min. </li><li> Testare il cucciolo ancora una volta come in 5.3 -5.6, rimuovere il tappo, e tornare il cucciolo alla diga. Rimuovere e pulire la rete di plastica della camera di test con etanolo al 95% e che il liquido evapori. Posizionare la maglia indietro prima di testare il prossimo cucciolo. NOTA: Applicare grasso al silicone al primo occlusione narice durante i test previene il rischio di sanguinamento e di stress associato con l'inserimento spina naso. </li></ol><img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig2highres.jpg" width="500"> Figura 2 odore precoce preferenza di formazione e test. A) la formazione degli odori precoce preferenza utilizzando odore + accarezzare paradigma. B) Due scelta odore test preferenza con biancheria da letto di menta piperita su un lato, il controllo di letti inodore sul lato opposto. Una zona neutra 2 cm è messo in mezzo. 6. testare l'efficacia del singolo Naris Occlusione nt "&gt; Questo esperimento viene eseguito per determinare se l'occlusione singola narice porta all'attivazione lateralizzato del sistema olfattivo. <ol><li> Eseguire occlusioni Naris unilaterali sul PD 6 o 7 cuccioli come descritto nella sezione 2. </li><li> Dopo ~ 5 min assuefazione, mettere il cucciolo in un contenitore di plastica coperto ed esporlo a 30 ml di olio di menta piperita puro imbevuti di un pezzo di tessuto per 10 min. </li><li> Subito dopo l'esposizione odore menta piperita, iniettare il cucciolo per via intraperitoneale (ip) con cloralio idrato (400 mg / kg) come anestetico generale o pentobarbitol, (150 mg / kg). </li><li> Una volta completamente anestetizzato (mostrando alcuna risposta alla coda o il piede pizzico), transcardiaca profumato il cucciolo con le soluzioni di ghiaccio-freddo di soluzione fisiologica (0,9%) per ~ 1 min, seguito da paraformaldeide (4%, disciolto in soluzione tampone fosfato 0.1 M, PBS ). </li><li> Dopo 10 min di paraformaldeide perfusione, raccogliere il cervello e metterlo in paraformaldeide notte a 4 ° C, poi transfer il cervello di una soluzione di saccarosio (20% in PBS) per altre 24 ore. </li><li> Tagliare le fette di cervello coronali a 30 micron di spessore, con un criostato. Raccogliere OB e PC fette e montare su vetrini rivestiti di gelatina, seguita da colorazione immunoistochimica standard per pCREB anticorpi 21,25,30. </li></ol> 7 Verifica del Reversibilità del singolo Naris Occlusione Questo esperimento test se l'effetto di blocco è reversibile a 24 ore dopo la rimozione del tappo naso. <ol><li> Eseguire occlusioni Naris unilaterali sul PD 6 o 7 cuccioli come descritto nella sezione 2. </li><li> Dopo 15 min (equivalente alla durata dell'occlusione narice durante l'allenamento - 5 min assuefazione + 10 min di formazione), rimuovere il tappo naso, e restituire il cucciolo alla diga. </li><li> 24 ore più tardi, esporre il cucciolo per l'odore di menta piperita in un contenitore di plastica coperto per 10 minuti come descritto al punto 6.2. </li><li> Seguire le stesse operazioni in settaioni 6,3-6,6. </li></ol>

<ol><li>Gregory, E. H., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+olfactory-guided+behavior+in+infant+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Development of olfactory-guided behavior in infant rats.</a> Physiol Behav. 6, 573-576 (1971).</li>
<li>Alberts, J. R., May, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonnutritive%2C+thermotactile+induction+of+filial+huddling+in+rat+pups%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Nonnutritive, thermotactile induction of filial huddling in rat pups.</a> Dev Psychobiol. 17, 161-181 (1984).</li>
<li>Galef, B. G., Kaner, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+maintenance+of+preference+for+natural+and+artificial+olfactory+stimuli+in+juvenile+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+Psychol%22%5BJournal%5D)">Establishment and maintenance of preference for natural and artificial olfactory stimuli in juvenile rats.</a> J Comp Physiol Psychol. 94, 588-595 (1980).</li>
<li>Johanson, I. B., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appetitive+learning+in+1-day-old+rat+pups%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Appetitive learning in 1-day-old rat pups.</a> Science. 205, 419-421 (1979).</li>
<li>Johanson, I. B., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appetitive+conditioning+in+neonatal+rats%3A+conditioned+orientation+to+a+novel+odor%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Appetitive conditioning in neonatal rats: conditioned orientation to a novel odor.</a> Dev Psychobiol. 15, 379-397 (1982).</li>
<li>Johanson, I. B., Teicher, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+of+an+odor+preference+in+3-day-old+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neural+Biol%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning of an odor preference in 3-day-old rats.</a> Behav Neural Biol. 29, 132-136 (1980).</li>
<li>McLean, J. H., Darby-King, A., Sullivan, R. M., King, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonergic+influence+on+olfactory+learning+in+the+neonate+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neural+Biol%22%5BJournal%5D)">Serotonergic influence on olfactory learning in the neonate rat.</a> Behav Neural Biol. 60, 152-162 (1993).</li>
<li>Moore, C. L., Power, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+in+maternal+care+and+individual+differences+in+play%2C+exploration%2C+and+grooming+of+juvenile+Norway+rat+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Variation in maternal care and individual differences in play, exploration, and grooming of juvenile Norway rat offspring.</a> Dev Psychobiol. 25, 165-182 (1992).</li>
<li>Pedersen, P. E., Williams, C. L., Blass, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+and+odor+conditioning+of+suckling+behavior+in+3-day-old+albino+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Psychol+Anim+Behav+Process%22%5BJournal%5D)">Activation and odor conditioning of suckling behavior in 3-day-old albino rats.</a> J Exp Psychol Anim Behav Process. 8, 329-341 (1982).</li>
<li>Sullivan, R. M., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinforcers+in+infancy%3A+classical+conditioning+using+stroking+or+intra-oral+infusions+of+milk+as+UCS%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Reinforcers in infancy: classical conditioning using stroking or intra-oral infusions of milk as UCS.</a> Dev Psychobiol. 21, 215-223 (1988).</li>
<li>Sullivan, R. M., Leon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+olfactory+learning+induces+an+enhanced+olfactory+bulb+response+in+young+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Early olfactory learning induces an enhanced olfactory bulb response in young rats.</a> Brain Res. 392, 278-282 (1986).</li>
<li>Weldon, D. A., Travis, M. L., Kennedy, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posttraining+D1+receptor+blockade+impairs+odor+conditioning+in+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Posttraining D1 receptor blockade impairs odor conditioning in neonatal rats.</a> Behav Neurosci. 105, 450-458 (1991).</li>
<li>Sullivan, R. M., Hofer, M. A., Brake, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory-guided+orientation+in+neonatal+rats+is+enhanced+by+a+conditioned+change+in+behavioral+state%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Olfactory-guided orientation in neonatal rats is enhanced by a conditioned change in behavioral state.</a> Dev Psychobiol. 19, 615-623 (1986).</li>
<li>Camp, L. L., Rudy, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+categorization+of+appetitive+and+aversive+events+during+postnatal+development+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Changes in the categorization of appetitive and aversive events during postnatal development of the rat.</a> Dev Psychobiol. 21, 25-42 (1988).</li>
<li>Moriceau, S., Wilson, D. A., Levine, S., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+circuitry+for+odor-shock+conditioning+during+infancy%3A+corticosterone+switches+between+fear+and+attraction+via+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dual circuitry for odor-shock conditioning during infancy: corticosterone switches between fear and attraction via amygdala.</a> J Neurosci. 26, 6737-6748 (2006).</li>
<li>Roth, T. L., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+opioids+and+their+role+in+odor+preference+acquisition+and+consolidation+following+odor-shock+conditioning+in+infant+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Endogenous opioids and their role in odor preference acquisition and consolidation following odor-shock conditioning in infant rats.</a> Dev Psychobiol. 39, 188-198 (2001).</li>
<li>Roth, T. L., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consolidation+and+expression+of+a+shock-induced+odor+preference+in+rat+pups+is+facilitated+by+opioids%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Consolidation and expression of a shock-induced odor preference in rat pups is facilitated by opioids.</a> Physiol Behav. 78, 135-142 (2003).</li>
<li>Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+sense+of+safety%3A+the+neurobiology+of+neonatal+attachment%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Developing a sense of safety: the neurobiology of neonatal attachment.</a> Ann N Y Acad Sci. 1008, 122-131 (2003).</li>
<li>Wilson, D. A., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+associative+conditioning+in+infant+rats+with+brain+stimulation+as+reward.+I.+Neurobehavioral+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Olfactory associative conditioning in infant rats with brain stimulation as reward. I. Neurobehavioral consequences.</a> Brain Res Dev Brain Res. 53, 215-221 (1990).</li>
<li>Sullivan, R. M., Wilson, D. A., Leon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+Processes+in+Early+Olfactory+Preference+Acquisition%3A+Neural+and+Behavioral+Consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Psychobiology%22%5BJournal%5D)">Associative Processes in Early Olfactory Preference Acquisition: Neural and Behavioral Consequences.</a> Psychobiology. , 29-33 (1989).</li>
<li>McLean, J. H., Harley, C. W., Darby-King, A., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pCREB+in+the+neonate+rat+olfactory+bulb+is+selectively+and+transiently+increased+by+odor+preference-conditioned+training%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">pCREB in the neonate rat olfactory bulb is selectively and transiently increased by odor preference-conditioned training.</a> Learn Mem. 6, 608-618 (1999).</li>
<li>Sullivan, R. M., Stackenwalt, G., Nasr, F., Lemon, C., Wilson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+an+odor+with+activation+of+olfactory+bulb+noradrenergic+beta-receptors+or+locus+coeruleus+stimulation+is+sufficient+to+produce+learned+approach+responses+to+that+odor+in+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Association of an odor with activation of olfactory bulb noradrenergic beta-receptors or locus coeruleus stimulation is sufficient to produce learned approach responses to that odor in neonatal rats.</a> Behav Neurosci. 114, 957-962 (2000).</li>
<li>Yuan, Q., Harley, C. W., McLean, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitral+cell+beta1+and+5-HT2A+receptor+colocalization+and+cAMP+coregulation%3A+a+new+model+of+norepinephrine-induced+learning+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Mitral cell beta1 and 5-HT2A receptor colocalization and cAMP coregulation: a new model of norepinephrine-induced learning in the olfactory bulb.</a> Learn Mem. 10, 5-15 (2003).</li>
<li>Fontaine, C. J., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateralized+odor+preference+training+in+rat+pups+reveals+an+enhanced+network+response+in+anterior+piriform+cortex+to+olfactory+input+that+parallels+extended+memory%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lateralized odor preference training in rat pups reveals an enhanced network response in anterior piriform cortex to olfactory input that parallels extended memory.</a> J Neurosci. 33, 15126-15131 (2013).</li>
<li>Morrison, G. L., Fontaine, C. J., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+the+anterior+piriform+cortex+in+early+odor+preference+learning%3A+evidence+for+multiple+olfactory+learning+structures+in+the+rat+pup%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A role for the anterior piriform cortex in early odor preference learning: evidence for multiple olfactory learning structures in the rat pup.</a> J Neurophysiol. 110, 141-152 (2013).</li>
<li>Nakamura, S., Kimura, F., Sakaguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+electrical+activity+in+the+locus+ceruleus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of electrical activity in the locus ceruleus.</a> J Neurophysiol. 58, 510-524 (1987).</li>
<li>Harley, C. W., Darby-King, A., McCann, J., McLean, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta1-adrenoceptor+or+alpha1-adrenoceptor+activation+initiates+early+odor+preference+learning+in+rat+pups%3A+support+for+the+mitral+cell%2FcAMP+model+of+odor+preference+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Beta1-adrenoceptor or alpha1-adrenoceptor activation initiates early odor preference learning in rat pups: support for the mitral cell/cAMP model of odor preference learning.</a> Learn Mem. 13, 8-13 (2006).</li>
<li>Shakhawat, A. M., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+bulb+alpha2-adrenoceptor+activation+promotes+rat+pup+odor-preference+learning+via+a+cAMP-independent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Olfactory bulb alpha2-adrenoceptor activation promotes rat pup odor-preference learning via a cAMP-independent mechanism.</a> Learn Mem. 19, 499-502 (2012).</li>
<li>Isaacson, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+representations+in+mammalian+cortical+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Odor representations in mammalian cortical circuits.</a> Curr Opin Neurobiol. 20, 328-331 (2010).</li>
<li>Lethbridge, R., Hou, Q., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+bulb+glomerular+NMDA+receptors+mediate+olfactory+nerve+potentiation+and+odor+preference+learning+in+the+neonate+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Olfactory bulb glomerular NMDA receptors mediate olfactory nerve potentiation and odor preference learning in the neonate rat.</a> PLoS One. 7, e35024 (2012).</li>
<li>Yuan, Q., Harley, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+a+nostril+knows%3A+olfactory+nerve-evoked+AMPA+responses+increase+while+NMDA+responses+decrease+at+24-h+post-training+for+lateralized+odor+preference+memory+in+neonate+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">What a nostril knows: olfactory nerve-evoked AMPA responses increase while NMDA responses decrease at 24-h post-training for lateralized odor preference memory in neonate rat.</a> Learn Mem. 19, 50-53 (2012).</li>
<li>Schwob, J. E., Price, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+axonal+connections+in+the+central+olfactory+system+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The development of axonal connections in the central olfactory system of rats.</a> J Comp Neurol. 223, 177-202 (1984).</li>
<li>Kucharski, D., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+routes+to+early+memories%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">New routes to early memories.</a> Science. 238, 786-788 (1987).</li>
<li>Kucharski, D., Johanson, I. B., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+olfactory+conditioning+in+6-day-old+rat+pups%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neural+Biol%22%5BJournal%5D)">Unilateral olfactory conditioning in 6-day-old rat pups.</a> Behav Neural Biol. 46, 472-490 (1986).</li>
<li>Cummings, D. M., Henning, H. E., Brunjes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+bulb+recovery+after+early+sensory+deprivation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Olfactory bulb recovery after early sensory deprivation.</a> J Neurosci. 17, 7433-7440 (1997).</li>
<li>Kucharski, D., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+change+in+the+access+to+olfactory+memories%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Developmental change in the access to olfactory memories.</a> Behav Neurosci. 102, 340-348 (1988).</li>
<li>Brunjes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+odor+deprivation%3A+time+course+of+changes+in+laminar+volume%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Unilateral odor deprivation: time course of changes in laminar volume.</a> Brain Res Bull. 14, 233-237 (1985).</li>
<li>Kass, M. D., Pottackal, J., Turkel, D. J., McGann, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+neural+representation+of+odorants+after+olfactory+deprivation+in+the+adult+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Changes in the neural representation of odorants after olfactory deprivation in the adult mouse olfactory bulb.</a> Chem Senses. 38, 77-89 (2013).</li>
<li>Kim, H. H., Puche, A. C., Margolis, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+deprivation+reversibly+modulates+transsynaptic+changes+in+the+NR2B-mediated+CREB+pathway+in+mouse+piriform+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Odorant deprivation reversibly modulates transsynaptic changes in the NR2B-mediated CREB pathway in mouse piriform cortex.</a> J Neurosci. 26, 9548-9559 (2006).</li>
<li>Korol, D. L., Brunjes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+changes+in+2-deoxyglucose+uptake+and+amino+acid+incorporation+following+unilateral+odor+deprivation%3A+a+laminar+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid changes in 2-deoxyglucose uptake and amino acid incorporation following unilateral odor deprivation: a laminar analysis.</a> Brain Res Dev Brain Res. 52, 75-84 (1990).</li>
<li>Leung, C. H., Wilson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-neuronal+regulation+of+cortical+apoptosis+in+the+adult+rat+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Trans-neuronal regulation of cortical apoptosis in the adult rat olfactory system.</a> Brain Res. 984, 182-188 (2003).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

L&#39;apprendimento e la memoria odore modello lateralizzato in cuccioli di ratto all&#39;interno di una finestra temporale critica è stata fondata da Hall e colleghi. In una serie di studi 33,34,36, hanno mostrato che una memoria preferenza odore potrebbe essere lateralizzato da odori + latte abbinamenti a una narice al PD 6 cuccioli di ratto. Memoria preferenza è stata forte quando la stessa narice era aperto durante l&#39;allenamento e test, ma non osserva quando la narice occlusa era sbloccato e testato. ...

L&#39;olfatto è la modalità sensoriale primaria nei roditori, senza il quale non sarebbero in grado di navigare con successo o di sopravvivere nel loro ambiente. E &#39;particolarmente critico per cuccioli neonati, che non possono né vedere, né udire durante la prima settimana post-natale, per usare l&#39;olfatto al fine di individuare la loro madre per alimentare 1. Come risultato, ratti neonatali possono essere condizionati a preferire gli odori con semplici manipolazioni sperimentali. Una varietà di stimoli sono stati utilizzati come stimolo incondizionato (UCS) per indurre risposte condizionate a nuovi odori (stimolo condizionato, CS) nei neonati, tra cui l&#39;ambiente di nidificazione 2,3, latte lattante 4-6, accarezzando o stimolazione tattile 7- 12, tail pinch 13, saliva materna 13, lieve scossa piede 14-18, e la stimolazione cerebrale intracranica 19. Il presente studio si avvale di un odore precoce preferenza paradigma consolidato in cui un odore, in questo caso menta piperita, is combinata con stimolazione tattile per produrre una preferenza per piperita 24 ore dopo 10,11,20. Questi odori ricordi dipendono dal circuito olfattivo intatto, tra cui in primo luogo il bulbo olfattivo (OB) 21-23 e la corteccia piriforme anteriore (APC) 24,25. Indagini sperimentali dei primi preferenza odore di apprendimento hanno approfondito e ampliato la nostra comprensione delle basi molecolari e fisiologiche di una memoria mammiferi. Questo modello mammiferi ha diversi vantaggi nello studio dei meccanismi della memoria. In primo luogo, sono state individuate le sorgenti neurali del segnale UCS. Vari stimoli come detto sopra stimolano locus coeruleus noradrenalina rilascio 26, che a sua volta attiva più adrenocettori nel OB e APC, causando effetti cellulari e fisiologici che sostengono l&#39;apprendimento 22,27,28. In secondo luogo, i meccanismi di memoria portante avvengono in strutture neurali laminari ben definite. Ilsemplicità dei circuiti olfattiva nei ratti neonati fornisce ai ricercatori con il quadro ideale con cui scoprire i processi complessi legati alla plasticità sinaptica. Neuroni sensoriali olfattivi (OSN) nel progetto epitelio olfattivo sulla mitrale / cellule tufted in OB e questi mitrale / cellule tufted in progetto di girare ipsilaterally a corteccia piriforme (PC) attraverso il tratto olfattivo laterale (LOT), tra le altre strutture 29. Entrambe le sinapsi OSN della OB 30,31 e la sorte sinapsi 24,25 in aPC sono stati identificati come loci critici per cambiamenti sinaptici che supportano l&#39;apprendimento e la memoria. In terzo luogo, in tenera età nei ratti, ingressi olfattive possono essere facilmente lateralizzato. Ogni APC ha accesso alle informazioni bilaterale odore attraverso la commessura anteriore una volta che questa sostanza bianca è completamente formato in post-natale giorno 12 (PD12) 32. Prima di PD 12, ingresso odore può essere isolato a ipisilateral OB e APC attraverso un&#39;unica narice occlusione 24,25,31,33,34 &lt;/ Sup&gt;. Singola narice occlusione permette la formazione della memoria odore dalla narice aperta ed impedire la stessa memoria dei narice occluse prima di PD 12 33. Memoria odore è isolato per l&#39;emisfero ipsilaterale compreso sia OB e APC. Pertanto, ogni pup ratto può essere il proprio controllo per l&#39;apprendimento e alla base della fisiologia. Nel presente studio, è introdotto l&#39;odore primi protocollo apprendimento preferenza lateralizzato. Questo metodo serve come un potente strumento per studiare i meccanismi neurali alla base dell&#39;apprendimento odore, fornendo un controllo intra-animale 24,25,31, riducendo in tal modo sia il numero di animali necessari e la variazione generale. Naris occlusione è reversibile in quanto il tappo di grasso o naso può essere applicato e rimosso con il minimo stress o danni per l&#39;animale. Qui, in primo luogo, vengono descritte le procedure dettagliate di odore precoce preferenza formazione e test, con un focus sul protocollo lateralizzante con occlusione singola narice con un nose spina. Poi i risultati vengono presentati per dimostrare l&#39;efficacia del singolo occlusione narice a isolare ingresso odore e la produzione di memoria odore lateralizzato. Infine, le potenzialità di utilizzo di questo modello di apprendimento lateralizzato per studiare i cambiamenti fisiologici nel sistema olfattivo che entrambi generano l&#39;apprendimento e la memoria supporto di espressione sono discussi.

<table><tbody><tr><td>Tubo in polietilene 20</td><td>Intramedic</td><td>427406</td><td>Non radiopaco, non tossico</td></tr><tr><td>3-0 Filo di sutura in seta</td><td>Syneture</td><td>Sofsilk</td> Grasso siliconico <td>non assorbente</td></tr><tr><td></td><td>Warner Instrument</td><td>64-0378</td><td>Gel di</td></tr><tr><td>xilocaina inodore al 2%</td><td>AstraZeneca</td><td>Prod. No 061</td><td>Gelatina di lidocaina cloridrato, acquistata in farmacia locale</td></tr><tr><td>Pennello</td><td>Dynasty</td><td>206R</td><td>Dimensioni simili/anche altre marche funzionano Estratto</td></tr> di <tr><td>menta piperita</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W284807</td><td>Anche altre marche dovrebbero andare bene</td></tr><tr><td>Scatola per l'allenamento</td> Scatola in acrilico <td>N/A</td><td>su misura</td><td>(20 x 20 x 5 cm3), vedi Figura 2A. I parametri e il materiale per la scatola non sono critici e possono essere modificati. Il materiale utilizzato deve essere inodore e non assorbe gli odori</td></tr><tr><td>Camera di prova</td><td>Su misura</td><td>N/A</td><td>Acciaio inossidabile (30 x 20 x 18 cm3), vedere Figura 2B. I parametri e il materiale per la camera non sono critici e possono essere modificati. Ad esempio, è possibile utilizzare una camera in acrilico invece di una in acciaio inossidabile.</td></tr><tr><td>Anticorpo pCREB</td>: <td>Segnalazione cellulare</td><td>9198</td><td>Ser 133 (87G3), Coniglio mAb,</td></tr><tr><td>cloralio idrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8383</td><td>N/A,</td></tr><tr><td>Paraformaldehype</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td>, <td>N/A,</td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td>N/A</td></tr></tbody></table>

un laterizzazione odore learning modello in ratti neonati per dissezione formazione neural circuiti sostenere la memoria

A Lateralized Odor Learning Model in Neonatal Rats for Dissecting Neural Circuitry Underpinning Memory Formation

I cuccioli di ratto durante un periodo postnatale critico (≤ 10 giorni) formano facilmente una preferenza per un odore che è associato a stimoli che imitano le cure materne. Tale memoria delle preferenze può durare da ore, a giorni, anche per tutta la vita, a seconda dei parametri di allenamento. L'apprendimento precoce delle preferenze olfattive ci fornisce un modello in cui i cambiamenti critici per una forma naturale di apprendimento avvengono nei circuiti olfattivi. Un'ulteriore caratteristica che lo rende un potente strumento per l'analisi dei processi di memoria è che l'apprendimento precoce delle preferenze olfattive può essere lateralizzato tramite l'occlusione di una singola narice all'interno del periodo critico. Ciò è dovuto alla mancanza di connessioni commissurali anteriori mature degli emisferi olfattivi in questa tenera età. Questo lavoro delinea protocolli comportamentali per l'apprendimento degli odori lateralizzati utilizzando i tappi nasali. L'occlusione nasale acuta e reversibile riduce al minimo i danni tissutali e neuronali associati all'occlusione a lungo termine e a metodi più aggressivi come la cauterizzazione. Il modello di apprendimento degli odori lateralizzato consente il confronto all'interno degli animali, riducendo così notevolmente la varianza rispetto ai disegni tra gli animali. Questo metodo è stato utilizzato con successo per sondare i cambiamenti circuitali nel sistema olfattivo prodotti dall'allenamento. Le direzioni future includono l'esplorazione delle basi molecolari della memoria degli odori utilizzando questo modello di apprendimento lateralizzato; e correlare il cambiamento fisiologico con la forza e la durata della memoria.

Qui passiamo in rassegna alcuni dei risultati stabiliti in precedenza 24 per dimostrare l'efficacia dell'occlusione narice a isolare ingresso odore e imparare a un emisfero, e la reversibilità di questo metodo. Occlusione singola narice durante l'allenamento precoce preferenza odore conduce ad una memoria odore lateralizzato 24. La memoria è limitata alla narice risparmiato (Figura 3). Quando i cuccioli sono testati per la preferenza odori con la stessa...

Questo protocollo introduce l'apprendimento precoce lateralizzato delle preferenze olfattive nei ratti utilizzando l'occlusione acuta di un singolo naride. L'apprendimento lateralizzato consente l'esame dei risultati comportamentali e dei meccanismi biologici di base all'interno degli stessi animali, riducendo la varianza indotta dai disegni tra gli animali. Questo protocollo può essere utilizzato per studiare i meccanismi molecolari alla base dell'apprendimento precoce degli odori.

Un laterizzazione Odore Learning Modello in ratti neonati per dissezione Formazione Neural circuiti Sostenere la memoria

Rat pups during a critical postnatal period (&#8804; 10 days) readily form a preference for an odor that is associated with stimuli mimicking maternal ...

Questo protocollo introduce l'apprendimento precoce lateralizzato delle preferenze olfattive nei ratti utilizzando occlusioni acute singole narie. Ciò si ottiene costruendo prima tappi nasali rimovibili in polietilene. Il secondo passo è occludere l'Ariete desiderato prima dell'addestramento comportamentale.Quindi, prepara la lettiera profumata e poi addestra l'animale nella lettiera profumata mentre lo accarezzi con un pennello. Il passaggio finale consiste nel testare la preferenza di odore lateralizzata utilizzando un apparecchio di test a due scelte. In definitiva, l'immunoistochimica della proteina legante l'elemento di risposta C amp fosforilato o P crib viene utilizzata per dimostrare il silenziamento unilaterale dell'attività neuronale dovuto all'isolamento singolo e alla reversibilità del metodo.Il vantaggio principale di questa tecnica dei nostri metodi di controllo degli animali esistenti è che siamo in grado di ridurre la variabilità e il numero di animali attraverso la natura del nostro disegno sperimentale di controllo intraanimale prima dello strato 11 postnatale, a causa della mancanza di proiezioni di commes anteriori mature MA, che due emisferi olfattivi non sono

a-lateralized-odor-learning-model-neonatal-rats-for-dissecting-neural

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Larve di Drosophila sono in grado di associare stimoli odore con la ricompensa gustativa. Qui descriviamo un semplice paradigma comportamentale che permette l'analisi di appetitivo apprendimento associativo olfattivo.

Appetitivo apprendimento associativo olfattiva in<em&gt; Drosophila</em&gt; Le larve

Descriviamo un protocollo per la marcatura in vivo dei neuroni sensoriali olfattivi mediante elettroporazione e successiva scansione laser confocale o microscopia multifotone per visualizzare la morfologia neuronale e il suo sviluppo nel tempo.

Il sistema olfattivo come modello per studiare gli schemi di crescita assonale e Morfologia In Vivo

L'obiettivo di questo protocollo è studiare la cognizione spaziale nei roditori. Il labirinto d'acqua a doppia H è un test innovativo, particolarmente utile per chiarire le diverse componenti dell'apprendimento, del consolidamento e della memoria, nonché l'interazione dei sistemi di memoria.

The Double-H labirinto: una prova comportamentale robusto per l&#39;apprendimento e la memoria nei roditori

Questo protocollo descrive come silenziare temporaneamente e a distanza l'attività neuronale in regioni cerebrali discrete mentre i ratti sono impegnati in compiti di apprendimento e memoria. L'approccio combina la farmacogenetica (Designer-Receptors-Exclusively-Activated-by-Designer-Drugs) con un paradigma comportamentale (precondizionamento sensoriale) progettato per distinguere tra diverse componenti dell'apprendimento.

Un metodo per Remotely Silencing Neural Activity in Roditore Durante Fasi discreti di apprendimento

Qui, ci alleniamo topi su un compito di apprendimento associativo per testare la discriminazione di odore. Questo protocollo consente inoltre di studi sui cambiamenti strutturali indotti su apprendimento nel cervello.

Una prova oggettiva e riproducibile di apprendimento olfattivo e discriminazione nei topi

Qui presentiamo un protocollo con il quale il calcio pre e/o postsinaptico può essere visualizzato nel contesto dell'apprendimento e della memoria della Drosophila. L'imaging di calcio in vivo che utilizza sensori di calcio localizzati sinapricamente viene combinato con un classico paradigma di condizionamento olfattivo in modo tale che la plasticità sinaptica alla base di questo tipo di apprendimento associativo può essere determinata.

In Vivo Optical Calcium Imaging della plasticità sinaptica indotta dall'apprendimento in Drosophila melanogaster

Abbiamo precedentemente sviluppato protocolli per Caenorhabditis elegans per formare memorie associative a breve e lungo termine mediante allenamento di massa e distanziato, rispettivamente. Qui, vengono descritti protocolli dettagliati per il condizionamento di C. elegans accoppiando 1-propanolo e acido cloridrico come stimoli condizionati e incondizionati, rispettivamente, per formare memoria associativa avversiva.

Apprendimento associativo avversivo e formazione della memoria accoppiando due sostanze chimiche in Caenorhabditis elegans

Descriviamo qui i metodi per indurre e analizzare il rimodellamento olfattivo dipendente dall'esperienza dei glomeruli sinaptici del lobo antennale nel cervello giovanile di Drosophila .

Rimodellamento dipendente dall'esperienza del cervello giovanile, neurone sensoriale olfattivo, connettività sinaptica in un periodo critico della prima infanzia

Questo protocollo descrive la costruzione di un olfattometro per esperimenti di comportamento olfattivo go/no-go. Vengono fornite istruzioni dettagliate, insieme alle immagini, per garantire il successo della costruzione dell'olfattometro. Sono incluse anche informazioni per la risoluzione dei problemi riscontrati durante il processo.

Costruzione di un olfattometro per studi sul comportamento olfattivo dei roditori

Qui si descrivono i metodi per testare C. elegans apprendimento associativo e di breve e lungo termine della memoria associativa. Questi test popolazione impiegare le capacità worm per chemiotassi verso odoranti volatili, e la forma associazioni positive su di abbinamento cibo con il butanone chemoattractant. Aumentare il numero di periodi di condizionamento induce memoria a lungo termine.

C. elegans Learning Positivo Butanone, a breve termine e lungo termine saggi di memoria associativa

Impara un modello lateralizzato di apprendimento olfattivo nei ratti neonati utilizzando l'occlusione acuta di una narice. Questo metodo permette di studiare i meccanismi neurali della memoria con controlli intra-animali.

Un laterizzazione Odore Learning Modello in ratti neonati per dissezione Formazione Neural circuiti Sostenere la memoria

Esplora altri video