Name: Costruzione di vapore Chambers utilizzato per esporre topi da alcol Durante lequivalente di tutti i tre trimestri di Sviluppo Umano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Scopri come costruire camere di vapore alcoliche personalizzabili per esporre topi durante tutti e tre i trimestri equivalenti allo sviluppo umano. Questo metodo consente di studiare gli effetti dell'esposizione fetale all'alcol in modo controllato.

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Sostenuto dal National Institutes of Health concede R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 e K12-GM088021. Gli autori ringraziano Samantha L. Blomquist per l&#39;assistenza tecnica e Drs. Kevin Caldwell e Donald Partridge per valutare criticamente il manoscritto e video.

Tutte le procedure di animali sono state approvate dalla University of New Mexico Scienze della Salute-Centro Institutional Animal Care ed uso comitato. 1. Vapor Chamber Assembly <ol><li> Tagliare i fogli di policarbonato con una sega circolare o seghetto alle dimensioni previste nel video per la parte superiore, inferiore, anteriore, posteriore, lati e porta (Figura 1 e Tabella 1). </li><li> Con una sega circolare o seghetto, tagliare un'apertura alta 8 pollici da 16 pollici di larghezza nel mezzo del pannello frontale. </li><li> Misurare e segnare i fori per la cerniera pianoforte sul 18 pollici da 10 pollici foglio di policarbonato che diventerà la porta della camera. </li><li> Nella porta, fori lavello contatore con un bit 5/16 di pollice trapano, e con un bit 3/16 di pollice trapano, praticare il foro per le viti. Assicurarsi praticare fori lavello contatore sulla parte interna della porta per le teste delle viti. </li><li> Preparare le lastre in policarbonato per la saldatura. </li><li> Montare front, pannelli posteriori e laterali sul pannello inferiore utilizzando saldare # 16. </li><li> Sigillare eventuali lacune tra i pannelli con Weld-on # 16. </li><li> Fissare il pannello superiore con saldare # 16. </li><li> Utilizzare pinze a barre o libri di testo pesanti per tenere tutto a posto, mentre le saldature cura. </li><li> Attaccare un 1 pollice da un pezzo 12 pollici di policarbonato sulla parte anteriore del pannello 1 pollice sotto l'apertura per il fissaggio della cerniera della porta. </li><li> Lasciare almeno 24 ore per saldare per curare. </li><li> Tagliate due pezzi di tubo PEX 12 centimetri di lunghezza e 1 pezzo di tubo PEX lungo 1 pollice. </li><li> Con un bit 5/16 trapano, praticare un foro in ciascuno dei tubi PEX 12 pollici circa 1 a 2 pollici da un'estremità. </li><li> Collegare il tubo PEX 2 x 12 pollici a un connettore a T 3/8 pollici con i fori situati lontano dal connettore. </li><li> Tappare le estremità aperte dei tubi PEX con tappi da 3/8 di pollice. </li><li> Fissare la cerniera pianoforte al pannello frontale e porta con 4-40 viti e dadi macchina. </li><li> Utilizzando la porta come guida, marca i fori necessari per la cerniera del piano sul distanziale 1 pollice sul pannello anteriore della camera. </li><li> Con un po '3/16 di pollice trapano, praticare i fori nel pannello frontale per la cerniera pianoforte. </li><li> Fissare la porta e pianoforte cerniera al pannello frontale con 4-40 viti e dadi macchina. </li><li> Assemblare i morsetti a ginocchiera come mostrato nel video con una rondella e dado su entrambi i lati del braccio laterale. </li><li> Marco e trapano 3/16 fori pollici per l'interruttore morsetti sul pannello frontale e allegare Morsetti a ginocchiera con 4-40 viti e dadi macchina. </li><li> Aggiungere guarnizioni gommino 3/8 pollici per l'interno della porta. </li><li> Con un noioso punta 5/8 di pollice, praticare un foro al centro del pannello superiore della porta di ingresso. </li><li> Praticare un foro di 1/2 pollice in basso / centro del pannello posteriore per la porta di uscita. </li><li> Montare la porta di uscita spingendo la parte filettata del 3/8 di pollice attraverso parete adattatori attraverso la parete di fondo della camera di vapore nel foro porta di uscita. Fissare il dado dalinterno della camera per tenere in posizione. </li><li> Rimuovere la copertura di protezione da lastre in policarbonato. </li><li> Fissare il pezzo 1 pollice di tubo PEX al connettore a T e forzare il tubo PEX attraverso il foro nella parte superiore della camera dall'interno. </li><li> Attaccare a 3/8 di pollice 90 gomito all'inizio del tubo PEX 1 pollice dall'esterno. NOTA: Praticare un foro da 1/2 pollice nella porta e inserire una setti di tenuta 1/2 pollice nel foro. </li><li> Ripetere i passaggi 1-22 per l'aria di controllo unico da camera. </li></ol> 2. Rack e all'Assemblea Air consegna <ol><li> Se il posizionamento delle camere sul carrello / cremagliera menzionato nell'elenco materiale, montare il carrello secondo le istruzioni del produttore. </li><li> Con i dadi e bulloni di ricambio, allegare un pezzo pezzo di policarbonato al rack per contenere i regolatori di flusso d'aria. </li><li> Ovunque sul pezzo pezzo di policarbonato, marchio e trapano 3/4 di pollice di buchi per i regolatori di flusso d'aria e attaccare i regolatori con i dadidisponibile. </li><li> Attaccare 3/8 di pollice attraverso parete adattatore per le porte di ingresso e di uscita dei regolatori di flusso d'aria. </li><li> Montare il pallone etanolo con la pietra di aerazione, # 8 tappo e sgancio rapido in linea connettori. </li><li> Uso 3/8 di pollice tubi TYGON, collegare i regolatori di flusso per la pompa dell'aria e pallone etanolo come mostrato in Figura 1. </li><li> Per l'unica camera d'aria, collegare la porta di uscita del regolatore di flusso d'aria verso l'ingresso 3/8 di pollice 90 gomito con tubo TYGON 3/8 di pollice, come mostrato nella Figura 1. </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500"> Figura 1. Rappresentazione schematica della configurazione delle camere di vapore. Un connettore a T è collegato alla pompa di aria a basso rumore. Un lato del connettore a T è direttamente collegato ad un regolatore di flusso d'aria per il solo aria camera vapore. Gli altri side è diviso di nuovo e collegato a due diversi regolatori di flusso d'aria, uno per l'aria e uno per l'etanolo. La camera d'aria è direttamente collegato al regolatore come mostrato. Per la camera di vapore etanolo, un regolatore di flusso d'aria è collegata alla pietra aeratore immerso in etanolo liquido nel pallone filtro. Il braccio porta laterale del pallone filtro è collegato con l'uscita del regolatore dell'aria come indicato. Il vapore etanolo fuse e aria viene poi collegata all'ingresso della camera di vapore etanolo. I tubi di scarico (non mostrati) sono collegati ad una presa di ventilazione nella stanza. 3. Prova Vapor Chambers e regolare i livelli Etanolo <ol><li> Aggiungere 600 ml di etanolo 190 prova al pallone filtro, inserire la pietra aerazione, e collegare a Ingresso di tubo al braccio laterale del pallone. </li><li> Chiudere porte delle camere e accendere la pompa di aria. </li><li> Regolare regolatori di flusso d'aria in modo che circa la metà di quanto l'aria passa attraverso l'alcol liquido come l'aria viene miscelata con. Adjust l'aria solo flusso d'aria al flusso combinato di alcol e l'aria della camera di etanolo. </li><li> Consentire camere equilibrare per almeno 30 minuti prima di misurare la concentrazione di etanolo aria. </li><li> Misurare la concentrazione di etanolo aria estraendo 5 ml di aria con un ago 18G e una siringa da 60 ml attraverso il setto. Diluire il campione con aria ambiente disegnando lo stantuffo per 60 ml (01:12 diluizione). Misurare il livello di etanolo aria usando un etilometro secondo le istruzioni del produttore. È necessaria la diluizione dell'aria della camera di raggiungere livelli di vapore di alcol nel campo di rilevamento del etilometro. NOTA: Se si utilizza diversi livelli di esposizione alcol diluizione potrebbe essere necessario modificare. </li><li> Come punto di partenza, regolare i regolatori di flusso d'aria in modo da ottenere una concentrazione di alcol aria di circa 4,5-5 g / dl (g di alcol vaporizzato per dl di aria). </li></ol> 4. Allevamento di animali <ol><li> Femmine House Group C578BL / 6 topi (2-3 mesi) per almeno 1 settimana per sincronizzare i cicli ovarici. </li><li> Ospitare autonomamente maschio topi C57BL / 6 (2-5 mesi) per almeno 2 settimane. </li><li> Dopo la sincronizzazione, mettere una donna sola con un singolo maschio per 5 giorni per consentire l'accoppiamento. </li><li> Dopo l'accoppiamento, rimuovere maschi e femmine singolarmente casa e metterli nelle camere. </li></ol> 5. Pre-e post-natale Etanolo Vapor Esposizione <ol><li> Esporre dighe gravidanza di vapori di etanolo per 4 ore al giorno a partire dalle 10:00 durante il ciclo di luce (luci a partire da 06:00-18:00), tranne il giorno della nascita per prevenire la morte dei cuccioli. </li><li> Pesare dighe giorno di gestazione (G) 5, G13-G14 e G18-G20 per monitorare le gravidanze; biancheria da letto era cambiato nei giorni in cui le femmine sono stati pesati per ridurre al minimo la manipolazione. </li><li> Ogni giorno sostituire il cibo per i gruppi etanolo esposto evitare il consumo di pellets con qualsiasi etanolo assorbito in loro. </li><li> Il giorno dellala nascita non esporre gli animali. Dopo la nascita esporre le dighe ei cuccioli per 4 ore al giorno a partire dalle 10:00 da P1-P12. </li><li> Pesare cuccioli su P2, P8, P12, e P25; e cambiare la biancheria da letto su P8 e P12 per ridurre al minimo la movimentazione aggiuntiva. </li><li> Subito dopo l'ultima esposizione (P12), trasferire le gabbie di un animale stanza custodia standard. </li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Qui, descriviamo in dettaglio i metodi per la costruzione delle camere di inalazione di vapori. I materiali e gli strumenti necessari per costruire le camere sono prontamente disponibili un certo numero di fornitori commerciali e la procedura per la costruzione delle camere sono relativamente semplici. Il sistema che descriviamo qui non contiene valvole di ritegno in linea per impedire il riflusso e la miscelazione. Siamo stati in grado di misurare qualsiasi etanolo rilevabile in aria solo camere che suggeriscono che no...

Bere durante la gravidanza può danneggiare il feto, causando alterazioni persistenti in molti organi e sistemi che riducono in modo significativo la qualità della vita per le persone colpite e delle loro famiglie. Si stima che circa il 10-30% delle donne beve durante la gravidanza negli Stati Uniti, con il 1-8% di bere in un modello di 1,2 binge. La gamma di effetti prodotti dall&#39;esposizione etanolo durante lo sviluppo fetale è collettivamente noti come disturbi dello spettro fetale alcolica (FASDs). Stime recenti indicano che FASDs sono un problema di salute pubblica con una prevalenza fino al 2-5% negli USA 3. Il più grave manifestazione di FASDs è la sindrome alcolica fetale (FAS), che è caratterizzata da ritardo di crescita, anomalie cranio-facciali, e deficit neurocomportamentali, tra cui difficoltà di apprendimento. La prevalenza di FAS è stata stimata essere 0,2-0,7% negli Stati Uniti 3. I trattamenti attualmente disponibili per FASDs sono solo parzialmente efficacie sviluppo di trattamenti più efficaci è limitata dalla scarsa comprensione delle basi cellulari e molecolari di questo complesso spettro di disturbi. I dati dei Birth Defects Prevention Study nazionali (NBDPS) indicano che le donne incinte più frequentemente bevono durante il 1 ° trimestre, prima della gravidanza è stato rilevato, seguita da astinenza durante le fasi successive della gestazione 2. Il NBDPS anche scoperto che il secondo modello più comune del consumo di etanolo durante la gestazione comporta potabile in tutte le trimestri di gravidanza 2. Le ragioni di questo sono la mancanza di consapevolezza circa gli effetti potenzialmente nocivi di esposizione fetale etanolo (anche a basse dosi), accesso limitato alle cure prenatali, anamnesi positiva per disturbi neuropsichiatrici, e l&#39;abuso o dipendenza da etanolo 4. È interessante notare che il NBDPS riferito che il terzo modello più comune di consumo coinvolto astinenza durante la 1 <sup&gt; St e 2 nd trimestre seguite da consumo durante il 3 ° trimestre di gravidanza, quando spesso si ritiene che bere è sicuro perché organogenesi è stata in gran parte completata. Tuttavia, il 3 ° trimestre è un periodo di elevata suscettibilità ai danni del sistema nervoso etanolo-indotta perché questo è un periodo in cui i circuiti neuronali sono sottoposti a profonda raffinatezza 2. Il NBDPS anche identificato altri, meno frequenti i modelli di consumo di alcol che si verificano durante la gravidanza, tra cui il consumo in tutto il 1 ° e 2 trimestre nd seguite da astinenza durante il 3 ° trimestre 2. Nel tentativo di modellare i diversi modelli di consumo di etanolo osservati in donne in gravidanza, un numero di sviluppo paradigmi esposizione etanolo sono state definite utilizzando diverse specie animali, ratti e topi essendo 5,6 più comune. La durata della gravidanza in questi animali tipicamente lasts circa 3 settimane, che corrisponde al 1 ° e 2 nd trimestre di gravidanza umana. Molti studi sui roditori hanno valutato l&#39;impatto di varie dosi e modelli di esposizione all&#39;etanolo durante questo periodo. Esempi dei metodi frequentemente utilizzati per amministrare etanolo per topi e ratti in gravidanza includono la somministrazione tramite diete liquide 7,8, aggiunta di etanolo all&#39;acqua potabile 9,10, bere volontaria di soluzioni saccarina dolcificata 11, sonda gastrica gastrica 12, l&#39;inalazione dei vapori 13 e iniezione sottocutanea o intraperitoneale 14. I risultati di questi studi hanno ricapitolato molti dei deficit riscontrati negli esseri umani con FASDs, dimostrando che l&#39;esposizione durante le prime fasi della gravidanza è sufficiente a danneggiare i circuiti neuronali attraverso il cervello (recensito in 6,15). Esperimenti con roditori hanno dimostrato che l&#39;esposizione durante la equivalente al 3 </sup&gt; Trimestre di gravidanza umana, che corrisponde approssimativamente alle prime 1-2 settimane di vita post-natale nei ratti e nei topi, può alterare significativamente lo sviluppo del cervello. L&#39;esposizione durante questo periodo è stata modellata con la somministrazione di etanolo per ratti neonati o topi. L&#39;etanolo è stato somministrato a questi animali utilizzando una varietà di metodi, compreso l&#39;alimentazione tramite gastrostomia negli animali allevati artificialmente 16-18, intubazione intragastrica 19, iniezione sottocutanea 20 e vapore inalazione 21,22. Questi studi hanno dimostrato in modo convincente che la crescita scatto cervello è un periodo di elevata vulnerabilità agli effetti sullo sviluppo di etanolo 6. Come accennato in precedenza, potabile durante tutte trimestre di gravidanza è un modello comune di consumo di etanolo in donne 2. Tuttavia, relativamente pochi studi hanno valutato l&#39;impatto di questo modello di esposizione utilizzando modelli animali. Alcuni di questi studi hanno preso advantage di grandi animali dove avviene il 3 ° trimestre equivalente in utero piuttosto che il periodo neonatale come nel caso di ratti e topi. Questi modelli animali sono primati non umani 23,24 e le pecore 25-27. Tuttavia, questi modelli animali non sono stati ampiamente utilizzato nella ricerca FASDs, in parte, a causa del costo elevato e la necessità di strutture di cura specializzati. Roditori sono stati più comunemente usati per caratterizzare l&#39;effetto di tutto trimestre etanolo esposizione sullo sviluppo fetale 5. Le cavie sono state particolarmente vantaggiosa in questo senso dato il loro ampio sviluppo prenatale e similarità nella maturazione del cervello a quello umano 28,29. Con cavie, è stato possibile caratterizzare l&#39;effetto di etanolo esposizione in utero che comprende il periodo di sviluppo equivalente della umana 3 ° trimestre. Il costo relativamente elevato di questi animali, così come la durata relativamente lunga della gravidanza(~ 67 giorni), ha limitato il loro utilizzo per un paio di laboratori che lavorano sulla ricerca FASDs. A causa del loro utilizzo costo-efficacia e in largo nella ricerca biomedica, i ricercatori hanno usato topi per modellare l&#39;esposizione all&#39;etanolo durante tutti i trimestri di gravidanza. Negli studi iniziali, i ratti sono stati esposti durante la gravidanza attraverso diete liquide seguita dalla somministrazione di etanolo tramite gastrostomia per allevati artificialmente neonati (giorni postnatali (P) 1-10) con conseguente picco dei livelli di etanolo nel sangue (BEC) nelle dighe di 0,08 g / dl e nei cuccioli 0.16 g / dl. Questo paradigma ha causato alterazioni duraturi in ottica mielinizzazione del nervo e ha ridotto il numero di fibre glia Bergmann nel cervelletto 30-32. Allo stesso modo, Maier e collaboratori con condizioni di allevamento artificiali somministrati etanolo per le dighe di ratto in gravidanza in modo binge-like tramite intubazione intragastrica seguita dalla somministrazione neonatale durante parte del 3 ° trimestre equivalente (P4-9) 33,34. PEAK BEC materne e pup erano 0,3 g / dl sia giorno di gestazione 20 e P6. Questo paradigma esposizione all-trimestre ha provocato un ritardo di crescita che era significativamente maggiore rispetto a quella osservata in cuccioli esposti durante i periodi selezionati di gestazione 33. Inoltre, ratti esposti a etanolo durante l&#39;equivalente di tutti trimestre mostravano una riduzione del numero di cerebellare Purkinje e granuli che era maggiore di quello osservato in animali esposti durante altri periodi 34. Riduzione del numero delle cellule dell&#39;ippocampo sono stati segnalati anche con questo paradigma, ma questi effetti sembrano essere principalmente a seguito di esposizione durante il 3 ° trimestre equivalente 35. Un metodo che prevede la somministrazione di etanolo via intragastrica sonda gastrica per entrambe le ratte gravide e topi neonatale è stato utilizzato anche per modellare tutti trimestre l&#39;esposizione 36. Questo metodo, che ha prodotto BECs di 0,13 g / dl nelle femmine (giorno di gestazione 17) e 0,24 g / dl in cuccioli P6, lon indottadella durata di g-alterazioni nei livelli dei neurotrasmettitori monoamine nell&#39;ippocampo e nell&#39;ipotalamo, e una maggiore espressione di DNA metiltransferasi e metil CpG proteine ​​2 vincolanti nell&#39;ippocampo 37,38. Utilizzando un paradigma simile esposizione (BEC = 0,14-0,2 g / dl nelle dighe e 0,2 g / dl nei cuccioli), Gil-Mohapel et al. 39 rilevato un aumento del numero di nuovi neuroni immaturi nel giro dentato di ratti adulti che può rappresentare un meccanismo di compensazione per il danno neuronale indotta da etanolo o un&#39;alterazione nella maturazione dei neuroni adulti nati. Gli investigatori hanno anche tentato di modellare qualsiasi esposizione trimestre etanolo esponendo dighe via diete liquide o l&#39;acqua potabile sia durante la gravidanza e l&#39;allattamento 9,40. Tuttavia, l&#39;utilità di esporre i cuccioli attraverso il latte materno è limitata, perché in genere si traduce in BECs bassa pup (ad esempio, ,002-,05 g / dl; 41,42). I topi sono stati utilizzati anche extenstivamente per caratterizzare gli effetti dell&#39;esposizione etanolo sviluppo. Questo modello animale condivide molte delle forze sopra descritti per il modello animale di ratto, con il vantaggio aggiuntivo che molti ceppi di topi geneticamente modificati sono disponibili 5. I topi sono stati utilizzati con successo per caratterizzare gli effetti di etanolo durante il 1 °, 2 ° o 3 trimestri di gravidanza rd 43,44. Tuttavia, l&#39;impatto di una esposizione trimestre su questi animali non è stato ben caratterizzato perché è tecnicamente più difficile da esporre topi durante l&#39;equivalente di tutti trimestre di gravidanza umana. Ad esempio, l&#39;allevamento artificiale e gavage gastrica, che sono stati utilizzati con successo nei ratti, richiedono procedure più specializzati nei topi 45. Per quanto a nostra conoscenza, solo uno studio finora ha cercato di studiare l&#39;effetto di una esposizione trimestre etanolo utilizzando topi; questi animali sono stati esposti a soluzione di etanolo in acqua potabile during gravidanza e allattamento 46. BEC materni erano 0,07 g / dl e pup BEC non sono stati determinati, ma dovrebbero essere una frazione di quelli in dighe. Qui, descriviamo un nuovo modello per l&#39;esposizione tutti trimestre etanolo di topi in cui l&#39;alcol viene somministrato ad entrambi dighe e neonati in stato di gravidanza attraverso le camere di inalazione di vapori. Camere di vapore sono state costruite sulla base di un progetto precedente 47. Noi forniamo istruzioni dettagliate su come costruire le camere di inalazione ed eseguire le procedure di esposizione. Forniamo anche informazioni sui BECs che possono essere raggiunti e l&#39;impatto dell&#39;esposizione sulla sopravvivenza della prole e la crescita.

<table><tbody><tr><td>Policarbonato 1/4" trasparente 48" x 24"</td> <td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>Guarnizione a bulbo in gommapiuma 3/8"w x 7/32"h</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>Weld-on #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>Cerniera per pianoforte lunga 12"</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 ft</td></tr><tr><td>Morsetti a levetta standard</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8</td></tr><tr><td>Tubo PEX 1/2"</td> <td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td></td></tr><tr><td>Raccordo a T spinato da 10 piedi (Nero) Confezione 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>Tappo spinato (Nero) Confezione 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>Spina Gomito raccordo (Nero) Confezione 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>Adattatori passanti da 3/8", tubo a tubo filettato</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Vite a croce Phillips 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>Dado esagonale a vite a macchina 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>Flussometro a pannello 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>PARCHETTA, FILTRO 1.000 ml 6/CONFEZIONE</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>numero arabo</td></tr><tr><td>Guarnizione di precisione Septa</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Black Rubber Stopper #8 1-foro</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBO TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBO TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>Aeratore Stone P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" T-connettori Pk da 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Sezionatori conici Pk di 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 Tubo flessibile Barb con valvola di accoppiamento in linea</td><td>Più freddo Prodotti Azienda</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>Pompa ad aria di media capacità</td><td>LMI Produttori</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Nexelate Wire Shelving 36 "L X 24" P X 63 "H</td><td>T9A990135 industriale globale</td><td></td><td>1</td></tr><tr><td>Set di (4) ruote in poliuretano da 5" Global</td><td>industrial</td><td>T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>

costruzione di vapore chambers utilizzato per esporre topi da alcol durante l&#39;equivalente di tutti i tre trimestri di sviluppo umano

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

L&#39;esposizione all&#39;alcol durante lo sviluppo può risultare in una costellazione di anomalie morfologiche e comportamentali che sono collettivamente noti come Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Alla fine più grave dello spettro è la sindrome alcolica fetale (FAS), caratterizzata da ritardo di crescita, dismorfismi cranio-facciale, e deficit neurocomportamentali. Studi con modelli animali, tra cui roditori, hanno chiarito molti meccanismi molecolari e cellulari coinvolti nella fisiopatologia di FASDs. Somministrazione di etanolo per roditori gravidanza è stato usato per modellare esposizione umana durante il primo e secondo trimestre di gravidanza. Terzo trimestre il consumo di etanolo negli esseri umani è stato modellato utilizzando roditori neonatali. Tuttavia, pochi studi sui roditori hanno caratterizzato l&#39;effetto dell&#39;esposizione all&#39;etanolo durante l&#39;equivalente di tutti e tre i trimestri di gravidanza umana, un modello di esposizione che è comune nelle donne in gravidanza. Qui vi mostriamo come costruire camere di vapore da subito omateriali btainable che possono ciascuno ospitare fino a sei gabbie standard del mouse. Descriviamo un paradigma camera di vapore che può essere utilizzato per modellare l&#39;esposizione a etanolo, con una minima manipolazione, durante tutte tre trimestri. I nostri studi dimostrano che le dighe in gravidanza hanno sviluppato notevole tolleranza metabolica all&#39;etanolo. Tuttavia, i topi neonatale non hanno sviluppato la tolleranza metabolica e il numero di feti, il peso del feto, il peso della placenta, il numero di cuccioli / figliata, il numero di morti cuccioli / figliata, e il peso dei cuccioli non è risultata significativamente influenzata dall&#39;esposizione etanolo. Un importante vantaggio di questo paradigma è la sua applicabilità a studi con topi geneticamente modificati. Inoltre, questo paradigma riduce al minimo la manipolazione degli animali, un importante confondere nella ricerca alcolica fetale.

Figura 2A mostra che sia i topi in gravidanza e prole neonatale sono stati esposti a concentrazioni di vapori di etanolo relativamente stabili nelle camere. Questi variavano tra 4-6 g / dl. Figura 2B mostra i BECs conseguiti nei topi in gravidanza in funzione del tempo. BEC sono stati misurati utilizzando un alcool deidrogenasi standard basato dosaggio 48. A G5, BECs rapidamente salito a ~ 60 mM 2 ore dopo l'inizio dell'esposizione e ha raggiunto la fine del periodo di esposi...

Dimostriamo la costruzione di camere di vapori dell&#39;alcol utilizzando materiali facilmente reperibili che ospitano contemporaneamente 6 gabbie del mouse. Descriviamo ulteriormente il loro utilizzo in un modello murino di esposizione fetale da alcol equivalente a tutti i 3 trimestri di gravidanza umana. Questo paradigma espone gli animali durante la gestazione e giorni postnatali 1-12.

Costruzione di vapore Chambers utilizzato per esporre topi da alcol Durante l&#39;equivalente di tutti i tre trimestri di Sviluppo Umano

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

In questo video, dimostreremo come costruire e assemblare camere di vapore di alcol. Descriveremo anche un paradigma di inalazione di alcol che espone il maas durante l'equivalente di tutti e tre i trimestri dello sviluppo umano. Le camere sono altamente personalizzabili in base ai livelli di alcol nel sangue desiderati o ai paradigmi di esposizione.Il nostro design a camera può ospitare fino a sei gabbie per topi di dimensioni standard in cui i topi hanno accesso ad lipid a cibo e acqua. Questo paradigma produce livelli di alcol nel sangue relativamente alti sia nei topi gravidi che nei cuccioli senza l'uso di rosolo. Sentiamo dal laboratorio di Fernando Valenzuela presso l'Università del New Mexico.In questo video, dimostreremo l'assemblaggio di camere di vapore in policarbonato etanolo e descriveremo il loro utilizzo in un modello murino di esposizione fetale all'alcol in tutti e tre i trimestri. Chiunque abbia competenze di falegnameria di base sarà in grado di costruire le camere e le dimensioni possono essere modificate per adattarsi alle esigenze individuali. Le camere possono essere alloggiate nella struttura per animali per tutta la durata dell'esposizione e ridurranno al minimo lo stress legato al trasporto e alla movimentazione degli animali.A causa delle differenze nelle fasi di sviluppo, la somministrazione di etanolo ai roditori gravidi è stata utilizzata per modellare l'esposizione umana durante il primo e il secondo trimestre, mentre la somministrazione di etanolo ai neonati è stata utilizzata per modellare l'esposizione al terzo trimestre. Queste camere sono progettate per ospitare più gabbie per topi contemporaneamente ed esporre le madri gravide e i neonati ospitati con la loro madre. Alcuni dei vantaggi dell'utilizzo di questo paradigma di esposizione all'alcol includono la capacità di imitare tutti e tre i trimestri di sviluppo, la riduzione dello stress per le madri gravide e i cuccioli, nonché la flessibilità nel controllo del livello di esposizione all'etanolo.Su cinque singoli pezzi da 24 x 48 pollici di un quarto di pollice di spessore, le lastre di policarbonato trasparente misurano e segnano le dimensioni indicate per la parte superiore, inferiore, anteriore, posteriore, lati e la porta. Queste dimensioni costruiranno una camera larga 32 pollici, profonda 22 pollici e alta 14 pollici. Una camera di queste dimensioni si adatta adeguatamente a sei gabbie per topi standard che misurano 11 pollici e mezzo per sette pollici e mezzo per cinque pollici e mezzo di altezza.È importante ricordare che questo fornisce una sola camera e questo processo dovrà essere ripetuto per ottenere due camere identiche, una camera per l'esposizione all'alcol e una camera per le esposizioni controllate solo dall'aria. Le lastre di policarbonato possono essere tagliate con una sega circolare dotata di lama da 80 denti o con un seghetto alternativo dotato di lama specifica in plastica o plexiglass. Tagliare le lastre di policarbonato alle dimensioni misurate facendo attenzione il più possibile a garantire tagli dritti.Ciò ridurrà gli spazi vuoti durante il processo di assemblaggio una volta che tutti i pezzi sono stati tagliati. Misura un rettangolo di otto pollici per 16 pollici al centro del pannello frontale per creare un'apertura per la porta. Usando una punta da trapano da tre otto pollici, praticare un foro all'interno di ogni angolo.I fori vengono utilizzati per inserire la lama secondaria della maschera attraverso il foglio di policarbonato e tagliare via l'apertura. Se si utilizza una sega circolare, è possibile eseguire un taglio a tuffo. Potrebbero essere necessari alcuni tagli all'indietro per ripulire i bordi vicino agli angoli.Una volta tagliati tutti i bordi, il centrotavola può essere rimosso e si rimane con un'apertura nel pannello frontale. Per iniziare il montaggio della porta, segnare i fori necessari per fissare la cerniera del pianoforte alla porta. Utilizzando una punta da trapano da cinque 16 pollici per praticare i fori di svasatura in corrispondenza dei segni, questi fori di svasatura accetteranno la testa della vite e devono essere praticati solo a metà del foglio di policarbonato.Con tre punte da trapano da 16 pollici, completare i fori attraverso il foglio utilizzando i fori di svasatura come guida prima del montaggio. Rimuovere circa due pollici della copertura protettiva delle lastre di policarbonato per consentire la saldatura dei pezzi. Il processo di assemblaggio può essere rapido, quindi può essere utile stendere la parte inferiore, la parte posteriore, la parte anteriore e i lati prima di saldare i pezzi insieme.Per saldare il policarbonato, utilizzare la saldatura a presa rapida su cemento solvente 16. Per iniziare il montaggio, aggiungere un generoso cordone di saldatura sul bordo inferiore del pezzo laterale. Asciugare immediatamente eventuali gocce di saldatura con un tovagliolo di carta.Posizionare il lato sul pezzo inferiore con l'aiuto. Assemblare il resto delle pareti sul fondo della camera. Ricorda che per le dimensioni indicate le parti laterali si inseriranno tra il pannello anteriore e posteriore.Una volta assemblate le pareti, riempire gli spazi tra i giunti dall'interno con il Weldon. Per fissare la parte superiore della camera, aggiungere una generosa quantità di Weldon alla parte superiore di ogni parete. Posizionare il pannello superiore sopra le pareti e allineare i bordi.Usa i morsetti della barra per tenere tutto in posizione mentre la saldatura si indurisce. In alternativa, è possibile utilizzare libri di testo pesanti durante il processo di polimerizzazione per garantire che la porta poggi a filo all'esterno della camera. Un pezzo di policarbonato da un pollice per 12 pollici deve essere saldato al pannello frontale un pollice sotto l'apertura.La cerniera si attaccherà a questo distanziatore e consentirà alla porta di sigillare la camera. Per costruire il tubo di ingresso, tagliare due pezzi di tubo in polietilene da mezzo pollice lungo 12 pollici. Taglia anche un pezzo di un pezzo di tubo di polietilene da mezzo pollice per erogare l'alcol vaporizzato o il trapano ad aria.Un foro di cinque 16 pollici a circa un pollice dall'estremità di ciascuno dei pezzi da 12 pollici di tubo in polietilene. Assemblare il sistema di erogazione dell'aria utilizzando due spine da tre otto pollici e un connettore a T da tre ottavi di pollice. Assicurati che i fori che hai praticato nel tubo in polietilene siano i più lontani dal connettore a T.Fissare la cerniera del pianoforte alla porta, assicurandosi che i fori del sottolavandino siano rivolti verso l'alto. Utilizzando quattro viti e dadi da 40 pezzi, fissare la cerniera del pianoforte alla porta. Usa la porta come guida e segna i fori per il pianoforte Cerniera sul distanziatore da un pollice sul pannello frontale con tre punte da trapano da 16 pollici.Praticare i fori nel pannello frontale per fissare la porta con quattro viti e dadi da 40 pezzi. Fissare la porta e la cerniera del pianoforte al pannello frontale. Serrare con una chiave.Montare il fermo premuto. Morsetto a levetta come mostrato. Segnare i fori del morsetto a levetta sul pannello frontale utilizzando la porta come guida.Ripetere l'operazione per due morsetti a levetta lungo la parte superiore e uno su ciascun lato della porta con tre punte da trapano da 16 pollici. Praticare i fori per i morsetti a ginocchiera. Fissare i morsetti a ginocchiera con quattro viti e dadi da 40 pezzi.Con i dadi all'interno della camera, serrare con una chiave per garantire una camera ermetica. Tagliare e fissare una guarnizione in gomma larga tre ottavi di pollice lungo il bordo della porta. Quando la porta è chiusa, il bulbo formerà una chiusura ermetica tra la porta e il pannello frontale della camera.Segna il centro del pannello superiore per creare una porta di ingresso per la camera con una punta da trapano da cinque otto pollici. Praticare il foro per la porta di ingresso. Crea una porta di uscita praticando un foro di mezzo pollice nella parte inferiore centrale del pannello posteriore.Inserire un adattatore a parete passante da tre otto pollici nella porta di uscita e fissarlo dall'interno della camera. A questo punto, la copertura protettiva può essere rimossa. Installare il sistema di erogazione dell'aria attraverso il foro nel pannello superiore dall'esterno.Inserire un gomito da tre otto pollici a 90 gradi Praticare un foro da mezzo pollice nella parte anteriore della porta. Quindi inserire un setto di tenuta da mezzo pollice nel foro. Questo servirà come porta per misurare il vapore di etanolo.A questo punto, il taglio e la foratura sono completi e le camere possono essere pulite. Assemblare il rack e posizionare le due camere e il pub dell'aria sul rack. Per aiutare a organizzare il sistema di flusso d'aria, attaccare un pezzo di scarto di policarbonato al guscio inferiore e che può essere utilizzato per aiutare a montare i regolatori del flusso d'aria segnare e praticare una presa di trapano di tre quarti di pollice per i tre regolatori del flusso d'aria nel pezzo di scarto di policarbonato.Fissare i regolatori del flusso d'aria al policarbonato con i dadi in dotazione. Collegare un adattatore a parete passante da tre otto pollici a ciascuna porta del regolatore per la camera di vapore dell'etanolo. Un regolatore del flusso d'aria controllerà la quantità di aria che viene fatta gorgogliare attraverso l'alcol liquido e uno controllerà la quantità di aria che viene miscelata con l'alcol vaporizzato.L'ultimo controllerà la quantità d'aria per la seconda camera di sola aria. Assemblare il pallone imbevuto di alcol come mostrato. Utilizzando tre tubi da otto pollici.Assemblare il sistema di erogazione dell'aria come illustrato nello schema utilizzando connettori a T o Y per dividere le linee. Una singola pompa fornisce un flusso d'aria sufficiente sia per le camere di controllo della sola aria che per le camere dell'alcol. Collegare tre tubi da otto pollici alle porte di uscita.Aggiungere 600 mil di un etanolo a 90 gradi al pallone e collegarlo al sistema. Per testare il livello di vapore di etanolo, utilizzare una siringa e un ago per aspirare cinque mil di aria attraverso la septina. Rimuovere l'ago e diluire il campione d'aria da uno a 12 tirando la siringa fino a 60 ml.Con l'aria ambiente, spingere lentamente l'aria attraverso l'etilometro per misurare i vapori di etanolo. I livelli di etanolo vaporizzato devono essere correlati ai livelli di alcol nel sangue animale per ogni singolo sistema. Una volta che le camere si trovano nella struttura per animali, ricordati di svuotare le camere direttamente nel sistema di ventilazione della stanza.I topi femmine di due o tre mesi sono stati alloggiati in gruppo per almeno una settimana, mentre i topi maschi di due o cinque mesi sono stati alloggiati individualmente per due settimane. I topi femmina sono stati accoppiati con maschi alloggiati individualmente per cinque giorni per consentire l'accoppiamento. Dopo l'accoppiamento, le femmine sono state rimosse dai maschi alloggiate individualmente in una nuova gabbia e collocate all'interno delle camere di vapore.Gli animali sono stati esposti all'etanolo per quattro ore al giorno. Durante il ciclo di luce da G 5 a G 20. Le femmine venivano periodicamente pesate per monitorare la gravidanza.Gli animali non sono stati esposti il giorno della nascita per evitare la morte dei cuccioli. Il primo giorno dopo la nascita, i cuccioli e le mamme sono stati rimessi nelle camere ed esposti fino al postnatale. I cuccioli del giorno 12 sono stati periodicamente pesati per monitorare la crescita.Per avviare il luogo di inalazione del vapore. Le dighe gravide alloggiate individualmente sia nell'alcol che nell'aria solo. Le camere chiudono e sigillano le porte.Aggiungere il pallone di etanolo liquido, collegarlo al sistema e accendere la pompa. I regolatori del flusso d'aria controllano la quantità di aria che entra nell'etanolo liquido e la quantità di aria che viene miscelata con il vapore di etanolo. Il rapporto tra vapore di etanolo e aria controlla i livelli finali di vapore di etanolo nelle camere.L'aria controlla solo il flusso d'aria è impostato sul flusso d'aria combinato dell'etanolo e dell'aria. Dopo l'esposizione ai vapori di etanolo, il cibo viene cambiato per eliminare il cibo che potrebbe aver assorbito l'etanolo vaporizzato. Le porte delle camere sia per l'alcol che per l'aria sono incrinate per consentire lo scambio d'aria con la stanza.In questo video, abbiamo dimostrato come assemblare camere di vapore di etanolo e descritto un paradigma di inalazione di vapore di alcol nel topo che espone gli animali durante tutti e tre i trimestri umani equivalenti. Il livello di vapore alcolico può essere facilmente regolato per modellare livelli di alcol nel sangue bassi o alti. Uno dei vantaggi di queste camere è il fatto che le camere sono abbastanza grandi da ospitare più gabbie in un dato punto.Ciò consente agli animali di essere alloggiati all'interno delle camere per tutta la durata dell'esposizione. Ciò riduce al minimo lo stress causato all'animale dalla manipolazione o dal trasporto. Inoltre, questo paradigma può essere personalizzato per qualsiasi trimestre di interesse e/o livello di esposizione durante la costruzione.È fondamentale che tutti i tagli siano dritti e quadrati per garantire una camera ermetica durante la saldatura dei pezzi di policarbonato. È importante muoversi in modo rapido ed efficiente perché le saldature si asciugano rapidamente. Dopo aver visto questo video, dovresti essere in grado di costruire le tue camere di inalazione del vapore.

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