Valutazione della murini esercizio di resistenza senza l'uso di una griglia Shock: Un'alternativa alla Esercizio forzato

L'obiettivo generale di questa procedura è determinare la resistenza all'esercizio volontario. Nei topi da laboratorio, ciò si ottiene consentendo prima al topo di acclimatarsi alla sala operatoria nella sua gabbia domestica per una o due ore. Il mouse può quindi acclimatarsi al tapis roulant e al suono del motore.

Successivamente, la velocità del tapis roulant viene gradualmente aumentata fino a quando il mouse non funziona comodamente alla sua massima velocità sostenuta. Il passaggio finale consiste nel determinare quando il mouse ha raggiunto l'esaurimento. In definitiva, la quantità di tempo che il topo ha corso fino all'esaurimento rivela una misura della resistenza all'esercizio senza gli effetti confondenti dello stress derivante dall'uso di una griglia d'urto.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che è un perfezionamento dei metodi esistenti per determinare la resistenza all'esercizio e i topi, principalmente perché non utilizza una griglia di tiro per incoraggiare i topi a correre, riducendo così gli effetti confondenti dello stress, sia per l'animale che per l'esperimento. Decidere in anticipo i gruppi sperimentali e le procedure post-esercizio per i topi. Posiziona il tapis roulant su un carrello o un tavolo robusto in una stanza tranquilla dedicata a questa procedura.

Durante le prove di corsa, impostare il tapis roulant su corsie delle dimensioni di un topo e con un'inclinazione adeguata al protocollo. L'inclinazione di cinque gradi positivi viene utilizzata qui per ovviare al danno muscolare dovuto all'esercizio eccentrico che si verifica durante la corsa in discesa. Posiziona un tampone assorbente sotto la campana del tapis roulant per raccogliere le feci.

Consentire al topo di acclimatarsi alla sala operatoria nella sua gabbia domestica trasportata con i compagni di gabbia per una o due ore. Seleziona un singolo mouse e registra il suo numero di etichetta. Pesa anche il mouse e registra il suo peso.

Posiziona il mouse nel tapis roulant senza il motore acceso per acclimatarsi per circa cinque minuti. Accendere l'alimentazione senza il nastro del tapis roulant in funzione e lasciare che il mouse si abitui al rumore della macchina per altri cinque minuti. A questo punto, rimuovere i topi nei gruppi sedentari dal tapis roulant e rimetterli nella loro gabbia o condurre procedure post-esercizio secondo il disegno sperimentale.

Dopo l'acclimatazione, ruotare la cintura a bassa velocità. Quando l'animale sta esplorando la cintura e non sulla piattaforma, tocca o solleva delicatamente i quarti posteriori del topo con un abbassalingua da una a tre volte per incoraggiare gli animali riluttanti a rimanere sul tapis roulant e correre. Avvia un timer di laboratorio Una volta che il mouse funziona alla velocità iniziale di 10 metri al minuto, aumenta lentamente la velocità.

Quando il mouse si trova nella parte superiore del nastro con incrementi di un metro al minuto circa ogni due minuti, ridurre la velocità all'impostazione precedente. Se il mouse corre ripetutamente in brevi raffiche e non a un ritmo costante, la maggior parte dei topi correrà prontamente, ma a volte si ferma per brevi periodi. Usa l'abbassalingua per picchiettare o sollevare delicatamente la parte posteriore dell'animale per incoraggiare la ripresa della corsa.

Spesso il solo notare la mano con l'abbassalingua che viene verso di loro fa sì che i topi corrano ancora un po'. Non arrestare il timer per interruzioni temporanee della marcia. Determina la velocità di corsa massima sostenuta di ciascun mouse regolando la velocità e osservando il mouse registrare questa velocità.

Alcuni topi si rifiuteranno completamente di correre. Tali topi correranno in brevi raffiche. Quindi fermarsi per strigliare o pedalare, cioè sedersi sulla piattaforma e utilizzare le zampe anteriori sulla cintura.

La classica postura di un topo che rifiuta è curva con tutte e quattro le zampe piantate sotto l'animale per evitare di essere spinto indietro sul tapis roulant dall'abbassalingua. Occasionalmente un topo diventa aggressivo nei confronti dell'abbassalingua quando non è disposto a correre, mordendo la lingua, abbassando l'abbassalingua o arrampicandosi su di esso come via di fuga. Entro i primi cinque minuti della prova è chiaro se il mouse funzionerà o meno.

Rimuovi e identifica i topi che si rifiutano di scappare dall'analisi, ma non contarli come topi sedentari. A seconda del disegno sperimentale, i topi che rifiutano possono essere ritestati in un giorno diverso. La stanchezza è definita da tre soste consecutive e dal rifiuto di riprendere la corsa nonostante il gentile incoraggiamento.

Oltre a segni fisici di esaurimento come respirazione affannosa e postura divaricata. Identifica i topi esausti e ferma il timer. Registra la quantità totale di tempo trascorso a correre a tutte le velocità.

A seconda del disegno sperimentale, riportare il topo nella sua gabbia o condurre procedure immediate post-esercizio come la raccolta di sangue o tessuti. Secondo le linee guida istituzionali, pulire la cintura con un asciugamano germicida dopo aver testato ogni singolo topo in modo che l'odore del topo precedente non influenzi il comportamento dei topi successivi testati per il topo successivo. Usa un abbassalingua nuovo per ogni topo.

I topi che risiedono nella stessa gabbia possono essere testati in sequenza lo stesso giorno senza ulteriore acclimatazione alla sala operatoria. La resistenza all'esercizio riflette accuratamente il profilo molecolare e metabolico di diversi ceppi di C 57 neri sei topi che differiscono nell'espressione delle citochine derivate dal muscolo I topi transgenici IL 15 che sovraesprimono IL 15 mostrano tempi di corsa all'esaurimento significativamente aumentati rispetto ai controlli ATE, mentre i topi privi di IL 15 mostrano tempi di esecuzione significativamente ridotti prima di raggiungere i controlli wild type di esaurimento. Vedi 57 topi neri da due fonti diverse non mostrano tempi di esecuzione significativamente diversi.

La velocità di corsa massima sostenuta differiva solo nei topi knockout IL 15. Una limitazione inevitabile di questa tecnica è che alcuni topi si rifiutano di correre volontariamente. La percentuale di giovani topi di controllo wild type che si rifiutano di correre è di circa il 10%A quattro mesi di età, la percentuale di rifiuti aumenta al 20% a otto mesi di età e aumenta a oltre il 60% entro i 16 mesi di età.

Tuttavia, la percentuale di rifiuti nella fascia di età più avanzata è significativamente più bassa nei topi transgenici IL 15. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di rimanere calmi e rilassati e prestare attenzione al comportamento del topo. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare un tapis roulant per determinare la resistenza all'esercizio e i topi senza usare l'e chakra.