Name: Valutazione della murini esercizio di resistenza senza luso di una griglia Shock: Unalternativa alla Esercizio forzato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-14T16:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Scopri un metodo etico per valutare la resistenza all'esercizio nei topi da laboratorio senza griglie elettroshock. Questa tecnica riduce lo stress e migliora la validità dei risultati sperimentali in fisiologia animale.

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Supportato da Merit Review # BX001026 dal Department of Veterans Affairs (LSQ), e l&#39;uso di risorse e strutture in Health Care VA Puget Sound System, il Core transgenico risorse presso l&#39;Università di Washington Nathan Shock Centro di Eccellenza in Biologia di base di invecchiamento (NIA # 5P30AG-013.280), e l&#39;Università di Washington Diabete Endocrinologia Research Center (NIH # P30 DK-17047). Ringraziamo Cynthia Pekow DVM e Kari L. Koszdin DVM, VA Puget Sound, fornito utili commenti sul manoscritto.

La procedura qui descritta è stata approvata dal suono Institutional Animal Care and Use Committee VA Puget, ed è conforme con la Guida ILAR per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio. Preparazione 1 Sperimentale <ol><li> Decidere in anticipo se il sangue o raccolta di tessuto subito dopo l&#39;esercizio fisico è necessario, e in caso affermativo, determinare l&#39;intervallo post-esercizio per la conduzione di tali procedure. Gli esempi includono la determinazione dell&#39;ormone indotta da esercizio o il rilascio di citochine in circolo (che richiede la raccolta di sangue), la determinazione di esercizio espressione indotta di specie di mRNA di interesse (che richiede l&#39;eutanasia seguito da collezione dei tessuti). Qualora non sia indicata l&#39;esercizio di sangue posta immediato o raccolta di tessuto, avere materiali per queste procedure a portata di mano in camera procedura. Ricevi revisione istituzionale approvazione bordo e svolgere, secondo le linee guida legislative. Non tutti gli esperimenti richiedono sangue postexercise o collecti tessutosu; un semplice confronto di resistenza in esecuzione può essere tutto ciò che è necessario. </li><li> Decidere in anticipo sui gruppi sperimentali e procedure postexercise per topi (vedi descrizione sopra). </li><li> Posizionare il tapis roulant su un tavolo robusto in una stanza tranquilla dedicata durante le prove di marcia a questa procedura. </li><li> Posizionare il tapis roulant per i vicoli del mouse di dimensioni e ad un&#39;inclinazione appropriata al protocollo. L&#39;inclinazione di 5 o è qui utilizzato per evitare danno muscolare per esercizio eccentrico (allungamento del muscolo allo stesso tempo come contrazione) che si verifica durante la discesa in esecuzione. </li><li> Inserire un tampone assorbente sotto la cintura tapis roulant per la cattura feci. </li></ol> 2 Acclimatazione del mouse sul tapis roulant Decidere se è necessario un (nessun esercizio) gruppo &quot;sedentario&quot; di topi, ed esporre i topi sedentari per il tapis roulant senza correre come indicato nei passaggi 2,1-2,5. Determinare se sono necessari 2 o 4 gruppi sperimentali,. esempio, sedentario / Esercizio (2 gruppi); Controlli esercitati / esercitata trattamento (2 gruppi, senza animali sedentari); o, sedentario / Esercitate x controllo / trattamento (4 gruppi). Il &quot;trattamento&quot; può essere un genotipo transgenico o ko, un regime farmacologico, dieta speciale, o altro intervento sperimentale. <ol><li> Lasciare che il mouse si adatti alla stanza procedimento nella sua gabbia casa trasportati, con i compagni di gabbia, per 1 - 2 ore. </li><li> Selezionare un singolo mouse e il numero di etichetta di registrazione; pesare mouse e il peso record. </li><li> Posizionare il mouse nel tapis roulant senza il motore acceso per acclimatazione, circa 5 min. Accendete, senza la corsa cintura tapis roulant, e lasciare il mouse acclimatare alla rumorosità della macchina per altri 5 min. </li><li> Rimuovere i topi nei gruppi &quot;sedentari&quot; (se usato; vedi Nota 1) dal tapis roulant a questo punto e restituirli alla loro gabbia o eseguire procedure di post-esercizio come da progetto sperimentale (vedi nota 2). </li></ol><ol><li> Dopo acclimatazione, girare il nastro ad una velocità bassa (10 m / min) quando l&#39;animale sta esplorando la cintura e non sulla piattaforma. </li><li> Toccare o sollevare il posteriore del mouse con un abbassalingua, una a tre volte, per incoraggiare gli animali riluttanti a restare sul tapis roulant e correre delicatamente. NOTA: La maggior parte dei topi verrà eseguito immediatamente, ma a volte fermarsi per brevi periodi. In questo caso, utilizzare il divaricatore di linguetta di toccare delicatamente o sollevare la parte posteriore dell&#39;animale per favorire la ripresa di esecuzione. Spesso, i topi non hanno bisogno di essere toccato con la lingua depressore; notando la mano con l&#39;abbassalingua venire verso di loro fa sì che i topi a correre un po &#39;di più. </li><li> Avviare un timer laboratorio una volta che il mouse è in funzione alla velocità iniziale di 10 m / min. </li><li> Girare la velocità lentamente quando il mouse è in alto (fine salita) della cintura, in incrementi di 1 m / min, circa ogni 2 min. </li><li> Girare la velocità fino alimpostazione precedente se il mouse viene eseguito più volte in brevi raffiche e non ad un ritmo costante. </li><li> Determinare la massima velocità sostenuta esecuzione di ogni mouse (di solito 14-17 m / min per C57BL / 6 topi) regolando la velocità e guardare il mouse. Registrare questa velocità. NOTA: La posizione dell&#39;animale sul tapis roulant spunti l&#39;investigatore per la volontà dell&#39;animale da eseguire ad una velocità più elevata. Se il mouse è all&#39;estrema (in salita) finale e per correre nel muro, è pronto a correre a una velocità superiore. Se il mouse viene eseguito ad un ritmo costante nel mezzo del tapis roulant può essere alla sua velocità massima, o può avere bisogno di ulteriori regolazioni, a seconda della qualità della corsa. </li></ol> 4. endpoint e topi che si fermano <ol><li> Utilizzare l&#39;abbassalingua per toccare delicatamente o sollevare i quarti posteriori di animali che si fermano, per favorire la ripresa di esecuzione (vedi nota 3.2). Non interrompere il timer per interruzioni temporanee in esecuzione. </li><li> Identificare e RemovE i topi che si rifiutano di funzionare. Nota: questo sul foglio dati. A seconda del disegno sperimentale, i topi che rifiutano possono essere riesaminati in un giorno diverso NOTA: alcuni topi completamente rifiutare di eseguire. Tali topi saranno eseguiti in brevi raffiche, poi si ferma per lo sposo o &quot;pedale&quot;, cioè, sedersi sulla piattaforma e usare le zampe anteriori sul nastro. La posizione di questi topi è curvo, con tutti e quattro i piedi piantati sotto l&#39;animale per evitare di essere spinto indietro sul tapis roulant con la lingua depressore. Di tanto in tanto un mouse diventa aggressivo verso l&#39;abbassalingua quando non vuole correre, mordere l&#39;abbassalingua o salire come una via di fuga. E &#39;chiaro entro i primi 5 minuti del processo se il mouse, o non lo farà, correre. Rimuovere i topi che si rifiutano di eseguire dall&#39;analisi, ma non li contano come topi &quot;sedentari&quot;. </li><li> Identificare i topi esausti e arrestare il timer. NOTA: Esaurimento è definito da tre fermate successive e rifiuto di risume in esecuzione nonostante l&#39;incoraggiamento gentile, oltre a segni fisici di stanchezza, come respiro affannoso e la postura strombato. I topi recuperare dalla stanchezza in 30 a 60 min. </li><li> Annotare la quantità totale di tempo trascorso in esecuzione a tutte le velocità. </li><li> A seconda del disegno sperimentale, o di rispedire il mouse è alla sua gabbia, o conducono le procedure postexercise immediate, come sangue o raccolta di tessuto come da linee guida istituzionali. </li><li> Pulire la cinghia pulita con una salvietta germicida dopo aver testato ogni singolo mouse in modo che il profumo del mouse precedente non influenza il comportamento dei successivi topi testati. </li><li> Verificare il successivo mouse. Utilizzare una nuova abbassalingua per ogni mouse. I topi che risiedono nella stessa gabbia possono essere testati in sequenza nello stesso giorno senza acclimatazione aggiuntivo per la stanza procedura. </li></ol>

<ol><li>Hill, J. A., Wyatt, H. R., Reed, G. W., Peters, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+and+the+environment%3A+where+do+we+go+from+here%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Obesity and the environment: where do we go from here?</a> Science. 299 (5608), 853-855 (2003).</li>
<li>Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+linking+obesity+to+insulin+resistance+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes.</a> Nature. 444 (7121), 840-846 (2006).</li>
<li>Van Gaal, L. F., Mertens, I. L., De Block, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+linking+obesity+with+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms linking obesity with cardiovascular disease.</a> Nature. 444 (7121), 875-880 (2006).</li>
<li>Pischon, T., Nothlings, U., Boeing, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Obesity and cancer.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 67 (2), 128-145 (2008).</li>
<li>Benton, C. R., Wright, D. C., Bonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGC-1%CE%B1-mediated+regulation+of+gene+expression+and+metabolism%3A+Implications+for+nutrition+and+exercise+prescriptions%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Physiol.+Nutr.+Metab%22%5BJournal%5D)">PGC-1α-mediated regulation of gene expression and metabolism: Implications for nutrition and exercise prescriptions.</a> Appl. Physiol. Nutr. Metab. 33 (5), 843-862 (2008).</li>
<li>Handschin, C., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+exercise+and+PGC1alpha+in+inflammation+and+chronic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The role of exercise and PGC1alpha in inflammation and chronic disease.</a> Nature. 454 (7203), 463-469 (2008).</li>
<li>Vasunilashorn, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+Short+Physical+Performance+Battery+score+to+predict+loss+of+ability+to+walk+400+meters%3A+analysis+from+the+InCHIANTI+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A+Biol.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Use of the Short Physical Performance Battery score to predict loss of ability to walk 400 meters: analysis from the InCHIANTI study.</a> J. Gerontol. A Biol. Med. Sci. 64 (2), 223-229 (2009).</li>
<li>Wang, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+muscle+fiber+type+and+running+endurance+by+PPAR%CE%B4%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Bio%22%5BJournal%5D)">Regulation of muscle fiber type and running endurance by PPARδ.</a> PLoS Bio. 2 (10), e294(2004).</li>
<li>LeBrasseur, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myostatin+inhibition+enhances+the+effects+of+exercise+on+performance+and+metabolic+outcomes+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A+Biol.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Myostatin inhibition enhances the effects of exercise on performance and metabolic outcomes in aged mice.</a> J. Gerontol. A Biol. Med. Sci. 64 (9), 940-948 (2009).</li>
<li>Burch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electric+pulse+stimulation+of+cultured+murine+muscle+cells+reproduces+gene+expression+changes+of+trained+mouse+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Electric pulse stimulation of cultured murine muscle cells reproduces gene expression changes of trained mouse muscle.</a> PLoS ONE. 5 (6), e10970(2010).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+biogenesis+and+peroxisome+proliferator-activated+receptor-%CE%B3+coactivator-1%CE%B1+%28PGC-1%CE%B1%29+deacetylation+by+physical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial biogenesis and peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α (PGC-1α) deacetylation by physical activity.</a> Diabetes. 60 (1), 157-167 (2011).</li>
<li>Knab, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeatability+of+exercise+behaviors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Repeatability of exercise behaviors in mice.</a> Physiol. & Behavior. 98 (4), 433-440 (2009).</li>
<li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-15+Receptor+deletion+results+in+circadian+changes+of+locomotor+and+metabolic+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">IL-15 Receptor deletion results in circadian changes of locomotor and metabolic behavior.</a> J. Mol. Neurosci. 41 (2), 315-321 (2010).</li>
<li>Wu, X., Hsuchou, H., Kastin, A. J., Rood, J. C., Pan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+interleukin-15+receptor+in+normal+anxiety+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav.+Immun%22%5BJournal%5D)">Essential role of interleukin-15 receptor in normal anxiety behavior.</a> Brain Behav. Immun. 24 (8), 1340-1346 (2010).</li>
<li>Pistilli, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+IL-15+receptor+%CE%B1+alters+the+endurance%2C+fatigability%2C+and+metabolic+characteristics+of+mouse+fast+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Loss of IL-15 receptor α alters the endurance, fatigability, and metabolic characteristics of mouse fast skeletal muscles.</a> J. Clin. Invest. 121 (8), 3120-3132 (2011).</li>
<li>Quinn, L. S., Anderson, B. G., Conner, J. D., Wolden-Hanson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-15+overexpression+promotes+endurance%2C+oxidative+energy+metabolism%2C+and+muscle+PPAR%CE%B4%2C+SIRT1%2C+PGC-1%CE%B1%2C+and+PGC-1%CE%B2+expression+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">IL-15 overexpression promotes endurance, oxidative energy metabolism, and muscle PPARδ, SIRT1, PGC-1α, and PGC-1β expression in male mice.</a> Endocrinology. 154 (1), 232-245 (2013).</li>
<li>Quinn, L. S., Anderson, B. G., Conner, J. D., Wolden-Hanson, T., Marcell, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-15+is+required+for+post-exercise+induction+of+the+pro-oxidative+mediators+PPARdelta+and+SIRT1%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">IL-15 is required for post-exercise induction of the pro-oxidative mediators PPARdelta and SIRT1.</a> Endocrinology. , (2013).</li>
<li>Ward, J. M., Anver, M. R., Mahler, J. F., Devor-Henneman, D. E. Chapter 13, Pathology of mice commonly used in genetic engineering (C57BL/6; 129; B6,129; and FVB/N). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWard%2C+JM+%22The+Pathology+of+Genetically+Engineered+Mice%22">The Pathology of Genetically Engineered Mice</a>. Ward, J. M., Mahler, J. F., Maronpot, R. R., Sundberg, J. P. , Iowa State University Press. Ames, IA, Chapter. 161-179 (2000).</li>
<li>Lightfoot, J. T., Turner, M. J., Debate, K. A., Kleeberger, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstrain+variation+in+murine+aerobic+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Sci.+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Interstrain variation in murine aerobic capacity.</a> Med. Sci. Sports Exerc. 33 (12), 2053-2057 (2001).</li>
<li>Turner, M. J., Kleeberger, S. R., Lightfoot, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+genetic+background+on+daily+running-wheel+activity+differs+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Genomics%22%5BJournal%5D)">Influence of genetic background on daily running-wheel activity differs with aging.</a> Physiol. Genomics. 22 (1), 76-85 (2005).</li>
<li>Haight, T. J., van der Laan, M. J., Manini, T., Tager, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+effects+of+leisure-time+physical+activity+on+walking+speed%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr.+Health+Aging%22%5BJournal%5D)">Direct effects of leisure-time physical activity on walking speed.</a> J. Nutr. Health Aging. 17 (8), 666-673 (2013).</li>
<li>Studenski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gait+speed+and+survival+in+older+adults%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Gait speed and survival in older adults.</a> JAMA. 305 (1), 50-58 (2011).</li>
<li>Jacobsen, K. R., Kalliokoski, O., Teilmann, A. C., Hau, J., Abelson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+isoflurane+anaesthesia+and+vasectomy+on+circulating+corticosterone+and+ACTH+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gen.+Comp.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">The effect of isoflurane anaesthesia and vasectomy on circulating corticosterone and ACTH in BALB/c mice.</a> Gen. Comp. Endocrinol. 179 (3), 406-413 (2012).</li>
<li>Sellers, T. L., Jaussi, A. W., Yang, H. T., Heninger, R. W., Winder, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+exercise-induced+increase+in+glucocorticoids+on+endurance+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of the exercise-induced increase in glucocorticoids on endurance in the rat.</a> J. Appl. Physiol. 65 (1), 173-178 (1988).</li>
<li>Cook, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forced+treadmill+exercise+training+exacerbates+inflammation+and+causes+mortality+while+voluntary+wheel+training+is+protective+in+a+mouse+model+of+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav.+Immun%22%5BJournal%5D)">Forced treadmill exercise training exacerbates inflammation and causes mortality while voluntary wheel training is protective in a mouse model of colitis.</a> Brain Behav. Immun. 33, 46-56 (2013).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.

Qui descritto è un metodo per valutare la resistenza esecuzione volontaria nei topi di laboratorio utilizzando un tapis roulant motorizzato senza l&#39;uso di una griglia di shock. Questo metodo può rivelare differenze tra sub-linee di C57BL / 6 topi che differiscono nella espressione della citochina IL-15, che a sua volta provoca differenze nell&#39;espressione dei fattori che sottendono esercizio di resistenza 16,17. In linea con i principi della &quot;Tre cuori in R&quot; nel laboratorio di scienze animali...

L&#39;obesità, insulino-resistenza e diabete di tipo 2 sono disordini metabolici correlati che esercitano profondi effetti sulla salute sia negli Stati Uniti e le popolazioni di tutto il mondo 1-4. Esercizio di resistenza può prevenire, così come trattare, queste condizioni di 5,6. Inoltre, la valutazione della velocità di deambulazione e la resistenza sono utilizzate come test clinici diagnostici per fragilità, sarcopenia, e le conseguenze di altri disturbi come la malattia polmonare ostruttiva cronica, in soggetti umani 7. I percorsi biochimici alla base degli effetti benefici di esercizio di resistenza sulla composizione corporea e la sensibilità all&#39;insulina stanno cominciando da chiarire, utilizzando topi geneticamente o farmacologicamente modificati che display migliorato o ridotto la capacità di esercizio 8-11. Tuttavia, molti di questi studi hanno utilizzato tapis roulant motorizzati dotati di griglie d&#39;urto per costringere i topi a correre 8-11. Animali che smettono di esecuzione sono spinti dala cinghia in movimento tapis roulant su una griglia che offre una scossa elettrica piede; per sfuggire stimolo negativo, i topi tornano a correre sul nastro. Tali procedure possono introdurre stress psicologico e comportamento di evitamento come fattori di confondimento che influenzano parametri sperimentali 12. Altri metodi di misurazione di resistenza, come la quantificazione dell&#39;attività ambulatoriale utilizzando un apparato trave-break o quantificazione di in-gabbia corsa della ruota, possono essere confusi dalla modulazione dei cicli circadiani, ansia, formazione involontaria, o cibo comportamento di ricerca 12-16. Inoltre, queste procedure richiedono una custodia ad una, un&#39;altra fonte di stress psicologico per i topi. Pertanto, è necessaria una misura diretta di esercizio di resistenza non confusi da stress. Per ovviare a questi problemi, il nostro laboratorio ha sviluppato e validato un metodo per valutare la massima capacità di esecuzione e durature in esecuzione velocità non allenati, topi naïve utilizzando un tapis roulant motorizzato non equipped con una griglia shock. Lo spazio alla fine del tappeto scorrevole, dove la griglia di shock risiede abitualmente, allora diventa una piattaforma per i topi a riposo, e fornisce un posto per topi che rifiutano di correre a sedersi fino rimossa dall&#39;apparecchio. I topi sono incoraggiati a correre da un osservatore umano per mezzo picchiettando leggermente o toccare con un abbassalingua, insieme con la sensibilità alla disponibilità volontaria per l&#39;esecuzione da parte del mouse. Questo metodo è stato utilizzato per quantificare le differenze di esercizio di resistenza tra geneticamente modificati e controllare C57BL / 6 topi che differiscono nell&#39;espressione del muscolo citochina derivata interleuchina-15 (IL-15) 16,17. Questo metodo è un perfezionamento umano che diminuisce gli effetti confondenti di rinforzo negativo causati da un uso di una griglia di shock.

<table><tbody><tr><td>Tapis roulant per roditori aperto Exer-3/6</td><td>Columbus Instruments, Columbus OH</td><td>1050RM</td><td>Questo numero di catalogo è per i modelli senza griglia antiurto. Le griglie d'urto possono essere rimosse manualmente dai modelli più vecchi (Eco 3/6)</td></tr><tr><td>Salviette germicide in tessuto Sani PDI</td><td>- Professional Disposables, Inc., Orangeburg, NY</td><td>solitamente ordinate tramite la struttura locale</td><td>Contiene il 10% di alcol isopropilico; può essere utilizzato qualsiasi prodotto equivalente.</td></tr><tr><td>Abbassalingua</td><td>Qualsiasi fornitore</td><td></td><td></td>locale</tr><tr><td>Timer di laboratorio</td><td>Qualsiasi fornitore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Topi IL-15 TG</td>*<td>JAX, Bar Harbor, ME</td><td>011002</td><td>Transgene murino IL-15 espresso da un promotore di actina alfa-scheletrico umano modificato con sequenza di segnale alterata per facilitare la secrezione.</td></tr><tr><td>Topi C57BL/6J (wild-type)*</td><td>JAX, Bar Harbor, ME</td><td>000664</td><td>Topi di controllo per topi IL-15 TG</td></tr><tr><td>IL-15 KO*</td><td>Taconic Farms, Germantown, NY</td><td>4269-M</td><td>Topi omozigoti IL-15 "knockout" su sfondo C57BL/</td></tr><tr><td>6 C57BL/6NTac (wild-type)*</td><td>Taconic Farms, Germantown, NY</td><td>Topi di controllo B6-M</td><td>per IL-15 KO*</td></tr><tr><td>Opzionale; le linee e i trattamenti dei topi possono essere specifici per l'esperimento protocollo.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione della murini esercizio di resistenza senza l&#39;uso di una griglia shock: un&#39;alternativa alla esercizio forzato

Assessment of Murine Exercise Endurance Without the Use of a Shock Grid: An Alternative to Forced Exercise

Utilizzando modelli di topo di laboratorio, i meccanismi molecolari responsabili dei benefici metabolici di esercizio di resistenza cominciano a essere definiti. Il metodo più comune per valutare l&#39;esercizio di resistenza nei topi utilizza costretto esecuzione su un tapis roulant motorizzato provvisto di una griglia shock. Animali che smettono di esecuzione sono spinti dal nastro in movimento tapis roulant su una griglia che offre una scossa elettrica piede; per sfuggire stimolo negativo, i topi tornano a correre sul nastro. Tuttavia, il comportamento di evitamento e stress psicologico dovuto all&#39;uso di un apparato di shock possono interferire con la quantificazione di resistenza in esecuzione, così come le misure di confondere i livelli di ormone e di citochine sieriche postexercise. Qui, noi dimostrare e validare un metodo raffinato per misurare la resistenza in esecuzione in naïve C57BL / 6 topi di laboratorio su un tapis roulant motorizzato senza utilizzare una griglia shock. Quando i topi sono preacclimated al tapis roulant, che corrono volontariamente con andatura accelera specifico per ogni mouse. Uso della griglia ammortizzatore è sostituito dal delicato incoraggiamento da un operatore umano utilizzando un abbassalingua, accoppiato con sensibilità alla volontà volontario per eseguire da parte del mouse. Endpoint chiari per quantificare i tempi di esaurimento per ogni mouse esecuzione sono definiti e riflettono in segni comportamentali di esaurimento come la postura strombato e respiro affannoso. Questo metodo è un perfezionamento umano che riduce anche gli effetti confondenti dello stress sui parametri sperimentali.

Questa procedura di misurazione esercizio di resistenza riflette accuratamente il profilo molecolare e metabolico di diversi ceppi di topi C57BL / 6 che differiscono nell&#39;espressione della citochina IL-15 16,17. Topi transgenici che iperesprimono IL-15 (IL-15 TG topi) mostra aumentato significativamente run-to-esaurimento volte rispetto ai controlli littermate, mentre i topi che mancano di IL-15 (IL-15 KO topi) presentano ridotti significativamente i tempi di funzionamento prima di raggiungere esaurimento...

Viene dimostrato un metodo per valutare la resistenza all'esercizio nei topi di laboratorio senza l'uso di una griglia d'urto. Questo metodo è un perfezionamento umano che può ridurre gli effetti confondenti dello stress sui parametri sperimentali.

Valutazione della murini esercizio di resistenza senza l&#39;uso di una griglia Shock: Un&#39;alternativa alla Esercizio forzato

Using laboratory mouse models, the molecular pathways responsible for the metabolic benefits of endurance exercise are beginning to be defined. The most ...

L'obiettivo generale di questa procedura è determinare la resistenza all'esercizio volontario. Nei topi da laboratorio, ciò si ottiene consentendo prima al topo di acclimatarsi alla sala operatoria nella sua gabbia domestica per una o due ore. Il mouse può quindi acclimatarsi al tapis roulant e al suono del motore.Successivamente, la velocità del tapis roulant viene gradualmente aumentata fino a quando il mouse non funziona comodamente alla sua massima velocità sostenuta. Il passaggio finale consiste nel determinare quando il mouse ha raggiunto l'esaurimento. In definitiva, la quantità di tempo che il topo ha corso fino all'esaurimento rivela una misura della resistenza all'esercizio senza gli effetti confondenti dello stress derivante dall'uso di una griglia d'urto.Il vantaggio principale di questa tecnica è che è un perfezionamento dei metodi esistenti per determinare la resistenza all'esercizio e i topi, principalmente perché non utilizza una griglia di tiro per incoraggiare i topi a correre, riducendo così gli effetti confondenti dello stress, sia per l'animale che per l'esperimento. Decidere in anticipo i gruppi sperimentali e le procedure post-esercizio per i topi. Posiziona il tapis roulant su un carrello o un tavolo robusto in una stanza tranquilla dedicata a questa procedura.Durante le prove di corsa, impostare il tapis roulant su corsie delle dimensioni di un topo e con un'inclinazione adeguata al protocollo. L'inclinazione di cinque gradi positivi viene utilizzata qui per ovviare al danno muscolare dovuto all'esercizio eccentrico che si verifica durante la corsa in discesa. Posiziona un tampone assorbente sotto la campana del tapis roulant per raccogliere le feci.Consentire al topo di acclimatarsi alla sala operatoria nella sua gabbia domestica trasportata con i compagni di gabbia per una o due ore. Seleziona un singolo mouse e registra il suo numero di etichetta. Pesa anche il mouse e registra il suo peso.Posiziona il mouse nel tapis roulant senza il motore acceso per acclimatarsi per circa cinque minuti. Accendere l'alimentazione senza il nastro del tapis roulant in funzione e lasciare che il mouse si abitui al rumore della macchina per altri cinque minuti. A questo punto, rimuovere i topi nei gruppi sedentari dal tapis roulant e rimetterli nella loro gabbia o condurre procedure post-esercizio secondo il disegno sperimentale.Dopo l'acclimatazione, ruotare la cintura a bassa velocità. Quando l'animale sta esplorando la cintura e non sulla piattaforma, tocca o solleva delicatamente i quarti posteriori del topo con un abbassalingua da una a tre volte per incoraggiare gli animali riluttanti a rimanere sul tapis roulant e correre. Avvia un timer di laboratorio Una volta che il mouse funziona alla velocità iniziale di 10 metri al minuto, aumenta lentamente la velocità.Quando il mouse si trova nella parte superiore del nastro con incrementi di un metro al minuto circa ogni due minuti, ridurre la velocità all'impostazione precedente. Se il mouse corre ripetutamente in brevi raffiche e non a un ritmo costante, la maggior parte dei topi correrà prontamente, ma a volte si ferma per brevi periodi. Usa l'abbassalingua per picchiettare o sollevare delicatamente la parte posteriore dell'animale per incoraggiare la ripresa della corsa.Spesso il solo notare la mano con l'abbassalingua che viene verso di loro fa sì che i topi corrano ancora un po'. Non arrestare il timer per interruzioni temporanee della marcia. Determina la velocità di corsa massima sostenuta di ciascun mouse regolando la velocità e osservando il mouse registrare questa velocità.Alcuni topi si rifiuteranno completamente di correre. Tali topi correranno in brevi raffiche. Quindi fermarsi per strigliare o pedalare, cioè sedersi sulla piattaforma e utilizzare le zampe anteriori sulla cintura.La classica postura di un topo che rifiuta è curva con tutte e quattro le zampe piantate sotto l'animale per evitare di essere spinto indietro sul tapis roulant dall'abbassalingua. Occasionalmente un topo diventa aggressivo nei confronti dell'abbassalingua quando non è disposto a correre, mordendo la lingua, abbassando l'abbassalingua o arrampicandosi su di esso come via di fuga. Entro i primi cinque minuti della prova è chiaro se il mouse funzionerà o meno.Rimuovi e identifica i topi che si rifiutano di scappare dall'analisi, ma non contarli come topi sedentari. A seconda del disegno sperimentale, i topi che rifiutano possono essere ritestati in un giorno diverso. La stanchezza è definita da tre soste consecutive e dal rifiuto di riprendere la corsa nonostante il gentile incoraggiamento.Oltre a segni fisici di esaurimento come respirazione affannosa e postura divaricata. Identifica i topi esausti e ferma il timer. Registra la quantità totale di tempo trascorso a correre a tutte le velocità.A seconda del disegno sperimentale, riportare il topo nella sua gabbia o condurre procedure immediate post-esercizio come la raccolta di sangue o tessuti. Secondo le linee guida istituzionali, pulire la cintura con un asciugamano germicida dopo aver testato ogni singolo topo in modo che l'odore del topo precedente non influenzi il comportamento dei topi successivi testati per il topo successivo. Usa un abbassalingua nuovo per ogni topo.I topi che risiedono nella stessa gabbia possono essere testati in sequenza lo stesso giorno senza ulteriore acclimatazione alla sala operatoria. La resistenza all'esercizio riflette accuratamente il profilo molecolare e metabolico di diversi ceppi di C 57 neri sei topi che differiscono nell'espressione delle citochine derivate dal muscolo I topi transgenici IL 15 che sovraesprimono IL 15 mostrano tempi di corsa all'esaurimento significativamente aumentati rispetto ai controlli ATE, mentre i topi privi di IL 15 mostrano tempi di esecuzione significativamente ridotti prima di raggiungere i controlli wild type di esaurimento. Vedi 57 topi neri da due fonti diverse non mostrano tempi di esecuzione significativamente diversi.La velocità di corsa massima sostenuta differiva solo nei topi knockout IL 15. Una limitazione inevitabile di questa tecnica è che alcuni topi si rifiutano di correre volontariamente. La percentuale di giovani topi di controllo wild type che si rifiutano di correre è di circa il 10%A quattro mesi di età, la percentuale di rifiuti aumenta al 20% a otto mesi di età e aumenta a oltre il 60% entro i 16 mesi di età.Tuttavia, la percentuale di rifiuti nella fascia di età più avanzata è significativamente più bassa nei topi transgenici IL 15. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di rimanere calmi e rilassati e prestare attenzione al comportamento del topo. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare un tapis roulant per determinare la resistenza all'esercizio e i topi senza usare l'e chakra.

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Valutazione della murini esercizio di resistenza senza l'uso di una griglia Shock: Un'alternativa alla Esercizio forzato

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