Name: Una Procedura di osservare Context-indotta Rinnovo pavloviano condizionata alcol-seeking comportamento in Rats (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 24 s
Description: Scopri il rinnovo del comportamento di ricerca dell'alcol pavloviano indotto dal contesto nei ratti. Questo metodo fornisce un modello animale per studiare i meccanismi di ricaduta nell'addiction.

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Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (RO1 AA014925 assegnato alla Dott.ssa Patricia H. Janak dell'Università della California, San Francisco, CA, USA), dal Fonds de recherche du Quebec – Santé (NC) e dal Natural Sciences and Engineering Research Council (NC, 387224-2010). La pubblicazione ad accesso libero di questo articolo è stata resa possibile grazie alla sponsorizzazione di Med Associates Inc.

Tutte le procedure sono approvate dal Comitato di Ricerca Animal Ethics alla Concordia University e concordano con le raccomandazioni del Consiglio canadese Animal Care. 1. Gli animali <ol><li> Ottenere ratti maschio lungo-Evans (220 - 240 g all&#39;arrivo). </li><li> Mantenere i ratti in una temperatura (21 ° C) e umidità (44%), controllata di cura degli animali, su un ciclo luce-buio 12 ore con le luci accese alle ore 7:00. </li><li> Pair-house ratti all&#39;arrivo. Dopo 3 giorni, i ratti casa singolarmente in gabbie scatola da scarpe di plastica con biancheria da letto di beta-chip, un osso di nylon, e l&#39;accesso gratuito al ratto chow standard ed acqua. Utilizzare coperchi gabbia che hanno doppi occhielli per consentire la successiva disposizione di una seconda bottiglia, oltre alla borraccia. NOTA: I ratti possono essere alloggiati individualmente, non appena arrivano nella struttura di cura degli animali. </li><li> Inizia a gestire ratti ogni giorno. NOTA: Come guida, una settimana di trattamento è di solito sufficiente per loro ambientarsi ad essere picked e gestito dallo sperimentatore. </li></ol> 2. intermittente etanolo Access nella casa Cage NOTA: Comportamento intermittente accesso etanolo nella gabbia casa per garantire che i ratti saranno bere quantità fisiologicamente rilevanti di etanolo prima della fase di formazione comportamentale dell&#39;esperimento inizia 17-19. Avviare la procedura durante la fase di luce, anche se potrebbe essere iniziato in qualsiasi momento durante il ciclo di chiaro o scuro. <ol><li> Preparare due bottiglie per ogni ratto. <ol><li> Utilizzare una plastica da 100 ml cilindro graduato come la bottiglia di etanolo e una bottiglia d&#39;acqua di plastica standard di 473 ml. Utilizzare una relativamente piccola bottiglia di capacità etanolo, riempita quasi a capacità massima di volume, per ridurre al minimo la perdita di etanolo a causa di perdite ed evaporazione. </li><li> Riempire una bottiglia con il 15% di etanolo, fatta diluendo etanolo al 95% in acqua di rubinetto. NOTA: altre concentrazioni di etanolo, come ad esempio il 10% o il 20%, può essere utilizzato al posto del 15% di etanolo. </li><li> Fill la seconda bottiglia con acqua del rubinetto. </li><li> Inserire un tappo di gomma, con un tubo di aspirazione che contiene un cuscinetto a sfere per ridurre al minimo le perdite, in ogni bottiglia. </li></ol></li><li> Impostare due gabbie di controllo, trattati in modo identico alle gabbie a casa con l&#39;eccezione che le gabbie di controllo non contengono ratti o biancheria da letto. <ol><li> Preparare bottiglie di etanolo e acqua per le gabbie di controllo come specificato nei punti 2.1.1 - 2.1.4. </li><li> Utilizzare le misure ottenute dalle gabbie di controllo per controllare per spandimenti e / o evaporazione che possono verificarsi nel corso della sessione di accesso etanolo (come descritto ai punti 2.8.1 - 2.8.2). </li></ol></li><li> Pesare tutte le bottiglie di etanolo e di acqua. Registrare tutti i pesi. </li><li> Pesare tutti i topi. Registrare tutti i pesi. </li><li> Inserire la bottiglia etanolo e la bottiglia d&#39;acqua su ogni gabbia casa e controllare gabbia allo stesso tempo. Lasciare entrambe le bottiglie sulle gabbie per 24 ore. </li><li> Alla fine del periodo di 24 ore, rimuovere entrambe le bottiglie dallagabbie allo stesso tempo. </li><li> Pesare tutte le bottiglie di etanolo e di acqua. Registrare tutti i pesi. </li><li> Per determinare la quantità di etanolo e acqua è stata consumata durante il periodo di 24 ore, sottrarre il peso di ogni bottiglia quando è stato tolto dalla gabbia casa dal peso della bottiglia quando è stato posto sulla gabbia a casa 24 ore prima per ogni ratto. <ol><li> Fare lo stesso per le due gabbie di controllo, e quindi calcolare l&#39;importo medio di versamento per ciascun fluido. </li><li> Sottrarre la quantità media di etanolo e di fuoriuscita di acqua, rispettivamente dalle corrispondenti misure di etanolo e di consumo di acqua per ogni ratto. </li><li> Utilizzare queste misure di differenza fuoriuscita controllata per calcolare il consumo di etanolo in g / kg, consumo di acqua, etanolo e la preferenza. </li></ol></li><li> Per calcolare il consumo di etanolo (g / kg), prima convertire il peso (g) di soluzione di etanolo consumato in volume (ml) in base alla densità della soluzione totale (componenti etanolo + acqua), secondoal volume formula (ml) = Peso (g) / Densità (g / ml). NOTA: La densità della soluzione varierà in funzione della concentrazione di etanolo. <ol><li> Successivamente, moltiplicare il volume (ml) di soluzione di etanolo consumata dalla densità (g / ml) di etanolo in scala per la soluzione percentuale specifica utilizzata, a dare il peso (g) di etanolo consumato. </li><li> Dividere il peso (g) di etanolo consumata dal peso di ratto (kg) per ottenere la g / kg di misura del consumo di etanolo. </li></ol></li><li> Per calcolare etanolo preferenza, esprimere assunzione di etanolo (ml) in percentuale del totale di liquidi (acqua + etanolo, ml) di aspirazione. </li><li> Riportare il flacone solo acqua torna alla home gabbia del ratto. Per il prossimo 24 ore, dare la ratti accesso all&#39;acqua, ma non etanolo. Invece di una bottiglia di etanolo, posizionare una seconda bottiglia di pre-pesato acqua sulla gabbia di casa. </li><li> Alla fine del periodo di 24 ore, rimuovere entrambi bottiglie di acqua dalla gabbia allo stesso tempo. </li><li> Pesare entrambe le serie di bottiglie d&#39;acqua. Registrare tutti weicombatte. </li><li> Sottrarre il peso di ogni bottiglia quando è stato tolto dalla gabbia casa dal peso della bottiglia quando è stato posto sulla gabbia a casa 24 ore prima, sottraendo la misura media fuoriuscita ottenuto da gabbie di controllo come descritto ai punti 2.8.1 - 2.8.2. </li><li> Utilizzare queste misure differenza fuoriuscita controllata per calcolare il consumo di acqua. </li><li> Inizia il ciclo di nuovo, fornendo sia l&#39;etanolo e bottiglie d&#39;acqua ai ratti, come descritto nei punti da 2.1 a 2.14. <ol><li> Ripetere questo ciclo per più (circa 12) sedute di indurre livelli elevati e stabili di consumo di etanolo. Vedere la Figura 1 per risultati rappresentativi di consumo di etanolo (g / kg) nella gabbia casa. </li><li> Alternate la posizione spaziale della bottiglia etanolo e acqua sul coperchio della gabbia tra le sessioni per prevenire lo sviluppo di una preferenza laterale. </li><li> Fare una soluzione di etanolo fresco una volta alla settimana per garantire la concentrazione accurata e stabile etanolo attraversosessioni. Ridurre al minimo l&#39;impatto di evaporazione di etanolo per periodi prolungati di tempo che utilizzano questo approccio. </li></ol></li></ol> 3 Apparecchiatura <ol><li> Casa ciascuna camera di condizionamento all&#39;interno di un ventilato,-attenuazione del suono box. </li><li> Costruire ciascuna camera di condizionamento di un metallo in acciaio inox asta pavimento, un soffitto in policarbonato trasparente, in policarbonato trasparente parete posteriore e porta d&#39;ingresso, e fianchi in alluminio del pannello di metallo. <ol><li> Installare una porta fluido centrale, vicino alla base della parete laterale destra metallo. Dotare l&#39;ingresso al porto fluido con una fotocellula a raggi infrarossi per rilevare le entrate nella porta. </li><li> Collegare tubo di polietilene dal retro della porta fluido a una siringa da 20 ml contenente etanolo utilizzando un ago a punta smussata. Posizionare la siringa in una pompa a siringa situata al di fuori del box-attenuazione del suono. Per le sessioni di allenamento discriminazione di Pavlov, caricare etanolo nella siringa prima di metterlo nella pompa. Prime il tubo by avanzare manualmente la pompa, e poi asciugare l&#39;eccesso di etanolo dal porto fluido. </li><li> Sul fianco sinistro, installare un houselight bianca centrale, vicino al soffitto della camera. </li><li> Installare un clicker (2 ciclo Hz) e un generatore di rumore bianco con un altoparlante nell&#39;angolo superiore sinistro del fianco sinistro. </li></ol></li><li> Dotare ogni camera di condizionamento, con una specifica configurazione di visive, olfattive, tattili e stimoli per creare un contesto caratteristico. <ol><li> Utilizzare due contesti diversi, designato Contesto 1 e Context 2 Configurare la metà delle camere condizionata Contesto 1 e l&#39;altra metà come Context 2. </li><li> Per creare Contesto 1, posizionare pannelli neri di cartone sopra il soffitto e pareti anteriore e posteriore della camera, odore spruzzo di limone (10% v / v, fatta diluendo olio di limone in acqua di rubinetto) in una capsula di Petri e posizionarlo al centro di un vassoio di rifiuti metallici sotto il pavimento della camera e inserire un chiaro pannello di pavimento in policarbonato sopra il metallo rod pavimento. Foderare il contenitore scorie con tovagliolo di carta assorbente o da banco liner. </li><li> Per creare Contesto 2, lasciare il soffitto e pareti anteriore e posteriore della camera di scoperta, in modo che siano chiare, spruzzo odore di mandorle (10% v / v, fatta diluendo benzaldeide in acqua di rubinetto) in una capsula di Petri e posizionarlo centralmente in un contenitore scorie di metallo sotto il pavimento della camera e inserire un pannello perforato pavimento di metallo sul pavimento asta di metallo. Foderare il contenitore scorie con tovagliolo di carta assorbente o da banco liner. </li></ol></li></ol> 4. assuefazione Abituare i ratti alla sala formazione comportamentale e ciascuno dei due contesti all&#39;interno condizionamento camere. Per questa fase dell&#39;esperimento, non caricare l&#39;etanolo nelle siringhe da 20 ml. <ol><li> Abituare i ratti al processo di essere trasportati dalla struttura di cura degli animali alla sala formazione comportamentale in laboratorio in due sessioni assuefazione brevi. <ol><li> Nella prima sessione, caricare i ratti in loro gabbie di casa su un carrello a ruote nello stabilimento di cura degli animali, e li trasportano al pronto formazione comportamentale in laboratorio. Illuminare le luci della stanza, accendere i ventilatori in ogni suono attenuazione cubicolo, uscite dalla stanza, chiudere la porta e lasciare che i ratti adattarsi a questo nuovo ambiente per 20 minuti, pur rimanendo nelle loro gabbie a casa sul carrello. Al termine di questo periodo di 20 minuti, restituire i ratti alla funzione di cura degli animali. </li><li> Nella seconda sessione, portare i topi alla sala formazione comportamentale in laboratorio. Come prima, lasciare le luci e ventilatori cubicolo nella stanza. Rimanere nella stanza, con la porta chiusa per ridurre al minimo le distrazioni, e la maniglia e pesare ogni ratto nella sala formazione comportamentale. Registrare i pesi, e quindi restituire i ratti alla struttura di cura degli animali. </li></ol></li><li> Abituare i ratti alle camere di condizionamento in due sessioni assuefazione brevi. <ol><li> Trasportare i ratti alla sala formazione comportamentale, registrare il peso di ciascun ratto,e caricare ogni ratto nella sua camera di condizionamento designato. </li><li> Nella prima sessione di assuefazione impostare la metà delle camere come Context 1 e il resto come Context 2. </li><li> Nella seconda sessione di assuefazione configurare ogni camera con il contesto che non è stato utilizzato nella sessione precedente. </li><li> Condurre sessioni di assuefazione in modo controbilanciato, in modo tale che la metà dei ratti vengono prima esposto a Context 1, seguito da Context 2, e l&#39;altra metà vengono prima esposti a Context 2, seguito da Context 1 Idealmente, condurre entrambe le sessioni di assuefazione nel stesso giorno, anche se potevano essere distribuite in due giorni, se necessario. </li><li> Per le sessioni di assuefazione, utilizzare un programma per computer per illuminare il houselight 1 min dopo che il programma è stato rilasciato. Annotare il numero totale di voci di porta fluido effettuate durante una sessione di 20 min. Al termine della sessione, programmare la houselight per spegnere. Non presenta alcun etanolo o segnali durante le sessioni di assuefazione. </li></ol></li&gt; <li> Rimuovere i ratti dalle camere, li tornare alle loro gabbie a casa, e trasportarli di nuovo alla funzione di cura degli animali. </li><li> Pulire le attrezzature (ad esempio, pannelli a pavimento, vassoi rifiuti, piastre di Petri). Vedere il punto 5.7 per ulteriori dettagli. </li></ol> 5. pavloviano Discriminazione Training (PDT) Treno ratti per comportamentale discriminano tra un cue uditivo che è accoppiato con etanolo e un secondo spunto uditivo che non è. Per questa fase dell&#39;esperimento, riempire le siringhe da 20 ml con 15% di etanolo. <ol><li> Dotare ogni camera di condizionamento, con una specifica configurazione di visiva, olfattiva, e stimoli tattili per creare un contesto caratteristico, come descritto ai punti 3.3.2 e 3.3.3 <ol><li> Assegnare la metà dei ratti a Contesto 1 e l&#39;altra metà a Contesto 2 in modo controbilanciato, in base al consumo di etanolo e di preferenza in media attraverso le ultime 2 sessioni della procedura di accesso etanolo gabbia a casa. Fare riferimento alla context usato durante la PDT come Contesto A. NOTA: Ogni ratto deve solo provare un contesto in questa fase di formazione. </li><li> Assicurarsi che lo stimolo olfattivo è l&#39;ultimo stimolo contestuale da aggiungere ad ogni camera di condizionamento. Chiudere le porte della camera e la cabina-attenuazione del suono per contenere lo stimolo olfattivo e ridurre al minimo la comingling di odori diversi. </li></ol></li><li> Portare i topi nella stanza formazione comportamentale, registrare il peso di ciascun ratto, e caricare ogni ratto nella sua camera di condizionamento designato. </li><li> Avviare il programma per computer che controlla la seguente sequenza di eventi durante ogni sessione di PDT. <ol><li> A 5 minuti dopo che il programma è stato rilasciato, illuminare il houselight. </li><li> Presentare lo stimolo rumore bianco e il clicker stimolo 16 volte ciascuno. Designa uno di questi stimoli uditivi essere il CS + e l&#39;altro per essere il CS, in modo controbilanciato attraverso entrambi i contesti. </li><li> Rendere ogni CS + e CS-prova last 10 sec. </li><li> Consegnare 0,2 ml di etanolo nella porta del fluido durante l&#39;ultimo 6 sec del CS +. Non fornire alcun etanolo durante il CS. </li><li> Rendere ogni sessione PDT ultimi 58 minuti in media. Presentare il CS + e CS-ciascuno su una variabile tempo 67 sec programma. </li><li> Record voci fluido porto durante la 10 sec intervallo CS (10 sec durante la presentazione CS), il 10 sec intervallo pre-CS (10 sec immediatamente prima dell&#39;inizio CS), e il 10 sec intervallo post-CS (10 sec immediatamente seguente Offset CS) sia per CS + e CS-presentazioni, così come totale di voci di porta fluido per l&#39;intera sessione. Registrare anche la durata di ogni voce porta fatta durante questi intervalli. </li><li> Al termine della sessione, ruotare la houselight off. </li></ol></li><li> Rimuovere i ratti dalle camere, li tornare alle loro gabbie a casa, e trasportarli di nuovo alla funzione di cura degli animali. </li><li> Controllare le porte del fluido per garantire che i ratti hanno consumato i 3,2 ml di etanolo consegnati in ogni PDT sESSIONE. </li><li> Lavare l&#39;etanolo fuori dal tubo di polietilene con una siringa da 60 ml contenente una piccola quantità di acqua. Quindi, passare 60 ml di aria attraverso il tubo utilizzando una seconda, siringa vuota, per assicurarsi che sia asciutto. </li><li> Pulire l&#39;apparecchiatura. Per la pulizia quotidiana, lavare i pannelli di pavimento, vassoi rifiuti, e piastre di Petri. Una volta alla settimana, pulire l&#39;intera camera di condizionamento. Non utilizzare prodotti di pulizia profumati per evitare l&#39;introduzione di odori indesiderati nella apparato sperimentale. </li><li> Continuare sedute di PDT tutti i giorni fino ratti mostrano discriminazione stabili nelle loro risposte ingresso porta al CS + vs CS. NOTA: le voci della porta fatte in risposta al CS + dovrebbero aumentare nel corso sessioni, mentre voci di porta fatte in risposta al CS dovrebbero rimanere bassi. Il numero esatto di sedute di PDT necessario per conseguire discriminati condizionata risposta può variare, ma, come una guida, intenzione di circa 20 sessioni. </li></ol> 6. Estinzione <ol><li> Outfit ogni condizionamento chamber con visiva, olfattiva, e stimoli tattili per creare un contesto che è distinto da quello dei ratti hanno sperimentato durante le sedute di PDT. Ad esempio, se Contesto 1 è stato utilizzato in PDT, configurare la camera come Contesto 2 per le sessioni di estinzione. Fare riferimento al contesto utilizzato durante l&#39;estinzione come Context B. </li><li> Condurre sessioni di estinzione identico a sedute di PDT, ma non fornire alcuna etanolo durante il CS +. <ol><li> Utilizzare lo stesso programma informatico che è stato utilizzato durante PDT per presentare il CS + e CS. </li><li> Per mantenere la coerenza tra le fasi dell&#39;esperimento, caricare una siringa vuota nella pompa a siringa, e lasciare la pompa accesa. Assicurarsi che il tubo di polietilene non contiene etanolo prima sessione di estinzione. </li></ol></li><li> Continuare sessioni di estinzione tutti i giorni fino ratti non è più spettacolo discriminazione risponde tra il CS + e CS. NOTA: le voci della porta fatte in risposta al CS + dovrebbe diminuire gradualmente tra le sessioni di estinzione, fino a quando non vi è alcuna difference tra voci di porta fatte in risposta al CS + e le voci di porta fatte in risposta al CS. Il numero esatto di sessioni di estinzione necessarie per estinguere condizionata rispondere può variare, ma come una guida, ha intenzione di circa 8 sessioni. </li><li> Pulire l&#39;apparecchiatura al termine di ogni sessione, come descritto nel passaggio 5.7. </li></ol> 7 Context-indotta Rinnovo di prova <ol><li> Dotare ogni camera di condizionamento con i, olfattiva, e stimoli tattili visive per creare il contesto che è stato sperimentato durante le sedute di PDT. Ad esempio, se un determinato topo esperto Contesto 1 a sedute di PDT, configurare sua camera come Contesto 1 nella sessione di test. Fare riferimento al contesto utilizzato durante la prova di rinnovamento come Context A. </li><li> Effettuare il test di rinnovamento indotta contesto identico a sedute di PDT, ma non fornire alcuna etanolo durante la prova di rinnovo. Presentare il CS + e CS-come prima durante le sedute di PDT, ma trattenere l&#39;etanolo. <ol><li> Utilizzare lo stesso pr del computerOgram che è stato utilizzato durante PDT per presentare il CS + e CS. </li><li> Per mantenere la coerenza tra le fasi, caricare una siringa vuota nella pompa a siringa, e lasciare la pompa accesa. Assicurarsi che il tubo di polietilene non contiene etanolo prima della sessione di test. </li></ol></li><li> Osservare il rinnovo indotta contesto pavloviano condizionata comportamenti alcol-ricerca. NOTA: Questo effetto rinnovamento sarà evidente da un aumento selettivo del numero di voci portuali effettuate in risposta al CS +, con nessun cambiamento nel comportamento ingresso porto made in risposta al CS, rispetto al CS + e CS-rispondendo osservato il fine della formazione estinzione. </li><li> Pulire l&#39;attrezzatura al termine della sessione, come descritto al punto 5.7. </li></ol>

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</ol>

Tutte le procedure sperimentali sono state approvate dal comitato di ricerca Animal Ethics Concordia University e sono conformi alle linee guida del Canadian Council on Animal Care. La pubblicazione open-access di questo articolo è stata resa possibile dalla sponsorizzazione da Med Associates Inc.

I risultati di questa procedura rivelano che stimoli ambientali discreti che normalmente accompagnano la consegna alcol può acquisire la capacità di guidare il comportamento-alcol in cerca. Essi dimostrano inoltre che gli stimoli contestuali associati alla disponibilità o l&#39;assenza di alcol prima può guidare condizionata risposte comportamentali a stimoli alcol-predittiva discreti. Passaggi critici all&#39;interno del protocollo I contesti nella presente compito incorporano stimoli esterni al ratto. Tuttavia, lo stato interoceptive del ratto a test può anche costituire un &#39;contesto&#39; che potrebbero influenzare il rinnovamento 20. E &#39;quindi importante abituare i ratti a tutte le procedure che possono verificarsi prima della prova di rinnovamento e modificare il loro stato interoceptive, come microinfusions intracraniche o iniezioni sistemiche. Inoltre, assuefazione a microinfusions o iniezioni sistemiche dovrebbe essere condotta prima sia estinzione e PDT sessions, per evitare che tali procedure di diventare associata ad una specifica fase dell&#39;esperimento. Parametri temporali, come la durata CS, intervallo CS-USA, e l&#39;intervallo tra le prove (ITI), sono da tempo noti per influenzare condizionata rispondere in una varietà di paradigmi di condizionamento 21-26. Analogamente, i parametri temporali possono influenzare l&#39;osservazione dell&#39;effetto rinnovamento nella nostra procedura. Ogni set di parametri diversi da quelli specificati nel protocollo deve essere convalidato sperimentalmente in studi pilota prima di procedere ad impiegarli nelle indagini più grandi. Modifiche e risoluzione dei problemi Precedenti ricerche hanno trovato che la quantità di etanolo che i ratti consumano nella gabbia casa può variare in funzione del fornitore da cui i ratti vengono acquistati 17,27. Fornitore è quindi una considerazione importante per questa fase dello studio. Analogamente, la scelta del ceppo ratto dovrebbe essere considered con attenzione, in quanto vi sono numerose segnalazioni di differenze di ceppi di consumo di etanolo 28-31. Prima opera in un paradigma di condizionamento avversivo ha dimostrato che l&#39;età evolutiva dei ratti influenza l&#39;osservazione di rinnovamento di un pavloviano condizionata risposta di paura 32. La mancanza di un effetto di rinnovamento in ratti molto giovani (di età inferiore ai 20 giorni dopo la nascita) è stato suggerito di essere dovuto alla codifica compromissione di informazioni contestuali 33. L&#39;età evolutiva di ratti da utilizzare nel presente procedimento deve quindi essere preso in considerazione. Rinnovo pavloviano condizionata comportamento alcol-ricerca è stato osservato quando il 10% 9,16, 15% 14, o 20% 15 soluzioni di etanolo sono stati utilizzati durante la gabbia di casa accesso etanolo e PDT fasi dell&#39;esperimento. I ricercatori potrebbero usare una qualsiasi di queste concentrazioni di etanolo, ai fini della costituzione di tale procedura nel loro laboratories. Durante l&#39;acquisizione di una formazione discriminazione pavloviano è importante controllare le porte del fluido dopo ogni sessione per garantire che tutti i etanolo che è stato consegnato è stato consumato. Lasciando topi nelle camere di condizionamento per un ulteriore 10 - 15 minuti dopo ogni sessione può essere fatto all&#39;inizio del PDT per incoraggiare il consumo di qualsiasi etanolo che non è stato consumato durante la sessione. Il numero di ratti che lasciano etanolo non consumato nei porti dovrebbe diminuire, come progredisce PDT. Se entro la fine di ratti PDT sono (a) non consumare tutto il etanolo e / o (b) non risponde al CS + allora queste discipline deve essere eliminato dallo studio. La maggior parte dei ratti affidabile rispondere più al + CS rispetto al CS. Tuttavia, alcuni ratti possono rispondere ad alti livelli per entrambe le indicazioni, quindi non mostra evidenza di discriminazione. I ratti che mostrano elevata rispondono sia al CS + e CS-durante PDT non vengono eliminati dallo studio. Nella nostra esperienza, questi soggetti mostrano discriminazione notevoledurante la prima sessione di estinzione in assenza di etanolo, suggerendo che i loro livelli elevati di rispondere alla CS durante PDT sono guidati dalla presenza di etanolo nella valvola liquido. Questi soggetti tendono a mostrare gli effetti di rinnovo robusti. Limiti della procedura Poiché il test rinnovo viene condotta in assenza di etanolo, voci di porta condizionati indotte dal CS + diminuiscono gradualmente tutta la sessione di test. Pertanto, l&#39;importo complessivo del comportamento generato prova, contro la quale i cambiamenti sperimentalmente indotte possono essere valutate, è piuttosto bassa. Perché in questo compito risposta tende ad essere superiore al via contro la fine della sessione di test, è importante esaminare gli effetti delle manipolazioni sperimentali sulla condizionato rispondono a titolo di prova-by-processo. Le voci nella presa del fluido forniscono la misura di dipendente principale in questo compito. Tuttavia, una voce porta errata potrebbe essere registrata se un animale è abbastanza vicino alla presa del fluido di rompere il raggio infrarosso attraverso l&#39;apertura della porta fluido con i baffi. Anche se poco frequenti, le risposte errate sono evidenti come un drammatico aumento in porto totale voci relative al comportamento del soggetto in sessioni precedenti. Videoregistrando gli animali faciliterebbe l&#39;individuazione di possibili risposte errate, e consentire un&#39;analisi più raffinata dei comportamenti esibiti dai ratti per tutta la formazione e la sperimentazione. Importanza della tecnica rispetto ai metodi esistenti / alternative Rinnovamento Contesto-indotta del comportamento farmaco-seeking è ampiamente studiata utilizzando un compito di condizionamento strumentale in cui la variabile dipendente primaria è una risposta operante, come ad esempio una pressa a leva 8,34 o il naso colpire 12. Nel presente procedimento, la risposta in cerca di droga è &#39;approccio condizionato&#39; alla porta del fluido che si manifesta da presentazioni diil + CS. Questa risposta è probabilmente acquisita attraverso l&#39;apprendimento pavloviano, che è il processo di apprendimento che media la formazione di associazioni tra stimoli ambientali e gli effetti farmacologici delle sostanze d&#39;abuso negli esseri umani. Le applicazioni future Questo compito può essere utilizzato in combinazione con neurofarmacologia, neurochimica optogenetics e per studiare i meccanismi neurali che sono coinvolti nel rinnovamento indotta contesto dei comportamenti alcol-cerca pavloviano condizionata 16. Inoltre, i meccanismi comportamentali e neurali che regolano l&#39;acquisizione e l&#39;estinzione di pavloviano condizionata comportamenti alcol-ricerca possono essere studiate. Infine, questo compito può essere utilizzato per esplorare manipolazioni di estinzione che potrebbero impedire il rinnovamento, una direzione importante per la ricerca traslazionale volta a ridurre l&#39;impatto del farmaco associato contesti ambientali sulla reattività di droga segnali predittivi dopo la terapia di esposizione spunto in addi umanocts.

Rimanendo sobrio è una notevole sfida per gli individui che soffrono di disturbi da abuso di alcool. L&#39;astinenza è un momento di vulnerabilità per l&#39;impatto comportamentale, psicologico e fisiologico degli stimoli ambientali che abitualmente accompagnano l&#39;uso di alcol, che possono, attraverso il condizionamento pavloviano, diventano associati ebbrezza 1,2. L&#39;esposizione a stimoli predittivi alcol può suscitare risposte condizionate come alcol desiderio, che possono promuovere comportamenti alcol-cerca che facilitano la ricaduta 3,4. Le sequenze stereotipate di comportamento che portano al consumo di alcol può causare alcuni tipi di stimoli per essere regolarmente sperimentato immediatamente prima che gli effetti farmacologici di assunzione di alcol. Ad esempio, la vista, l&#39;olfatto e il gusto di alcol sono proprietà sensoriali di alcol che precedono affidabile intossicazione. Oltre a tali segnali, che sono indicati come &#39;discreti&#39; o &#39;Proximaspunti l &#39;, contesti ambientali in cui i farmaci vengono regolarmente utilizzati possono anche provocare desiderio 5,6. L&#39;esposizione a luoghi fisici in cui i farmaci sono stati precedentemente utilizzati possono dunque essere un trigger critico per recidiva 7. I modelli animali sono stati sviluppati per studiare i meccanismi neurali che mediano l&#39;impatto della droga contesti associati al comportamento di droga ricerca di 8-13. La procedura qui descritta permette l&#39;indagine di come contesti associati al consumo di alcol possono modulare il comportamento-alcol alla ricerca che si manifesta da un discreto, alcool predittivo cue pavloviano. Formazione discriminazione pavloviano è condotto in un contesto ambientale specifico, in cui i ratti sono addestrati a behaviorally distinguere tra due stimoli uditivi condizionata, un + CS che è associato con l&#39;alcol, e un CS che non è. Sessioni di estinzione vengono poi condotti in un contesto diverso, in cui rispondendo alla CS+ Diminuisce a causa di alcol trattenuta. Successivamente, riesposizione al alcol associato, nell&#39;ambito della formazione pavloviano innesca un aumento selettivo dei comportamenti alcol-cerca suscitato dal CS +, con nessun cambiamento nel rispondere alla CS. Questo risultato, che abbiamo sempre replicato 9,14-16, si estende risultati di procedure strumentali di condizionamento in cui sono stati trovati per stimolare il rinnovamento delle risposte operanti connessi con la somministrazione di farmaci 10,13 contesti di droga.

<table><tbody><tr><td>Carrello multiuso per impieghi gravosi</td><td>Rubbermaid</td><td>#4520-88</td><td>Utilizzato per trasportare i ratti nella loro gabbia domestica dalla stanza della colonia alla sala del comportamento o ad altre strutture</td></tr><tr><td>Ratti, Long-Evans</td><td>Harlan</td><td></td><td>I ratti pesavano 220-240 g all'arrivo</td></tr><tr><td>Bilancia Ohaus</td><td>Fisher</td><td>#S402421</td><td>Per pesare i topi; tarare prima il fondo di un contenitore di plastica, quindi metterci dentro il topo per pesarlo</td></tr><tr><td>Beta-chips, pioppo tremulo</td><td>Harlan</td><td>#7090A</td><td>Lettiera per gabbia domestica</td></tr><tr><td>Nylabone</td><td>Bio-Serv</td><td>#K3580</td><td>Arricchimento fornito nella gabbia domestica</td></tr><tr><td>Cibo per roditori autoclavabile</td><td>Agribrands, Charles River</td><td>#5075</td><td>Per l'alimentazione dei ratti</td></tr><tr><td>Coperchio della gabbia a barre metalliche</td><td>Ancare</td><td>#R20SS2B</td><td>Realizzato su misura con due fessure per bottiglie</td></tr><tr><td>Fondo della gabbia</td><td>Ancare</td><td>#R20PC</td><td>Per ospitare i topi</td></tr><tr><td>Tappi Ancare</td><td></td><td>#8.5</td><td>Tappi in gomma per occludere l'apertura in bottiglie d'acqua e cilindri graduati; va con tubi per sorseggiare a sfera&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubi a sfera, lunghezza 1,5"</td><td>Ancare</td><td>#TD-99</td><td>Inseriti nei tappi, consentono ai ratti di bere da bottiglie d'acqua e cilindri graduati</td></tr><tr><td>Bottiglie d'acqua</td><td>Ancare</td><td>#FSPC8HT</td><td>capacità di 473 ml (16 once), deve essere occluso con tappo</td></tr><tr><td>Cilindri graduati, 100 ml</td><td>Fisher</td><td>#0300741</td><td>Per contenere etanolo durante l'esposizione all'alcol nella gabbia domestica; l'estremità con beccuccio deve essere tagliata per consentire l'occlusione con i tappi</td></tr><tr><td>Bilancia Mettler</td><td>Mettler Toledo</td><td>#MS6001S</td><td>Per pesare bottiglie d'acqua e bombole di etanolo</td></tr><tr><td>Tubo in polietilene, diametro interno 1/32", spessore della parete 1/32", diametro esterno 3/32"</td><td>Fisher</td><td>#14-169-1A</td><td>Per collegare la siringa di etanolo da 20 ml alla porta del fluido</td></tr><tr><td>Ago, 18 g, lunghezza 1,5"</td><td>Fisher</td><td>#B305199</td><td>Per collegare il tubo in polietilene alle siringhe per etanolo; deve essere archiviato</td></tr><tr><td>Siringhe, 20 ml, Luer-Lok non sterile</td><td>Fisher</td><td>#1482316J</td><td>Per contenere etanolo sulle pompe del fluido; deve essere collegato al tubo in polietilene con un ago da 18 G 1 1/2</td></tr><tr><td>Siringhe, 60 ml, Luer-Lok non sterile</td><td>Fisher</td><td>#14-820-11</td><td>Per lavare i tubi in polietilene dopo le sessioni di PDT</td></tr><tr><td>Pompa a siringa a velocità singola, 3.33 giri/min</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-018MD</td><td>Per contenere siringhe di etanolo da 20 ml e fornire etanolo</td></tr><tr><td>Porta fluida Med</td><td>Associates Inc.</td><td>#ENV-254-CB</td><td>Per consentire l'erogazione di etanolo durante le sessioni PDT; collegato a siringhe di etanolo con tubo in polietilene</td></tr><tr><td>Rilevatore a infrarossi con ingresso alla porta</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-215M</td><td>Fisso su entrambi i lati della porta del fluido; sono necessari 2 per porta del fluido</td></tr><tr><td>Houselight, 28 V, 100</td><td>mA Med Associates Inc.</td><td>#ENV-135M</td><td>Fornisce l'illuminazione generale nella camera di condizionamento</td></tr><tr><td>Modulo clicker</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-225SM</td><td>Stimolo uditivo per camera di condizionamento</td></tr><tr><td>Generatore di rumore bianco con altoparlante</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#PHM-100</td><td>Stimolo uditivo per camera di condizionamento</td></tr><tr><td>Pavimento bar</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A-GF</td><td>Da abbinare alla camera di prova modulare</td></tr><tr><td>Rivestimento da banco, assorbente</td><td>VWR</td><td>#89126-790</td><td>Carta assorbente da inserire nel vassoio di metallo, deve essere tagliata per adattarsi al vassoio di metallo</td></tr><tr><td>Foglio di policarbonato, spessore 1/8", 12-5/8" x 10"</td><td>Johnston Plastics</td><td>#30102515</td><td>Per realizzare un inserto per pavimenti liscio e trasparente utilizzato per il contesto 1. Deve essere tagliato in pezzi da 11,5" x 12,25"</td></tr><tr><td>Foglio di alluminio perforato, 0,063" di spessore, 48" x 96", 0,250" fori x 0,375" centri</td><td>Anica Steel</td><td></td><td>Per realizzare un inserto per pavimenti perforato utilizzato per il contesto 2. Deve essere tagliato in pezzi da 11,5" x 12,25"</td></tr><tr><td>Cartone nero, 0,053" di spessore, 28" x 44"</td><td>Omer DeSerres</td><td>#P1909</td><td>Per costruire pannelli che coprono il soffitto, la porta e la parete posteriore della camera di condizionamento nel contesto 1. Deve essere tagliato a misura. Ogni camera necessita di tre pannelli che misurano circa 11,5" x 13,25". I pannelli possono essere uniti dal lato più stretto utilizzando del nastro adesivo.</td></tr><tr><td>Nastro adesivo per tutti gli usi, 1,88" x 45 yd.</td><td>Duck Tape</td><td></td><td>Materiale adesivo per collegare i pannelli di cartone nero utilizzati per coprire la parete posteriore, il soffitto e la porta nel contesto 1.</td></tr><tr><td>Camera per test modulare</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A</td><td>Camera di condizionamento</td></tr><tr><td>Cabine fonoassorbenti</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-200R3AM</td><td>Viene fornito con ventola da 28 V CC installata (#ENV-025F)</td></tr><tr><td>Piastra di Petri</td><td>Fisher</td><td>#08748B</td><td>solo sul fondo, per contenere la soluzione spruzzata che fornisce lo stimolo dell'odore; deve essere centrato nel vassoio metallico nelle camere di condizionamento</td></tr><tr><td>Pacchetto di interfaccia PCI</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-700P2-R2</td><td>Collega l'armadio di interfaccia da tavolo al computer; include 1 scheda di interfaccia, 1 scheda di decodifica, 1 cavo a nastro e 1 cavo di alimentazione da 28 V CC</td></tr><tr><td>Armadio da tavolo di grandi dimensioni e alimentatore</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SG-6510D</td><td>Utilizzato per contenere le 12 schede incluse nel pacchetto SmartCrtrl 8 Input, 16 Output</td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 Input, 16 Output</td><td>Pacchetto Med Associates Inc.</td><td>#DIG-716P2</td><td>Utilizzato per collegare e controllare i dispositivi nella camera di condizionamento. La confezione include tutti i cavi, il modulo di interfaccia e il pannello di connessione.</td></tr><tr><td>Med PC IV software</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SOF-735</td><td>Software per l'esecuzione di programmi. Deve essere installato sul computer.</td></tr><tr><td>Monitor LG, 19" LCD</td><td>Concordia computer store</td><td>#W1942TQ-BF</td><td>Monitor per computer; per andare con il computer che esegue Med PC IV</td></tr><tr><td>HP Z200 tower workstation</td><td>Concordia computer store</td><td>#BZ788US#ABA</td><td>Computer su cui Med PC IV viene eseguito</td></tr><tr><td>Benzaldeide, &ge; 99%</td><td>Les produits chimiques OMEGA Chemical Company Inc.</td><td>#B37-50</td><td>Diluire in acqua di rubinetto per odore di contesto di mandorle</td></tr><tr><td>Olio di limone, spremuto a freddo, California</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#W262528-1KG-K</td><td>Diluire in acqua di rubinetto per odore di contesto di limone</td></tr><tr><td>Alcool etilico, 95%</td> <td>Alcoli</td><td></td> commerciali <td>Diluire in acqua di rubinetto alla concentrazione desiderata</td></tr></tbody></table>

una procedura di osservare context-indotta rinnovo pavloviano condizionata alcol-seeking comportamento in rats

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Contesti ambientali in cui l&#39;abuso di droghe vengono consumate può innescare desiderio, una soggettiva risposta pavloviano condizionata che può facilitare il comportamento di droga ricerca e tempestiva ricaduta in tossicodipendenti astinenti. Abbiamo sviluppato una procedura per studiare i processi comportamentali e neurali che mediano l&#39;impatto del contesto sul comportamento alcol-seeking nei ratti. Dopo acclimatazione al gusto e gli effetti farmacologici del 15% di etanolo nella gabbia casa, ratti maschi a lungo Evans ricevano una formazione discriminazione pavloviano (PDT) in camere di condizionamento. In ciascuna sessione giornaliera (lun-ven) PDT, 16 studi ciascuno dei due stimoli diversi 10 sec uditivo condizionata verificano. Durante uno stimolo, il CS +, 0,2 ml di 15% etanolo viene consegnato in una porta di fluido per il consumo orale. Il secondo stimolo, il CS, non è accoppiato con etanolo. Attraverso sessioni, le voci nella porta del fluido durante l&#39;aumento CS +, mentre le voci durante il CS stabilizzare a un livello inferiore, indicando che una predictive associazione tra il CS + e l&#39;etanolo è acquisito. Durante PDT ciascuna camera è dotata di una configurazione specifica di stimoli contestuali visivi, olfattivi e tattili. A seguito di PDT, formazione estinzione è condotto nella stessa camera che è ora dotato di una diversa configurazione di stimoli contestuali. Il CS + e CS sono presentati come prima, ma l&#39;etanolo sia ritirato, che causa un graduale declino in voci di porta durante il CS +. Alla prova, i ratti vengono inseriti di nuovo nel contesto PDT e presentati con il CS + e CS-come prima, ma senza etanolo. Questa manipolazione innesca un aumento robusto e selettivo il numero di voci di porta fatte durante l&#39;alcool predittivo CS +, con nessun cambiamento nel rispondere durante il CS. Questo effetto, denominato rinnovamento indotta contesto, illustra la potente capacità di contesti legati al consumo di alcol per stimolare comportamenti alcol-cerca in risposta a stimoli di alcol di Pavlov.

Accesso etanolo intermittente nella gabbia di casa: Il consumo di etanolo (g / kg) e l'etanolo aumento preferenza attraverso sessioni di accesso etanolo intermittente nella gabbia di casa, in genere di raggiungere livelli stabili entro 8-12 sessioni (Figura 1). Nel set di dati mostrata nella figura 1, il consumo stabile di etanolo media attraverso le ultime due sessioni di gabbia di casa accesso etanolo variava 1,33-6,44 g / kg per i singoli ratti. La gabbia casa fase il consumo di etanolo dell'esperimento può essere interrotto una volta che il g / kg il consumo è stabilizzato, e ratti sono mantenuta a questo livello stabile di bere per un certo numero di sedute. Per analizzare i dati di questa fase, condurre analisi separata misure ripetute della varianza (ANOVA) attraverso il fattore entro i soggetti della sessione per il consumo di etanolo (g / kg) e l'etanolo preferenza. Schematica della procedura di rinnovo indotta contesto: Ogni fase delprocedura sperimentale (PDT, l'estinzione, prova rinnovo) è illustrato nella figura 2. Vedere la didascalia per ulteriori dettagli. Risposta misure e analisi dei dati: In tutte le fasi comportamentali descritte di seguito, le risposte di ingresso della porta fatte durante il CS + e CS sono normalizzati con riferimento alle pre-CS basali risposte di ingresso della porta. Per creare le misure normalizzate CS, sottrarre il numero di voci portuali effettuate durante l'intervallo di riferimento pre-CS (10 secondi immediatamente prima dell'inizio CS) dal numero di voci portuali effettuati durante le presentazioni del CS + e CS. Le misure CS normalizzati normalizzato CS + e servono come indicatori di comportamento suscitato particolare da presentazioni CS, elevati sopra dei livelli basali. Condurre misure ripetute ANOVA separati con i fattori oggetto entro ripetute di sessione e tipo CS (CS + vs CS) per le fasi di estinzione e PDT. Per i confronti tra fase (PDT, estinzione, rinnovareal test), i dati di utilizzo media attraverso le ultime due sedute di PDT e l'estinzione e la una sessione di dati di test di rinnovo in ripetute misure ANOVA. Per dare seguito a significativi effetti principali e le interazioni, t-test uso post hoc per campioni indipendenti o appaiati che sono corretti per confronti multipli. Criterio di significatività è fissato a α = 0.05. PDT: risposte ingresso porta per l'aumento CS + attraverso sedute di PDT, considerando che le risposte di ingresso porta al CS rimane bassa e stabile, nel complesso. Si noti che le risposte di ingresso porta al CS può aumentare leggermente nei primi sessioni di allenamento PDT; Tuttavia, voci di porta fatte in risposta alla CS stabilizzare a un livello molto più basso rispetto a quelli realizzati in risposta al CS +. Discriminazione di successo è evidenziato da un innalzamento statisticamente significativo in voci di porta durante il CS + rispetto al CS (Figura 3). Questo risultato indica che pavloviano condizionata comportamenti alcol-ricerca ha essereen istituito per il CS +, ma non il CS. Estinzione: risposte ingresso porta per il CS + graduale declino tra le sessioni di estinzione. Risposte ingresso di porta al CS rimangono bassi e stabili tra le sessioni di estinzione. Idealmente, discriminati risposta è abolito entro la fine della formazione di estinzione, come dimostra l'assenza di una differenza statisticamente significativa tra i valori delle porte al CS + e CS. Tuttavia, non è raro che un certo grado di discriminazione rispondere a rimanere, anche alla fine della formazione estinzione. In questo caso, è importante verificare che le risposte di ingresso porta al CS + alla fine della formazione estinzione sono statisticamente inferiore risposte ingresso porta al CS + all'inizio di estinzione, nonché al termine della PDT (figura 3) . Questo modello di risultati indica che pavloviano condizionata comportamento alcol-ricerca è stata notevolmente estinta. Context-indotta prova rinnovo: Portrisposte ingresso all'aumento CS + nel test rinnovo indotta contesto, relativa alle voci portuali CS + osservati alla fine della formazione estinzione. Tale incremento è selettivo per il CS +, come voci di porta al CS rimangono inalterate. Inoltre, voci di porta al CS + sono statisticamente elevati rispetto a voci di porta al CS nel test rinnovo indotta contesto (Figura 4). Conferma statistica dei confronti tra voci di porta CS + tra l'estinzione e la prova, così come i confronti di CS + e CS voci di porta all'interno di test, indica un rinnovamento selettivo di comportamento-alcol in cerca pavloviano condizionata indotta dal contesto di alcol associato a test. <img alt="Figura 1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig1highres.jpg" width="400"> Figura 1 Escalation del consumo di etanolo e di preferenza indotta da etanolo accesso intermittente nella gabbia casa. Media &amp;# 177; SEM (A) consumo di etanolo (g / kg) e (B) la preferenza etanolo attraverso 12 sessioni di accesso etanolo intermittente nella gabbia casa. Entrambe le misure aumentano tipicamente tra le sessioni e poi si stabilizzano. Consumo di etanolo Stabile media attraverso le ultime due sessioni di gabbia di casa accesso etanolo variava 1,33-6,44 g / kg per i singoli ratti. Questi dati sono stati ottenuti utilizzando ratti maschi lungo Evans potabile 15% (v / v) di etanolo. <img alt="Figura 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" width="400"> . Figura 2 Uno schema della procedura sperimentale La procedura si compone di tre fasi: formazione discriminazione pavloviano (PDT), l'estinzione, e test di rinnovamento indotta contesto. Durante ogni sessione di PDT, ratti ricevono 16 studi di uno stimolo uditivo condizionato (CS +) che segnala la consegna di etanolo e 16 studi diun secondo stimolo uditivo (CS), che non è associato con la consegna di etanolo. Sedute di PDT avvengono in Context A, composto da una configurazione specifica di visivo, olfattivo e stimoli tattili. Durante le sessioni di estinzione, che si svolgono nel contesto B, composto da un diverso insieme di stimoli visivi, olfattivi, tattili e, il CS + e CS vengono presentati, ma l'etanolo sia ritirato. Per la prova di rinnovamento indotta contesto, i ratti vengono restituiti Contesto A, e il CS + e CS sono presentati senza etanolo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig3highres.jpg" width="400"> Figura 3 Acquisizione ed estinzione di discriminate Pavlov condizionata, di rispondere per l'etanolo. Media ± SEM voci di porta normalizzato made durante il CS + e CS-attraverso PDT (sessioni 1-18) in contesto A e di estinzione (sessioni 19-26) in contesto B. Questi dati sono stati ottenuti utilizzando ratti maschi a lungo Evans, addestrato con il 10% (v / v) etanolo come stimolo incondizionato (US) che è stato presentato in collaborazione con il + CS durante la PDT. * P &lt;0,05, CS + rispetto al CS. Figura originariamente pubblicato in Chaudhri, Sahuque, e Janak (2008). Usato con il permesso di Elsevier. <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig4highres.jpg" width="500"> Figura 4 Context-indotta rinnovo del ± SEM voci di Pavlov condizionata, di rispondere per l'etanolo. Media normalizzata portuali effettuate durante il CS + e CS-in sedute di PDT in contesto A, sessioni di estinzione in contesto B, e test di rinnovamento nel contesto A. I dati sono media degli ultimi due sessioni per PDT e di estinzione; il test di rinnovamento è una singola sessione. Questei dati sono stati ottenuti utilizzando ratti maschi a lungo Evans, addestrati con il 10% (v / v) di etanolo come stimolo incondizionato (US) che è stato presentato in collaborazione con il CS + durante la PDT. * P &lt;0,05; ** P &lt;0,001, CS + rispetto al CS. #p &lt;0.05, CS + PDT rispetto CS + estinzione. ^ P &lt;0.05, CS + estinzione contro CS + prova. Figura originariamente pubblicato in Chaudhri, Sahuque, e Janak (2008). Usato con il permesso di Elsevier.

Una procedura per studiare la capacità di un contesto ambientale di alcol associato per attivare il rinnovamento dei comportamenti alcol-seeking nei ratti è descritto.

Una Procedura di osservare Context-indotta Rinnovo pavloviano condizionata alcol-seeking comportamento in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Questa procedura esamina la capacità di un contesto associato all'alcol di innescare il rinnovamento del comportamento pavloviano di ricerca dell'alcol. Ciò si ottiene abituando prima i ratti esperti di etanolo a camere di condizionamento che sono state configurate in due contesti unici. La seconda fase della procedura consiste nel condurre sessioni di formazione sulla discriminazione pavloviana in un contesto in cui due diversi segnali uditivi segnalano la disponibilità di alcol o la sua mancanza.Il terzo passo consiste nel condurre un addestramento all'estinzione. Nel secondo contesto in cui entrambi i segnali uditivi vengono presentati senza alcol, il passo finale è quello di riportare i ratti al contesto di addestramento originale e presentare entrambi i segnali uditivi senza alcol. Questa manipolazione provoca un rinnovamento del comportamento di ricerca dell'alcol innescato dal segnale uditivo precedentemente associato all'alcol.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto alle procedure esistenti come il condizionamento strumentale, è che fornisce un modello animale di comportamento di ricerca dell'alcol suscitato da segnali pavloviani che predicono l'alcol. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della dipendenza, come ad esempio il contesto associato all'alcol provoca ricadute Prima dell'allenamento, abituare i ratti alla sala prove e ai due contesti ambientali che sperimenteranno. Trasporta sempre i ratti dalla struttura di cura degli animali alla sala di prova in modo coerente.Nella prima sessione, lasciare i ratti nella sala di prova per 20 minuti con le luci della stanza accese e i ventilatori nelle cabine di attenuazione del suono accesi dopo 24 ore. Conduci la seconda sessione di assuefazione come la prima, ma ora pesa e maneggia ogni topo. Condurre la terza sessione 24 ore dopo.Per questo, allestisci ogni camera di condizionamento con una delle due combinazioni distintive di stimoli visivi, olfattivi e tattili. Per fornire un contesto coerente, lo stimolo olfattivo dovrebbe essere l'ultimo stimolo contestuale aggiunto a ciascuna camera. Per ridurre al minimo la commistione di diversi stimoli olfattivi, chiudere le porte delle camere e la cabina fonoassorbente in cui ciascuna camera è alloggiata.Subito dopo aver applicato lo stimolo olfattivo per la terza sessione, pesare ogni ratto e metterlo nella sua camera di condizionamento per 20 minuti. Metà dei ratti dovrebbe sperimentare il contesto uno e l'altra metà dovrebbe sperimentare il contesto. Due, per aiutare a mantenere il bisogno vitale di coerenza tra i ratti e le loro camere, è utile contrassegnare i ratti con un numero che identifichi una camera specifica.Un minuto dopo che tutti i ratti sono stati messi nelle loro camere, accendere la luce della casa nelle camere Durante i 20 minuti, registrare tutte le entrate della porta del fluido effettuate dai ratti. Quindi spegni le luci, scarica i topi e riportali alla loro struttura di cura. Più tardi, nello stesso giorno, condurre una quarta sessione di assuefazione quasi identica alla terza in cui il contesto delle camere di condizionamento è invertito.Infine, dopo ogni sessione, lavare sempre le vaschette dei rifiuti e i pannelli del pavimento delle camere di condizionamento e le piastre di Petri in cui è stato applicato lo stimolo olfattivo contestuale. Utilizzare settimanalmente solo soluzioni detergenti non profumate. Pulire le camere nella loro interezza per questo allenamento.Dividi i ratti in due gruppi con la stessa assunzione media di etanolo nelle ultime due sessioni di accesso all'etanolo. Un gruppo viene addestrato nel contesto e l'altro viene addestrato nel contesto. Due. Durante queste sessioni, i ratti imparano a distinguere tra due diversi segnali uditivi, uno accoppiato con l'etanolo e uno che non lo è.Quindi il primo passo è preparare siringhe da 20 millilitri con etanolo. Per le porte del fluido, collegare il tubo dal retro della porta del fluido alla siringa caricata. Utilizzando un ago smussato, caricare ogni siringa nella propria pompa all'esterno della cabina di attenuazione del suono.Quindi adescare il tubo facendo avanzare manualmente la pompa e rimuovere l'etanolo in eccesso dalla porta del fluido. Ora porta i ratti nella sala prove di laboratorio. Come durante l'assuefazione, pesare ogni ratto prima di metterlo nella camera di condizionamento assegnata.Assicurati di ricontrollare la configurazione del contesto all'interno di ciascuna camera e assicurati di caricare il ratto corretto nella camera corretta. Un ratto che è stato esposto al contesto sbagliato o al CS plus sbagliato potrebbe dover essere escluso dallo studio. Una volta che tutti i ratti sono stati pesati e caricati, avvia il programma per computer che controlla gli eventi della sessione di allenamento.Cinque minuti dopo l'inizio del programma, la luce della casa in ogni camera viene illuminata in ogni sessione, vengono presentate 16, dieci secondi di rumore bianco e 16, dieci secondi di rumore di clic. Per ogni ratto, designare uno di questi stimoli uditivi per l'etanolo e controbilanciare queste designazioni nei due contesti di condizionamento durante gli ultimi sei secondi del Cs, inoltre, la pompa eroga 0,2 millilitri di etanolo alla porta del fluido. Imposta gli stimoli su un tempo variabile di 67 secondi per fare una sessione di un'ora.Registra tutte le voci della porta del fluido a partire da 10 secondi prima di Cs, durante Cs e 10 secondi dopo Cs. Inoltre, registrare il numero totale di ingressi di porte fluide effettuate per l'intera sessione di formazione sulla discriminazione pavloviana. Al termine della sessione, spegni le luci della casa e riporta i ratti alla struttura di cura degli animali nelle camere di condizionamento.Controllare le porte del fluido per assicurarsi che i ratti abbiano consumato i 3,2 millilitri di etanolo erogati durante la sessione. Ricordarsi di controllare le porte del fluido dopo che i ratti sono stati rimossi dalle camere per assicurarsi che stiano consumando l'etanolo I ratti che non consumano l'etanolo e mostrano anche bassi livelli di ingressi nelle porte durante il CS plus potrebbero dover essere esclusi dallo studio. Pulire le camere di condizionamento come di consueto.Pulire il tubo sciacquandolo prima con acqua, quindi utilizzando una siringa vuota da 60 millilitri per far passare l'aria attraverso di esso. Ripetere le sessioni ogni giorno fino a quando i ratti non discriminano tra i due stimoli uditivi, come indicato dalle risposte all'ingresso in porto. Si prevede un aumento selettivo delle entrate nelle porte del CS plus che si stabilizzerà entro 16-20 sessioni.Per le sessioni di estinzione. La camera di condizionamento di ogni ratto dovrebbe essere impostata con un contesto diverso da quello utilizzato durante l'addestramento alla discriminazione pavloviana. Il contesto in cui viene condotta l'estinzione è indicato come Contesto B. Condurre le sessioni di estinzione esattamente come le sessioni di discriminazione utilizzando lo stesso programma informatico, ma non erogare etanolo durante il CS Plus.Per uniformità, le pompe sono caricate con siringhe vuote da 20 millilitri collegate alla camera da un tubo privo di etanolo. Esegui le sessioni di estinzione ogni giorno fino a quando i ratti smettono di discriminare tra CS più e meno. Questo può richiedere circa otto sessioni come sempre, pulire l'attrezzatura secondo necessità Prima di procedere al test di rinnovo.È fondamentale che vi sia una significativa riduzione degli ingressi in porto durante il CS plus alla fine dell'addestramento all'estinzione rispetto all'inizio. Il test di rinnovamento indotto dal contesto utilizza la stessa configurazione del contesto camerale utilizzata durante l'addestramento alla discriminazione pavloviana, che è un contesto diverso da quello dell'addestramento all'estinzione. Questo test a sessione singola viene eseguito in modo identico a una sessione di formazione sulla discriminazione pavloviana, tranne per il fatto che non viene erogato etanolo e le siringhe sono vuote.Usa lo stesso programma per computer per presentare gli stimoli uditivi. Il risultato atteso è un rinnovamento del comportamento di ricerca dell'alcol che è selettivo per il CS e pulire l'attrezzatura al termine del test. Come in precedenza, quando ai ratti è stato concesso l'accesso intermittente periodico all'etanolo nelle loro gabbie domestiche, il consumo di etanolo e la preferenza per l'etanolo sono aumentati a livelli stabili dopo 8-12 sessioni di allenamento.Durante l'addestramento pavloviano sulla discriminazione, le risposte all'ingresso in porto al CS plus sono aumentate durante le sessioni di addestramento, c'è stato un leggero aumento nella risposta al CS minus, ma i ratti hanno imparato a discriminare tra i due segnali uditivi durante l'addestramento all'estinzione, le risposte all'ingresso in porto al CS plus sono diminuite gradualmente mentre le risposte al CS meno sono rimaste basse. Quando i ratti sono stati riportati nel contesto associato all'addestramento alla discriminazione pavloviana, si è verificato un aumento selettivo degli ingressi in porto durante il CS plus rispetto ai risultati dopo l'addestramento all'estinzione. Al contrario, non c'è stato alcun cambiamento nella risposta al CS minus.Questi risultati dimostrano che il comportamento di ricerca dell'alcol suscitato da un segnale discreto può essere fortemente modulato dal contesto ambientale. Durante il tentativo di questa procedura, è importante che il ricercatore non utilizzi profumi, colonie o altri prodotti profumati. I ratti sono creature altamente olfattive e i segnali olfattivi associati al ricercatore possono essere dirompenti per il comportamento in questo compito Seguendo questo metodo, è possibile eseguire altre procedure come le micro infusioni intracraniche per rispondere a ulteriori domande come ad esempio in quali regioni cerebrali sono coinvolte.Il contesto ha indotto il rinnovamento della ricerca di alcol condizionato pavloviano.

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Research

Ricerca

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

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