Non terminale Tecniche di prelievo di sangue in Guinea Pigs
11 ottobre 2014
Anche se un modello noto, la cavia rappresenta attualmente una nicchia in scienze animali sperimentali e dati limitati sono disponibili sul esecuzione della maggior parte delle procedure. Qui vi presentiamo quattro diversi approcci alla non-terminale in tecniche di campionamento del sangue in vivo su cavie sia coscienti o anestetizzati.
L'obiettivo generale di questo video è quello di illustrare la metodologia di quattro diverse tecniche di prelievo del sangue nei porcellini d'India. Le procedure mostrate non sono terminali a meno che i volumi o il numero di campioni non superino le linee guida per la raccolta del sangue. Negli animali da laboratorio, qui vediamo la causa della vena venosa laterale e della vena tarsale.
La vena ecografica corre dorsalmente e lateralmente sopra l'articolazione tarsale. Da ciascuna zampa posteriore devono essere prelevati un massimo di tre campioni e si possono raccogliere da 100 a 400 microlitri di sangue per campione. L'attrezzatura necessaria include un rasoio elettrico, un bagno con acqua calda, un asciugamano pulito, un batuffolo di cotone, un disinfettante come alcol al 70%, aghi sterili, 21 gorge o tubi di raccolta più piccoli.
E se l'obiettivo è misurare la glicemia e il campionatore AccuCheck, il prelievo di sangue dal cefeo o dalla vena tarsale può essere effettuato in cavie senza anestesia. Il porcellino d'India viene trattenuto da un assistente addestrato e dovrebbe essere utilizzata una tecnica settica. I peli che ricoprono la zona tarsale vengono rasati con un rasoio elettrico e la zampa posteriore lavata e riscaldata in un bagno di acqua tiepida.
Oltre a pulire la gamba, questo fa dilatare le vene e diventare più visibili. La zampa posteriore viene estesa e la stasi raggiunta applicando una leggera pressione verso il basso appena sopra il ginocchio, consentendo alla vena di diventare visibile immediatamente prima del prelievo. L'area rasata viene pulita con un disinfettante.
La vena viene perforata con un ago o una lancetta e il sangue può essere raccolto in un tubo capillare o microt. Quando il sangue è stato raccolto, la stasi viene alleviata e viene applicata una leggera pressione con un batuffolo di cotone Per facilitare l'emostasi, qui si possono vedere le arterie superficiali e le vene sulla superficie dorsale dell'orecchio di porcellino d'India. Questi vasi possono essere utilizzati per il prelievo di sangue quando è richiesto solo un volume molto piccolo.
Un esempio potrebbe essere la misurazione della glicemia. Il porcellino d'India viene trattenuto delicatamente lasciando l'orecchio accessibile. Il sito di puntura deve essere preparato setticamente prima del prelievo, ma la rasatura non è necessaria.
Una leggera pressione può essere applicata alla base dell'orecchio per rendere le vene più visibili. La vena viene perforata con un ago o una lancetta e il sangue viene raccolto in un tubo capillare o immediatamente analizzato per i livelli di glucosio nel sangue utilizzando il sistema di campionamento AccuCheck. Quando il sangue è stato raccolto, è necessario applicare una leggera pressione sul sito di puntura per facilitare l'emostasi.
Questa immagine illustra la posizione della cavia per il prelievo di sangue giugulare e la causa della vena giugulare. La procedura viene eseguita esclusivamente su un animale anestetizzato. L'attrezzatura necessaria include farmaci per anestesia e rasoio elettrico, cotone idrofilo, un disinfettante come stetoscopio alcolico al 70%, unguento neutro per gli occhi, siringhe da un millilitro, aghi sterili, di solito 23 o 25.
L'eparina Gorge e l'EDTA possono essere utilizzati per lavare le siringhe prima del campionamento al fine di prevenire la coagulazione. Esistono una varietà di protocolli anestetici per i porcellini d'India. In questo caso, gli animali vengono anestetizzati mediante anestesia bilanciata con una miscela di solit tile sine e butif iniettata per via sottocutanea nel collo.
Questa miscela può essere diluita con soluzione salina per rendere il dosaggio più accurato. Dopo l'iniezione, il porcellino d'India deve essere rimesso nella sua gabbia e lasciato in quiete. L'effetto dell'ambiente circostante si osserva solitamente dopo circa 10 minuti e dura da 30 a 40 minuti prima del campionamento.
La profondità dell'anestesia viene valutata controllando i riflessi e viene somministrato un unguento neutro per proteggere gli occhi. La vena giugulare viene avvicinata con il porcellino d'India posto sul dorso e le zampe anteriori retratte trimestralmente. L'area viene rasata e preparata in modo asettico, la clavicola viene palpata e un ago da 23 gorge montato su una siringa da un millilitro viene inserito a circa un centimetro lateralmente alla linea mediana, appena cranio dorsalmente alla clavicola.
La siringa deve essere tenuta con un leggero angolo verso l'alto e mediale. Non appena la pelle viene penetrata, viene applicata una leggera pressione negativa alla siringa, poiché la giugulare si trova abbastanza superficialmente ed è sufficiente una profondità di inserimento di circa tre o quattro millimetri. Quando il campione è stato raccolto, rilasciare la tensione delle zampe anteriori e applicare una leggera pressione sul lato della puntura.
L'animale può quindi essere riportato in una gabbia di recupero, ma deve essere monitorato per garantire l'emostasi e il recupero dall'anestesia. Quando il porcellino d'India si è completamente ripreso dall'anestesia, può tornare nel suo recinto. Le caratteristiche anatomiche del porcellino d'India sono leggermente diverse da quelle di altri modelli di roditori e la modulazione delle tecniche di campionamento è necessaria per tenere conto delle differenze specifiche della specie e per ottenere campioni di qualità sufficienti nel più breve tempo possibile.
Sia a lungo che a breve termine. In vivo, gli studi richiedono spesso prelievi di sangue ripetuti. La scelta della tecnica deve essere attentamente ponderata al fine di ridurre lo stress e il disagio e garantire la sopravvivenza, nonché il rispetto dei requisiti di dimensione del campione e accessibilità.
Tutti i metodi descritti sono stati accuratamente testati e applicati con successo per prelievi di sangue ripetuti in vivo. Negli studi condotti presso la nostra struttura di ricerca, il porcellino d'India rappresenta una nicchia nelle scienze animali da esperimento, ma i dati disponibili sull'esecuzione delle procedure di base sono limitati. In questo articolo video, abbiamo presentato quattro diversi approcci al prelievo di sangue in vivo non terminale in animali coscienti o anestetizzati, a condizione che i volumi e il numero di campioni non superino le linee guida per la raccolta del sangue negli animali da laboratorio.
Queste procedure sono raccomandate per l'uso nei porcellini d'India quando è necessario ripetere il prelievo di sangue. Nel tuo protocollo di studio.
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Panoramica
In questo video vengono dimostrate quattro tecniche di prelievo ematico non terminali nei criceti, sia in stato di coscienza che sotto anestesia. Questi metodi sono fondamentali per i ricercatori che lavorano con questo organismo modello, per il quale sono disponibili pochi dati procedurali.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Scienze sperimentali sugli animali
- Tecniche veterinarie
- Metodologie di prelievo del sangue
Sfondo
- I criceti sono un modello poco comune nella ricerca sperimentale.
- Esistono dati limitati sulle procedure di prelievo ematico in questa specie.
- Le tecniche non terminali sono essenziali per pratiche di ricerca etiche.
- Comprendere le linee guida per la raccolta del sangue è fondamentale per il benessere degli animali.
Scopo dello studio
- Illustrare tecniche sicure ed efficaci di prelievo ematico.
- Fornire linee guida sui volumi massimi e sulla frequenza dei campionamenti.
- Ampliare la base di conoscenze per i ricercatori che utilizzano criceti siriani.
Metodi Utilizzati
- Dimostrazione del prelievo di sangue dalla vena safena laterale e dalla vena tarso.
- Utilizzo di attrezzature specifiche come aghi sterili e provette per il campionamento.
- Linee guida per il volume massimo di sangue per campione.
- Procedure per animali sia coscienti che anestetizzati.
Risultati principali
- Dimostrazione riuscita di quattro tecniche di prelievo del sangue.
- Definizione di limiti sicuri per il volume del campione.
- Istruzioni chiare per l'occorrente e la preparazione necessaria.
- Enfasi sulle considerazioni etiche nella raccolta del sangue.
Conclusioni
- Le tecniche presentate sono fondamentali per la ricerca che coinvolge i criceti.
- Una corretta formazione e il rispetto delle linee guida garantiscono il benessere degli animali.
- Ulteriori studi possono ampliare queste metodologie.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Metodo
Il prelievo ematico non terminale nei criceti permette studi longitudinali in vivo, consentendo il campionamento ripetuto di alta qualità preservando il benessere degli animali. Questa possibilità è fondamentale per valutazioni precliniche di farmacocinetica e farmacodinamica, in cui il campionamento seriale fornisce informazioni sull'interazione con il bersaglio e sulla riduzione del rischio meccanicistico. Tali tecniche colmano una lacuna metodologica in un modello di nicchia ma rilevante dal punto di vista traslazionale, migliorando l'affidabilità dei dati nei flussi di lavoro della fase iniziale della scoperta.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Bersaglio
- Valore scientifico: Consente la verifica di ipotesi mediante la misurazione seriale di biomarcatori in vivo.
- Valore operativo: Fornisce un accesso riproducibile ai dati sull'esposizione sistemica per studi di modulazione del bersaglio.
- Valore predittivo: Supporta la caratterizzazione della relazione dose-risposta e il rafforzamento della fiducia nel bersaglio.
Sviluppo di screening e saggi
- Valore scientifico: Genera campioni quantificabili di plasma o siero per i dosaggi analitici.
- Valore operativo: Standardizza i tempi di raccolta e la manipolazione dei campioni in tutte le campagne di screening.
- Prontezza per il dosaggio: Garantisce un volume e una qualità sufficienti per i flussi di lavoro analitici successivi.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Continuità traslazionale: Collega la validazione del target nella fase di scoperta con la caratterizzazione preclinica della sicurezza.
- Contenimento del rischio: Riduce la variabilità delle metriche di esposizione mediante campionamenti standardizzati.
- Rilevanza del modello: Sfrutta le somiglianze fisiologiche tra il criceto e l’essere umano per una previsione mirata alla riduzione dei rischi.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questi metodi di campionamento si integrano nei flussi di lavoro della biologia della scoperta fornendo matrici biologiche affidabili per l'analisi del percorso bersaglio e la valutazione dei composti promettenti.
- Biologia della scoperta: Facilita la chiarificazione dei percorsi metabolici mediante la misurazione seriale di marcatori farmacodinamici.
- Screening: Permette una valutazione costante dei composti attraverso un'acquisizione standardizzata e ripetibile dei campioni.
- Analisi: Fornisce risultati quantificabili (ad esempio, concentrazione, livelli di biomarcatori) per l'analisi comparativa delle condizioni.
- Ricerca traslazionale: Supporta la continuità con studi preclinici mantenendo l'integrità dei campioni e la conformità etica.
- Riutilizzo aziendale: Stabilisce una capacità riutilizzabile per studi longitudinali su criceti in diversi progetti.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva riducendo la variabilità indotta dal campionamento e gli artefatti da stress.
- Valore operativo: Migliora la standardizzazione e la scalabilità del campionamento in vivo tra diverse strutture.
- Valore strategico: Migliora la qualità delle decisioni di avanzamento o interruzione dello sviluppo fornendo dati longitudinali affidabili.
- Impatto sul portafoglio: Permette una priorizzazione adeguata al rischio basata su metriche di interazione con il bersaglio coerenti.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede una formazione in tecniche asettiche e nel manipolaggio degli animali per procedure eseguite su animali coscienti o anestetizzati.
- Dipende da attrezzature come rasoi elettrici, bagni riscaldati e strumenti sterili per il prelievo.
- Necessita il rispetto delle linee guida specifiche per specie riguardo al volume di sangue (massimo 100–400 µL/campione, ≤3 campioni/zampa posteriore).
- Comprende considerazioni adattative relative alla accessibilità delle vene in base alla ceppa, all'età o allo stato di salute dell'animale.
- Incluse limitazioni pratiche come difficoltà di visibilità in animali pigmentati o obesi e la necessità di abilità da parte dell'operatore per prevenire ematomi.
