Name: Tecnica di Suini appalti Fegato e trapianto ortotopico con un attivo Porto-Caval Shunt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: Impara la tecnica di trapianto ortotopico del fegato nel suino con shunt porto-cavale-giugulare attivo. Questo metodo garantisce emodinamica stabile durante l'intervento, evitando congestione splenica e ipertensione venosa.

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Lo studio è stato supportato da sovvenzioni di ricerca della Roche Organ Transplant Research Foundation (ROTRF) e di Astellas. Markus Selzner è stato sostenuto da un ASTS Career Development Award. Matthias Knaak è stato sostenuto dalla borsa di studio Astellas Research. Ringraziamo Uwe Mummenhoff e la famiglia di Birmingham per il loro generoso sostegno.

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Sperimentale suina OLTx è una procedura difficile per un ambiente di ricerca senza le risorse di terapia intensiva di uno scenario clinico. Le possibili complicanze comprendono instabilità emodinamica, emorragia, organo ischemia, ipotermia, e metaboliche, così come le vie respiratorie, scompenso. Per ogni gruppo di ricerca, la formazione procedurale sufficiente della tecnica chirurgica 5 nonché al 14,15 anestesia maiale è obbligatoria per ottenere risultati rappresentativi e riproducibili. Molti sottigliezze tecniche sono state descritte in letteratura, in particolare per quanto riguarda la fase di ricostruzione vascolare 5. Il protocollo OLTx sopra descritto fornisce le informazioni necessarie per un modello-cava sostituzione assomiglia OLTx umano. I risultati forniti dimostrano la sopravvivenza animale affidabile e di recupero del trapianto in entrambi i modelli HBD e DCD. Il protocollo è applicabile in situazioni di sopravvivenza a breve termine utilizzati nel trapianto riperfusione esperiments, per esempio, così come nei modelli di sopravvivenza a lungo termine, come studi di tolleranza. Un grande ostacolo della suina OLTx è relativamente scarsa tolleranza di cava e vena porta clampaggio. Congestione splancnica durante la fase anepatica provoca ipertensione venosa e capillare danni che possono portare a importanti ischemia intestinale e instabilità emodinamica al punto di uno shock irreversibile anche dopo organo riperfusione 7. Poiché la vena cava è completamente annegato nel parenchima epatico, una procedura piggy-back-cava conservazione non è fattibile. L&#39;occlusione totale della vena cava durante la fase di ricostruzione cava compromette la stabilità emodinamica del maiale. Anche se alcuni rapporti indicano che suina OLTx può essere eseguita durante totale cava e l&#39;occlusione della vena porta inferiore a 25 min 16,17, una tecnica di bypass porto-cava-giugulare per il tempo della ricostruzione vascolare è l&#39;opzione più sicura e più pratico 7- 9,18. In thesperienza e degli autori, un passivo porto-giugulare bypass non è ottimale per mantenere il emodinamicamente maiale stabile durante la fase anepatica. Il modello di bypass, compresa la decompressione attiva della cava sottoepatica e vena porta, permette una fase di ricostruzione tranquillità delle anastomosi cavali e portale sovraepatiche anche con il tempo di bloccaggio prolungato a causa di complicazioni impreviste. Contrariamente alle precedenti relazioni 7, una splenectomia non è obbligatoria quando il catetere portale di bypass viene rimosso. Sia splenica e la vena sono chiusi a metà circa la lunghezza della milza lasciando la metà prossimale sufficientemente perfusione. Complicazioni come sanguinamento o embolia gassosa a causa di bypass disconnessione sono evitabili, garantendo che il bypass è posizionato accuratamente e fissato correttamente. In sopravvivenza OLTx esperimenti a lungo termine, l&#39;anastomosi dotto biliare è considerato un punto debole a causa del suo alto tasso di complicanze 19. Il tessuto biliare è molto fragile e needs particolare attenzione quando viene gestita. Molte tecniche di anastomosi diverse sono state descritte 5,19. Una anastomosi end-to-end è tecnicamente facile e associata a complicazioni minime 19. Una sutura continuo con un ago non tagliente comprese grandi sezioni di tessuto connettivo peribiliare sembra essere superiore ad una sutura interrotta. Il dotto biliare è posto sotto tensione inutile quando i singoli punti di sutura interrotta sono annodati. Ciò può causare rotture del tessuto e perdite biliari consecutivi. Il materiale di sutura - riassorbibili o non riassorbibili - di solito non è importante, data la sua durata limitata fino a quando il maiale è terminata. Per i modelli di sopravvivenza a lungo termine nell&#39;arco di diversi mesi, suture assorbibili - come in OLTx umano - sono preferibili. Particolare attenzione deve essere presa con il post-operatorio di follow-up. Nutrizione sufficiente e alimentazione del fluido, un protocollo di sollievo dal dolore affidabile, e una adeguata immunosoppressioneregime sono obbligatori. Per gli esperimenti a lungo termine, l&#39;immunosoppressione appare particolarmente importante. Rispetto ad altri mammiferi, i maiali mostrano sorprendentemente basso tasso di rigetto immunologico dopo OLTx 20,21. Infiltrazioni di cellule rotonde sono la massima durante la seconda settimana dopo il trapianto e diminuiscono spontaneamente anche senza immunosoppressione. Il rifiuto è raramente la causa di morte dopo suina OLTx 22. Tuttavia, anche con il protocollo di immunosoppressione coinvolge la somministrazione di steroidi iv e inibitori della calcineurina po accennato qui, il rigetto del trapianto è indicato da un lieve aumento delle transaminasi a partire da circa 4 giorni dopo OLTx e confermato dal campo apparente portale infiltrazione di cellule turno. Gli inibitori della calcineurina può essere somministrato sia po 23,24 o IV 25,26; Entrambi i metodi hanno svantaggi. Anche con ausili applicativi orali, l&#39;importo effettivo raggiungimento del tratto gastro-intestinale resta sfuggente. D&#39;altra parte, iv infusione continua inpenna di un maiale con un animale attivo è difficile. Pertanto, l&#39;applicazione iv deve essere effettuata come un bolo, che si traduce in picchi di concentrazione elevata farmaco con potenziali effetti tossici. Tuttavia, entrambi i metodi di applicazione sembrano permettere la sopravvivenza a lungo termine. Simile a un contesto clinico, si raccomanda la profilassi post-operatorio di stress ulcera. Sanguinamento post-operatorio da ulcere peptiche è un problema frequente e può essere correlata a una funzione epatica 27. Dopo un paio di casi di sanguinamento gastrointestinale in entrambi i gruppi OLTx, gli autori hanno iniziato la profilassi regolari con pantoprazolo e non hanno avuto alcun sanguinamento gastrointestinale da allora. Rigoroso mantenimento delle condizioni di sterilità intraoperatoriamente, paragonabili a quelle previste in una sala operatoria clinica, e conseguenti profilassi antibiotica, diminuisce il rischio di complicanze infettive. In conclusione, questo articolo provides informazioni pratiche per la creazione di un programma di suino OLTx in un ambiente di ricerca. Sufficiente dedizione, pratica, e lavoro di squadra è importante al fine di diminuire il periodo di apprendimento, per produrre risultati affidabili, e per ridurre i costi e il numero di animali di ricerca.

Trapianto di fegato (OLTx) è l&#39;unica opzione di trattamento per i pazienti con malattia epatica allo stadio terminale o carcinoma epatocellulare avanzato. Negli ultimi 25 anni, il numero dei candidati in lista d&#39;attesa è progressivamente aumentato e ora supera di gran lunga il numero di innesti disponibili. Nella maggior parte delle regioni di trapianto, dal 20 al 30% dei pazienti in lista di attesa per trapianto di fegato muoiono senza ricevere un trapianto d&#39;organo o di esclusione dalle negoziazioni a causa della progressione della malattia. Strategie per aumentare il pool di donatori e, quindi, il numero di innesti a disposizione, sono disperatamente necessari. Criteri di assegnazione degli organi estese, conservazione trapianto prolungato, e induzione della tolleranza immunologica rappresentano ancora grandi sfide cliniche 1-3. Quindi, la ricerca sperimentale OLTx è fondamentale al fine di ottimizzare clinica pratica OLTx. Suini OLTx è un modello sperimentale consolidata che assomiglia OLTx umano in molti modi, tra cui ldimensioni Iver, l&#39;anatomia, la fisiologia e 4-6. Così, è diventato un metodo sperimentale standard campi di ricerca quali tecniche chirurgiche, la fisiologia, l&#39;immunologia, la conservazione, e danno da ischemia-riperfusione. Numerose tecniche di approvvigionamento graft, destinatario epatectomia, e, soprattutto, la ricostruzione vascolare, sono stati descritti in letteratura 5. La scelta della tecnica appropriata varia in base alle preferenze del ricercatore e capacità tecnica. Contrariamente allo scenario umano, congestione splancnico durante la fase anepatica rappresenta un problema importante in porcine OLTx. La successiva ischemia intestinale e danno vascolare congestizia possono causare grave instabilità emodinamica, mettendo a repentaglio la sopravvivenza di maiale e, quindi, il successo dell&#39;esperimento 7-9. Pertanto, sufficiente la decompressione intestinale è obbligatorio, soprattutto in contesti sperimentali tecnicamente meno raffinati. Noiing un porto-cavale-giugulare shunt attivo per tutta la durata della fase di anepatica è un&#39;opzione affidabile per evitare la congestione intestinale. Il sistema può essere utilizzato per esperimenti riperfusione precoce nonché scenari di sopravvivenza a lungo termine. Il protocollo che segue contiene tutte le informazioni per un fegato modello di trapianto di stabili e riproducibili nei suini, compresi gli appalti di fegato da donatore, operazione destinatario, incluso epatectomia e tecniche di ricostruzione nave end-to-end, e cure post-operatorie.

<table><tbody><tr><td>Atropina Solfato 15 mg/30ml</td><td>Rafter 8 Prodotti</td><td>238481</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,3 mg/ml</td><td>RB Pharmaceuticals LDT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin 1 g</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2237138</tr><tr><td>Ciclosporina Soluzione orale 5.000 mg/50 ml</td><td>Novartis Pharmaceuticals Canada Inc.</td><td></td><td></td>2150697</tr><tr><td>Fentanil citrato 0,25 mg/5 ml</td><td>Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2240434</tr><tr><td>Eparina 10.000 iU/10 ml</td><td>Leo Pharma A/S</td><td>453811</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano 99,9%, 250 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2231929</tr><tr><td>Ketamina cloridrato&nbsp; 5000 mg/50 ml</td><td>Bimeda-MTC Animal Health Inc.</td><td></td><td></td>612316</tr><tr><td>Suoneria lattata" s + 5% Destrosio, 0,5 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61131</td><td></td></tr><tr><td>Lacteted Ringer' s, 1 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61085</td><td></td></tr><tr><td>Metronidazolo 500 mg/100 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td>870420</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam 50 mg/10 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2242905</tr><tr><td>Pantoprazolo 40 mg</td><td>Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2306727</tr><tr><td>Cloruro di potassio 40 mEq/20 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>37869</td><td></td></tr><tr><td>Propofol 1.000 mg/100 ml</td><td>Pharmascience Inc.</td><td></td><td></td>2244379</tr><tr><td>Protamina Solfato 50 mg/5 ml</td><td>Partner farmaceutici del Canada Inc.</td><td></td><td></td>2139537</tr><tr><td>soluzione salina 0,9%, 1 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>60208</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio 50 mEq/50 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>261998</td><td></td></tr><tr><td>Solu-Medrol 500 mg</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2367963</tr><tr><td>Acido Tranexamico 1.000 mg/10 ml</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2064413</tr><tr><td>University of Wisconsin Solution, SPS-1 Sistemi di</td><td>recupero d'organo</td><td>SPS-1</td><td></td></tr><tr><td>Xilocaina Endotracheale 10 mg/50 ml</td><td>AstraZeneca</td><td>2003767</td><td></td></tr><tr><td>Appose ULC 35 W suturatrice</td><td>cutanea Covidien Canada</td><td>803712</td><td></td></tr><tr><td>Maxon, 1</td><td>Covidien Canada</td><td>606173</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 0</td><td>Covidien Canada</td><td>S606</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 2-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S405</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 3-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S404</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 4-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP581X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 5-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP725X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 6-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP733X</td><td></td></tr><tr><td>Catetere i.v, 18 G</td><td>BD Canada</td><td>381147</td><td></td></tr><tr><td>Catetere Cook TPN, 9,5 Fr</td><td>Cook Medical Company</td><td>C-TPNS-9,5-90</td><td></td></tr><tr><td>PSI Kit per catetere a guaina, 8,5 Fr</td><td>Arrow International</td><td>ASK-09803-UHN</td><td></td></tr><tr><td>Linea di pompe per infusione</td><td>Smith Medical ASD Inc.</td><td>21-0442-25</td><td></td></tr><tr><td>Set per l'amministrazione del fegato (linea di lavaggio)</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>17175</td><td></td></tr><tr><td>Mallinckrodt, tubo tracheale, 6,5 mm</td><td>Covidien Canada</td><td>86449</td><td></td></tr><tr><td>Tubo di collegamento per aspirazione Med-Rx</td><td>Benlan Inc.</td><td>70-8120</td><td></td></tr><tr><td>Borsa per organi</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>2990</td><td></td></tr><tr><td>Punta di aspirazione</td><td>Tyco Healthcare Group LP</td><td>8888501023</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, matita per cauterizzazione</td><td>Covidien Canada</td><td>E2515H</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, elettrodo di ritorno del paziente</td><td>Covidien Canada</td><td>E7507</td><td></td></tr><tr><td>Connettore di bypass 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>955083-001</td><td></td></tr><tr><td>Connettore di bypass 3/8" x 3/8" Luer Lock</td><td>Raumedic AG</td><td>955163-001</td><td></td></tr><tr><td>Connettore di bypass Y 3/8" x 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>961360-002</td><td></td></tr><tr><td>Tubo di bypass 1/4" x 1/16"</td><td>Raumedic AG</td><td>039505-010</td><td></td></tr><tr><td>Tubo di bypass 3/8" x 3/32"</td><td>Raumedic AG</td><td>039535-005</td><td></td></tr><tr><td>Pompa centrifuga Rotaflow</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>HC 2821</td><td></td></tr><tr><td>Anello di fascetta stringitubo in acciaio inossidabile, 5mm</td><td>Oetiker</td><td>16700007</td><td></td></tr><tr><td>Divaricatore addominale</td><td>Medite GmbH</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>De Bakey &ndash; Beck, Morsetto per cava infraepatico</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB519R</td><td></td></tr><tr><td>Deithrich, Morsetto atraumatico (vena portale)</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB525R</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto Gregory Bulldog, curvo</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB382R</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto Gregory Bulldog, dritto</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB381R</td><td></td></tr><tr><td>Potts &ndash; De Martel, Forbici</td><td>Aesculap Inc.</td><td>BC648R</td><td></td></tr><tr><td>Satinsky, morsetto per cava sopraepatica</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB605R</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto per tubi simmetrici</td><td>Codman Instruments</td><td>198010</td><td></td></tr><tr><td>Macchina per anestesia, Optimax</td><td>Moduflex Attrezzatura per anestesia</td><td>SN5180</td><td></td></tr><tr><td>Bypass Misuratore di portata, HT 110</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td></td><td></td>HT110B11106</tr><tr><td>Sonda flussometro, H6XL</td><td>Transonic Systems Inc.</td>Pompa per terapia del calore <td>H6Xl689</td><td></td></tr><tr><td>, pompa a T Gaymar</td><td>Industries Inc</td><td>TP500-G89D19</td><td></td></tr><tr><td>pompa di infusione 3.000</td><td>SIMS Graseby Ltd.</td><td></td><td></td>SN300050447</tr><tr><td>Isoflurano Vapor 19.1</td><td>Draeger Medical Canada Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Monitor, Datex AS 3</td><td>Instrumentarium Corp./ Hitachi</td><td>D-VHC14-23-02</td><td></td></tr><tr><td>Unità di azionamento centrifuga Rotaflow</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>952301</td><td></td></tr><tr><td>Rotaflow Console</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>706035</td><td></td></tr><tr><td>Pad per terapia della temperatura</td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP26E</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab Force Tx</td><td>Valleylab Inc.</td><td></td><td>Ventilatore 216151480</td></tr><tr><td>, AV 800</td><td>DRE Medical Equipment</td><td>40800AVV</td><td></td></tr><tr><td>Warm Touch, sistema di riscaldamento del paziente</td><td>Nellcor/ Covidien Canada</td><td>5015300A</td><td></td></tr></tbody></table>

tecnica di suini appalti fegato e trapianto ortotopico con un attivo porto-caval shunt

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

Il successo del trapianto di fegato ha provocato una drammatica carenza di organi. Ogni anno, un numero considerevole di pazienti in lista d'attesa per il trapianto di fegato muore senza ricevere un trapianto d'organo o viene cancellato a causa della progressione della malattia. Anche dopo un trapianto riuscito, il rigetto e gli effetti collaterali dell'immunosoppressione rimangono le principali preoccupazioni per la sopravvivenza del trapianto e la morbilità del paziente. 
La ricerca sperimentale sugli animali è stata essenziale per il successo del trapianto di fegato e svolge ancora un ruolo fondamentale nello sviluppo della pratica clinica dei trapianti. In particolare, il modello di trapianto ortotopico di fegato suino (OLTx) è ottimale per la ricerca clinicamente orientata per la sua stretta somiglianza con le dimensioni, l'anatomia e la fisiologia umana. 
La decompressione della congestione intestinale durante la fase anepatica dell'OLTx suina è importante per garantire una sopravvivenza affidabile degli animali. L'uso di uno shunt attivo porto-cavale-giugulare consente di ottenere un'eccellente decompressione intestinale. Il sistema può essere utilizzato per esperimenti di sopravvivenza a breve e lungo termine. Il seguente protocollo contiene tutte le informazioni tecniche per un modello di trapianto di fegato stabile e riproducibile nei suini, compresa la cura post-operatoria degli animali.

In un primo studio di trapianto, un modello donatore a cuore battente (HBD, n = 5) è stato confrontato con un modello DCD (n = 10) esposta a 45 min di ischemia calda in situ. In entrambi i gruppi, gli innesti sono stati conservati in ghiaccio per 10 ore dopo l'approvvigionamento. Nel gruppo HBD, il 100% dei suini beneficiari sopravvisse fino alla fine del follow-up il giorno 5 dopo il trapianto. Nel gruppo DCD, solo il 50% dei suini beneficiari sopravvissuto per 5 giorni a causa di problemi di coagulazione o scompenso metabolico, come risultato della funzione epatica post-operatorio diminuito. Tutti i campioni di sangue sono stati prelevati dal catetere venoso centrale. Dopo la centrifugazione, campioni di siero sono stati ottenuti e analizzati per danno epatocellulare (aspartato aminotransferasi, AST), la funzione delle vie biliari (bilirubina totale e fosfatasi alcalina), e la funzione del fegato (INR). Il tempo impiegato per ogni marcatore è illustrata nelle figure 2 - 5. <p class="jove_content" ast livelli hanno raggiunto un picco dopo ore u l nel gruppo hbd e dcd p="0,13)" sono tornati a valori quasi normali giorni. analogamente i della fosfatasi alcalina stati notevolmente aumentati rispetto al mentre bilirubina totale rimasta stabile micromol per tutto progressivamente aumentato fino giorno la grande deviazione standard dei di mostra una peculiare eterogeneit infortunio biliare in questo gruppo. inr come marker funzione epatica ha mostrato andamento simile ai ast. ripristinati il aveva inferiori con> Figura 1. Schema dello shunt porto-cavale-giugulare. Il bypass è riempita con una soluzione di Ringer lattato. Poi la parte cava viene serrato con un morsetto del tubo, le parti giugulari e splenici sono collegati ai cateteri pre-impostati, il bypass è aperto, e la pompa centrifuga viene avviato dopo portale serraggio venosa. Dopo resezione epatica, la parte cavale della tangenziale viene inserito e fissato nella infraepatica moncone vena cava, craniale alle vene renali. Il morsetto del tubo viene rilasciato per consentire la decompressione cava, oltre alla decompressione portale. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig2.jpg"> Figura 2. aspartato aminotransferasi (AST) (HBD n = 5, DCD n = 10). AST è un marcatore sensibile di danno epatocellulare. La poppa di piccoer 24 ore è più bassa nella HBD rispetto al gruppo DCD, suggerendo il danno da riperfusione meno epatica; la deviazione standard più piccola mostra risultati più omogenei nel gruppo HBD. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig3.jpg"> Figura 3. bilirubina totale (HBD n = 5, DCD n = 10). Bilirubina totale, come un marcatore della clearance biliare e l'integrità del dotto biliare, mostra un andamento stabile ed omogenea con valori inferiori a 10 mmol / L nel gruppo HBD. La curva bilirubina nel gruppo DCD aumenta gradualmente nel tempo e mostra una deviazione standard alto, suggerendo lesioni biliare in solo una parte del gruppo sperimentale. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig4.jpg"> Figura 4. Fosfatasi alcalina (HBD n = 5, DCD n = 10). Fosfatasi alcalina is un indicatore di danno biliare. I valori per il gruppo HBD sono inferiori rispetto a quella del gruppo DCD, che implica meno lesioni biliare. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig5.jpg"> Figura 5. INR (HBD n = 5, DCD n = 10). Un alto valore di INR indica diminuita funzione epatocellulare a causa della diminuzione rilascio dei fattori della coagulazione. In entrambi i gruppi HBD e DCD, i valori INR tornare a valori normali 5 giorni dopo il trapianto, suggerendo il recupero della funzionalità epatica. I valori per il gruppo HBD appaiono inferiori.

La ricerca sperimentale sugli animali svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo della pratica clinica dei trapianti. Il modello di trapianto ortotopico di fegato suino (OLTx) assomiglia molto alle condizioni umane ed è spesso utilizzato nella ricerca clinicamente orientata. Il seguente protocollo contiene tutte le informazioni per un modello OLTx suino affidabile che utilizza uno shunt attivo porto-cavale-giugulare.

Tecnica di Suini appalti Fegato e trapianto ortotopico con un attivo Porto-Caval Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di eseguire in modo affidabile un trapianto di fegato allogenico nei suini, garantendo un'emodinamica animale stabile sia dopo l'intervento. Ciò si ottiene implementando prima uno shunt giugulare cavale portale attivo prima di bloccare in modo incrociato il CVA della vena e la vena porta, al fine di evitare la congestione intestinale durante la fase di impianto. Successivamente, viene eseguito un trapianto ortotopico di fegato mediante tecnica di sostituzione del cava, iniziando con l'anastomosi del cavo sopraepatico.Quindi la vena porta viene anastomosi e il fegato viene riperfuso. Infine, viene rimosso lo shunt giugulare cavale portale e viene completata l'anastomosi residua della vena infraepatica, dell'arteria epatica e del dotto biliare comune. Alla fine, il maiale è stato svezzato dall'anestesia e monitorato attentamente dopo l'intervento.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come l'occlusione vascolare totale o l'inance passiva, è che in questa particolare tecnica, la congestione splenica durante la fase anabolica è completamente evitata. In questo modo, preveniamo l'ipertensione venosa e il danno capillare che possono portare a una maggiore ischemia intestinale e instabilità emodinamica Dopo aver asportato il fegato da un maiale donatore e anestetizzato il maiale ricevente secondo il protocollo di testo, posizionare un suino ricevente in posizione supina su un tavolo chirurgico sopra un termoforo. Dopo l'intubazione, utilizzare la geometria del cappuccio per confermare che sia stata eseguita correttamente con la pulsossimetria sulla coda o sull'orecchio del suino.Monitorare la frequenza cardiaca e la saturazione di ossigeno. Eseguire la tecnica di Seldinger per inserire un induttore di guaina nella vena giugulare esterna sinistra che verrà utilizzato successivamente per un bypass giugulare attivo del cavo portale. Dopo aver inserito un catetere di nutrizione parenterale totale nella vena giugulare esterna destra in condizioni sterili, sezionare l'arteria carotide destra e inserire un catetere in polipropilene per il monitoraggio invasivo della pressione arteriosa.Quindi utilizzare due cravatte di seta zero per circondare l'arteria per consentire la legatura di emergenza. Successivamente, eseguire una laparotomia della linea mediana e inserire un divaricatore addominale per ottenere un accesso sufficiente al quadrante superiore destro. Quindi, nei passaggi centrali, dividere il legamento epatoduodenale vicino al fegato tra i legami.Identificare, dividere e marcare i rami dell'arteria epatica e del dotto biliare. Successivamente, sezionare l'arteria epatica in direzione retrograda fino a raggiungere la divisione dell'arteria gastroduodenale. Quindi liberare la vena porta dal tessuto aderente utilizzando un CVA venoso mobilizzato con elettrocauterizzazione dal retroperitoneo sul lato destro per esporre l'elio della milza a circa metà della lunghezza della milza.Eliminare accuratamente l'arteria splenica e la vena dagli strati peritoneali aderenti. Quindi usa 4 2 0 lacci di seta per circondare sia l'arteria splenica che la vena. Inserire un induttore della guaina di French 8,5 con due fori aggiuntivi nella punta del catetere nella vena splenica che punta distalmente verso la vena porta con uno dei due lacci zero.Fissare il catetere distalmente al suo inserimento e utilizzare altri due lacci zero per chiudere la vena prossimale all'inserimento. Successivamente, riempire la soluzione salina in un bypass costituito da una testa della pompa centrifuga, un tubo giugulare e un afflusso sia da un ramo portale che da un ramo cavale. Metti un tubo clamp sull'estremità prossimale del tubo caval.Quindi collegare il portale e l'apertura giugulare del bypass a entrambi i cateteri introduttori della guaina e utilizzare un anello di fascetta stringitubo in metallo per sigillare la connessione. Posizionare la testa della pompa centrifuga nella sua posizione di pompa tre minuti dopo aver somministrato 1000 milligrammi di acido texa e 10.000 UI di eparina per via endovenosa. Aprire le pinze di entrambi i cateteri introduttori della guaina e bloccare a croce la vena porta.Quindi, avviare la pompa centrifuga a circa 1.500 giri al minuto. Quindi, utilizzando un morsetto per la schiena deba, la vena infraepatica CVA appena craniale alle vene renali. Applicare una pressione decisa sul tessuto epatico per spremere una parte del sangue rimanente.Quindi, utilizzando un morsetto a croce statsky, bloccare la vena cava epatica sup, compreso un bordo diaframmatico, mentre si ritrae il fegato in modo coccoloso. Ora taglia il CVA della vena sopraepatica direttamente al suo bordo con il tessuto epatico e taglia la vena porta vicino all'elio epatico a circa quattro centimetri cranialmente al morsetto CVA infraepatico. Praticare un foro nella parete anteriore della vena cava in questo foro.Posizionare il connettore dell'apertura del cavo di bypass con un blocco dell'esca rivolto anteriormente con una fascetta di seta zero. Fissare il connettore nella CVA infraepatica. Quindi aprire il tubo clamp del ramo del cavo del bypass.Infine, aprire il morsetto CVA infraepatico per consentire un bypass giugulare del cavo in aggiunta al bypass giugulare portale esistente. Dopo aver aumentato la velocità della pompa a circa 2.500 giri al minuto, verificare che il deflusso del bypass sul lato giugulare sia compreso tra 900 e mille millilitri al minuto. Utilizzando quattro suture in polipropilene monofilamento zero.Chiudere tutti e tre gli osteo della vena frenica sul lato ricevente in corrispondenza del punto di apertura CVA sup epatico. Suture in polipropilene monofilamento a quattro zero a doppio braccio all'interno, all'esterno in entrambi gli angoli del CVA epatico del SUP sul lato ricevente. Dopo aver posizionato l'organo del donatore nella cavità addominale, tagliare il CVA della vena epatica S del donatore per adattarlo al lato ricevente.Usando gli aghi interni dei punti d'angolo laterali della ricevente, crea un punto d'angolo interno esterno su ciascuno dei lati del cva del donatore super epatico. Una volta approssimata l'Austria del ricevente e del donatore, legare entrambe le estremità della sutura sinistra. Quindi fai un punto interno esterno della parete posteriore della kava ricevente accanto alla cravatta e passa sopra la parete posteriore.Idealmente evitare la parete di kava con la sutura rimanente che scorre sulla parete anteriore dall'angolo sinistro. Quindi legare insieme entrambe le suture utilizzate per le pareti posteriore e anteriore. Dopo aver tagliato la vena porta donatrice a una lunghezza appropriata, utilizzare sei suture in polipropilene monofilamento zero per eseguire un'anastomosi della vena porta end-to-end come appena dimostrato poco prima di completare la parete frontale, utilizzare un'altra linea di lavaggio per intubare il lume dell'hava infraepatica e con un litro di soluzione fisiologica a temperatura ambiente.Eliminare la soluzione UW attraverso la vena porta hava infraepatica. Successivamente, completare l'anastomosi e legare le suture lasciando circa 0,5 centimetri di fattore di crescita. Quindi posizionare un altro morsetto posteriore deba sulla CVA infraepatica del donatore.Aprire il morsetto CVA epatico S e verificare la presenza di sanguinamento. Quindi aprire il morsetto del portale per riperfondere il fegato, riposizionare il lato ricevente della vena cava infraepatica e mettere un morsetto per tubi sulla parte del cavo del bypass. Dopo aver arrestato la pompa centrifuga, tagliare le fascette del connettore del cavo e rimuoverlo.Restituire il sangue rimanente dal bypass al maiale attraverso il catetere giugulare. Ora chiudi la pinza, il catetere giugulare e scollega il bypass. Quindi, dopo aver somministrato 100 milligrammi di solfato di protamina per antagonizzare un'eparina, utilizzare cinque suture monofilamento zero per eseguire un'anastomosi end-to-end della CVA infraepatica.Anche in questo caso, CVA inferiore infraepatico riperfuso rilasciando entrambi i morsetti. Dopo aver tagliato un cerotto aortico attorno al tronco celiaco del donatore, mettere un morsetto bulldog sull'arteria epatica comune prossimalmente alla giunzione dell'arteria gastroduodenale. Una volta che l'arteria epatica è stata lavata con eparina, utilizzare sei suture in polipropilene monofilamento zero per anesteti.L'osteo arterioso da un capo all'altro in una tecnica di paracadute in corsa, quindi riperfondere aprendo prima le pinze del bulldog distale e poi quelle prossimali con 2 6 0 suture monofilamento. Usa la tecnica della corsa per anestomos il dotto biliare da un capo all'altro. Dopo aver verificato la presenza di emostasi, rimuovere il catetere introduttore della guaina dalla vena splenica.Utilizzare i due lacci rimanenti per chiudere le estremità prossimale e distale con la sutura assorbibile monofilamento di misura uno. Chiudere la parete addominale. Infine, utilizzare una suturatrice cutanea o eseguire due punti di sutura zero per chiudere la pelle.Fare riferimento al protocollo di testo per l'assistenza postoperatoria. Nel nostro primo studio sui trapianti, il 100% dei suini riceventi che ricevevano fegati da un donatore a cuore battente o HBD è sopravvissuto fino alla fine del follow-up, cinque giorni dopo il trapianto. Tuttavia, solo il 50% dei suini che hanno ricevuto fegati da donatori dopo la morte circolatoria o DCD è arrivato all'analisi di follow-up di cinque giorni di campioni di sangue da danno epatocellulare.La funzionalità biliare ed epatica ha mostrato che i livelli di ST hanno raggiunto un picco dopo 24 ore in entrambi i gruppi. Questo era molto più alto nel gruppo DCD rispetto al gruppo HCD e tornava a valori quasi normali dopo cinque giorni. Allo stesso modo, come mostrato in questo grafico, i valori di fosfatasi alcalina sono aumentati notevolmente dopo 36 ore nel gruppo DCD rispetto al gruppo HBD, come dimostrato qui.Mentre la bilirubina totale era stabile nel gruppo HPD, è aumentata gradualmente nel gruppo DCD fino al quinto giorno e mostra un'elevata deviazione standard che suggerisce un danno biliare solo in una parte del gruppo sperimentale. In questa figura l'INR come marker della funzionalità epatica ha mostrato un andamento simile ai valori di A ST che hanno raggiunto il picco a 24 ore e sono stati riportati a valori quasi normali. Dopo cinque giorni Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare un bypass venoso venoso attivo durante il trapianto ortotopico di fegato di maiale.In questo modo, garantiamo condizioni stabili e motrici durante l'intera procedura.

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Vi presentiamo uno facile da stabilire revisione della classica due-bracciale tecnica di trapianto di fegato nel ratto.

Trapianto di fegato in ratti

Trapianto di fegato nei ratti è un modello sperimentale indispensabile per la ricerca biomedica. Qui vi presentiamo le nostre procedure chirurgiche per il trapianto ortotopico di fegato di ratto con la ricostruzione arteriosa epatica con un trapianto parziale del 50%.

Procedure chirurgiche per un modello di Rat parziale trapianto di fegato con la ricostruzione arteriosa epatica

Trapianto di fegato ausiliario fornisce un supporto temporaneo in insufficienza epatica acuta, fino a quando la rigenerazione del fegato fallire. Il trapianto eterotopico ausiliario di fegato (HALT) con arterialization vena porta (PVA) rende del fegato è sufficiente. Abbiamo sviluppato una tecnica analoga nel ratto, di esaminare l'influenza del arterialization vena porta sulla morfologia e la funzione del trapianto.

Eterotopica ausiliario Ratto trapianto di fegato con flusso regolato Portal Vein arterialization in acuta insufficienza epatica

La ricostruzione della vena cava suprahepatic (SHVC) rimane un passo difficile nel trapianto orthotopic del fegato del ratto. In questo articolo, vi mostriamo un protocollo passo-passo per la ricostruzione di SHVC in ratti facendo uso di una tecnica di anastomosi magnetico romanzo.

Un modello del ratto di orthotopic del trapianto del fegato usando una tecnica novella dell'anastomosi magnetico per la ricostruzione della Vena Cava Suprahepatic

Questo protocollo è destinato per descrivere la consegna di porcino dell'epatocita isolamento ed ex vivo del gene per curare modelli di malattie metaboliche tramite trapianto autologous della cellula. Anche se questo particolare modello gode di vantaggi unici che favoriscono la riuscita terapia, l'applicazione è una Fondazione pertinente all'indirizzo di indicazioni e altre malattie.

Lentivirali terapia genica mediata da vettore di epatociti Ex Vivo per trapianto autologo nei suini

In questo protocollo viene descritto un modello di trapianto di fegato ortotopico suino dopo conservazione statica a freddo di organi donatori per 20 ore senza l'uso di un bypass veno-venoso durante l'attecchimento. L'approccio utilizza una tecnica chirurgica semplificata con minimizzazione della fase anepatica e sofisticata gestione del volume e del vasopressore.

Trapianto di fegato suino senza bypass veno-venoso come modello di donatore a criteri estesi

Il modello suino di perfusione meccanica normotermica epatica (NMP), qui descritto, può essere utilizzato con successo per studiare l'NMP come strategia di conservazione, strumento per la valutazione della vitalità e piattaforma per la riparazione d'organo. Ha un alto valore traslazionale, tuttavia è tecnicamente impegnativo e laborioso.

Perfusione epatica isolata normotermica suina

In questo protocollo, discutiamo l'implementazione di un modello di trapianto ortotopico di fegato (OLT) di successo nei topi. Inoltre, vengono discussi anche gli adiuvanti per analizzare ulteriormente la pervietà dell'allotrapianto dopo il successo dell'OLT in un topo, in particolare utilizzando scansioni di tomografia microcomputerizzata (microCT).

Trapianto ortotopico di fegato di successo nei topi che utilizzano l'angiografia con tomografia microcomputerizzata

Questo protocollo delinea la metodologia per stabilire un modello suino che utilizza la perfusione meccanica (MP) a temperatura variabile e controllata per la conservazione del fegato del donatore, seguita dal trapianto di fegato ortotopico (OLTx). Mira a promuovere il tasso di successo di OLTx utilizzando la donazione di donatori dopo la morte circolatoria (DCD) del fegato e stabilire un modello stabile.

Conservazione della donazione suina dopo morte circolatoria (DCD) Fegato mediante perfusione e trapianto ortotopico di fegato

Questo protocollo fornisce informazioni tecniche per la ricostruzione dei vasi utilizzando la tecnica della cuffia nel trapianto di fegato ortotopico di topo.

Ricostruzione vascolare con la tecnica della cuffia nel trapianto di fegato ortotopico di topo

Impara la tecnica di trapianto ortotopico del fegato nel suino con shunt porto-cavale-giugulare attivo. Questo metodo garantisce emodinamica stabile durante l'intervento, evitando congestione splenica e ipertensione venosa.

Tecnica di Suini appalti Fegato e trapianto ortotopico con un attivo Porto-Caval Shunt

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