Ottimizzato Ex-ovo Coltura di Chick embrioni a stadi avanzati di sviluppo

L'obiettivo generale di questo metodo è quello di presentare una tecnica di coltura X ovo ottimizzata per embrioni di pollo, che consenta l'osservazione dello sviluppo embrionale dall'hamburger e dallo stadio 19 di Hamilton fino agli stadi avanzati di sviluppo fino allo stadio 40. Questo metodo è utile per gli studenti in un laboratorio di biologia dello sviluppo, così come per i ricercatori che desiderano utilizzare l'embrione di pollo come organismo modello per impostare questo metodo di coltura X ovo. Per prima cosa, le uova vengono preparate.

Le uova sono state incubate a 37 gradi Celsius con il 40% di umidità per circa tre giorni e mezzo, che è approssimativamente correlato all'hamburger e allo stadio 19 di Hamilton. Le uova vengono preparate spruzzandole con etanolo al 70% in modo che quando il guscio viene rotto, l'embrione non venga contaminato. Dopo che le uova sono state spruzzate, vengono lasciate asciugare momentaneamente.

Mentre la camera di umidità è preparata, la camera di umidità è costituita da un contenitore Ziploc. Il primo passo nella costruzione della camera di umidità è aggiungere uno strato di uno o due centimetri di imbottitura assorbente. In questo caso, Kim pulisce, anche se è possibile utilizzare anche strati di imbottitura in cotone.

Questo strato di imbottitura assorbente si inserisce nella base del contenitore Ziploc mostrato qui. Una volta posizionato lo strato assorbente, circa 150 millilitri di acqua distillata vengono versati nella base del contenitore. La maggior parte di quest'acqua dovrebbe essere assorbita dall'imbottitura.

La camera di umidità è ora completa e può essere posizionata lateralmente. Una piccola barca sterile viene utilizzata per cullare l'embrione quando viene rimosso dal guscio. La barca misura 8,8 centimetri quadrati a causa dell'orientamento delle uova nell'incubatrice, l'embrione si trova sulla superficie superiore dell'uovo e quindi il guscio dovrebbe essere rotto sul lato opposto.

Il guscio viene poi delicatamente spezzato e l'uovo viene posto molto vicino alla barca. Con un movimento fluido, l'uovo viene separato, rilasciando delicatamente l'embrione nel modo in cui Boat. L'embrione viene quindi ispezionato per assicurarsi che il giogo sia ancora intatto e che l'embrione sia vitale, come mostrato qui con un battito cardiaco visibile e senza anomalie evidenti.

Successivamente, aggiungiamo un antibiotico all'embrione per aiutare a combattere l'infezione. Penicillina streptomicina a una concentrazione di 5.000 unità di penicillina e cinque milligrammi di streptomicina per mil è assegnata per ridurre al minimo la frequenza del gelo e del disgelo. Avvenimenti. 40 microlitri vengono prelevati dall'aliquota e aggiunti all'albumina circostante utilizzando una pipetta.

Ora l'embrione è pronto per essere posizionato con cura nella camera di umidità. Una volta nella camera di umidità, all'embrione viene dato un coperchio per aiutare a prevenire la contaminazione. Un coperchio quadrato di Petri di nove centimetri e mezzo quadrati è posto sopra la barca di passaggio.

È importante assicurarsi che non ci sia umidità sul bordo della barca di andata in modo che non si formi una guarnizione tra la capsula di Petri e la barca di navigazione, che limiterebbe l'ossigeno all'embrione. Quindi, per completare la camera di umidità, viene posizionato un coperchio sul contenitore Ziploc. Tuttavia, solo due angoli del coperchio vengono premuti in posizione, lasciando gli altri angoli aperti e consentendo al flusso d'aria di raggiungere l'embrione.

Una volta completata la camera di umidità, viene posta in un'incubatrice a 37 gradi in modo che l'embrione possa continuare a svilupparsi dopo quattro giorni e mezzo. La camera di umidità può essere rimossa dall'incubatrice e l'embrione può essere osservato approssimativamente allo stadio 34. A questo punto, gli studenti possono facilmente osservare l'embrione, compresi i vasi sanguigni, il grande occhio e le gemme degli arti.

L'embrione può essere ulteriormente osservato al microscopio da dissezione e possono essere eseguite ricerche più avanzate come le manipolazioni embrionali. Dopo aver osservato l'embrione in questa fase, può essere riportato in un'incubatrice a 37 gradi e continuerebbe a svilupparsi almeno fino allo stadio 40, ovvero 14 giorni di incubazione. In conclusione, questo metodo mostra l'ottimizzazione della coltura di embrioni di pollo al di fuori del guscio dell'uovo.

Offre agli studenti l'opportunità di osservare lo sviluppo di embrioni di pollo in un ambiente di laboratorio affollato e, inoltre, fornisce ai ricercatori l'accesso agli embrioni se stanno facendo manipolazioni.