Isolamento e Asportazione di Murine Aorta; Una tecnica versatile nello studio delle malattie cardiovascolari

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di isolare, isolare e asportare l'aorta murina. Ciò si ottiene esponendo prima la cavità toracica e addominale. Il secondo passo consiste nel perfondere con soluzione salina fredda e sterile.

Successivamente, gli organi delle cavità toraciche e addominali vengono rimossi, lasciando il cuore attaccato all'aorta. Il passaggio finale consiste nell'asportare il tessuto adiposo perivascolare e il tessuto di avvento dall'aorta. Infine, viene utilizzato un microscopio da dissezione per verificare che tutto il tessuto circostante sia stato rimosso e l'aorta può essere utilizzata per una varietà di analisi sperimentali.

Quindi questa tecnica è utile per rispondere a domande chiave nel campo della ricerca cardiovascolare, come lo sviluppo di aneurismi e la formazione di placche aterosclerotiche. E quindi si possono osservare i cambiamenti nella biologia molecolare, come l'espressione genica e proteica. Dopo l'eutanasia del topo, verificare lo stato di eutanasia con un pizzico di dita.

Successivamente, sterilizzare la pelle bagnando il pelo addominale con etanolo al 70%. Quindi fissare il mouse alla tavola chirurgica supina con le appendici distese. Inizia l'intervento chirurgico usando il forcipe per localizzare e isolare la pelle addominale appena inferiore al processo xifoideo.

Quindi, solleva la pelle e tagliala con le forbici. Questo dovrebbe esporre la porzione superiore del peritoneo e la cavità toracica inferiore. Quindi, usando pinze e forbici, sollevare il processo xifoideo e praticare incisioni laterali appena inferiori ad esso lungo i margini sottocostali.

Per sezionare la cavità toracica, entrare attraverso il diaframma, facendo attenzione a non danneggiare il cuore o i vasi principali nel processo. Ora cranio estendono le incisioni laterali lungo i margini sottocostali. Pertanto, rimuovere la parte anteriore della gabbia toracica.

Per completare queste incisioni può essere necessaria una dissezione smussata per rimuovere il cuore dalla parete toracica anteriore. Ora usando una garza, pulisci la cavità toracica dai liquidi in eccesso per rendere più facile l'accesso agli organi. Quindi rimuovere i polmoni usando una pinza e delle forbici lobo per lobo.

Il cuore e l'aorta dovrebbero quindi essere completamente esposti e facilmente accessibili per raccogliere il sangue tramite una puntura cardiaca. Fatelo ora prima di procedere con la perfusione per perfondere il cuore, riempite una siringa da 10 cc con 10 millilitri di XPBS sterile ghiacciato. Quindi collegare un ago da 25 gauge.

Inserire con cautela l'ago nel ventricolo sinistro. Quindi praticare un'incisione nell'atrio destro in modo che non si accumuli una pressione eccessiva nel sistema circolatorio nella fase successiva. Ora, nei prossimi due o tre minuti, espellere lentamente il PBS dalla siringa nel cuore.

Durante l'espulsione del PBS, utilizzare una garza sterile per assorbire il liquido che fuoriuscirà dall'atrio in corrispondenza dell'incisione. Quando il PERFUSE eight è stato espulso, assorbire il liquido rimanente con una garza che oscuri una visione pulita della cavità toracica. Per esporre il contenuto gastrointestinale, tagliare delicatamente la parete addominale, estendendo l'incisione fino all'area sovrapubica.

Una volta lì, tagliare bilateralmente verso gli arti inferiori per creare un lembo di pelle, che può essere appuntato o asportato. Andando avanti rimuove diversi organi, i lobi del fegato, il pancreas, la milza, l'intestino e l'esofago inferiore. Questo apre la vista sull'aorta.

Fai molta attenzione mentre seziona la regione perrene poiché ci sono rami superficiali dall'aorta alle arterie renali in questa regione. Eseguire questa dissezione in modo preciso e con cura, poiché i batteri del GI possono contaminare gli altri tessuti, sciacquare l'area ripulita con un XPBS e assorbire la soluzione in eccesso con una garza, l'aorta dovrebbe essere facilmente accessibile. Quindi, con forbici e pinze, separa l'aorta dalla colonna vertebrale.

Una dissezione smussata è appropriata e si raccomanda vivamente l'uso di un microscopio da dissezione. L'aorta può essere rimossa, iniziando in modo coddly o cran. Ciò che conta è un processo ordinato dell'impianto di pulizia e separazione dei tessuti.

Quando si seziona il tessuto adiposo perivascolare, rimuoverlo utilizzando micro forbici sottili per evitare danni alla parete aortica. Ciò riduce al minimo la possibilità di contaminazione dei fibroblasti durante la coltura di cellule muscolari lisce aortiche. Un'attenta escissione del tessuto perivascolare, adiposo e dell'avventizia è molto importante.

Qualsiasi tessuto residuo potrebbe causare contaminazione nella coltura cellulare, ma anche influenzare i saggi molecolari. Utilizzando questa procedura, un'aorta intatta originata dal cuore scende nelle cavità toraciche e addominali. Con le arterie renali ancora attaccate, l'aorta può essere visualizzata in situ per quantificare le alterazioni morfometriche, che sono diagnostiche nello studio degli aneurismi dell'aorta addominale.

Successivamente, l'aorta può essere rimossa, fissata e colorata per osservare i cambiamenti istologici come con la colorazione di emato, toin ed eoin, o con la colorazione ver Hoff Van Geen per osservare le bande di elastina e quindi visualizzare l'integrità strutturale dell'aorta. Le cellule aortiche possono essere utilizzate anche per l'isolamento di cellule primarie e per studi in vitro come studi di vitalità e localizzazione proteica. Dopo la procedura, è possibile utilizzare altre tecniche come l'isolamento di proteine e RNA per esaminare l'espressione proteica, l'attività enzimatica e l'espressione genica.