Name: Localizzazione, identificazione, e lescissione dei Depositi Murine adipose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Impara a localizzare e rimuovere i depositi di tessuto adiposo nei topi adulti con minima dissezione e contaminazione. Questo metodo supporta analisi istologiche e studi sull'espressione genica.

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Gli autori non hanno riconoscimenti.

NOTA: Tutte le procedure sugli animali sono state eseguite con l&#39;approvazione della Cura e uso Comitato Animal Istituzionale (IACUC) dell &#39;Università di Cincinnati ed in conformità con la guida per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio dal National Institutes of Health (NIH Publication No . 85-23, Revised 1996). 1. Euthanize e sterilizzare il mouse <ol><li> Posizionare il mouse in un set contenente una dose supratheraputic di isoflurano e permettono di inalare a effetto. Una volta che il mouse è eutanasia, rimuoverlo dalla scatola. </li><li> Cervicale dislocate come un secondo mezzo di eutanasia. </li><li> Sterilizzare la superficie esterna del mouse dalla pulizia del animale con etanolo al 70%. </li></ol> 2. Identificazione e isolamento di tre diversi Depositi adipose <ol><li> Brown Tessuto adiposo (BAT) Isolamento: <ol><li> Assicurarsi che il pelo è bagnato dalla pulizia alcol per facilitare il taglio attraverso la epidermico e dermico Layers. </li><li> Posizionare il mouse in posizione supina con la schiena contro il tavolo. </li><li> Afferra la pelle appena sotto il diaframma con una pinza, ascensore e incidere con le forbici. </li><li> Tagliare trasversalmente attorno alla circonferenza del mouse per esporre il peritoneo. </li><li> Rivela il deposito BAT a forma di farfalla dal degloving la metà superiore del mouse. Tenere le appendici inferiori e dell&#39;addome in una mano e tirando la pelle verso la testa. </li><li> Orientare il mouse, in modo che sia posizionato prono sul tavolo. Fare attenzione a non contaminare il deposito a vista con i capelli. </li><li> Strumenti chirurgici pulite e cambiamento per un nuovo paio di guanti. </li><li> Individuare le scapole e deposito corrispondente. Rimuovere con cautela qualsiasi adiposo bianco superficiale in cima la farfalla e poi sezionare la farfalla di interscapolare grasso bruno. Fare attenzione a evitare il muscolo strettamente associato con il grasso marrone. NOTA: L&#39;uso di un microscopio dissezione è raccomandato per la rimozione del white adiposo, così come nella separazione del adiposo marrone dal scapole. </li><li> Rimuovere deposito di grasso e trasferire in una provetta 2 ml. </li><li> Se RNA o proteina deve essere estratta, congelare il tessuto mediante immersione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. Congelare il campione in una sola volta per evitare il degrado. Se coltura, coprire il tessuto in DMEF-12 e impostare su ghiaccio fino a che tutti i campioni vengono raccolti per la cultura (info supplementare). </li></ol></li><li> Isolamento di sottocutaneo tessuto adiposo (SQ), un bianco Tessuto adiposo Depot (WAT): <ol><li> Mettere su un nuovo paio di guanti per non contaminare tra depositi di grasso. </li><li> Rivela il inguinale, depositi SQ triangolari da DE-guanto la metà inferiore del mouse. Tenere le appendici superiori e torace in una mano e tirando la pelle verso i piedi con l&#39;altra mano. </li><li> Orientare il mouse in posizione supina facendo attenzione a non contaminare il deposito a vista con i capelli. </li><li> Clean surgicastrumenti l e passare a un nuovo paio di guanti. </li><li> Sezionare con cura i triangoli di grasso SQ. Fare attenzione a non contaminare il campione con il muscolo, la vicina di grasso, ghiandole mammarie o tagliando le navi e contaminare il campione di sangue. NOTA: L&#39;uso di un microscopio dissezione è consigliata se i confini non sono chiaramente definiti. </li><li> Rimuovere depositi di grasso e trasferire a 2 ml microprovette. </li><li> Se RNA o proteina deve essere estratta, congelare il tessuto mediante immersione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. Congelare il campione in una sola volta per evitare il degrado. </li><li> Per la colorazione, correggere o incorporare in ottobre Se coltura, coprire il tessuto in DMEF-12 e impostare su ghiaccio fino a che tutti i campioni vengono raccolti per la cultura (info supplementare). </li></ol></li><li> Isolamento di gonadica Fat un tessuto adiposo viscerale (VAT) e Bianco Tessuto adiposo (WAT) Depot: <ol><li> Mettere su un nuovo paio di guanti per non contaminare tra depositi di grasso. </li><li> Con scissors, tagliate il peritoneo trasversalmente, direttamente sotto il diaframma. Tagliare il peritoneo dal diaframma alla metà del retto coronale per esporre gli organi addominali. </li><li> Individuare i testicoli o delle ovaie e identificare il tessuto adiposo bianco attaccato, noto come il adiposo epididimale nei maschi o adiposo gonadica nelle femmine. </li><li> Strumenti chirurgici puliti e cambiare per un nuovo paio di guanti </li><li> Sezionare con cura entrambi i depositi di grasso dell&#39;epididimo dal testicoli, epididimi, e vasi deferenti. Oppure, se femmina, sezionare accuratamente entrambi cuscinetti di grasso gonadici dalle ovaie. </li><li> Rimuovere i depositi di grasso e trasferirli a 2 tubi ml microcentrifuga. </li><li> Se RNA o proteina deve essere estratta, congelare il tessuto mediante immersione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. Congelare il campione in una sola volta per evitare il degrado. </li><li> Per la colorazione, correggere o incorporare in ottobre Se coltura, coprire il tessuto in DMEF-12 e impostare su ghiaccio fino a che tutti i campioni vengono raccolti per la cultura (info supplementare). </li&gt; </ol></li></ol> 3. Isolamento di Perivascolare Tessuto adiposo (PVAT) <ol><li> Isolamento del Cuore: <ol><li> Disporre il mouse in posizione supina con appendici superiori e inferiori estesi verso l&#39;esterno. </li><li> Appendici protetta tramite nastro chirurgico. </li><li> Dopo aver posizionato il mouse, come riportato sopra, creare tensione sollevando il processo xifoideo con una pinza. Tagliare orizzontalmente attraverso la membrana, esponendo la parte inferiore della cavità toracica. </li><li> Pur mantenendo la tensione, sollevando il processo xifoideo, tagliare la gabbia toracica superiormente verso la testa, appena a lato dello sterno. </li><li> Sollevare la gabbia toracica appena inferiore alla clavicola, e tagliare lungo la lunghezza inferiore della clavicola verso il cavo ascellare in entrambe le direzioni. La cavità toracica e il suo contenuto (cuore, polmoni, ecc) ora dovrebbero essere chiaramente visibili. </li><li> Pulire la cavità toracica di sangue estraneo e fluido usando ga sterileuze di assorbire il liquido. Se gli organi di raccolta o navi sono sicuri profusa (info supplementare). </li><li> Una volta che la superficie è eliminato da fluido, tagliare i vasi bronchi e connessi per rimuovere i polmoni, permettendo una migliore esposizione del cuore. </li></ol></li><li> Localizzazione e Asportazione di aortica Perivascolare Tessuto adiposo (PVAT): <ol><li> Rimuovere i seguenti organi per identificare meglio le parti inferiori della aorta: fegato, stomaco, milza, pancreas, intestino, e colon. </li><li> Prima iniziare con l&#39;identificazione dello stomaco e dell&#39;esofago. Tagliare dell&#39;esofago alla giunzione gastro-esofageo per liberare lo stomaco dal corpo. </li><li> Avanti, individuare l&#39;intestino e mesentere circostante. Tagliare superficialmente attraverso mesentere, in quanto si trova molto vicino alla parte renale dell&#39;aorta, poi &quot;eseguire l&#39;intestino.&quot; </li><li> Tagliare il colon liberare il più vicino al retto possibile. Così, liberando lo stomaco, intestino e colon dal mouse. </li><li> Respostare lo stomaco, intestino, colon, pancreas e milza tagliando attraverso il mesentere Collegamento e vasi. Il pancreas e la milza dovrebbe venire gratis con lo stomaco, intestino e colon. </li><li> Rimuovere il fegato tagliando attraverso le vene epatiche e allegando mesentere, rimuovere tutti i lobi. </li><li> Tagliare via lo strato di grasso viscerale e circondano i reni. Lasciare i reni allegate all&#39;aorta in vivo per servire come marcatori geografiche per diversi segmenti dell&#39;aorta. </li><li> Risciacquare la zona con 1x PBS sterile e rimuovere tutto il fluido per assorbimento con una garza sterile. </li><li> Utilizzando micro-forbici e micro-pinza, separare l&#39;aorta dal suo attaccamento dorsale per la colonna vertebrale e il suo attaccamento ventrale all&#39;esofago. </li><li> Isolare l&#39;aorta seguendo e staccando l&#39;aorta la lunghezza dell&#39;aorta discendente dall&#39;origine nel cuore alla biforcazione della regione iliaca. </li><li> Identificare e isolare i vasi succlavi. Isolare questi vasidal collo alla radice aortica per esporre meglio la giunzione aortica e la radice nel cuore. </li><li> Rimuovere il timo poi tagliare l&#39;arteria brachiocefalico, l&#39;arteria carotide comune sinistra, e succlavia sinistra, permettendo il movimento del cuore. </li><li> Con l&#39;aiuto di un microscopio dissezione, visualizzare il tessuto adiposo (PVAT) strato perivascolare che circonda l&#39;aorta. </li><li> Facendo molta attenzione a non schiacciare o spremere il PVAT, tirare delicatamente il modo PVAT dall&#39;aorta con micro-pinza. Tagliare delicatamente il fissaggio del PVAT all&#39;aorta con micro-forbici a partire regione toracica appena superiore al punto in cui si trova il diaframma. NOTA: Si consiglia un microscopio a dissezione. </li><li> Ripetere questo processo l&#39;intera lunghezza dell&#39;aorta, terminando a regione aortica sottorenale, che si trova appena superiore alla biforcazione iliaca del vaso aortico. </li><li> Se aortico PVAT è desiderato, utilizzato lo stesso metodo per rimuovere il PVAT dalla minore curvature dell&#39;arco. </li><li> Posizionare i campioni PVAT in 2 ml provetta (s). </li><li> Se RNA o proteina deve essere estratta, congelare il tessuto mediante immersione in azoto liquido e conservare a -80 ° C. Congelare il campione in una sola volta per evitare il degrado. Se coltura, coprire il tessuto in DMEF-12 e impostare su ghiaccio fino a che tutti i campioni vengono raccolti per la cultura (info supplementare). NOTA: ulteriori depositi adiposi da considerare se interessati in una completa analisi depot adiposo includono: retroperitoneale, mesenterica, omentale, pericardico e poplitea. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li>
<li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults%2C+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li>
<li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+medical+care+costs+of+obesity%3A+an+instrumental+variables+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Health+Economics%22%5BJournal%5D)">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li>
<li>Obesity accounts for 21 percent of U.S. health care costs, study finds. , Cornell University. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm">http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm</a> (2012).</li>
<li>Marder, W., Chang, S. Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarder%2C+W+%22Thomson+Medstat+Research+Brief%22">Thomson Medstat Research Brief</a>. , (2006).</li>
<li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-fat+diet+increases+IL-1%2C+IL-6%2C+and+TNF-%CE%B1+production+by+increasing+NF-%CE%BAB+and+attenuating+PPAR-%CE%B3+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-α production by increasing NF-κB and attenuating PPAR-γ expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li>
<li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li>
<li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li>
<li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinction+of+white%2C+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li>
<li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White%2C+brown%2C+beige%2Fbrite%3A+different+adipose+cells+for+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li>
<li>Casteilla, L., Pénicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling%3A+factors+in+selection+and+depot+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li>
<li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti o altri conflitti di interesse.

L&#39;obesità può portare a una grande serie di morbilità e la piena comprensione del ruolo che svolge adiposo non è pienamente compreso; ricerca pertanto continuato nel campo della adiposo è necessaria. I modelli animali, in particolare i modelli murini sono ideali per la ricerca iniziale nella progressione delle malattie e la sperimentazione di potenziali trattamenti farmaceutici. Utilizzando questi modelli, isolamento precisa e escissione di depositi adiposi è uno strumento estremamente importante e necessario nello ...

Adiposa fatto un&#39;apparizione notevole sotto i riflettori dei media, a causa della notevole aumento di obesità negli ultimi decenni del 20 ° secolo. L&#39;obesità colpisce attualmente più di un terzo degli adulti e il 17% di bambini e adolescenti negli Stati Uniti (US) 1. Spanning tutti i gruppi etnici, ricerca statistica che circonda l&#39;epidemia di obesità ha mostrato che i neri non ispanici hanno il tasso aggiustato per età più alta di obesità (49,5%) rispetto ai messicani americani (40,4%), tutti gli ispanici (39,1%), e non bianchi ispanici (34,3%) 2. L&#39;effetto economico di obesità è anche una preoccupazione crescente per il sistema sanitario. Nel 2012, è stato stimato che il costo medico annuale delle cure per l&#39;obesità negli Stati Uniti nel 2005 è stato di 190,2 miliardi dollari, quasi il 21% del bilancio complessivo di spesa medica. Purtroppo, l&#39;obesità infantile è stata stimata essere responsabile a $ 14 miliardi di dollari in costi medici diretti da solo. Statisticamente, è stato determinato che il costo medio di medicaindividui con obesità è stato $ 2741 superiore di un anno rispetto a quelli senza questa morbosità 3-5. L&#39;obesità è un importante fattore di rischio per una serie di condizioni, quali: diabete di tipo 2, dislipidemia, malattie cardiovascolari, cancro, disturbi muscolari e scheletrici infiammazione cronica. L&#39;obesità è profondamente legata alla patogenesi della sindrome metabolica e di altre malattie croniche 6-8. Con tali connessioni drastiche e negativi tra obesità e altre patologie concomitanti, la ricerca scientifica si è concentrata l&#39;attenzione per capire meglio l&#39;epidemia attuale e le diverse e cardine ruoli adiposo. Storicamente, il tessuto adiposo è stato considerato irrilevante ed è stato considerato solo come un semplice tessuto di riempimento. Attualmente, adiposo ha dimostrato di giocare molti ruoli essenziali nella funzione del corpo in: metabolismo, regolazione ormonale, l&#39;infiammazione, la protezione e l&#39;isolamento 9. Il tessuto adiposo è composto principalmente daadipociti, ma contiene anche periciti, le cellule endoteliali, monociti, macrofagi e cellule staminali pluripotenti 8. Il tessuto adiposo è distribuito in tutto il corpo in depositi distinti. I principali depositi si trovano subdermally, per via sottocutanea, intramuscolare, e visceralmente 10. Depositi adiposi hanno dimostrato di avere deposito specifici profili metabolici, che hanno mostrato una predisposizione specifica depot di obesità e disturbi correlati 8. Tradizionalmente, il tessuto adiposo è stata classificata in due tipi principali: tessuto adiposo bianco (WAT) e tessuto adiposo bruno (BAT); anche se recente letteratura indica le presenze di un terzo gruppo battezzato brite o beige adiposo 11. Il tessuto adiposo è stato dimostrato di avere colori diversi, morfologie, funzioni metaboliche, le caratteristiche biochimiche e modelli genetici di espressione 10. Gli adipociti in WAT hanno un unico, grande goccia di lipidi e di quantità variabili di mitocondri. WATsi trova in località prevalentemente sottocutaneo e viscerale del corpo. Funzioni WAT principalmente come un sito di stoccaggio di energia e di protezione d&#39;organo. Gli adipociti in BAT hanno una morfologia multiloculare e mitocondri abbondanti. BAT si trova principalmente nel collo e grandi vasi sanguigni del torace, nonché le scapole 12. BAT funzioni principalmente a comportamenti dispendio energetico che regolano la termogenesi 7. Adiposo Brite o beige ha dimostrato di condividere una morfologia analogo ed espressione BAT, ma è stato trovato per essere originato da adipociti bianchi 11. Il metodo chirurgico descritto in questo manoscritto fornisce ai ricercatori con la capacità di analizzare diversi effetti che fattori quali: l&#39;ambiente, i prodotti farmaceutici, e la genetica, hanno sulla adiposo; così come il ruolo adiposo benefico o dannoso gioca nella malattia e la salute generale. Inoltre, fornendo un modo per identificare e isolare diversi tipi di tessuto adiposopermettere una migliore comprensione delle relazioni biochimiche e le differenze tra depositi. Questo può aiutare a determinare il rapporto tra posizione, la funzione, e tipi di grassi nel corpo. Questo metodo descritto realizza questo fornendo i mezzi per la visualizzazione lordo, analisi di espressione genica, analisi di espressione della proteina, l&#39;esame istologico, e l&#39;isolamento di linee cellulari primarie per studi in vitro. Attualmente non ci sono molti articoli che forniscono informazioni sul comportamento metabolico dei diversi depositi adiposi, nonché le loro sedi anatomiche; ma non forniscono un metodo di approfondimento su come localizzare in particolare, di identificare e isolare questi depositi. Questo metodo fornisce una tecnica chirurgica precisa che permette l&#39;isolamento di più depositi con una quantità minima di dissezione e la contaminazione rispetto ad altri metodi progettati per l&#39;isolato di uno o due depositi 13-14. L&#39;obiettivo di questo protocollo è quello di fornireun metodo preciso per l&#39;identificazione e l&#39;isolamento di diversi tipi di depositi di grasso di molteplici posizioni anatomiche.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanolo</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Riscaldare a bagnomaria prima di applicare il fazzoletto.</td></tr><tr><td>Provette per microcentrifuga da 2 ml</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Sigma</td><td>Aldrich P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

localizzazione, identificazione, e l&#39;escissione dei depositi murine adipose

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

L'obesità è aumentata drasticamente negli ultimi decenni e colpisce oltre un terzo della popolazione adulta degli Stati Uniti. L'effetto economico dell'obesità nel 2005 ha raggiunto l'incredibile cifra di 190,2 miliardi di dollari solo in costi medici diretti. L'obesità è un importante fattore di rischio per una vasta gamma di malattie. Storicamente, si sapeva poco sull'adiposo e sulle sue funzioni principali ed essenziali nell'organismo. L'adiposo bruno e il bianco sono i due principali tipi di adiposo, ma la letteratura attuale ha identificato un nuovo tipo di grasso chiamato brite o adiposo beige. La ricerca ha dimostrato che i depositi adiposi hanno profili metabolici specifici e alcuni depositi consentono una propensione all'obesità e ad altri disturbi correlati. L'obiettivo di questo protocollo è quello di fornire ai ricercatori la capacità di identificare e asportare depositi adiposi che consentiranno l'analisi di diversi effetti fattoriali sul tessuto adiposo; così come il ruolo benefico o dannoso che l'adiposo svolge nella malattia e nella salute generale. L'isolamento e l'escissione dei depositi adiposi consente agli investigatori di esaminare i cambiamenti morfologici grossolani e i cambiamenti istologici. L'adiposo isolato può essere utilizzato anche per studi molecolari per valutare il cambiamento trascrizionale e traduzionale o per la sperimentazione in vitro per scoprire bersagli di interesse e meccanismi d'azione. Questa tecnica è superiore ad altre tecniche pubblicate grazie al design che consente l'isolamento di più depositi con semplicità e contaminazione minima.

Identificazione e localizzazione delle adiposo sottocutaneo inguinale, interscapolare adiposo bruno, viscerale adiposo epididimale (figura 1), nonché la aortico adiposo perivascolare arco, toracica adiposo aortica, suprarenal adiposo aortica e dell'aorta infrarenale adiposo (Figura 2) è stata ottenuta con successo usando il metodo chirurgico descritto. L'esame istologico e la differenziazione tra i campioni BAT e Wat sono stati positivamente valutati usando ematossilina e eosina (H &amp...

Grazie al collegamento drastica e negativa tra obesità e altre patologie concomitanti, la ricerca sul adiposo giochi di ruolo nella malattia e la salute generale è garantito. Presentiamo un protocollo per l&#39;isolamento e l&#39;escissione di depositi adiposi consentano lo studio della adiposo usare in situ e metodi in vitro.

Localizzazione, identificazione, e l&#39;escissione dei Depositi Murine adipose

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare l'identificazione e l'escissione del deposto adiposo per l'analisi di diversi effetti fattoriali su e da adiposo. Ciò si ottiene esponendo prima gli organi interni e i depositi adiposi di un topo adulto. Nella seconda fase, gli organi e i tessuti superflui vengono rimossi per esporre meglio i depositi, consentendo l'identificazione dei depositi nelle loro posizioni corrispondenti.Nella fase finale, il tessuto adiposo viene quindi estratto con particolare cura per evitare contaminazioni. In definitiva, l'isolamento e l'escissione di questi depositi forniscono tessuto per l'analisi istologica, l'espressione proteica, l'attività enzimatica e l'analisi dell'espressione genica, nonché per studi in vitro. Il vantaggio principale di questo particolare protocollo rispetto alle metodologie esistenti è che consente l'isolamento di più depositi con dissezione minima e contaminazione minima.Quindi questa procedura può aiutare a rispondere alle domande sul campo dell'obesità. Ad esempio, gli effetti dannosi o addirittura benefici del tessuto adiposo sulle malattie umane. Per isolare il tessuto adiposo bruno, inizia posizionando un topo adulto etanolo, pulito e soppresso in posizione supina con la schiena contro il tavolo.Quindi usa una pinza per sollevare la pelle appena sotto il diaframma e incidere la pelle con le forbici. Taglia trasversalmente attorno alla circonferenza del topo per esporre il peritoneo. Quindi, tenendo le appendici inferiori e l'addome con una mano, tira la pelle verso la testa con l'altra mano per togliere il guanto alla metà superiore del topo rivelando il deposito adiposo marrone a forma di farfalla o pipistrello.Quindi, individua lo scapo e il deposito di pipistrelli corrispondente. Quindi utilizzare un microscopio da dissezione per rimuovere con cura l'adiposa bianca superficiale sopra la farfalla e sezionare il grasso bruno interscapolare, facendo attenzione a evitare qualsiasi muscolo associato. Per isolare il tessuto adiposo sottocutaneo o sottoq, tenere le appendici superiori e il torace con una mano e tirare la pelle verso il basso verso i piedi con l'altra mano per deguantare la metà inferiore del topo e rivelare i depositi subq inguinali triangolari.Quindi riposiziona il topo in posizione supina e seziona attentamente i triangoli di grasso subq per isolare il grasso gonadico dalla cavità addominale. Usa le forbici per tagliare il peritoneo trasversalmente direttamente sotto il diaframma. Quindi tagliare il peritoneo dal diaframma al retto, a metà coronalità per esporre gli organi addominali e sezionare attentamente entrambi i depositi di grasso epidermico dai testicoli epi e dai vasi deia.Per isolare il tessuto adiposo perivascolare, mantenere l'animale in posizione supina ed estendere le appendici superiore e inferiore verso l'esterno. Successivamente, sollevare il processo xifoideo con una pinza per creare tensione nella parte superiore del corpo e tagliare orizzontalmente attraverso il diaframma, esponendo la parte inferiore della cavità toracica. Taglia la gabbia toracica superiormente verso la testa appena a lato dello sterno, quindi raccogli la gabbia toracica appena sotto la clavicola.Taglio lungo la lunghezza inferiore della clavicola verso l'ascella in entrambe le direzioni. La cavità toracica e il suo contenuto dovrebbero ora essere chiaramente visibili. Una volta che l'area è stata ripulita dal liquido, tagliare i bronchi e attaccare i vasi per rimuovere i polmoni ed esporre il cuore.Dopo aver identificato lo stomaco e l'esofago, tagliare l'esofago in corrispondenza della giunzione gastroesofagea per liberare lo stomaco. Quindi, identifica l'intestino e il mesentere circostante. Tagliare superficialmente il mesentere e poi tagliare il colon il più vicino possibile al retto per liberare lo stomaco, l'intestino, il colon, il pancreas e la milza.Quando gli organi sono stati rimossi, tagliare le vene epatiche e il mesentere di collegamento e rimuovere tutti i lobi del fegato. Tagliare via lo strato viscerale e il grasso che circonda i reni, lasciando i reni attaccati all'aorta in vivo per fungere da marcatori geografici per i diversi segmenti dell'aorta. Quindi, quando l'area intorno ai reni è libera, usa micro forbici e micro pinze per separare l'aorta dal suo attacco dorsale alla colonna vertebrale e dal suo attacco ventrale all'esofago.Nel torace, seguire e staccare l'aorta dalla sua origine nel cuore alla biforcazione nella regione iliaca. Per isolare il tessuto adiposo aortico, a questo punto, si possono identificare i vasi succlavi. Isolare questi vasi dal collo alla radice aortica per esporre meglio la giunzione aortica e la radice nel cuore.Quindi rimuovere il timo e tagliare le arterie brachiocefalica, la carotide comune sinistra e la succlavia sinistra per consentire il movimento del cuore. Infine, utilizzare un microscopio da dissezione per visualizzare il tessuto adiposo perivascolare o lo strato P VVA T che circonda l'aorta. Quindi utilizzare micro pinze per allontanare delicatamente il tessuto dall'aorta e micro forbici per tagliare delicatamente l'attacco del PVAT all'aorta a partire dalla regione toracica, appena sopra il punto in cui si trova il diaframma.Quindi utilizzare micro pinze per allontanare delicatamente il tessuto dall'aorta e micro forbici per tagliare delicatamente l'attacco del PVAT all'aorta a partire dalla regione toracica appena sopra il punto in cui si trova il diaframma. Ripetere questo processo per l'intera lunghezza dell'aorta terminando nella regione aortica infrarenale, situata appena sopra la biforcazione iliaca del vaso aortico e inferiore ai rami renali del pipistrello. E i campioni di wat possono essere differenziati mediante analisi istologica con colorazione h ed e, linee cellulari primarie di adipociti sottocutanei e perivascolari.Gli adipociti possono quindi essere coltivati e differenziati da preadipociti ad adipociti per l'analisi di microarray. In queste immagini rappresentative, ad esempio, la conversione di preadipociti in coltura in adipociti è stata confermata con adipociti che colorano con olio rosso O, isolati, coltivati e differenziati con questo metodo, possono essere utilizzati per ulteriori analisi in vitro. In questo esperimento rappresentativo, è stato osservato che l'attività enzimatica di MM P 2 diminuisce negli adipociti perivascolari isolati in risposta a un trattamento sperimentale rispetto ai controlli non trattati.Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordarsi di cambiare i guanti e di pulire frequentemente gli strumenti per ridurre al minimo la contaminazione. Quindi, dopo che questi tessuti sono stati raccolti, è possibile eseguire una varietà di procedure su di essi. Ad esempio, la coltura cellulare, l'analisi istologica, la misurazione delle proteine e persino l'espressione genica.E poi questi risultati possono essere utilizzati per aiutare a capire la relazione, le somiglianze e le differenze tra i diversi depositi.

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In questo video, dimostriamo la procedura chirurgica per isolare il tessuto adiposo bianco sottocutaneo e il tessuto adiposo bruno interscapolare da un topo appena nato.

Raccolta del deposito adiposo bianco e marrone dal cucciolo di topo: una procedura chirurgica per raccogliere il tessuto adiposo bianco e il tessuto adiposo bruno dal cucciolo di topo

Il tessuto adiposo (AT) può influenzare l'omeostasi di tutto il corpo, quindi è importante comprendere i meccanismi molecolari della differenziazione e della funzione degli adipociti. Forniamo un protocollo per ottenere nuove informazioni su questi processi analizzando l'omeostasi degli adipociti, la differenziazione e l'esposizione all'ipossia come modello per l'apoptosi indotta degli adipociti.

Meccanismo di regolazione dei numeri adipociti in organismi adulti attraverso la differenziazione e l&#39;apoptosi omeostasi

Presentiamo le tecniche necessarie per isolare la frazione vascolare stromale (SVF) dai depositi di tessuto adiposo inguinale (sottocutaneo) e perigonadico (viscerale) di topo per valutare la loro espressione genica e l'attività collagenolitica. Questo metodo include l'arricchimento di cellule staminali di derivazione adiposa (ASC)ad alto contenuto di Sca1 utilizzando la separazione cellulare immunomagnetica.

Separazione immunomagnetica di Sca1 Fat Depot-specifica<sup&gt; alta</sup&gt; derivate da tessuto adiposo cellule staminali (ASC)

Gli adipociti esistono in depositi discreti e hanno ruoli diversi all'interno dei loro microambienti unici. Poiché vengono scoperte le differenze regionali nel carattere e nella funzione degli adipociti, l'identificazione standardizzata e l'isolamento dei depositi sono fondamentali per l'avanzamento del campo. Qui, vi presentiamo un protocollo dettagliato per l'escissione di vari depositi adiposi del topo.

Identificazione e dissezione dei diversi depositi di adiposi del mouse

L'obiettivo di questo protocollo è sintetizzare liposomi marcati con fluorescenza e utilizzare la citometria a flusso per identificare la localizzazione in vivo dei liposomi a livello cellulare.

Preparazione, somministrazione e valutazione dell'assorbimento cellulare tessuto-specifico in vivo di liposomi marcati con coloranti fluorescenti

Questo protocollo descrive l'approccio tecnico per isolare sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi di tessuto adiposo bianco (WAT) murino intra-addominale mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza o separazione di microsfere immunomagnetiche.

Isolamento di sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi adiposi intra-addominali murini

Questo protocollo descrive un metodo per la dissezione dei depositi adiposi di topo e l'isolamento e la digestione delle rispettive arterie per liberare e quindi identificare la popolazione di cellule endoteliali. Le cellule appena isolate utilizzate nelle applicazioni a valle faranno progredire la comprensione della biologia delle cellule vascolari e dei meccanismi della disfunzione vascolare.

Isolamento e identificazione di cellule endoteliali vascolari da depositi adiposi distinti per applicazioni a valle

Questo protocollo descrive l'isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale (SVF) dal tessuto adiposo murino per ottenere preadipociti e ottenere la differenziazione degli adipociti in vitro. L'uso di un dissociatore tissutale per la digestione della collagenasi riduce la variazione sperimentale e aumenta la riproducibilità.

Isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale dal tessuto adiposo bianco murino mediante un dissociatore tissutale

In questo articolo, forniamo una procedura pratica per la dissezione e l'esecuzione di analisi istologiche e di espressione genica del tessuto adiposo bruno sopraclavicolare murino.

Dissezione, elaborazione istologica e analisi dell'espressione genica del tessuto adiposo bruno sopraclavicolare murino

Le dimensioni e la fragilità degli adipociti maturi hanno limitato le tecniche e gli strumenti disponibili per il loro studio e isolamento. Qui viene descritto un protocollo per l'isolamento di adipociti murini maturi, che può essere facilmente adattato a diversi depositi adiposi e diete di topi.

Isolamento e coltura di adipociti murini primari da topi magri e obesi

Impara a localizzare e rimuovere i depositi di tessuto adiposo nei topi adulti con minima dissezione e contaminazione. Questo metodo supporta analisi istologiche e studi sull'espressione genica.

Localizzazione, identificazione, e l'escissione dei Depositi Murine adipose

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